臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)新技術(shù)

可編輯可編輯精品精品熒光定量PCR所謂實(shí)時熒光定量PCR所謂實(shí)時熒光定量PCRPCR熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。技術(shù)原理：將標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后，完成高TaqmanCT臨床應(yīng)用價；地中海貧血、血友病、性別發(fā)育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優(yōu)生優(yōu)流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)（FCM）是一種在功能水平上對單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定點(diǎn)，成為當(dāng)代最先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)。技術(shù)原理儀器中一系列光學(xué)系統(tǒng)（透鏡、光闌、濾片和檢測器等）收集熒光、光散射、光臨床應(yīng)用學(xué)研究，并已開始用于細(xì)菌鑒定，病毒感染細(xì)胞的識別和艾滋病感染者T4細(xì)胞的記數(shù)。FCMFCM治療有重要作用。目前FCM用的各種單克隆抗體試劑已經(jīng)發(fā)展到了百余種，可以對各種血細(xì)胞和組織細(xì)胞的表型進(jìn)行測定分析。一、一、在血液病診斷和治療中的應(yīng)用FCM通過對外周血細(xì)胞或骨髓細(xì)胞表面抗原和DNA的檢測分析，對白血FCM通過對外周血細(xì)胞或骨髓細(xì)胞表面抗原和DNA的檢測分析，對白血病等各種血液病的診斷、預(yù)后判斷和治療起著舉足輕重的作用。二、在血栓與出血性疾病中的應(yīng)用FCM可以通過單抗免疫熒光標(biāo)記(血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa,CD62，CD63病等各種血液病的診斷、預(yù)后判斷和治療起著舉足輕重的作用。二、在血栓與出血性疾病中的應(yīng)用FCM可以通過單抗免疫熒光標(biāo)記(血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa,CD62，CD63等)監(jiān)測血小板功能及活化情況，有利于血栓栓塞性疾病的診斷和治療。而用FCMFCMFCM靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。酶聯(lián)免疫分析技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)技20世紀(jì)70技術(shù)原理后加入酶反應(yīng)底物，根據(jù)底物被酶催化產(chǎn)生的顏色及其吸光度(A)值的大小進(jìn)行定性或定量分析的方法。的常用方法。臨床應(yīng)用：ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。1寄生蟲感染如阿米巴、弓形蟲、錐蟲等。2、蛋白質(zhì)如各種免疫球蛋白，腫瘤標(biāo)志物如甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺堿性磷酸酶，激素如hCG,FSH,TSH,hGH,酶如肌酸激酶-MB，其他蛋白質(zhì)如鐵蛋白等。3、非肽類激素如T3,T4，雌二醇，皮質(zhì)醇等。4、藥物治療心臟病藥物如地高辛，抗哮喘藥物如茶堿，抗生素如慶大霉素等。免疫印跡技術(shù)免疫印跡法(Westernblotting)是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學(xué)分析技術(shù)相結(jié)合的雜交技術(shù)基本原理：免疫印跡與DNASouthernNC時間分辨熒光分析法時間分辨熒光分析法（Timeresolvedfluoroisnmunoassay,TRFIA）是近十年發(fā)展起來的非同位素免疫分析技術(shù)，是目前最先進(jìn)的免疫檢測技術(shù)。技術(shù)原理：使用三價稀土離子（如Eu3+時間分辨熒光分析法時間分辨熒光分析法（Timeresolvedfluoroisnmunoassay,TRFIA）是近十年發(fā)展起來的非同位素免疫分析技術(shù)，是目前最先進(jìn)的免疫檢測技術(shù)。技術(shù)原理：使用三價稀土離子（如Eu3+Tb3+Sm3Dy3+）作為示蹤物，通過這些稀土離子與具有雙功能結(jié)構(gòu)的螯合劑以及抗原形成稀土離子-螯合劑-抗原螯合物。當(dāng)標(biāo)記抗原、待測抗原共同競爭抗體，形成免疫復(fù)合物，由射的熒光強(qiáng)度，從而確定待測抗原的量。性增強(qiáng)液，稀土離子從免疫復(fù)合物中解離出來，和增強(qiáng)液中的β-二酮體、三正辛基氧化膦、TritonX-100萬倍。零以后，再測定長壽命標(biāo)記物的熒光。TRFIA一、TRFIA法在內(nèi)分泌學(xué)中的應(yīng)用但不能產(chǎn)生抗體，不具有免疫原性，它們屬于半抗原。對這些半抗原的測定，一二、TRFIA在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用對一些完全抗原，它們大多是既有免疫反應(yīng)性又有免疫原性的蛋白質(zhì)類，主要包括促甲狀腺激素、血清胰島素、血清癌胚抗原、血清甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等，主要采用非競爭性TRFIA法進(jìn)行測定。三、TRFIA法在免疫學(xué)中的應(yīng)用某些免疫細(xì)胞（如NKLAKT）的活性，可以用TRFIA檢測。四、TRFIA法在微生物學(xué)中的應(yīng)用目前TRFIA已廣泛應(yīng)用于乙型肝炎病毒、腦炎病毒、流感病毒、呼吸道合胞體病毒、副粘病毒、風(fēng)疹病毒、馬鈴薯病毒、輪狀病毒、人類免疫陷病毒、出血熱病毒和梅毒螺旋體的抗原抗體以及某些細(xì)菌和寄生蟲抗體的檢測。最近,潘利華等用 TRFIA法進(jìn)行了人血清中丙型肝炎病毒抗體(Anti-HCV)的檢測，效果明顯高于酶聯(lián)免疫法。飛行時間質(zhì)譜技術(shù)十個，甚至數(shù)百個蛋白，同時極大的提高了診斷的靈敏度和特異性。技術(shù)原理U型飛行之后，達(dá)到傳感器。不同離子到達(dá)傳感器的時間不同，借此來選擇m/z。通常的假設(shè)認(rèn)為離子只能帶一個電荷，如此，得到的信號，直接對應(yīng)檢測到離子的相對原子質(zhì)量。臨床應(yīng)用：在腫瘤早期診斷中的研究進(jìn)展——液體芯片-飛行時間質(zhì)譜技術(shù)在的生物標(biāo)記物進(jìn)行鑒定?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA),是將具有一項(xiàng)最新免疫測定技術(shù)。靈敏度高是化學(xué)發(fā)光免疫分析關(guān)鍵的優(yōu)越性。技術(shù)原理的氧化,形成一個激發(fā)態(tài)的中間體,當(dāng)這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時,同時發(fā)射出光子(hM),利用發(fā)光信號測量儀器測量光量子產(chǎn)額。免疫反應(yīng)系統(tǒng)將發(fā)光物質(zhì)(在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體)直接標(biāo)記在抗原(化學(xué)發(fā)光免疫分析)或抗體(免疫化學(xué)發(fā)光分析)上,或酶作用于發(fā)光底物。臨床應(yīng)用：用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物腫瘤標(biāo)記物、內(nèi)分泌功能、傳染性疾病等多種檢測項(xiàng)目。生物芯片DNA組織等技術(shù)原理DNA、RNA、多肽、蛋白質(zhì)以及其他生物成分（寡核苷cDNAgenomic、多肽、抗體、抗原等）固著于硅片、玻璃片（珠塑料片（珠、凝膠、尼龍膜等固相遞質(zhì)上形成的生物分子點(diǎn)陣。臨床應(yīng)用：從正常人的基因組中分離出DNA與DNA芯片雜交就可以得出標(biāo)準(zhǔn)圖譜。從病人的基因組中分離出DNA與DNA芯片雜交就可以得出病變圖譜。通過比較、分析這兩種圖譜，就可以得出病變的DNA信息。這種基因芯片診斷技術(shù)以其快速、高效、敏感、經(jīng)濟(jì)、平行化、自動化等特點(diǎn)，將成為一項(xiàng)現(xiàn)代化診斷新技術(shù)。免疫濁度法免疫濁度法抗原定量檢測。技術(shù)原理應(yīng)液的濁度隨之增加，與一系列的標(biāo)準(zhǔn)品對照，即可計(jì)算出受檢物的含量。臨床應(yīng)用：1G、A、M，κ、λ，C3、C42、心血管疾病監(jiān)測:載脂蛋白A、B，脂蛋白(a)，C-反應(yīng)蛋白等。3、炎癥狀況監(jiān)測:C-反應(yīng)蛋白，a-酸性糖蛋白，觸珠蛋白，銅藍(lán)蛋白等。4、風(fēng)濕性疾病檢測：ASO、RF、CRP5、腎臟功能檢測：尿微量白蛋白，a-微球蛋白，β-微球蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白，免疫球蛋白G等。6、營養(yǎng)狀態(tài)監(jiān)測：白蛋白，前白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白等。7、凝血及出血性疾病的檢測：抗凝血酶Ⅲ，轉(zhuǎn)鐵蛋白，觸珠蛋白等。8、血腦屏障監(jiān)測：腦脊液白蛋白，免疫球蛋白G、A、M。免疫熒光標(biāo)記技術(shù)免疫熒光標(biāo)記技術(shù)性的熒光素（異硫氰熒光黃或羅丹明B200)用化學(xué)方法結(jié)合在特異的抗體或抗的結(jié)合是高度特異的，所以只要知道其中的一種因子，也就知道了另一種因子。技術(shù)特點(diǎn)：12、利用了物理、化學(xué)、組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)、生物學(xué)等綜合性技術(shù)，使免疫熒光技術(shù)成為一種獨(dú)立完整的一門方法學(xué)。3、一種熒光抗體可以檢查多種抗原抗體復(fù)合物。4、只要知道一種抗體或抗原，就可以知道其對應(yīng)的抗原或抗體。臨床應(yīng)用：1、在細(xì)菌診斷中的應(yīng)用：主要用于鑒定細(xì)菌和對抗原結(jié)構(gòu)的研究。如對甲型鏈球菌的快速診斷和分型鑒定，腦膜炎雙球菌的快速診斷等。23、在病毒學(xué)診斷中的應(yīng)用：快速診斷中對流感病毒、乙腦、狂犬病、脊髓灰白質(zhì)炎、恙蟲病等的快速檢出；也可用來檢查血清中的抗病毒抗體。45、血液中B及T細(xì)胞的鑒定。6、激素和酶的局部組織定位。7、一些器官移植抗原鑒定。8、組織中免疫球蛋及補(bǔ)體組分的檢測。9、在診斷自身免疫病方面的應(yīng)用：(1)抗核抗體（ANA)：是自身免疫性疾病最常出現(xiàn)的一種抗體，特別是系統(tǒng)性紅斑狼瘡，陽性率更高。其它如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、慢性肝炎等血中亦可出現(xiàn)較高效價的抗體。1：25698％慢性活動性肝炎在31％左右。線粒體抗體在膠原性疾病中可見（2-8％）且效價遠(yuǎn)較自身免疫性肝炎低。異性。其臨床意義對于自身免疫性肝炎約82％，HBsAg甲狀腺球蛋白的抗體：甲狀腺球蛋白是甲狀腺腺泡內(nèi)主要激素貯存形而形成自身抗原，從而刺激機(jī)體產(chǎn)生自身抗體?？贵w可用于診斷重癥肌無力，抗腎上腺抗體診斷阿狄森氏病。膠體金技術(shù)域，目前已成為一種最常用的快速的檢測技術(shù)。技術(shù)原理：該技術(shù)以微孔膜作為固相，固相膜有很多孔，像濾紙一樣，常用的固相膜為法。臨床應(yīng)用：1、感染性疾病的抗原、抗體的檢測：可檢測的抗原