2022-2023學(xué)年 蘇教版 選擇性 必修三 微生物分離、純化和培養(yǎng)的無菌技術(shù)（108張）課件

第2課時(shí)微生物分離、純化和培養(yǎng)的無菌技術(shù)課程內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)核心素養(yǎng)對(duì)接(1)概述平板劃線法分離和純化微生物的過程。(2)概述稀釋涂布平板法分離和純化微生物的過程。(3)進(jìn)行土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)。(1)科學(xué)思維——能通過平板劃線法和稀釋涂布平板法的操作，掌握微生物分離和純化的基本方法。(2)科學(xué)探究——學(xué)會(huì)配制選擇培養(yǎng)基，以分離出能分解尿素的細(xì)菌，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)。課前自主預(yù)習(xí)課中合作探究課堂小結(jié)課后·分層訓(xùn)練///////1235/////////////////////隨堂檢測(cè)4///////課前自主預(yù)習(xí)知識(shí)點(diǎn)1知識(shí)點(diǎn)2知識(shí)點(diǎn)1平板劃線法分離和純化微生物1.平板劃線法劃線稀釋單個(gè)菌落 “由點(diǎn)到線”的稀釋劃線單個(gè)微生物單個(gè)微生物皿底第1第2過火滅菌由點(diǎn)到線倒置菌落2.通過平板劃線法獲得純化的酵母菌菌落高壓蒸汽

火焰

大于瓶口的縫隙知識(shí)點(diǎn)2稀釋涂布平板法分離和純化微生物(1)稀釋涂布平板法梯度稀釋涂布平板涂布器充分0.1酒精冷卻恒溫培養(yǎng)箱50℃表面和內(nèi)部(3)分離土壤中分解尿素的細(xì)菌并進(jìn)行計(jì)數(shù)3～5無菌水氮源無菌水污染最低3倒置2430～300稀釋體積(1)倒平板后，待平板冷凝之后需將其倒置。(

)(2)平板劃線法接種時(shí)，每一次劃線前都要挑取菌體。(

)(3)稀釋涂布平板法能分離細(xì)菌，也能計(jì)數(shù)。(

)(4)測(cè)定不同微生物數(shù)量時(shí)，接種的土壤懸液的稀釋度相同。(

)(5)采用混合平板法分離和純化微生物時(shí)，僅在培養(yǎng)基的表面長出菌落。(

)(6)通過培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基，可以判斷是否存在著雜菌污染。(

)√×√××√1.在利用平板劃線法純化酵母菌的實(shí)驗(yàn)中，若純化培養(yǎng)失敗，可能的原因有哪些？

提示

接種環(huán)灼燒后未冷卻即挑取菌體進(jìn)行劃線，菌體因接觸高溫接種環(huán)而死亡；第1次劃線前挑取的菌體過多，劃線時(shí)不能得到充分稀釋而無法獲得酵母菌單菌落；第1次劃線前未灼燒接種環(huán)，因接種環(huán)有雜菌而無法獲得酵母菌單菌落；第2次、第3次劃線前未灼燒接種環(huán)，未將殘留在接種環(huán)上的酵母菌殺死，酵母菌得不到充分稀釋而無法獲得酵母菌單菌落；第2次劃線或第3次劃線時(shí)未能從上次劃線的末端開始，酵母菌得不到充分稀釋而無法獲得酵母菌單菌落；培養(yǎng)基滅菌不徹底或培養(yǎng)過程受到雜菌污染，無法獲得酵母菌單菌落。2.有人說，采用稀釋涂布平板法培養(yǎng)和計(jì)算得到的微生物的數(shù)量比稀釋液中實(shí)際微生物的數(shù)量要少。你同意這樣的觀點(diǎn)嗎？

為什么？

提示

同意這個(gè)觀點(diǎn)。稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在平板表面上所形成的單個(gè)菌落來計(jì)數(shù)的，一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。實(shí)際計(jì)數(shù)時(shí)，往往會(huì)出現(xiàn)菌落聚合在一起的情況，因?yàn)閮蓚€(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此，稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。3.在無菌操作的條件下，為什么能通過稀釋涂布平板法對(duì)所培養(yǎng)的微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)？

提示

稀釋涂布平板法將待分離的材料做一系列的梯度稀釋，再取一定量的某一稀釋度的菌液涂布平板，然后用無菌的涂布器將菌液均勻地涂布在整個(gè)平板表面，使其中的微生物充分分散，培養(yǎng)后在平板培養(yǎng)基表面形成多個(gè)單菌落。如果經(jīng)稀釋涂布平板法培養(yǎng)出的都是單個(gè)細(xì)胞增殖形成的菌落，那么統(tǒng)計(jì)這些菌落數(shù)目，即可計(jì)算出單位體積樣品中的微生物數(shù)量。課中合作探究探究點(diǎn)一探究點(diǎn)二探究點(diǎn)一平板劃線法分離和純化微生物1.閱讀教材P22有關(guān)倒平板的內(nèi)容，回答下列問題：(1)倒平板時(shí)，為什么在酒精燈火焰旁操作？提示

酒精燈火焰旁是無菌區(qū)域，可以避免周圍環(huán)境中的微生物的污染。(2)倒平板時(shí)為什么要使錐形瓶的瓶口通過火焰？提示

通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。(3)平板冷凝后為何要倒置？提示

防止皿蓋上的冷凝水珠落入培養(yǎng)基，避免培養(yǎng)基中的水分過快蒸發(fā)。2.閱讀教材P21有關(guān)平板劃線法的內(nèi)容，回答下列問題： (1)平板劃線法接種菌種時(shí)，哪些操作可防止雜菌污染？

提示

①接種前將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒。②劃線操作在酒精燈火焰旁進(jìn)行。③接種環(huán)挑取菌體前后，要將試管口通過火焰。④劃線時(shí)將培養(yǎng)皿的皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃線，劃線后及時(shí)蓋上皿蓋。(2)在瓊脂平板表面多次做“由點(diǎn)到線”的稀釋劃線的目的是什么？提示

這樣做可以得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)微生物增殖而成的菌落。(3)在做第二次劃線以及其后的操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？提示

劃線末端含有的菌體數(shù)目較少，每次從上一次劃線的末端開始劃線能夠使菌體的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終分散成單個(gè)的菌體。(4)接種操作時(shí)每次劃線接種前與接種后都要灼燒接種環(huán)，其目的分別是什么？提示

每次劃線前灼燒是為了殺死上次劃線結(jié)束后殘留的菌種。接種結(jié)束后灼燒，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。(5)接種結(jié)束后，為什么要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和一個(gè)接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)？未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長很關(guān)鍵。如果有菌落生長，說明了什么？提示

培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對(duì)照，未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的。若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底，或培養(yǎng)基被污染了，需要重新制備。1.倒平板成功關(guān)鍵點(diǎn) (1)待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)進(jìn)行倒平板操作。 (2)要使錐形瓶的瓶口通過酒精燈火焰，通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。 (3)倒平板時(shí)，要用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開，以免雜菌污染培養(yǎng)基。 (4)整個(gè)操作過程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。 (5)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，那么這個(gè)平板不能用來培養(yǎng)微生物，因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。2.平板劃線法成功關(guān)鍵點(diǎn) (1)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。 (2)第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接種環(huán)滅菌，劃線操作結(jié)束后仍需灼燒接種環(huán)。

(3)灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后才能挑取菌體，以免溫度太高殺死菌種。 (4)在做第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的菌落。 (5)多次劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。 (6)接種和劃線操作需要在酒精燈火焰附近進(jìn)行。[例1]

下列關(guān)于制備固體培養(yǎng)基時(shí)倒平板的敘述，正確的是(

) A.倒好的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進(jìn)行干熱滅菌 B.應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C.為防止微生物侵入培養(yǎng)基，要在酒精燈火焰旁進(jìn)行操作 D.倒好培養(yǎng)基后，應(yīng)立即將平板倒過來放置

解析

應(yīng)該在倒平板之前將培養(yǎng)基進(jìn)行濕熱滅菌，將培養(yǎng)皿進(jìn)行干熱滅菌，A錯(cuò)誤；倒平板時(shí)，用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，B錯(cuò)誤；為防止微生物侵入培養(yǎng)基，要在酒精燈火焰旁進(jìn)行操作，C正確；倒好培養(yǎng)基后，等培養(yǎng)基冷凝后再將平板倒過來放置，D錯(cuò)誤。C[例2]

(多選)為了獲得純化的酵母菌菌落，在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線接種，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是(

)A.為保證無菌操作，接種環(huán)使用前必須滅菌B.倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整

C.圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落D.接種和劃線操作需要在酒精燈火焰附近進(jìn)行ACD解析

為保證無菌操作，接種環(huán)使用前必須滅菌，A正確；倒平板后無需間歇晃動(dòng)，B錯(cuò)誤；圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，C正確；酒精燈火焰附近是無菌區(qū)，接種和劃線操作需要在酒精燈火焰附近進(jìn)行，D正確。探究點(diǎn)二稀釋涂布平板法分離和純化微生物1.篩選分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基的配方如表所示：組分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0gH2O定容至1000mL(1)在培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？提示

碳源是葡萄糖，氮源是尿素。(2)分離分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基是如何進(jìn)行選擇的？提示

該選擇培養(yǎng)基的配方中，尿素是培養(yǎng)基中的唯一氮源，因此，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。(3)為什么只有能分解尿素的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長？提示

分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可催化尿素分解產(chǎn)生NH3，NH3可作為微生物生長的氮源。2.甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。 (1)甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230，該同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果是否可靠？為什么？

提示

不可靠。為增加實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性，應(yīng)設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)，在同一稀釋度下至少涂布3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)結(jié)果后計(jì)算平均值。(2)乙同學(xué)在該濃度下涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)將21舍去，然后取平均值。該同學(xué)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理是否合理？為什么？提示

不合理。微生物計(jì)數(shù)時(shí)，如果實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果差別很大的情況，應(yīng)分析實(shí)驗(yàn)過程中可能的影響因素，找出差異的原因，而不能簡(jiǎn)單地將結(jié)果舍棄后進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)某同學(xué)在三種稀釋度下吸取0.1mL的菌液涂布平板，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，得到以下的數(shù)據(jù)，試計(jì)算1g樣品的活菌數(shù)。平板菌落數(shù)稀釋度平板1平板2平板3104320360356105212234287106212318提示

105的稀釋度下取0.1mL的菌液涂布的三個(gè)平板上的菌落數(shù)在30～300之間，計(jì)算其平均值為(212＋234＋287)/3≈244。進(jìn)一步可以換算出1g樣品中活菌數(shù)為(244÷0.1)×105＝2.44×108(個(gè))。(4)為什么統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低？提示

當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。1.稀釋涂布平板法 (1)主要操作環(huán)節(jié)：系列稀釋和涂布平板。 (2)系列稀釋和涂布平板后培養(yǎng)結(jié)果如圖所示2.平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較3.兩種微生物計(jì)數(shù)方法的比較[例3]

(多選)某興趣小組從校園土壤中取樣，進(jìn)行土壤中“分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)。小明將1g土壤制成10－6稀釋液，取0.1mL稀釋液篩選出約120個(gè)菌落，而其他同學(xué)只篩選出約40個(gè)菌落。下列敘述正確的是(

)A.出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是小明和其他同學(xué)取樣的土壤不同B.要檢查培養(yǎng)基是否受到污染，可將小明配制的培養(yǎng)基不接種進(jìn)行培養(yǎng)C.稀釋倍數(shù)太小可能導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏小D.其他同學(xué)1g土樣中分解尿素的細(xì)菌約為4×108個(gè)ABCD解析

小明篩選出的菌落數(shù)明顯比其他同學(xué)多，出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是小明和其他同學(xué)取樣的土壤不同，也有可能是培養(yǎng)基中混入其他氮源或培養(yǎng)基被污染，A正確；要檢查培養(yǎng)基是否受到污染，可將小明配制的培養(yǎng)基不加土樣進(jìn)行培養(yǎng)，即進(jìn)行空白對(duì)照，B正確；當(dāng)稀釋倍數(shù)太小時(shí)，兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)菌連在一起時(shí)，培養(yǎng)基上看到的是一個(gè)菌落，即可能導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏小，C正確；其他同學(xué)篩選出約40個(gè)菌落，1g土樣中分解尿素的細(xì)菌約為40×106÷0.1＝4×108個(gè)，D正確。[例4]

環(huán)境中的苯酚有害，研究者準(zhǔn)備依據(jù)下圖步驟操作，從處理廢水的活性污泥中分離篩選能高效降解苯酚的菌株。相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(

)DA.苯酚降解菌富集培養(yǎng)基以苯酚為碳源促進(jìn)目的菌大量增殖B.將采集樣品接種培養(yǎng)時(shí)苯酚濃度應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加C.可采用稀釋涂布平板法獲得降解苯酚的單菌落D.平板上長出的菌落就是研究者所需要的目的菌株解析

欲分離篩選能高效降解苯酚的菌株，在培養(yǎng)基中以苯酚為唯一碳源富集培養(yǎng)，可促進(jìn)目的菌的大量增殖，A正確；圖示方法為稀釋涂布平板法，將采集樣品接種培養(yǎng)時(shí)苯酚濃度應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加，B正確；當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠大時(shí)，平板上可獲得降解苯酚的單菌落，C正確；由于活性污泥中含有多種微生物，則在平板上長出的菌落不全是研究者所需要的目的菌株，D錯(cuò)誤。課堂小結(jié)思維導(dǎo)圖晨讀必背1.由單個(gè)微生物增殖形成的菌落，就是這種微生物的純種菌落。2.平板劃線法和稀釋涂布平板法都可用于菌種的分離和純化，只有稀釋涂布平板法才可用于微生物的計(jì)數(shù)。隨堂檢測(cè)1.如圖為純培養(yǎng)酵母菌的一個(gè)操作環(huán)節(jié)，下列相關(guān)敘述中，錯(cuò)誤的是(

)DA.該操作步驟是接種，方法是平板劃線法B.除第一次劃線外，以后的每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端C.圖中酵母菌密度最小的是5處D.該接種方法適用于酵母菌的計(jì)數(shù)解析

該操作步驟是接種，方法是平板劃線法，A正確；除第一次劃線外，以后的每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端，目的是將聚集的菌種逐漸稀釋，從而得到單菌落，B正確；圖中5為最后一次劃線，菌種密度最低，C正確；平板劃線法只能用于微生物的分離、培養(yǎng)，不能用于計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。C2.某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。下列關(guān)于土壤中分解尿素細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)的敘述，正確的是(

) A.分解尿素的細(xì)菌是以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源的 B.倒平板時(shí)應(yīng)將打開的培養(yǎng)皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C.培養(yǎng)基中KH2PO4等的作用之一是作為緩沖劑保持pH穩(wěn)定 D.若實(shí)驗(yàn)組菌落平均數(shù)為57個(gè)/平板，空白對(duì)照平板上有3個(gè)菌落，則本組菌落數(shù)的平均值為54個(gè)/平板解析

分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)型，不能以CO2作為碳源，A錯(cuò)誤；倒平板時(shí)，不能將打開的培養(yǎng)皿蓋放到一邊，以免微生物污染，正確的做法是：用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10～20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，B錯(cuò)誤；無機(jī)鹽可以作為緩沖劑保持細(xì)胞生長過程中pH穩(wěn)定，所以培養(yǎng)基中KH2PO4等的作用之一是作為緩沖劑保持pH穩(wěn)定，C正確；在完全正確的操作情況下，空白對(duì)照組中不應(yīng)出現(xiàn)菌落。若空白對(duì)照組出現(xiàn)菌落，說明操作過程中存在微生物污染，屬于實(shí)驗(yàn)失誤，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用，D錯(cuò)誤。A3.為了觀察手掌上附著的微生物，某小組成員將自己的手掌在配制的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上輕輕按壓后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，將平板倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，結(jié)果如圖所示。下列說法錯(cuò)誤的是(

)A.配制的培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后，還要調(diào)節(jié)pH才能用于接種B.待高溫滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至50℃左右后，再進(jìn)行倒平板C.在超凈工作臺(tái)上和酒精燈火焰旁進(jìn)行操作，是為了防止雜菌污染D.手掌上的某些微生物在該培養(yǎng)基上并沒有生長繁殖形成菌落解析

配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基時(shí)，先調(diào)節(jié)pH，再進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，A錯(cuò)誤；待高溫滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至50℃左右后，再進(jìn)行倒平板，此溫度下培養(yǎng)基不燙手，便于后續(xù)操作，且培養(yǎng)基尚未凝固，容易倒出，B正確；超凈工作臺(tái)在使用前經(jīng)紫外線消毒，而酒精燈火焰附近存在一個(gè)無菌區(qū)，為了防止雜菌污染，要在超凈工作臺(tái)上和酒精燈火焰附近進(jìn)行操作，C正確；牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基雖然營養(yǎng)齊全，但并非所有微生物均可在其上生存，如病毒則無法在該培養(yǎng)基上生長繁殖，D正確。ACD4.(多選)下列關(guān)于稀釋涂布平板法和平板劃線法的操作，正確的是(

)A.兩次劃線之間灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種B.不同濃度的菌液經(jīng)涂布后均可在固體培養(yǎng)基表面形成單菌落C.在獲取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過火焰D.同一濃度的稀釋液應(yīng)至少涂布三個(gè)平板用來計(jì)數(shù)解析

兩次劃線之間灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使得下次劃線的菌種來自上次劃線的末端，A正確；若菌液濃度過大，形成的菌落就連在一起，則得不到單個(gè)的菌落，當(dāng)菌液稀釋度足夠高的情況下，菌液經(jīng)涂布后可在固體培養(yǎng)基表面形成單菌落，B錯(cuò)誤；在獲取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過火焰，進(jìn)行灼燒滅菌，目的是防止雜菌污染，C正確；同一濃度的稀釋液應(yīng)至少涂布三個(gè)平板，取平均值，以減小誤差，D正確。5.尿素是一種重要的氮肥，但是不能被農(nóng)作物直接吸收，只有被土壤中的細(xì)菌分解成氨后才能被植物利用。某實(shí)驗(yàn)小組要完成課題“從土壤中分離出能分解尿素的細(xì)菌”，回答下列問題： (1)在該實(shí)驗(yàn)中，配制培養(yǎng)基需要以________為唯一氮源。該培養(yǎng)基中________(填“需要”或“不需要”)添加葡萄糖，原因是__________________ ________________________________。若要驗(yàn)證該培養(yǎng)基具有選擇作用，需要設(shè)置_____________________________________________________________作為對(duì)照，當(dāng)_____________________________________________________

時(shí)，即可說明該培養(yǎng)基具有選擇作用。尿素需要

尿素分解菌為異養(yǎng)生物，需要葡萄糖為其提供碳源在相同稀釋度下接種等量的相同樣品的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落明顯多于該培養(yǎng)基上的菌落(2)在接種前需要對(duì)樣品進(jìn)行稀釋處理，以保證獲得菌落數(shù)在________范圍、適于計(jì)數(shù)的平板。測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用104、105、106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，若測(cè)定放線菌數(shù)量，則需要采用與此不一樣的稀釋倍數(shù)，原因是________________________________________________________。(3)在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)從對(duì)應(yīng)106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約200個(gè)菌落，但是其他同學(xué)在同樣稀釋度下只篩選出大約90個(gè)菌落，若甲同學(xué)的結(jié)果有問題，則可能的原因是：_____________________________________________________________________________________________________________________。30～300土壤中各類微生物的數(shù)量是不同的

培養(yǎng)基被雜菌污染或培養(yǎng)基中混入了其他含氮物質(zhì)或土壤樣品不同基礎(chǔ)對(duì)點(diǎn)綜合提升D知識(shí)點(diǎn)1平板劃線法分離和純化微生物1.下列有關(guān)用平板劃線法接種的操作，錯(cuò)誤的是(

)A.將接種環(huán)放在火焰上灼燒B.用已冷卻的接種環(huán)挑取菌體C.挑取菌體和劃線都要在火焰旁進(jìn)行D.接種環(huán)劃線要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連解析

劃線時(shí)，不能將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連，D錯(cuò)誤。BD2.(多選)微生物接種方法有很多，平板劃線法是最常用的一種。如圖是平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)棰佗冖邰?。下列操作方法正確的是(

)A.劃線操作時(shí)，如接種環(huán)不慎劃破培養(yǎng)基，可以繼續(xù)正常操作B.對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行編號(hào)或?qū)N進(jìn)行標(biāo)注時(shí)，應(yīng)使用記號(hào)筆在皿底標(biāo)記C.可以將第④區(qū)域的劃線與第①區(qū)域的劃線相連D.在該操作過程中需要灼燒接種環(huán)5次解析

劃線操作時(shí)，如接種環(huán)不慎劃破培養(yǎng)基，則該培養(yǎng)基將不能繼續(xù)使用，A錯(cuò)誤；培養(yǎng)時(shí)需要倒置培養(yǎng)，對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行編號(hào)或?qū)N進(jìn)行標(biāo)注時(shí)，應(yīng)使用記號(hào)筆在皿底標(biāo)記，B正確；第④區(qū)域的劃線不能與第①區(qū)域的劃線相連，C錯(cuò)誤；接種前和接種后接種環(huán)均需要灼燒，在該操作過程中需要灼燒接種環(huán)5次，D正確。A3.下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)相關(guān)敘述中，正確的是(

)A.擴(kuò)大培養(yǎng)酵母菌應(yīng)該使用液體培養(yǎng)基并使用搖床振蕩培養(yǎng)B.瓊脂在培養(yǎng)基中不僅可以作為凝固劑，還可以作為碳源C.劃線分離操作過程，若劃線4次，則接種環(huán)需要灼燒4次D.待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，在酒精燈火焰附近倒平板解析

酵母菌是異養(yǎng)兼性厭氧微生物，在有氧條件下能大量繁殖，液體培養(yǎng)基能增大菌體與營養(yǎng)物質(zhì)的接觸，使用搖床振蕩培養(yǎng)能增加溶氧量，故擴(kuò)大培養(yǎng)酵母菌應(yīng)該使用液體培養(yǎng)基并使用搖床振蕩培養(yǎng)，A正確；瓊脂不能提供碳源，只能作為凝固劑，B錯(cuò)誤；每次劃線前后均需要對(duì)接種環(huán)灼燒，所以若劃線4次，則接種環(huán)需要灼燒5次，C錯(cuò)誤；待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板，D錯(cuò)誤。AD4.(多選)下列關(guān)于微生物的分離與培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是(

)A.干熱滅菌可以使用專門的干熱滅菌箱或酒精燈火焰的充分燃燒層B.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D.微生物純培養(yǎng)是指獲得由單一個(gè)體繁殖而形成的微生物群體的過程解析

干熱滅菌法包括干熱空氣滅菌法和火焰灼燒法，前者可以使用專門的干熱無菌箱，后者可以使用酒精燈火焰的充分燃燒層，A正確；倒平板時(shí)，用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，B錯(cuò)誤；接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后待其冷卻再挑取菌落，防止溫度過高燒死微生物，C錯(cuò)誤；在微生物培養(yǎng)過程中，由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，D正確。BCD知識(shí)點(diǎn)2稀釋涂布平板法分離和純化微生物5.(多選)下列就“分離土壤中分解尿素的細(xì)菌并進(jìn)行計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)的有關(guān)敘述，正確的是(

) A.尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，農(nóng)作物直接吸收利用 B.經(jīng)高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基所倒平板和接種后培養(yǎng)時(shí)的平板均要倒置 C.同一稀釋度下至少要涂布三個(gè)平板并且要培養(yǎng)到菌落數(shù)穩(wěn)定時(shí)計(jì)數(shù) D.在相同培養(yǎng)條件下，未接種的培養(yǎng)基表面無菌落生長說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染解析

尿素是一種重要的氮肥，農(nóng)作物不能將其直接吸收利用，而是通過土壤中的細(xì)菌將其分解為氨和CO2后才能被農(nóng)作物利用，A錯(cuò)誤；經(jīng)高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基所倒平板和接種后培養(yǎng)時(shí)的平板均要倒置，以防止冷凝水污染培養(yǎng)基，B正確；為使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確，同一稀釋度下至少要涂布三個(gè)平板并且要培養(yǎng)到菌落數(shù)穩(wěn)定時(shí)計(jì)數(shù)，并求其平均數(shù)，C正確；證明選擇培養(yǎng)基沒有被雜菌污染的方法是對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行空白培養(yǎng)，即選取未接種的培養(yǎng)基與接種樣品的培養(yǎng)基同時(shí)培養(yǎng)，在相同培養(yǎng)條件下，未接種的培養(yǎng)基表面無菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染，D正確。A6.如圖是從土壤中篩選具有較強(qiáng)降解磷能力菌株過程中的一些操作。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(

)A.倒平板后的培養(yǎng)皿需進(jìn)行滅菌B.培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)皿的放置應(yīng)如圖乙中a所示C.在火焰旁操作，可以防止雜菌污染D.進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)時(shí)，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板解析

培養(yǎng)基滅菌后倒平板，倒平板后的培養(yǎng)皿不再進(jìn)行滅菌，A錯(cuò)誤；等待平板冷卻凝固后，應(yīng)將平板倒過來放置，如圖a所示，B正確；操作時(shí)為避免雜菌污染，應(yīng)在火焰旁操作，C正確；進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，D正確。C7.如圖為“分離土壤中分解尿素的細(xì)菌并進(jìn)行計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中樣品稀釋示意圖。據(jù)圖分析錯(cuò)誤的是(

)A.3號(hào)試管中樣品液的稀釋倍數(shù)為104倍B.對(duì)4號(hào)試管中的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)可能恰為5號(hào)試管的10倍C.5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤樣品中的活菌數(shù)為1.7×108D.該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要低解析

5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤樣品中細(xì)菌數(shù)為(168＋175＋167)÷3×106÷0.1＝1.7×109，C錯(cuò)誤；用這種計(jì)數(shù)方法得到的結(jié)果往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，因?yàn)橛锌赡芏鄠€(gè)細(xì)菌形成一個(gè)菌落，D正確。BD8.(多選)在分離、純化酵母菌實(shí)驗(yàn)中，劃線接種(甲)、培養(yǎng)結(jié)果(乙)如圖所示，且甲、乙的對(duì)應(yīng)位置不變。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(

)A.配制培養(yǎng)基時(shí)需進(jìn)行濕熱滅菌B.甲中a區(qū)域?yàn)閯澗€的起始位置C.連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落D.圖示接種過程中接種環(huán)灼燒了4次解析

為了能徹底滅菌，配制的培養(yǎng)基需進(jìn)行濕熱滅菌，A正確；起始劃線的區(qū)域長出的菌落多且密，甲中d區(qū)域?yàn)閯澗€的起始位置，a區(qū)域?yàn)閯澗€的結(jié)束位置，B錯(cuò)誤；連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落，C正確；由于每次使用接種環(huán)前后都要灼燒滅菌，圖示甲中共有4次劃線接種，接種過程中接種環(huán)灼燒了5次，D錯(cuò)誤。B9.下圖表示從土壤中分離能降解酚類化合物對(duì)羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn)過程。下列與該實(shí)驗(yàn)相關(guān)的敘述中不正確的是(

)A.實(shí)驗(yàn)中所用的培養(yǎng)基①②③④均屬于選擇培養(yǎng)基B.圖中Ⅰ、Ⅱ過程實(shí)現(xiàn)了對(duì)目標(biāo)微生物的稀釋C.統(tǒng)計(jì)⑤處培養(yǎng)基中的菌落數(shù)并不一定代表接種到④上的活菌數(shù)D.在⑤處培養(yǎng)基上形成菌落的微生物同化作用類型為異養(yǎng)型解析

該實(shí)驗(yàn)的目的是從土壤中分離能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物，所以使用的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基，A正確；圖中Ⅰ、Ⅱ過程為選擇培養(yǎng)，目的是增大所分離的微生物的濃度，B錯(cuò)誤；⑤處的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，C正確；所分離的微生物利用現(xiàn)成的有機(jī)物生長繁殖，所以該微生物的同化作用類型為異養(yǎng)型，D正確。AC10.(多選)硝化細(xì)菌可將氨或銨鹽氧化為易被植物吸收的硝酸鹽，釋放的能量可用于將二氧化碳和水轉(zhuǎn)化成有機(jī)物。下圖為從土壤中分離硝化細(xì)菌菌株的過程示意圖。下列有關(guān)說法錯(cuò)誤的是(

)A.制作該固體培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先滅菌再調(diào)pHB.Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基在功能上屬于選擇培養(yǎng)基C.要篩選硝化細(xì)菌，Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基的成分應(yīng)不含碳源、氮源D.接種后的Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基在恒溫箱中通常需要倒置培養(yǎng)解析

為了防止雜菌污染，配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)該先調(diào)節(jié)pH，然后滅菌，A錯(cuò)誤；Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基在功能上屬于選擇培養(yǎng)基，可通過選擇培養(yǎng)基增加該菌的濃度，B正確；硝化細(xì)菌可將氨或銨鹽氧化為易被植物吸收的硝酸鹽，該培養(yǎng)基應(yīng)加入氮源，硝化細(xì)菌利用氧化氮源獲得化學(xué)能合成有機(jī)物，C錯(cuò)誤；操作完后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫箱中培養(yǎng)，D正確。11.分解尿素的細(xì)菌廣泛存在于農(nóng)田等土壤中，某生物實(shí)驗(yàn)小組嘗試對(duì)分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離與計(jì)數(shù)，請(qǐng)回答下列問題： (1)為篩選出能分解尿素的細(xì)菌，配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)以__________作為唯一氮源，因此該培養(yǎng)基屬于______培養(yǎng)基。 (2)常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目的方法是___________________________。尿素選擇稀釋涂布平板法(3)該小組對(duì)分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間，這樣做的目的是__________________________。將1mL樣液稀釋104倍，在3個(gè)平板上分別涂布0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目，每隔一個(gè)“時(shí)間間隔”統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，最后選取______________________作為結(jié)果。如果3個(gè)平板的菌落數(shù)分別為39、42和45，據(jù)此可得出每毫升樣液中活菌數(shù)為________。檢驗(yàn)平板滅菌是否徹底菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄4.2×106解析

(1)要篩選出能分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。(2)接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可用于活菌計(jì)數(shù)；顯微直接計(jì)數(shù)法用于統(tǒng)計(jì)活菌和死菌的數(shù)目。(3)該小組在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間，用于檢測(cè)平板滅菌是否徹底。經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目，每隔一個(gè)“時(shí)間間隔”統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，最后選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。3個(gè)平板的菌落數(shù)分別為39、42和45，據(jù)此可得出每毫升樣液中活菌數(shù)＝(39＋42＋45)÷3×104÷0.1＝4.2×106。12.研究人員欲從土壤中篩選高淀粉酶活性的細(xì)菌(目標(biāo)菌)，并對(duì)其進(jìn)行研究?；卮鹣铝袉栴}： (1)在細(xì)菌篩選過程中，將土壤樣品稀釋液接種至以________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，除碳源外，該培養(yǎng)基還含有氮源、水、無機(jī)鹽和____________。 (2)進(jìn)行微生物菌種純化時(shí)，為得到單菌落，最常用的兩種接