釀酒分析與檢測課件

《釀酒分析與檢測》

第五章色譜分析指導(dǎo)教師：范文來江南大學(xué)生物工程學(xué)院《釀酒分析與檢測》

第五章色譜分析指導(dǎo)教師：范文來第五章釀酒分析與檢測

第一節(jié)色譜分析基本原理

一、色譜法分離基本原理二、色譜流出曲線及術(shù)語三、色譜分離理論依據(jù)

第二節(jié)氣相色譜分析

一、氣相色譜儀簡介 二、甲醇測定（蒸餾酒、葡萄酒）三、乙醇測定（啤酒） 四、β-苯乙醇的測定（黃酒、白酒） 五、白酒主要風味物質(zhì)測定

第五章釀酒分析與檢測

第一節(jié)色譜分析基本原理

第五章釀酒分析與檢測第三節(jié)液相色譜分析

一、高效液相色譜儀簡介 二、白酒中乳酸測定 三、葡萄酒中檸檬酸測定 四、葡萄酒中白藜蘆醇的測定 五、葡萄酒中糖分和有機酸測定第四節(jié)氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析

一、氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用儀簡介 二、GC–MS法測定氨基甲酸乙酯 三、GC–MS法測定白酒中塑化劑 四、GC–MS法定性分析白酒風味物質(zhì)第五章釀酒分析與檢測第三節(jié)液相色譜分析 第一節(jié)色譜分析基本原理

一、色譜法分離基本原理色譜法（chromatography）最初是由俄國植物學(xué)家茨維特（俄文名Михаи?лСемёновичЦветь，英文名MikhailSemyonovichTsvet）首先提出并命名的。1906年茨維特用柱色譜實驗裝置實現(xiàn)了多種物質(zhì)的分離并確立了色譜柱。圖5-1色譜柱分離原理示意圖第一節(jié)色譜分析基本原理

一、色譜法分離基本原理色譜法（ch

色譜法是基于混合組分通過互不相溶的兩相而達到分離的，即樣品溶解在流動相（mobilephase）中，從裝填在柱子（column）中或涂漬在載體表面的固定相（stationaryphase）上通過，依據(jù)組分與固定相之間的相互作用力的不同，經(jīng)過充分的運行時間，即被分離（如圖5-1所示）。

二、色譜流出曲線及術(shù)語樣品經(jīng)色譜分離檢測后（通常是電信號），以組分的濃度（或電信號）作縱坐標，流出時間作橫坐標得到的曲線稱為流出曲線，也稱色譜圖，如圖5-2所示。流出曲線突起的部分，稱為色譜峰（peak）。當色譜柱后沒有組分進入檢測器時，在實驗操作條件下，反映檢測器系統(tǒng)噪聲隨時間變化的線稱為基線（baseline）。穩(wěn)定的基線是一條直線（或當有載氣通過檢測器時產(chǎn)生的噪聲信號是直線）。由各種因素所引起的基線起伏稱為基線噪聲，而基線隨時間定向的緩慢變化稱為基線漂移。圖5-2色譜圖二、色譜流出曲線及術(shù)語樣品經(jīng)色譜分離檢測后（通常是電信號），

二、色譜流出曲線及術(shù)語

死時間（hold-uptime，tM）：載氣流經(jīng)色譜柱的時間。死體積（hold-upvolume，VM）：在死時間內(nèi)流經(jīng)色譜柱載氣的體積。保留時間（retentiontime，tR）：tR=tM+tR′，組分從進樣開始到出現(xiàn)最大濃度時的時間叫保留時間。調(diào)整保留時間（adjustedretention

time，tR′）：保留時間減去死時間等于調(diào)整保留時間，表示組分在固定相上滯留的時間，不同組分tM均相同，但tR′不同。

二、色譜流出曲線及術(shù)語

死時間（hold-uptime二、色譜流出曲線及術(shù)語保留體積（retentionvolume，VR）：在保留時間內(nèi)流經(jīng)色譜柱載氣的體積稱保留體積。相對保留值（r）：r2,1=t′R(2)/t′R(1)=V′R(2)/V′R(1)≥1，相對保留值也稱色譜柱的選擇性，r2,1越大，分離的越好，色譜柱選擇性越好。峰高（h）：峰的頂點到基線之間的距離稱之為峰高。半峰高（h?）：峰高h的1/2處。峰底寬Y：由色譜峰的兩邊拐點做切線，與基線交點的距離。半峰高寬度Y?：色譜峰高一半處的峰寬。也稱為色譜峰半高寬度。二、色譜流出曲線及術(shù)語保留體積（retentionvolu二、色譜流出曲線及術(shù)語峰高與峰面積（A）是定量的指標或參數(shù)；保留值是定性的指標或參數(shù)；峰寬或半峰寬是衡量柱效的指標或參數(shù)，如式5-1所示。峰面積A=h×Y?×1.065式51理論塔板數(shù)和有效塔板數(shù)：理論塔板數(shù)（N）和有效塔板數(shù)的區(qū)別是用保留值和調(diào)整保留值的關(guān)系，由于死體積中的保留時間與分配平衡無關(guān)，因此有效塔板數(shù)描述得更加準確一些。理論塔板數(shù)或者有效塔板數(shù)是衡量色譜柱分離能力高低的重要指標，買來一個色譜柱，一定先看它給出的柱效指標，就是指N的大小，只有N比較大，對難分離的物質(zhì)才能夠給出滿意的結(jié)果。二、色譜流出曲線及術(shù)語峰高與峰面積（A）是定量的指標或參數(shù)；二、色譜流出曲線及術(shù)語分離度R：分離度等于相鄰組分色譜峰保留值之差與色譜峰平均峰底之比。分離度R等于1時，兩個色譜峰得到基本分離；R大于等于1.5時，兩峰得到完全分離。在定量分析中，要對色譜峰進行積分時，最少要達到R為1，如果達到R≥1.5，可以保證積分中基本沒有誤差。二、色譜流出曲線及術(shù)語分離度R：分離度等于相鄰組分色譜峰保留三、色譜分離理論依據(jù)色譜具有多種類型，根據(jù)色譜分離原理，可分為吸附色譜（adsorptionchromatography）、分配色譜（partitionchromatography）、離子交換色譜（ion-exchangechromatography）、凝膠色譜（gelchromatography）與親和色譜（affinitychromatography）等。吸附色譜是利用吸附劑對被分離物質(zhì)的吸附能力不同，用溶劑或氣體洗脫，以使組分分離。常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚酰胺等有吸附活性的物質(zhì)。三、色譜分離理論依據(jù)色譜具有多種類型，根據(jù)色譜分離原理，可分三、色譜分離理論依據(jù)分配色譜是利用溶液中被分離物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)不同，以使組分分離。其中一個相為液體，涂布或使之鍵合在固體載體上，稱固定相；另一相為液體或氣體，稱流動相。常用的載體有硅膠、硅藻土、硅鎂型吸附劑與纖維素粉等。離子交換色譜是利用被分離物質(zhì)在離子交換樹脂上的離子交換勢不同而使組分分離。常用的有不同強度的陽、陰離子交換樹脂，流動相一般為水或含有有機溶劑的緩沖液。三、色譜分離理論依據(jù)分配色譜是利用溶液中被分離物質(zhì)在兩相中分三、色譜分離理論依據(jù)凝膠色譜或凝膠滲透色譜，又稱體積排阻色譜，是利用被分離物質(zhì)分子量大小的不同和在填料上滲透程度的不同，以使組分分離。常用的填料有分子篩、葡聚糖凝膠、微孔聚合物、微孔硅膠或玻璃珠等，可根據(jù)載體和試樣的性質(zhì)，選用水或有機溶劑為流動相。按照兩相物理狀態(tài)分類，色譜可分為：（1）流動相為氣體、固定相為固體的，稱為氣固色譜（gas-solidchromatography）；（2）流動相為氣體，固定相為液體的，稱為氣液色譜（gas-liquidchromatography）；三、色譜分離理論依據(jù)凝膠色譜或凝膠滲透色譜，又稱體積排阻色譜三、色譜分離理論依據(jù)

（3）流動相為液體、固定相為固體的，稱為液固色譜（liquid-solidchromatography）；（4）流動相為液體、固定相為液體的，稱為液液色譜或液相色譜（liquid-liquidchromatography）；（5）流動相為超臨界流體的，稱為超臨界流體色譜（supercriticalfluidchromatography）。三、色譜分離理論依據(jù)（3）流動相為液體、固定相為固體三、色譜分離理論依據(jù)以氣相色譜（gaschromatography，GC）為例來說明色譜分離的原理。（一）氣相色譜分離原理三、色譜分離理論依據(jù)以氣相色譜（gaschromatogr（一）氣相色譜分離原理氣相色譜分析的分離原理是基于不同物質(zhì)在兩相間具有不同的分配系數(shù)，當兩相作相對運動時，試樣中的各組分就在兩相中進行反復(fù)多次的分配，使得原來分配系數(shù)只有微小差異的各組分產(chǎn)生很大的分離效果，從而各組分彼此分離開來。（一）氣相色譜分離原理氣相色譜分析的分離原理是基于不同物質(zhì)在（一）氣相色譜分離原理通過塔板理論可以來解釋色譜過程中熱力學(xué)因素作用，將色譜分離過程比作蒸餾過程，引用了處理蒸餾過程的概念、理論和方法來處理色譜過程。把色譜柱比作一個分餾塔，色譜柱可由許多假想的塔板組成（即色譜柱可分成許多小段），在每一小段（塔板）內(nèi)，一部分空間為涂在擔體上的固定液，另一部分空間充滿著載氣（氣相），載氣占據(jù)的空間稱為板體積△V。當欲分離的組分隨載氣進入色譜柱后，就在兩相間進行分配。（一）氣相色譜分離原理通過塔板理論可以來解釋色譜過程中熱力學(xué)（二）液相色譜原理液相色譜（LiquidChromatography，LC）保留值、塔板數(shù)、塔板高度、分離度、選擇性等與氣相色譜一致，塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致。（二）液相色譜原理液相色譜（LiquidChromatog（二）液相色譜原理液相色譜不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制，它非常適合分子量較大、難汽化、不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物及高聚物的分離分析，70%~80%的有機物采用LC方法分析。氣相色譜的流動相載氣是色譜惰性的，不參與分配平衡過程，與樣品分子無親和作用，樣品分子只與固定相相互作用；而在液相色譜中流動相液體也與固定相爭奪樣品分子，為提高選擇性增加了一個因素。也可選用不同比例的兩種或兩種以上的液體作流動相，增大分離的選擇性。液相色譜固定相類型多，如離子交換色譜和排阻色譜等，作為分析時選擇余地大。（二）液相色譜原理液相色譜不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制，它（二）液相色譜原理液液色譜法按固定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法（normalphasechromatography，NPC）和反相色譜法（reversephasechromatography，RPC）。正相色譜法采用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動相為相對非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時間。此法常用于分離中等極性和極性較強的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。（二）液相色譜原理液液色譜法按固定相和流動相的極性不同可分為（二）液相色譜原理反相色譜法一般用非極性固定相（如C18、C8）；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調(diào)節(jié)保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用最為廣泛，據(jù)統(tǒng)計，它占整個HPLC應(yīng)用的80%左右。隨著柱填料的快速發(fā)展，反相色譜法的應(yīng)用范圍逐漸擴大，現(xiàn)已應(yīng)用于某些無機樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過程的解離，常用緩沖液控制流動相的pH。但需要注意的是，C18和C8使用的pH通常為2.5~7.5（2~8），太高的pH會使硅膠溶解，太低的pH會使鍵合的烷基脫落。

（二）液相色譜原理反相色譜法一般用非極性固定相（如C18、C第二節(jié)氣相色譜分析

一、氣相色譜儀簡介（一）氣相色譜分析儀基本組成氣相色譜儀主要包括五部分：氣路系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、色譜分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和溫控系統(tǒng)，現(xiàn)簡要介紹如下。1、氣路系統(tǒng)氣相色譜儀具有一個讓載氣（carriergas）連續(xù)運行、管路密閉的氣路系統(tǒng)。通過該系統(tǒng)，可以獲得純凈的、流速穩(wěn)定的載氣。它的氣密性、載氣流速的穩(wěn)定性以及測量流量的準確性，對色譜結(jié)果均有很大的影響。第二節(jié)氣相色譜分析

一、氣相色譜儀簡介（一）氣相色譜分析儀

1、氣路系統(tǒng)

常用的載氣有氮氣和氫氣，也有用氦氣、氬氣和空氣。載氣的凈化，需經(jīng)過裝有活性炭或分子篩的凈化器，以除去載氣中的水、氧等不利的雜質(zhì)。流速的調(diào)節(jié)和穩(wěn)定是通過減壓閥、穩(wěn)壓閥和針形閥串聯(lián)使用后達到。一般載氣的變化程度<1%。氣相色譜的氣路系統(tǒng)簡單來說就是連接所有組成部分的管道。載體攜帶著樣品在氣路系統(tǒng)中流動，經(jīng)過色譜柱時進行分離，經(jīng)過檢測器時進行檢測，最終通過氣路系統(tǒng)流入廢液瓶中。

1、氣路系統(tǒng)

常用的載氣有氮氣和氫氣，也有用氦氣、氬2、進樣系統(tǒng)

進樣系統(tǒng)的作用是將液體試樣在進入色譜柱之前瞬間汽化，然后快速定量地轉(zhuǎn)入到色譜柱中。進樣的大小、進樣時間的長短、試樣的汽化速度等都會影響色譜的分離效果和分析結(jié)果的準確性和重現(xiàn)性。氣相色譜分析儀的進樣系統(tǒng)相對于液相色譜分析儀的進樣系統(tǒng)來說要重要得多，因為氣相色譜分析儀的進樣系統(tǒng)承擔著將樣品進行汽化的任務(wù)，汽化后樣品才可由載體氣體攜帶，不然樣品是無法進入到氣相色譜分析儀內(nèi)進行檢測的。隨著近年來氣相色譜分析儀的發(fā)展和功能的進步，它的進樣系統(tǒng)也發(fā)生了很大的變化，由手動進樣變?yōu)楝F(xiàn)在的自動進樣器。2、進樣系統(tǒng)2、進樣系統(tǒng)進樣系統(tǒng)還包括汽化室。為了使樣品在汽化室中瞬間汽化而不分解，要求汽化室熱容量大，無催化效應(yīng)。為了盡量減少柱前譜峰變寬，汽化室的死體積應(yīng)盡可能小。2、進樣系統(tǒng)進樣系統(tǒng)還包括汽化室。為了使樣品在汽化室中瞬間汽

3、色譜分離系統(tǒng)

氣相色譜分析儀色譜分離系統(tǒng)主要是指色譜柱（column），通常有填充柱（packedcolumn）和毛細管柱（capillarycolumn）兩大類。填充柱由不銹鋼或玻璃材料制成，內(nèi)裝固定相，一般內(nèi)徑為2~4mm，長1~3m。填充柱的形狀有U型和螺旋型二種。毛細管柱又叫空心柱，分為涂壁、多孔層和涂載體空心柱?？招拿毠苤馁|(zhì)為玻璃或石英。內(nèi)徑一般為0.2~0.5mm，長度30~100m，呈螺旋型。色譜柱的分離效果除與柱長、柱徑和柱形有關(guān)外，還與所選用的固定相和柱填料的制備技術(shù)以及操作條件等許多因素有關(guān)。

3、色譜分離系統(tǒng)

氣相色譜分析儀色譜分離系統(tǒng)主要

4、檢測系統(tǒng)

氣相色譜分析儀的檢測系統(tǒng)一般指的就是檢測器（detector），氣相色譜分析儀的檢測器一般都連接色譜柱的出口。當氣體樣品通過色譜柱，樣品中的所有組分分離后，各自流入到檢測器中進行檢測。檢測器是整個氣相色譜分析儀的心臟部位，它的功能就是把隨載氣流出色譜柱的各種組分進行電量轉(zhuǎn)換，將組分轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?，便于記錄測量和處理。4、檢測系統(tǒng)氣相色譜分析儀的檢測系統(tǒng)一般指的就是檢測器

4、檢測系統(tǒng)

根據(jù)檢測原理的差別，氣相色譜檢測器可分為濃度型和質(zhì)量型兩大類：濃度型檢測器測量的是載氣中組分濃度的瞬間變化，即檢測器的響應(yīng)值正比于組分的濃度。如熱導(dǎo)檢測器（thermalconductivitydetector，TCD）、電子捕獲檢測器（electroncapturedetector，ECD）；質(zhì)量型檢測器測量的是載氣中所攜帶的樣品進入檢測器的速度變化，即檢測器的響應(yīng)信號正比于單位時間內(nèi)組分進入檢測器的質(zhì)量。如氫焰離子化檢測器（flameionizationdetector，F(xiàn)ID）和火焰光度檢測器（flamephotometricdetector，F(xiàn)PD）。熱導(dǎo)檢測器（TCD）：氣流中樣品濃度發(fā)生變化，則從熱敏元件上所帶走的熱量也就不同，而改變熱敏元件的電阻值，由于熱敏元件為組成惠斯頓電橋之臂，只要橋路中任何一臂電阻發(fā)生變化，則整個線路就立即有信號輸出。熱敏元件一般為錸鎢絲組成，溫度系數(shù)為正，具有普遍適用的特點。

4、檢測系統(tǒng)

根據(jù)檢測原理的差別，氣相色譜檢測器可分

4、檢測系統(tǒng)電子捕獲檢測器（ECD）：β-射線與載氣分子作用產(chǎn)生慢電子，具有親電基團的試樣分子能捕獲慢電子而變成負離子，這種負離子能與載氣受放射粒子所產(chǎn)生的正離子復(fù)合，從而改變檢測器的基流，使之減少，輸出信號。ECD只對具有親電基團的樣品分子才有應(yīng)答，對水敏感，易受污染，載氣必須充分干燥，脫氧。對鹵素、硝基等負電性化合物選擇性極好。火焰離子化檢測器（FID）：在氫氧焰的高溫作用下，許多分子均將分裂為碎片，并有自由基和激態(tài)分子產(chǎn)生，從而在氫焰中形成這些高能粒子所組成的高能區(qū)。當有機分子入此高能區(qū)時，就會被電離，從而在外電路中輸出離子電流信號。FID靈敏度高，死體積小，應(yīng)答時間快，除載氣外還需引入空氣和氫氣，對永久性氣體和水無應(yīng)答。對有機化合物而言，能直接用于毛細管色譜分析。4、檢測系統(tǒng)電子捕獲檢測器（ECD）：β-射線與載氣分子

4、檢測系統(tǒng)

火焰光度檢測器（FPD）：燃燒著的氫焰中，當有樣品進入時，則氫焰的譜線和發(fā)光強度均發(fā)生變化，然后由光電倍增管將光度變化轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枴PD對磷、硫化合物有很高的選擇性，適當選擇光電倍增管前的濾光片將有助于提高選擇性，排除干擾，主要用于含磷、硫的有機化合物的分析。

4、檢測系統(tǒng)

火焰光度檢測器（FPD）：燃燒著的氫焰5、溫控系統(tǒng)

溫度在氣相色譜分析儀的檢測過程當中是一個非常重要的參數(shù)，直接影響色譜柱的選擇分離、檢測器的靈敏度和穩(wěn)定性?？刂茰囟戎饕菍ιV柱溫箱、汽化室、檢測室的溫度進行控制。色譜柱是氣相色譜儀的分離系統(tǒng)，樣品中的各個組分在色譜柱中經(jīng)過反復(fù)多次分配后得到分離，從而達到分析的目的。色譜柱安裝在柱溫箱中。色譜柱需要在一定的溫度條件下工作，采用計算機對柱溫箱進行溫度控制。5、溫控系統(tǒng)5、溫控系統(tǒng)柱溫箱的溫度控制方式有恒溫和程序升溫二種。對于沸點范圍很寬的混合物，一般采用程序升溫法進行。程序升溫能在一個分析周期內(nèi)使柱溫隨時間由低溫向高溫作線性或非線性變化，以達到用最短時間獲得最佳分離的目的。對于一些成分復(fù)雜、沸程較寬的樣品，柱溫箱還可進行多階程序升溫控制。程序設(shè)定后自動運行無需人工干預(yù)。5、溫控系統(tǒng)柱溫箱的溫度控制方式有恒溫和程序升溫二種。對于沸

一、氣相色譜儀簡介

（二）氣相色譜分析儀的簡要操作方法不同的GC儀器以及不同的檢測器其操作方法各異，但基本包括以下幾個步驟（具體的操作方法請參見相關(guān)儀器的操作手冊）。

1、檢查儀器狀況按順序打開氣體發(fā)生器開關(guān)或鋼瓶總閥、減壓閥以及凈化器上的空氣開關(guān)閥，然后打開GC和電腦的電源開關(guān)。載入或建立樣品檢測的方法，觀察GC特別是氣路系統(tǒng)是否正常工作，如進樣口壓力、載氣流速等是否正常，否則要檢查設(shè)備的氣路系統(tǒng)是否有漏氣的現(xiàn)象。一、氣相色譜儀簡介

（二）氣相色譜分析儀的簡要操作方法不

（二）氣相色譜分析儀的簡要操作方法

2、FID點火當氫火焰溫度達到設(shè)定值后，按點火鍵點火。如按過點火鍵后，氫焰的基線有個大的跳動并迅速回到零點走直線，說明沒有點著火，需檢查原因。3、進樣當儀器運行穩(wěn)定，基線平穩(wěn)后，可以進行樣品進樣。

（二）氣相色譜分析儀的簡要操作方法

2、FID點火二、甲醇測定（蒸餾酒、葡萄酒）（一）葡萄酒甲醇測定參照國標GB/T15038–2006中采用氣相色譜法測定葡萄酒中的甲醇設(shè)計該實驗。1、基本原理將葡萄酒蒸餾后的樣品進樣，在GC進樣口被汽化后，隨同載氣進入色譜柱，利用被測定的各組分在氣液兩相中具有不同的分配系數(shù)，在柱內(nèi)形成遷移速度的差異而得到分離。分離后的組分先后流出色譜柱，進入FID，根據(jù)色譜柱上各組分峰的保留時間與標樣對照進行定性；利用峰面積或峰高，以內(nèi)標法定量。二、甲醇測定（蒸餾酒、葡萄酒）（一）葡萄酒甲醇測定

2、儀器和設(shè)備

氣相測譜儀：配備氫火焰離子化檢測器（FID）即GC–FID。毛細管柱：PEG20M毛細管色譜柱（柱長30~60m，內(nèi)徑0.25mm，涂層0.2μm），或其他具有同等分析效果的色譜柱（如Wax柱或FFAP柱）。微量注射器：1μL。

2、儀器和設(shè)備

氣相測譜儀：配備氫火焰離子化檢測器（FI3、試劑和材料

（1）標準溶液乙醇溶液，10%vol，色譜純；。甲醇溶液，20mg/L，色譜純，作標樣用。用色譜純乙醇溶液（10%vol）配制。

（2）內(nèi)標4-甲基-2-戊醇溶液，20mg/L，色譜純，作內(nèi)標用。用色譜純乙醇溶液（10%vol）配制。所有試劑置于4°C冰箱保存。3、試劑和材料

4、色譜條件載氣（高純氮）：流速為0.5~1.0mL/min，分流比：約50:1，尾吹約20~30mL/min；氫氣：流速為40mL/min；空氣：流速為400mL/min；檢測器溫度：220°C；進樣口溫度：220°C；升溫程序：起始溫度40°C，恒溫4min，以3.5°C/min程序升溫至200°C，繼續(xù)恒溫10min。載氣、氫氣、空氣的流速等色譜條件隨儀器而異，應(yīng)通過試驗選擇最佳操作條件，以內(nèi)標與酒樣中其他組分峰獲得完全分離為準。4、色譜條件載氣（高純氮）：流速為0.5~1.0mL/mi5、試驗步驟（1）校正因子（f值）的測定吸取甲醇溶液1.00mL，移入100mL容量瓶中，然后加入內(nèi)標4-甲基-2-戊醇溶液1.00mL，用乙醇溶液稀釋至刻度。上述溶液中甲醇和內(nèi)標的濃度均為0.2mg/L。待色譜儀基線穩(wěn)定后，用微量注射器進樣，進樣量隨儀器的靈敏度而定。記錄甲醇和內(nèi)標峰的保留時間及其峰面積（或峰高），用其比值計算出甲醇的校正因子f。（2）試樣制備用100mL容量瓶準確量取100mL樣品（液溫20°C）于500mL蒸餾瓶中，用50mL水分三次沖洗容量瓶，洗滌液并入蒸餾瓶中，加幾顆玻璃珠或沸石，連接冷凝器。以取樣用的原容量瓶作接收器（外加冰?。?。開啟冷卻水，緩慢加熱蒸餾。收集餾出液接近刻度，取下容量瓶，蓋塞。于20°C水浴中保溫30min，補加水至刻度，混勻，備用。5、試驗步驟（1）校正因子（f值）的測定吸取甲醇溶液1.0

5、試驗步驟

（3）樣品檢測吸取蒸餾后試樣10.0mL于10mL容量瓶中，加入內(nèi)標4-甲基-2-戊醇溶液0.10mL，混勻后，在與f值測定相同條件下進樣，根據(jù)保留時間確定甲醇峰的位置，并測定甲醇與內(nèi)標峰面積（或峰高），求出峰面積（或峰高）之比，計算出酒樣中甲醇含量。

5、試驗步驟

（3）樣品檢測吸取蒸餾后試樣10.0mL6、結(jié)果計算甲醇的相對校正因子按式5-2計算。

樣品中甲醇的含量按式5-3計算

式中：x——樣品中甲醇的含量，單位為毫克每升（mg/L）。f——甲醇的校正因子。6、結(jié)果計算甲醇的相對校正因子按

6、結(jié)果計算

A1——標樣f值測定時內(nèi)標峰面積（或峰高）。A2——標樣f值測定時甲醇峰面積（或峰高）。A3——試樣中甲醇峰面積（或峰高）。A4——添加于酒樣中內(nèi)標峰面積（或峰高）。d1——內(nèi)標物相對密度。d2——甲醇相對密度。I——內(nèi)標物濃度（添加在酒樣中），單位：mg/L。所得結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

6、結(jié)果計算

A1——標樣f值測定時內(nèi)標峰面積（或峰高）。

7、注意事項

在重復(fù)性條件下獲得的3次獨立測定結(jié)果的絕對值不得超過算術(shù)平均值的10%。甲醇是易揮發(fā)的有毒化合物，會形成蒸汽被吸入呼吸道；皮膚可以吸入甲醇。因此，在試驗過程中，全程做好防護，且試驗在通風櫥內(nèi)完成。

7、注意事項

在重復(fù)性條件下獲得的3次獨立測定結(jié)果的絕對值（二）白酒甲醇測定白酒是蒸餾酒，因此白酒甲醇測定時不需要像葡萄酒（或果酒、黃酒）等發(fā)酵酒先行蒸餾再進行甲醇測定，白酒可以直接進樣測定。參照國標GB/T5009.48–2003采用氣相色譜法測定白酒中甲醇設(shè)計該實驗。1、基本原理用填充柱直接進樣，通過色譜柱將甲醇峰與其他峰分離，利用甲醇在氫火焰中的化學(xué)電離進行檢測，根據(jù)峰面積或峰高與標準比較定量。（二）白酒甲醇測定白酒是蒸餾酒，因此白酒甲醇測定時不需要像葡

2、儀器與設(shè)備

GC2010氣相色譜儀：帶氫火焰離子化檢測器（FID）。微量進樣注射器：1μL、50μL。

2、儀器與設(shè)備

GC2010氣相色譜儀：帶氫火焰

3、試劑與材料

（1）甲醇（色譜純）。（2）乙醇（色譜純）。（3）無甲醇的乙醇溶液取色譜純無水乙醇配制成60%vol的乙醇水溶液。取0.5μLGC–FID進樣，無甲醇以及其他雜峰出現(xiàn)。（4）標準儲備液稱取色譜純甲醇600mg，以少量水洗入100mL容量瓶中，并加水稀釋至刻度。（5）標準使用液吸取10.0mL標準溶液于100mL容量瓶中，加入無甲醇的60%vol乙醇溶液定容。所有試劑置于4°C冰箱保存。

3、試劑與材料

（1）甲醇（色譜純）。

4、色譜條件

色譜柱：2m×4mm，玻璃柱或不銹鋼柱；固定相：GDX–102，60~80目；載氣：氮氣；載氣流速：40mL/min；氫氣流速：40mL/min；空氣流速：450mL/min；汽化室溫度：190°C；柱溫：170°C；檢測器溫度190°C；進樣量為0.5μL。

4、色譜條件

色譜柱：2m×4mm，玻璃柱或不銹鋼5、試驗步驟（1）定性分析以各組分保留時間定性，吸取標準使用液和樣液各0.5μL，分別測得保留時間，試樣與標準出峰時間對照而定性。（2）定量進0.5μL標準使用液，制得色譜圖，分別量取各組分峰高，進0.5μL試樣，制得色譜圖，分別量取峰高，與標準峰高比較計算。5、試驗步驟（1）定性分析以各組分保留時間定性，吸取標準使6、結(jié)果計算甲醇含量計算如式5-4所示：式中：x——試樣中甲醇的含量，單位為毫克每升（mg/L）。A——進樣標準中某組分的含量，單位為毫克每毫升（mg/mL）。h1——試樣中甲醇的峰高，單位為毫米（mm）。h2——標準中甲醇的峰高，單位為毫米（mm）。V1——試樣液進樣量，單位為微升（μL）。V2——標準液進樣量，單位為微升（μL）。計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。6、結(jié)果計算甲醇含量計算如7、注意事項在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。甲醇測定的方法還包括化學(xué)比色法，國標中對甲醇測定的另一種方法是品紅–亞硫酸比色法，即西弗試劑法。此法是將甲醇在磷酸酸性條件下，被高錳酸鉀氧化為甲醛，然后加入無色的品紅亞硫酸試劑，與甲醛作用生成紫色醌型色素，根據(jù)顏色的深淺來檢測白酒中甲醇含量。7、注意事項在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不

7、注意事項

本實驗所使用的氣相色譜法是利用不同醇類在氫火焰中的化學(xué)電離進行檢測，根據(jù)峰面積與標準比較定量，在樣品進樣分析過程中未進行任何處理，分離效果較好，誤差較小。但是與本實驗所用的填充柱相比，毛細管柱具有較高的柱效，而且極大地縮短了樣品的分析時間，近年來被廣泛地用于白酒樣品的分析。在使用毛細管法測定甲醇時，通常采用極性柱如FFAP柱，色譜條件需要自行摸索。在采用FFAP等極性柱時，由于某些酒的成分比較復(fù)雜，可能會出現(xiàn)甲醇峰與其他化合物峰不能達到完全分離，此時，建議使用非極性柱進行分析。

7、注意事項

本實驗所使用的氣相色譜法是利用不同醇類在氫火

三、乙醇測定（啤酒）

（一）GC法檢測啤酒中乙醇

1、基本原理參照AOAC官方方法984.14中采用氣相色譜法測定啤酒中的乙醇設(shè)計該實驗。試樣進入氣相色譜（GC）儀中的色譜柱時，由于在氣固兩相中吸附系數(shù)不同，從而使得乙醇與其他組分得以分離，利用氫火焰離子化檢測器（FID）進行檢測，與標樣對照，根據(jù)保留時間定性，利用內(nèi)標法定量。三、乙醇測定（啤酒）

（一）GC法檢測啤酒中乙醇1

2、儀器與設(shè)備氣相色譜儀：配有FID檢測器。微量進樣器：1μL。容量瓶：10mL、100mL。移液管：合適的容量。3、試劑與材料（1）乙醇標準溶液色譜純，配制成3、4、5、6、7、8%vol水溶液，低溫保存。（2）正丙醇色譜純，作內(nèi)標用。配制成5%vol水溶液，低溫保存。2、儀器與設(shè)備4、色譜條件

色譜柱（不銹鋼或玻璃）：填充柱1.8m×0.3cm；固定相：Chrornosorb103，80~100目；載氣：氮氣或氦氣；流速：20mL/min；進樣口溫度：175°C；檢測器溫度：250°C；柱溫：185°C恒溫；燃氣：氫氣和空氣。分析時間大約為2min，乙醇的洗脫時間為1min，正丙醇（內(nèi)標）為1.6min。應(yīng)調(diào)節(jié)柱溫使保留時間盡量接近上述的時間。只測定色譜峰高已能夠滿足積分要求。如果可能的話可以對每個色譜峰進行峰面積積分處理。每次進樣至少要間隔3.5min。每天都要配制標準溶液，方法為等量混合試劑（1）和試劑（2）。在分析啤酒之前，注入定量標準溶液，計算乙醇和正丙醇的峰比值，每天測得的比值應(yīng)該是接近的。如果需要，可調(diào)節(jié)載氣流速以達到相同的比值。4、色譜條件

色譜柱（不銹鋼或玻璃）：填充柱1.8m×05、試驗步驟(1)試樣測定用S&S560或相似的濾紙過濾已除氣的啤酒。用移液管吸取5mL樣品于10mL容量瓶中，再加入5mL正丙醇，蓋好塞，混勻。向氣相色譜儀中注入0.2μL，進行測定，并計算出樣品中乙醇與正丙醇峰高比。啤酒的除氣方法：調(diào)節(jié)啤酒的溫度為15~20°C，然后把酒樣倒入一個大的三角燒瓶中，輕輕晃動，直至無氣體從啤酒中逸出為止。也可以利用旋轉(zhuǎn)振蕩的方法將啤酒酒樣徹底、均一地除氣，具體操作如下：吸取10μL磷酸三丁酯（TBP）到500mL廣口帶檔板燒瓶中，將大約250mL預(yù)溫的樣品移入燒瓶中，使液面達到燒瓶標記處，然后再加10μLTBP；用鋁箔包住燒瓶口，并在鋁箔中間打一個10mm洞，使鋁箔卷邊沿燒瓶口向下翻卷；將燒瓶放在旋轉(zhuǎn)振蕩器上190r/min準確振蕩12min。如有需要，可用干濾紙過濾，除去懸浮物，用表面玻璃蓋住漏斗，減少蒸發(fā)。除氣后，啤酒溫度應(yīng)保持在20°C左右。5、試驗步驟(1)試樣測定用S&S560或相似的濾紙過濾已

（2）工作曲線繪制分別準確吸取5mL乙醇標準溶液（3.1）于6個10mL容量瓶中，再分別吸取5mL正丁醇內(nèi)標液（3.2）于每個容量瓶中，蓋好塞，混勻。混合均勻后，在上述色譜條件下，分別進樣0.2μL，進行測定。每個濃度進樣測定3次，記錄乙醇和正丙醇的色譜峰高（也可使用積分器計算峰面積），并計算每一濃度乙醇與正丙醇峰高比的平均值。取每種濃度乙醇與正丙醇峰高比的平均比值對濃度作圖，得到一條接近所有點的直線，計算出校正因子（f）。每天要重復(fù)分析測定5%vol的乙醇標準溶液。（2）工作曲線繪制分別準確吸取5mL乙醇標準溶液（3.6、結(jié)果計算（1）定性分析根據(jù)乙醇標準溶液色譜分析結(jié)果，確定乙醇的保留時間。（2）定量分析測量啤酒樣品中乙醇和正丙醇的色譜峰的峰高，如式5-5所示：式中：He——乙醇峰高，cm。Hp——正丙醇峰高，cm。f——校正因子。6、結(jié)果計算（1）定性分析根據(jù)乙醇標準溶液色譜分析結(jié)果，確7、注意事項國家標準方法中，比重計法是檢測啤酒中乙醇的含量的首選。雖然該法操作簡便快速，但受酒中其他非乙醇成分的影響導(dǎo)致其抗干擾性差,因而結(jié)果的準確度較差，只適用于乙醇的水溶液。氣相色譜（GC）法是精確測量酒精的方法，在啤酒、葡萄酒和果酒的國家標準分析中，GC法被列為乙醇測定的第二法。本實驗采用美國釀造化學(xué)家協(xié)會（ASBC）制定的GC法測定啤酒中的乙醇，操作簡單方便，利用內(nèi)標法定量準確度高。7、注意事項國家標準方法中，比重計法是檢測啤酒中乙醇的含量

四、β-苯乙醇的測定（黃酒、白酒）

（一）GC法檢測白酒中β-苯乙醇

1、基本原理β-苯乙醇（β-phenethylalcohol），CAS號60-12-8，俗稱2-苯乙醇、β-苯基乙醇、2-苯基乙醇、芐基甲醇，化學(xué)式為C8H10O，分子量為122.17g/mol，是一種簡單的芳香族伯醇；常溫下為無色液體，具有淡雅、細膩而持久的玫瑰花香氣，常溫常壓下1L水可溶解19g，易溶于醇、酯、醛等有機溶劑中；相對密度1.0202，沸點219.8°C（12mmHg），空氣中閾值12~24ng/L，水中閾值1000μg/L。β-苯乙醇是飲料酒中重要的高沸點香氣成分，其在黃酒、日本清酒、啤酒、白酒中均有不同的含量。在酒類評定中，β-苯乙醇是一個重要指標：是稻米黃酒的特征性組分；也是豉香型白酒強制性標準的指標；還是米香型白酒感官評定酒的主體香味成分。四、β-苯乙醇的測定（黃酒、白酒）

（一）GC法檢測白酒中

試樣被汽化后，隨同載氣進入色譜柱，利用β-苯乙醇等被檢測組分在氣液兩相中具有不同的吸附系數(shù)，在柱內(nèi)形成遷移速度的差異而得到分離，分離后的組分先后流出色譜柱，進入氫火焰離子化檢測器（FID），根據(jù)色譜圖上各組分峰的保留值與標樣相對照進行定性；利用峰面積，以內(nèi)標法定量。試樣被汽化后，隨同載氣進入色譜柱，利用β-苯乙醇等被檢測組2、儀器與設(shè)備氣相色譜儀：備有氫火焰離子化檢測器（FID）。Milli-Q超純水系統(tǒng)：美國Millipore公司。色譜柱：DB–Wax柱（柱長30m，內(nèi)徑0.25mm，涂層0.25mm）。容量瓶：10mL、100mL。移液管：合適的容量。微量注射器：10μL2、儀器與設(shè)備氣相色譜儀：備有氫火焰離子化檢測器（FID）。3、試劑與材料（1）40%vol乙醇溶液吸取40mL乙醇（色譜純），加水稀釋至100mL，搖勻。（2）β-苯乙醇標準溶液（20mL/L）吸取β-苯乙醇（色譜純）2mL，用40%vol的乙醇溶液定容至100mL。（3）乙酸正戊酯溶液（20mL/L）作內(nèi)標用。吸取乙酸正戊酯（色譜純）2mL，用40%vol的乙醇溶液定容至100mL。3、試劑與材料（1）40%vol乙醇溶液吸取40mL4、色譜條件載氣（高純氮）：流速為1.0mL/min，分流比：37:1，尾吹20mL/min；氫氣：流速為40mL/min；空氣：流速為400mL/min；檢測器溫度：250°C；進樣器溫度：250°C；柱溫：起始溫度60°C，恒溫3min，以5°C/min程序升溫至150°C，繼續(xù)恒溫5min，然后以10°C/min程序升溫至230°C，恒溫5min。4、色譜條件載氣（高純氮）：流速為1.0mL/min，分流5、試驗步驟（1）校正因子（f值）測定吸取20mL/L的β-苯乙醇標準溶液1.00mL，移入100mL容量瓶中，加入1.00mL的內(nèi)標試劑（3），用試劑（1）稀釋至刻度。上述溶液中β-苯乙醇和內(nèi)標的濃度均為0.2mL/L。待色譜儀基線穩(wěn)定后，用10μL微量注射器取1μL進樣。記錄β-苯乙醇和內(nèi)標峰的保留時間及其峰面積，用其比值計算出β-苯乙醇的相對校正因子。（2）樣品測定用煮沸并冷卻至室溫的超純水將酒樣稀釋至酒精度40%vol，然后吸取稀釋酒樣10.0mL于10mL容量瓶中，加入內(nèi)標溶液0.10mL，混勻后，在與f值測定相同的條件下進樣。5、試驗步驟（1）校正因子（f值）測定吸取20mL/L的6、結(jié)果計算（1）定性分析根據(jù)β-苯乙醇標準溶液色譜分析結(jié)果，確定β-苯乙醇的保留時間。（2）校正因子校正因子如式5-6計算：式中：f——β-苯乙醇的相對校正因子。A1——標樣f值測定時內(nèi)標的峰面積。A2——標樣f值測定時β-苯乙醇的峰面積。6、結(jié)果計算（1）定性分析根據(jù)β-苯乙醇標準溶液色譜分析結(jié)

d——β-苯乙醇的相對密度。d1——內(nèi)標物的相對密度。（3）定量分析白酒樣品中的β-苯乙醇含量按下式計算：式5-7式中：x——樣品中β-苯乙醇的質(zhì)量濃度，單位為克每升（mg/L）。d——β-苯乙醇的相對密度。

f——β-苯乙醇的相對校正因子。A3——樣品中β-苯乙醇的峰面積。A4——添加于酒樣中內(nèi)標的峰面積。I——內(nèi)標物的質(zhì)量濃度（添加于酒樣中），單位：mg/L。所得結(jié)果應(yīng)表示至兩位小數(shù)。f——β-苯乙醇的相對校正因子。（二）GC法檢測黃酒中的β-苯乙醇1、原理對黃酒進行液液微萃?。↙LME）前處理后，再進行樣品檢測。采用DB–Wax毛細管柱分離，F(xiàn)ID檢測器檢測，以保留時間定性，內(nèi)標法定量。2、儀器與設(shè)備氣相色譜儀：備有氫火焰離子化檢測器（FID）。色譜柱：DB–Wax柱（柱長30m，內(nèi)徑0.25mm，涂層0.25mm）。Milli-Q超純水系統(tǒng)。容量瓶：10mL。移液管：合適的容量。微量注射器：10μL。（二）GC法檢測黃酒中的β-苯乙醇1、原理

3、試劑與材料

（1）乙酸乙酯色譜純。（2）乳酸色譜級。（3）無水乙醇色譜純。（4）4-(4-甲氧基苯基)-2-丁酮內(nèi)標；色譜純。（5）β-苯乙醇色譜純。

3、試劑與材料

（1）乙酸乙酯色譜純。

4、色譜條件

載氣（高純氮）：流速為2mL/min，分流比：1:1；氫氣：流速為40mL/min；空氣：流速為450mL/min；檢測器溫度：250°C；進樣口溫度：250°C；進樣量：1.00μL；柱溫：起始溫度150°C，恒溫3min，以10°C/min程序升溫至230°C，繼續(xù)恒溫2min。

4、色譜條件

載氣（高純氮）：流速為2mL/min，分流5、試驗步驟（1）樣品測定取2mL黃酒樣品于離心管中，加入5μL內(nèi)標4-(4-甲氧基苯基)-2-丁酮（用無水乙醇溶解，終濃度98.61mg/L）和1.5mL乙酸乙酯，充分混勻后靜置分層，然后用膠頭滴管將上清有機相轉(zhuǎn)移到1mL的小瓶中，取1μL在上述色譜條件下進行GC–FID分析。（2）標準曲線繪制準確稱取β-苯乙醇0.0500g，用無水乙醇定容至10mL作儲備液用。臨用前，取0.2mL的儲備液加入到10mL的容量瓶中，用模擬黃酒定容，然后逐級稀釋配制成0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0mg/L系列濃度梯度的標準溶液。分別吸取每個濃度梯度的標準溶液2mL于離心管中，加入5μL內(nèi)標4-(4-甲氧基苯基)-2-丁酮。5、試驗步驟（1）樣品測定取2mL黃酒樣品于離心管中，加

模擬黃酒采用超純水配制，其中含有2.5g/L乳酸，10%vol乙醇，配制好的模擬酒用5g/L乳酸將pH調(diào)整到4.0。每個濃度梯度的標準溶液依照酒樣的相同處理方式進行LLME后，再在上述色譜條件下，取1μL注入氣相色譜儀分別測定，以峰面積為縱坐標，質(zhì)量濃度為橫坐標繪制出標準曲線。模擬黃酒采用超純水配制，其中含有2.5g/L乳酸，10

6、結(jié)果計算

（1）定性分析根據(jù)β-苯乙醇標準溶液色譜分析結(jié)果，確定β-苯乙醇的保留時間。（2）定量分析測定黃酒樣品中β-苯乙醇色譜峰和內(nèi)標物色譜峰的峰面積，根據(jù)它們的峰面積之比，查標準曲線，按下式計算黃酒樣品中β-苯乙醇的含量：Y=Ax+B式58C=C0×Y式59式中：Y——樣品中β-苯乙醇與內(nèi)標的濃度比。

6、結(jié)果計算

（1）定性分析根據(jù)β-苯乙醇標準溶液色譜分

X——β-苯乙醇與內(nèi)標物的峰面積比。C0——內(nèi)標濃度，mg/L。C——樣品中β-苯乙醇濃度，mg/L。所得結(jié)果保留三位有效數(shù)字。在重復(fù)性條件下獲得的3次獨立測定結(jié)果的絕對值不得超過算術(shù)平均值的10%。X——β-苯乙醇與內(nèi)標物的峰面積比。

7、注意事項

上述白酒中β-苯乙醇的測定方法是范文來等人在國標法的基礎(chǔ)上對色譜柱和氣相色譜條件等進行改進的方法。通常氣相色譜法采取直接進樣的方式檢測酒樣。但是，黃酒中含有大量糖分、蛋白質(zhì)、脂肪、焦糖色素等不揮發(fā)性化合物，未經(jīng)前處理直接進樣，樣品中的糖分等有機成分和色素將在進樣口焦化，不但會污染襯管，導(dǎo)致色譜圖出現(xiàn)拖尾、鬼峰等現(xiàn)象，嚴重的會影響色譜柱的使用壽命。比較國家標準中檢測β-苯乙醇的方法，本實驗采用LLME對黃酒樣品進行前處理，避免了直接進樣對色譜儀器造成污染，且樣品及有機溶劑用量小，對于大批量檢測更經(jīng)濟適用。因此，此方法適宜作為黃酒中的β-苯乙醇的常規(guī)檢測方法。

7、注意事項

上述白酒中β-苯乙醇的測定方法是范文來等人在五、白酒主要風味物質(zhì)測定

1基本原理白酒微量成分眾多，性質(zhì)各異，其研究始于20世紀50年代，到目前為止，已經(jīng)在我國白酒中檢測到近千種成分，從極性的醇、脂肪酸到非極性的酯，從易揮發(fā)的乙醛到不易揮發(fā)的二元酸二乙酯；從含量g/L級的己酸乙酯、乙酸乙酯和乳酸乙酯，到含量僅幾個μg/L級的土味素（geosmin）。五、白酒主要風味物質(zhì)測定1基本原理

質(zhì)譜檢測器檢測的濃度范圍通常為μg/L或mg/L，而白酒中有些物質(zhì)的含量比高，為g/L，所以需要利用氫火焰離子檢測器（FID）來檢測含量較高的物質(zhì)。樣品被汽化后，隨同載氣進入色譜柱，利用被測定的各組分在氣液兩相具有不同的分配系數(shù)，在柱內(nèi)形成遷移速度的差異而得到分離。分離后的各組分先后流出色譜柱，進入氫火焰離子化檢測器，根據(jù)色譜圖上各組分峰的保留值與標樣相對照進行定性，利用峰面積（或峰高），以內(nèi)標法定量。質(zhì)譜檢測器檢測的濃度范圍通常為μg/L或mg/L，而白酒中

2、儀器和材料

氣相色譜儀：備有氫火焰離子化檢測器（FID）。毛細管色譜柱：FFAP毛細血管色譜柱（柱長60m，內(nèi)徑0.25mm，涂層0.2μm），或其他具有同等分析效果的毛細管色譜柱（如Wax柱）。微量注射器：1μL。

2、儀器和材料

氣相色譜儀：備有氫火焰離子化檢測器（FI3、試劑和溶液

（1）乙醇溶液（60%vol）用乙醇（色譜純）加水配制。（2）待測物標準品溶液（20mL/L）準確吸取標準品（色譜純）2mL，用乙醇溶液（1）定容至100mL。（3）乙酸正戊酯溶液（20mL/L）內(nèi)標，準確吸取乙酸正戊酯（色譜純）2mL，用乙醇溶液（1）定容至100mL。3、試劑和溶液

（1）乙醇溶液（60%vol）用乙醇（色譜4、色譜條件

載氣（高純氮）：流速為0.5~1.0mL/min；分流比：為37:1；尾吹為20~30mL/min；氫氣：流速為40mL/min；空氣：流速為400mL/min；檢測器溫度：220°C；進樣口溫度：220°C；程序升溫：起始溫度60°C，恒溫3min，以3.5℃/min程序升溫至180°C，繼續(xù)恒溫10min。4、色譜條件

載氣（高純氮）：流速為0.5~1.0mL/5、分析步驟

（1）校正因子（f值）測定吸取待測物標準品化合物溶液（3.2）1.00mL，移入100mL容量瓶中，加入內(nèi)標溶液1.00mL，用乙醇溶液稀釋至刻度。上如標準品和內(nèi)標溶液的濃度均為0.2mL/L。待色譜儀基線穩(wěn)定后，用微量進樣器進樣，進樣量隨儀器的靈敏度而定。記錄標準品化合物和內(nèi)標峰的保留時間及峰面積（或峰高），用其比值計算標準品的相對校正因子。（2）樣品測定吸取樣品10.0mL于10mL容量瓶中，加入內(nèi)標溶液0.10mL，混勻后，在與f值測定相同條件下進樣，根據(jù)保留時間確定標準品的位置，并測定待測物標準品與內(nèi)標峰面積（或峰高），求出峰面積（或峰高）之比，計算出標準品化合物的含量。5、分析步驟

（1）校正因子（f值）測定吸取待測物標準品化6、結(jié)果計算

（1）校正因子計算校正因子采用如式5-10所示計算：式中：f——校正因子。A1——標樣f值測定時內(nèi)標的峰面積（或峰高）。A2——標樣f值測定時標準品的峰面積（或峰高）。d2——標準品化合物的相對密度。d1——內(nèi)標物的相對密度。6、結(jié)果計算

（1）校正因子計算校正因子采用如

（2）樣品中化合物含量樣品中化合物濃度采用如式5-11計算：式中：Ci——樣品中化合物的質(zhì)量濃度，單位為mg/L。F——化合物的相對校正因子。A3——樣品中化合物的峰面積（或峰高）。（2）樣品中化合物含量

A4——添加于酒樣中內(nèi)標的峰面積（或峰高）。I——內(nèi)標物的質(zhì)量濃度（添加于酒樣中），單位為mg/L。所得結(jié)果表示至兩位小數(shù)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立的絕對差值，不應(yīng)超過平均值的5%。A4——添加于酒樣中內(nèi)標的峰面積（或峰高）。第三節(jié)液相色譜分析

一、高效液相色譜儀簡介以液體為流動相，采用高壓輸液泵、高效固定相和高靈敏度檢測器等裝置的液體色譜儀稱為高效液相色譜儀（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）?，F(xiàn)代液相色譜儀的種類很多，根據(jù)其功能不同，可分為分析型、制備型和專用型。無論高效液相色譜儀在復(fù)雜程度以及各種部件的功能上有多大的區(qū)別，就其基本原理而言是相同的，一般由5部分組成，分別是輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)以及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。如圖5-3是高效液相色譜的基本結(jié)構(gòu)。圖5-3高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)第三節(jié)液相色譜分析

一、高效液相色譜儀簡介以液體為流動相，

一、高效液相色譜儀簡介

HPLC的高壓輸液系統(tǒng)包括儲液裝置、高壓輸液泵、輔助設(shè)備、梯度洗脫裝置等。進樣系統(tǒng)是將樣品引入色譜柱的裝置，主要包括取樣、進樣兩個部分。色譜柱是液相色譜儀中最重要的部件，主要由柱管及固定相填料組成。

一、高效液相色譜儀簡介

HPLC的高壓輸液系統(tǒng)包括儲液裝置

一、高效液相色譜儀簡介

高效液相色譜儀中的檢測器與氣相色譜儀中所用的檢測器一樣，主要用于檢測色譜分離過程中各組分的濃度變化，要求具有靈敏度高、噪聲低、線性范圍寬、重復(fù)性好、分析化合物種類多等特點。目前，應(yīng)用較多的檢測器主要包括紫外檢測器、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、示差折光檢測器等。示差折光檢測器（RefractiveIndexDetector，RID）也稱為光折射檢測器，是基于連續(xù)測定色譜柱流出物光折射率的變化而實現(xiàn)測定樣品濃度，原則上，凡是與流動相光折射系數(shù)有差別的樣品都可以測定，因此RID屬于通用性檢測器，但是，由于RID對于流動相組成的任何變化都有明顯的響應(yīng)，不能用于梯度洗脫，另外，RID靈敏度低，不適合痕量組分分析。

一、高效液相色譜儀簡介

高效液相色譜儀中的檢測器與氣相色譜

一、高效液相色譜儀簡介

紫外檢測器（UltravioletDetector，UVD）是液相色譜分析中應(yīng)用最早而且最廣泛的檢測器之一，主要用于對紫外線有吸收組分的檢測。其特點是，使用面廣（如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）、靈敏度高（檢測下限為0~10g/mL）、線性范圍寬、對溫度和流速變化不敏感、可檢測梯度溶液洗脫的樣品。熒光檢測器（FluorescenceDectector，F(xiàn)D）是利用某些物質(zhì)在紫外光激發(fā)后發(fā)射可見光的性質(zhì)進行檢測的一種檢測器，主要用于能產(chǎn)生熒光或其衍生物能發(fā)生熒光物質(zhì)的檢測。該類型檢測器靈敏度高，比紫外吸收檢測器高100倍，是常用的檢測器之一。這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物（如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質(zhì)等）的測定，其靈敏度很高（檢測下限為10-14~10-12g/mL），痕量分析和梯度洗脫樣品的檢測均可采用。

一、高效液相色譜儀簡介

紫外檢測器（Ultraviolet

一、高效液相色譜儀簡介

電子捕獲檢測器（ElectricalConductivityDetector，ECD）是離子色譜分析中使用最廣泛的檢測器。其工作原理為：用兩個相對點測量水溶液中離子型溶質(zhì)的電導(dǎo)率，根據(jù)電導(dǎo)率變化測定溶質(zhì)濃度。由于電導(dǎo)率隨溫度變化會發(fā)生改變，因此檢測時需保持恒溫，而且不能使用梯度洗脫。蒸發(fā)光散射檢測器（EvaporativeLightScatteringDetector，ELSD）是一種通用型檢測器，ELSD的響應(yīng)不依賴于樣品的光學(xué)特性，任何揮發(fā)性低于流動相的樣品均能被檢測到，不受其官能團的影響，但由于對紫外吸收組分檢測靈敏度低，主要用于糖類、高分子化合物、高級脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘油三酯、甾體類等化合物的檢測。

一、高效液相色譜儀簡介

電子捕獲檢測器（Electrica

一、高效液相色譜儀簡介

高效液相色譜的工作流程是：高壓輸液泵將流動相以穩(wěn)定的流速（或壓力）輸送到分析體系，在色譜柱之前通過進樣器將樣品導(dǎo)入，流動相將樣品帶入到色譜柱，在色譜柱中各組分因在固定相中的分配系數(shù)和吸附力大小的不同而被分離，并以此隨流動相流到檢測器，檢測到的信號送至數(shù)據(jù)系統(tǒng)記錄、處理或保存。

一、高效液相色譜儀簡介

高效液相色譜的工作流程是：高壓輸液（二）高效液相色譜儀特點高效液相色譜可以根據(jù)所要分離的化合物性質(zhì)的不同，選擇不同分離機理的分離模式。常見的分離模式有液液分配色譜、液固吸附色譜、離子交換色譜、空間排阻色譜等。不論采用何種分離模式，一般來說，高效液相色譜具有以下特點。（1）高壓液相色譜法以液體為流動相（稱為載液），液體流經(jīng)色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達（150~350）×105Pa。（二）高效液相色譜儀特點高效液相色譜可以根據(jù)所要分離的化合物

（2）高速流動相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多，一般可達10mL/min。高效液相色譜法所需的分析時間較之經(jīng)典液相色譜法少得多，一般少于1h。（3）高效近年來研究出許多新型固定相，使分離效率大大提高。（4）高靈敏度高效液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測器，進一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測器靈敏度可達10-11g。另外，用樣量小，一般幾個微升。（2）高速流動相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多，一般可達1

（5）適應(yīng)范圍寬氣相色譜法與高效液相色譜法的比較：氣相色譜法雖具有分離能力好，靈敏度高，分析速度快，操作方便等優(yōu)點，但是受技術(shù)條件的限制，沸點太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進行分析。而高效液相色譜法只要求試樣能制成溶液，而不需要汽化，因此不受試樣揮發(fā)性的限制。對于高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子量大（大于400以上）的有機物（這些物質(zhì)幾乎占有機物總數(shù)的75%~80%）原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來進行分離、分析。據(jù)統(tǒng)計，在已知化合物中，能用氣相色譜分析的約占20%，而能用液相色譜分析的約占70%~80%。（5）適應(yīng)范圍寬氣相色譜法與高效液相色譜法的比較：氣相色二、白酒中乳酸測定乳酸（lacticacid，CAS號50-21-5），又叫2-羥基丙酸（2-hydroxypropanoicacid），化學(xué)式為C3H6O3，分子量為90.08g/mol，無色透明的黏稠體，吸水性較強，可與乙醇、乙醚自由混合，不溶于氯仿；相對密度1.20~1.25，熔點53°C，沸點122°C（12mmHg）；乳酸具有D-型（CAS號10326-41-7）、L-型（CAS號79-33-4）以及等量D-型、L-型乳酸的混合物（稱DL-乳酸）這三種存在形式，其中D-型和L-型雖然兩者在光學(xué)結(jié)構(gòu)上有些差異，但是它們的理化性質(zhì)并無差別。乳酸是白酒中研究最早和研究頻次最高的有機酸，是白酒中重要的風味物質(zhì)，是白酒中重要香氣物質(zhì)乳酸乙酯的前體物質(zhì)。乳酸在白酒中的含量較高，濃度通常在70.7~1816mg/L。二、白酒中乳酸測定乳酸（lacticacid，CAS號50（一）HPLC法測定白酒中乳酸

1、基本原理利用乳酸的紫外吸收特性，使用配備UVD的高效液相色譜儀測定，外標法定量。2、儀器與設(shè)備0.45μm水相微孔濾膜。電子分析天平。高效液相色譜儀配有紫外檢測器（UVD）3、試劑與材料（1）超純水。（2）分析純磷酸二氫鉀。（一）HPLC法測定白酒中乳酸1、基本原理

（3）色譜級乳酸。（4）分析純磷酸。（5）磷酸二氫鉀水溶液，0.1mol/L（用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5）。（6）標準乳酸溶液：乳酸，5g/L。4、HPLC條件在210nm處進行吸光度測量。C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：磷酸二氫鉀（pH2.5），0.1mol/L；進樣量：5μL；流速：1mL/min；柱溫：40°C。（3）色譜級乳酸。

5、試驗步驟（1）樣品制備樣品用0.45μm水相微孔濾膜過濾，備用。（2）流動相制備稱取13.609g磷酸二氫鉀，用超純水溶解，并定容至1L。取適量磷酸過0.45μ.濾膜，調(diào)節(jié)流動相pH至2.5。（3）色譜分析乳酸標準溶液和制備好的樣品均是5μL進樣，根據(jù)HPLC操作參數(shù)分別重復(fù)進樣三次，確定乳酸的保留時間，并記錄不同濃度乳酸標準溶液和樣品中乳酸的色譜峰面積。5、試驗步驟

6、結(jié)果計算（1）定性分析根據(jù)乳酸參考溶液色譜分析結(jié)果，確定乳酸的保留時間。（2）定量分析首先，測量一系列濃度梯度乳酸標準溶液的色譜峰面積，以乳酸濃度為縱坐標，峰面積橫坐標繪制乳酸標準曲線；其次測量樣品中乳酸色譜峰的峰面積，利用所繪制的標準曲線定量。6、結(jié)果計算（二）UPLC法檢測白酒乳酸近年，隨著超高效液相色譜（UltraPerformanceLiquidChromatography，UPLC）技術(shù)的發(fā)展，不僅在分析速度、分離度和靈敏度方面明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的HPLC，在試劑的使用量方面，也大大地減少，降低了分析成本。UPLC同樣適合白酒中乳酸的檢測。下面介紹UPLC–PDAD檢測白酒中的乳酸。1、儀器與設(shè)備0.22μm有機針頭式濾器。超高效液色譜（如WatersUPLCH–Class）配有溶劑管理器，進樣管理器，PDAD檢測器，數(shù)據(jù)處理軟件。（二）UPLC法檢測白酒乳酸近年，隨著超高效液相色譜（Ult

2、試劑

（1）超純水。（2）色譜級磷酸二氫鈉。（3）乳酸。（4）磷酸。（5）磷酸二氫鈉水溶液，3.1202g/L（用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.7）。（6）標準乳酸溶液：乳酸，5g/L。

2、試劑

（1）超純水。

3、UPLC條件

在210nm處進行吸光度測量；T3柱（100mm×2.1mm，1.8μm），如WatersACQUITYUPLCHSST3；流動相：磷酸二氫鈉（pH2.7），3.1202g/L；進樣量：1μL；流速：0.25mL/min；柱溫：40°C。

3、UPLC條件

在210nm處進行吸光度測量；T3柱（

4、試驗步驟

（1）樣品制備首先，用超純水將白酒樣品稀釋至15%vol左右，用一次性注射器取1mL過0.22μm有機針頭式濾器。（2）流動相制備準確稱取3.1202g色譜級磷酸二氫鉀，用超純水溶解，并定容至1L。取適量磷酸過0.22μ.有機針頭式濾器，調(diào)節(jié)流動相pH至2.7。（3）UPLC分析標準乳酸溶液和制備好的樣品均是1μL進樣，根據(jù)3描述的UPLC操作參數(shù)分別重復(fù)進樣三次，確定乳酸的保留時間，并記錄不同濃度乳酸標準溶液和樣品中乳酸的色譜峰面積。

4、試驗步驟

（1）樣品制備首先，用超純水將白酒樣

5、計算

（1）定性分析根據(jù)乳酸參考溶液色譜分析結(jié)果，確定乳酸的保留時間。（2）定量分析首先，測量一系列濃度梯度乳酸標準溶液的色譜峰面積，以乳酸濃度為縱坐標，峰面積為橫坐標繪制乳酸標準曲線；其次測量樣品中乳酸色譜峰的峰面積，利用所繪制的標準曲線以外標法定量。

5、計算

（1）定性分析根據(jù)乳酸參考溶液色譜分析結(jié)果，確

6、注意事項

對于白酒中乳酸的檢測，除了高效液相色譜法和超高效液相色譜法，還有衍生化氣相色譜法、離子色譜法（IonChromatography，IC）等，但是最常用的還是HPLC法。不僅樣品預(yù)處理簡單，分析時間短，操作也比較簡單，但是隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，UPLC法高的分離度和靈敏度以及更短的分析時間，逐漸顯示出自身的優(yōu)勢，明顯優(yōu)于HPLC法。但是，在UPLC檢測過程中，乳酸和乙酸的色譜峰的保留時間接近，如果樣品的酒精度過高，會出現(xiàn)乳酸峰和乙酸峰相互重疊的現(xiàn)象，兩個色譜峰的分離度不好，不能完全分離，影響了乳酸的定量，因此需對酒樣進行稀釋，一般酒精度低于30%vol，乳酸和乙酸的色譜峰可完全分離，滿足定量要求。

6、注意事項

對于白酒中乳酸的檢測，除了高效液相色譜法和超三、葡萄酒中檸檬酸測定檸檬酸（citricacid，CAS號77-92-9），又稱3-羧基-3-羥基戊二酸（3-carboxy-3-hydroxypentanedioicacid），無味，白色固態(tài)晶體，是一種弱酸，帶有三個羧基（–COOH），化學(xué)式為C6H8O7，分子量為192.12g/mol，熔點156°C（313°F;429K），沸點310°C（590°F;583K)，無水檸檬酸密度1.665g/cm3，一水合檸檬酸的密度為1.542g/cm3（18°C），易溶于水、乙醇、乙醚和乙酸乙酯，不溶于苯、三氯甲烷和甲苯等溶劑。三、葡萄酒中檸檬酸測定檸檬酸（citricacid，CAS

葡萄酒中的檸檬酸來自于葡萄，是葡萄酒中重要的有機酸，影響葡萄酒的口感、香氣和顏色。由于檸檬酸的來源廣泛，價格低廉，因此常使用檸檬酸來酸化高pH的葡萄酒。報道稱紅葡萄酒中檸檬酸含量0.17~1.32g/L，白葡萄酒中檸檬酸含量0.20~0.54g/L，甜葡萄酒中檸檬酸含量0.34~1.61g/L。葡萄酒中的檸檬酸來自于葡萄，是葡萄酒中重要的有機酸，影響葡

1、基本原理通過離子交換樹脂柱（ionexchangeresincolumn）提取葡萄酒中的有機酸，通過HPLC柱將酸分離，利用酸的紫外吸收特性進行檢測。2、儀器與設(shè)備0.45μm纖維素過濾膜。C18固相萃取小柱，如SepPak–WatersAssoc。HPLC，配有10μL進樣器，溫度控制設(shè)備，UVD檢測器，圖表記錄儀或者積分儀或計算機控制系統(tǒng)。1、基本原理

3、試劑

（1）超蒸餾水。（2）重新蒸餾過的甲醇。（3）檸檬酸。（4）硫酸（ρ20=1.84g/mL）。（5）硫酸溶液，0.0125mol/L。（6）標準檸檬酸溶液：檸檬酸，5g/L

3、試劑

（1）超蒸餾水。

4、HPLC操作參數(shù)

在210nm處進行吸光度測量；含有強正離子（H+）交換樹脂的色譜柱（長300mm，內(nèi)徑7.8nm，顆粒直徑9μm），如HPX–87HBIO–RAD；流動相：硫酸溶液，0.0125mol/L；流速：0.6mL/min；溫度：60~65°C（可根據(jù)色譜柱樹脂的類型選擇）。

4、HPLC操作參數(shù)

在210nm處進行吸光度測量；含有

5、試驗步驟

（1）樣品制備首先，用10mL甲醇清洗C18固相萃取小柱，再用10mL水清洗。去除葡萄酒或者葡萄汁中氣體。過0.45μm纖維素過濾膜。吸取8mL過濾后的樣品通過C18小柱。丟棄前3mL流出液，并收集之后的5mL流出液（注意防止C18小柱變干）。（2）色譜分析10μL標準檸檬酸溶液和10μL制備的樣品，按照4描述的HPLC操作參數(shù)依次進樣，重復(fù)進樣三次，并記錄檸檬酸標準品的保留時間，以及檸檬酸標準溶液和樣品中檸檬酸的色譜峰面積。

5、試驗步驟

（1）樣品制備首先，用10mL甲醇清洗C

6、結(jié)果計算

（1）定性分析根據(jù)檸檬酸參考溶液，確定檸檬酸的保留時間。（2）定量分析測量參考溶液和樣品中檸檬酸色譜峰的峰面積，以檸檬酸標準溶液色譜峰面積為橫坐標，濃度為縱坐標，繪制標準曲線，根據(jù)外標法計算三次檢測結(jié)果的平均值。

6、結(jié)果計算

（1）定性分析根據(jù)檸檬酸參考溶液，確定檸檬7、注意事項

葡萄酒中檸檬酸的檢測方法除了高效液相色譜法，還包括衍生化氣相色譜法、酶光譜（可見光）分析法、紙層析色譜法、電噴霧電離質(zhì)譜法、毛細管電泳法和電位滴定法。酶法主要用于葡萄酒中蘋果酸、乳酸、檸檬酸的檢測，主要基于酶耦合反應(yīng)，在酶（檸檬酸裂解酶、蘋果酸脫氫酶和乳酸脫氫）的作用下，催化有機酸的裂解和/或脫氫反應(yīng)，測量輔酶NADH或者NADPH吸光度的增加或者減少。該法特異性高，但是一次只能檢測一種有機酸，因此比較耗時。GC法雖然具有很高的靈敏度和選擇性，但是由于有機酸是不揮發(fā)的，因此需要硅烷化、酯化等衍生化步驟處理后才能進行GC分析，前處理步驟繁瑣，對于批量樣品檢測，耗費時間長、成本高。電泳法對于葡萄酒中有機酸的檢測，是在高效液相色譜法之后慢慢發(fā)展起來的，具有高分辨率、簡單、自動化、分析時間短、樣品和試劑的消耗少等優(yōu)點。對于HPLC法來說，葡萄酒樣品的前處理操作簡單。7、注意事項

葡萄酒中檸檬酸的檢測方法除了高效液相色譜法，還四、葡萄酒中白藜蘆醇的測定1、基本原理白藜蘆醇（resveratrol）屬于芪素類化合物（stilbenoid），CAS號501-36-0，分子式為C14H12O3，分子量228.25g/mol，帶輕微黃色的白色粉末，熔點261~263oC，沸點449~450oC，lgP3.139，難溶于水（溶解度0.03g/L），易溶于丙酮、乙醇（溶解度50g/L）、甲醇、乙酸乙酯、DMSO（溶解度16g/L）、乙醚、三氯甲烷等有機溶劑（溶解度從高到低），LD5023.2μmol/L（5.29g/L）。四、葡萄酒中白藜蘆醇的測定1、基本原理

白藜蘆醇有順、反兩種結(jié)構(gòu)，即順-白藜蘆醇和反-白藜蘆醇。順-白藜蘆醇在紫外光（350nm，甲醇溶液中）的作用下會發(fā)生光異構(gòu)化（photoisomerization），轉(zhuǎn)換為反-白藜蘆醇。反-白藜蘆醇反-白藜蘆醇白藜蘆醇有順、反兩種結(jié)構(gòu)，即順-白藜蘆醇和反-白藜蘆醇。順

白藜蘆醇是一種天然的抗氧化劑，能降低血液黏度，抑制血小板凝聚和血管舒張（vasodilation），保持血液流動；預(yù)防和治療動脈粥樣硬化（atherosclerosis）、冠心病、局部缺血性心臟病（ischemicheartdisease）和高血膽固醇；抑制低密度脂蛋白的氧化，調(diào)節(jié)其代謝；防止脂肪過氧化，保護肝臟；有類似雌激素的功效，能治療乳腺癌和其他疾病；通過抑制蛋白質(zhì)-酪氨酸激酶（protein-tyrosinekinase），防止癌癥的發(fā)生和發(fā)展，抑制腫瘤；能延緩老化。白藜蘆醇是一種天然的抗氧化劑，能降低血液黏度，抑制血小板凝

2、儀器與設(shè)備HPLC儀器，帶有二極管陣列紫外–可見光檢測。0.20μm過濾膜。3、試劑（1）超純水、色譜級乙腈、冰醋酸。（2）反-與順-白藜蘆醇標準溶液反-白藜蘆醇標準儲備液（1.0g/L）的配制：稱取10.0mg反-白藜蘆醇于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，置于–20°C冰箱中保存?zhèn)溆谩ｍ?白藜蘆醇通過反-白藜蘆醇在日光下照射獲得。2、儀器與設(shè)備

4、HPLC條件反相C18柱（250mm×4mm，5μm粒徑）；流動相：溶劑A：冰醋酸水溶液，pH2.4；溶劑B：20%A+80%乙腈；0min，82%A，18%B；10min，82%A，18%B；17min，77