藥物的鑒別試驗(yàn)

關(guān)于藥物的鑒別試驗(yàn)第1頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六一概述

藥物的鑒別實(shí)驗(yàn)是根據(jù)分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用化學(xué)、物理化學(xué)或生物學(xué)方法來(lái)判斷藥物的真?zhèn)?。鑒別是藥品質(zhì)量檢驗(yàn)工作中的首要任務(wù)，只有在藥物鑒別無(wú)誤后，雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定等分析才有意義。

鑒別只能證實(shí)藥物的真?zhèn)?，不能?duì)未知物進(jìn)行定性分析。第2頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六二鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目（一）性狀1.外觀指物質(zhì)的凝聚狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì)2.溶解度反映了藥品的純度。描述有“極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、極微溶解、幾乎不溶或不溶”來(lái)描述藥品的溶解性能。3.物理常數(shù)藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)，不僅具有鑒別意義，也反映藥品純雜程度。常數(shù)包括：熔點(diǎn)、比旋度、吸光系數(shù)、相對(duì)密度、餾程、凝點(diǎn)、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值等。（P23）第3頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（1）熔點(diǎn)：固體液體的溫度

（2）比旋度：在一定波長(zhǎng)與溫度下，偏振光透過(guò)長(zhǎng)ldm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測(cè)得的旋光度稱為比旋度。是反映手性藥物特性及其純度的主要指標(biāo)，用于鑒別藥品、含量測(cè)定。

第4頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（3）吸收系數(shù)：在給定的波長(zhǎng)、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度稱為吸收系數(shù)。

有兩種表示方式：摩爾吸收系數(shù)和百分吸收系數(shù)。后者是中國(guó)藥典收載的方法，它是指在一定波長(zhǎng)下，溶液濃度為1％（W/V)，厚度為lcm時(shí)的吸收度，用表示。

用于考查藥品的質(zhì)量，定量分析。第5頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（二）一般鑒別實(shí)驗(yàn)

*概念：依據(jù)某一類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)的特征，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)來(lái)鑒別藥物的真?zhèn)巍?/p>

*無(wú)機(jī)藥物：根據(jù)其組成的陰離子和陽(yáng)離子的特殊反應(yīng)

*有機(jī)藥物：則大都采用典型的官能團(tuán)反應(yīng)

*一般鑒別試驗(yàn)只能證實(shí)是某一類藥物,而不能證實(shí)是哪一種藥物.

*僅供確認(rèn)單一的化學(xué)藥物，如為數(shù)種化學(xué)藥物的混合物或有干擾物質(zhì)存在時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)不適用。第6頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六一般鑒別試驗(yàn)例如，經(jīng)一般鑒別反應(yīng)的鈉鹽試驗(yàn)，證實(shí)某一藥物為鈉鹽，但不能辨認(rèn)是氯化鈉、苯甲酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物。要想最后證實(shí)被鑒別的物質(zhì)到底是哪一種藥物，必須在一般鑒別試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，再進(jìn)行專屬鑒別試驗(yàn)，方可確認(rèn)。第7頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六一般鑒別試驗(yàn)項(xiàng)目Ch.P附錄項(xiàng)下一般鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目：丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機(jī)氟化物類、無(wú)機(jī)金屬鹽類（鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鋇鹽、銨鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋁鹽、鋅鹽、銅鹽、銀鹽、汞鹽、鉍鹽、銻鹽、亞錫鹽）、有機(jī)酸鹽（水楊酸鹽、枸櫞酸鹽、乳酸鹽、苯甲酸鹽、酒石酸鹽）、無(wú)機(jī)酸鹽（亞硫酸鹽或亞硫酸氫鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、硼酸鹽、碳酸鹽與碳酸氫鹽、醋酸鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物）。第8頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六一般鑒別試驗(yàn)舉例1.有機(jī)氟化物

(1)．鑒別試驗(yàn)取供試品約7mg，照氧瓶燃燒法（附錄VIIC）進(jìn)行有機(jī)破壞，用水20ml與0.01mol/L氫氧化鈉溶液6.5ml為吸收液，俟燃燒完全后，充分振搖；取吸收液2ml，加茜素氟藍(lán)試液0.5ml，再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml，即顯藍(lán)紫色；同時(shí)做空白對(duì)照試驗(yàn)。

(2)．試驗(yàn)原理有機(jī)氟化物經(jīng)氧瓶燃燒法破壞，為堿性溶液吸收成為無(wú)機(jī)氟化物后，與茜素氟藍(lán)、硝酸亞鈰形成藍(lán)紫色絡(luò)合物。第9頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六2.有機(jī)酸鹽

(1)水楊酸鹽

鑒別試驗(yàn)一:取供試品的稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。

原理:本品在中性或弱酸性條件下，和三氯化鐵試液生成配位化合物，在中性時(shí)呈紅色，弱酸性時(shí)呈紫色；若在強(qiáng)酸性中，配位化合物分解生成游離水楊酸。

鑒別試驗(yàn)二:取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀在醋酸按試液中溶解。第10頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六(2)酒石酸鹽

方法①取供試品的中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，銀即游離并附在管的內(nèi)壁成銀鏡。②取供試品溶液，加醋酸成酸性后，加硫酸亞鐵試液1滴和過(guò)氧化氫試液1滴，俟溶液退色后，用氫氧化鈉試液堿化，溶液即顯紫色。

第11頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六(3)枸櫞酸鹽

①取供試品溶液2ml（約相當(dāng)于枸櫞酸10mg）,加稀硫酸數(shù)滴,加熱至沸，加高錳酸鉀試液數(shù)滴，振搖，紫色即消失；溶液分成兩份，一份中加硫酸汞試液1滴,另一份中逐滴加入溴試液，均生成白色沉淀。

②取供試品約5mg，加吡啶－醋酐(3∶1)約5ml，振搖，即生成黃色到紅色或紫紅色的溶液。

第12頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六3.無(wú)機(jī)金屬鹽

(1)鈉鹽

鑒別試驗(yàn)一取鉑絲，用鹽酸濕潤(rùn)后，蘸取供試品，在無(wú)色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。原理鈉的火焰光譜在可見光區(qū)，有589.0nm、589.6nm主要譜線，故其燃燒火焰顯黃色。本焰色反應(yīng)極為靈敏（最低檢出限量為0.1ng鈉離子）。因此，對(duì)所用儀器和試劑要求必須很嚴(yán)格。在檢測(cè)前應(yīng)將鉑絲燒紅，趁熱浸入鹽酸中，如此反復(fù)數(shù)次，直至火焰不染黃色后，再蘸取供試品進(jìn)行測(cè)定。只有當(dāng)強(qiáng)烈的黃色火焰持續(xù)數(shù)秒鐘不退，才能確認(rèn)為鈉鹽。

第13頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六一般鑒別試驗(yàn)(2)鉀鹽

鑒別試液一

焰色反應(yīng)顯紫色，但有少量鈉鹽混存時(shí)，須隔藍(lán)色鈷玻璃透視，方能辨認(rèn)。原理鉀的火焰光譜在可見光區(qū)有766.49nm、769.90nm與404.4nm幾條譜線，其中以766.49nm與769.90nm兩條譜線最強(qiáng)。由于人眼在此波長(zhǎng)附近敏感度較差，故鉀鹽的燃燒火焰顯紫色。如有鈉鹽混存，因鈉焰靈敏度很高，需透過(guò)藍(lán)色鈷玻璃將鈉焰黃色濾去，此時(shí)火焰顯粉紅色。第14頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六一般鑒別試驗(yàn)(3)鈣鹽鑒別試驗(yàn)一

焰色反應(yīng)顯磚紅色（622nm）。鑒別試驗(yàn)二

取供試品溶液（1→20），加甲基紅指示液2滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至呈酸性，加草酸銨試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀不溶于醋酸，但可溶于鹽酸。第15頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六(4)銨鹽

鑒別試驗(yàn)取供試品，加過(guò)量氫氧化鈉試液后，加熱，即分解，發(fā)生氨臭；遇濕潤(rùn)的紅色石蕊試紙，能使之變藍(lán)，并能使硝酸亞汞試液濕潤(rùn)的濾紙顯黑色。第16頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（三）專屬鑒別試驗(yàn)（三）專屬鑒別試驗(yàn)（specificidentificationtest）根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性的不同，選用某些特有的靈敏的定性反應(yīng)，來(lái)鑒別藥物真?zhèn)蔚蔫b別試驗(yàn)。是證實(shí)某一種藥物的依據(jù)。第17頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六綜上所述一般鑒別試驗(yàn)是以某些類別藥物的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)為依據(jù)，根據(jù)其相同的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行藥物真?zhèn)蔚蔫b別，以區(qū)別不同類別的藥物。而專屬鑒別試驗(yàn)，則是在一般鑒別試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用各種藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)差異，來(lái)鑒別藥物，以區(qū)別同類藥物或具有相同化學(xué)結(jié)構(gòu)部分的各個(gè)藥物單體，達(dá)到最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康?。?8頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六三.鑒別的方法（一）化學(xué)鑒別法（二）光譜鑒別法（三）色譜鑒別法（四）x射線粉末衍射法（五）生物學(xué)法第19頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（一）化學(xué)鑒別法(1）呈色反應(yīng)鑒別法：系指供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)脑噭┤芤海谝欢l件下進(jìn)行反應(yīng)，生成易于觀測(cè)的有色產(chǎn)物。在鑒別試驗(yàn)中最為常用的反應(yīng)類型有：1）三氯化鐵呈色反應(yīng)---酚羥基的三氯化鐵呈色反應(yīng)；2）異羥肟酸鐵反應(yīng)---多為芳酸及其酯類、酰胺類；3）茚三酮呈色反應(yīng)---脂肪氨基；4）重氮化-偶合顯色反應(yīng)---芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基；5）氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)。

第20頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（一）化學(xué)鑒別法（2）沉淀生成反應(yīng)鑒別法：常用的這類反應(yīng)有：1）與重金屬離子的沉淀反應(yīng)在一定條件下，藥物和重金屬離子反應(yīng)，生成不同形式的沉淀；2）與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)多為生物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機(jī)堿及其鹽；3）其它沉淀反應(yīng)。第21頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（一）化學(xué)鑒別法（3）熒光反應(yīng)鑒別法：常用的熒光發(fā)射形式有以下類型：1）藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光：麥角新堿、潘生丁等；2）藥物溶液加硫酸使呈酸性后，在可見光下發(fā)射熒光(奎寧、安定等)；3）藥物和溴反應(yīng)后，于可見光下發(fā)射熒光；4）藥物和間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射出熒光及藥物經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。第22頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（一）化學(xué)鑒別法(4）氣體生成反應(yīng)鑒別法：1）大多數(shù)的胺（銨）類藥物、酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物，可經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨（胺）氣；2）化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體；3）含碘有機(jī)藥物經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯的香味。第23頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（5）使試劑退色的法：（6）測(cè)定生成物的熔點(diǎn)：第24頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六1．紫外光譜鑒別法

原理：多數(shù)有機(jī)藥物分子中含有能吸收紫外可見光的集團(tuán)而顯示特征吸收光譜，可作為鑒別的依據(jù)。優(yōu)缺點(diǎn)：光譜較為簡(jiǎn)單，曲線形狀變化不大,專屬性較紅外光譜差，宜采用在指定溶劑中測(cè)定2-3個(gè)特定波長(zhǎng)處的吸光度比值，以提高專屬性。（二）光譜鑒別法第25頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六紫外光譜鑒別法常用的方法有：

1）測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)，或同時(shí)測(cè)定最小吸收波長(zhǎng)；

2）規(guī)定一定濃度的供試液在最大吸收波長(zhǎng)處的吸收度；

3）規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)法；

4）規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度比值法；

5）經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。第26頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六紫外光譜鑒別法國(guó)外藥典采用的紫外法的特點(diǎn)：USP（29）采用對(duì)照品法；BP（2005）采用一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)僅有一個(gè)最大吸收或一個(gè)最小吸收。JP（15）同Ch.P.相似第27頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六2．紅外光譜鑒別法

特點(diǎn)：（1）紅外光譜法是一種專屬性很強(qiáng)、應(yīng)用較廣（固體、液體、氣體樣品）的鑒別方法。（2）主要用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥，特別適合于其他方法不易區(qū)分的同類藥物，如磺胺類、甾體激素類等.第28頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六紅外光譜鑒別法方法：

Ch.P與BP（2005）均采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法。如Ch.P對(duì)XX藥物的鑒別試驗(yàn)：“本品的紅外吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)造的圖譜（光譜集XX圖）一致”。USP（29）采用對(duì)照品法；JP（15）采用規(guī)定條件下測(cè)定一定波數(shù)處的特征吸收峰。第29頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（三）色譜鑒別法原理：利用不同物質(zhì)在不同色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為（Rf值或保留時(shí)間）進(jìn)行鑒別試驗(yàn)。（與對(duì)照品或已經(jīng)確證的已知藥品的色譜行為比較一致）1.薄層色譜鑒別法2.HPLC與GC鑒別法3.質(zhì)譜鑒別法第30頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六四.鑒別試驗(yàn)的條件

鑒別試驗(yàn)是以所采用的化學(xué)反應(yīng)或物理特性產(chǎn)生的明顯的易于覺察的特征變化為依據(jù)。因此，能影響鑒別試驗(yàn)判定結(jié)果的特征變化的因素都是應(yīng)當(dāng)精心選擇和嚴(yán)格控制的。也就是說(shuō)，鑒別試驗(yàn)應(yīng)該是在規(guī)定條件下完成的，否則鑒別試驗(yàn)的結(jié)果是不可信的。第31頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（一）溶液的濃度主要指被鑒別藥物的濃度，及所用試劑的濃度。由于鑒別試驗(yàn)多采用觀測(cè)沉淀、顏色或各種光學(xué)參數(shù)的變化，來(lái)判定結(jié)果，而藥物和有關(guān)試劑的濃度會(huì)直接影響上述的各種變化，必須嚴(yán)格規(guī)定溶液的濃度。第32頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（二）溶液的溫度溫度對(duì)化學(xué)反應(yīng)的影響很大，一般溫度每升高10℃，可使反應(yīng)速度增加2-4倍。（三）溶液的酸堿度許多鑒別反應(yīng)都需要在一定酸堿度的條件下才能進(jìn)行。溶液酸堿度的作用，在于能使各反應(yīng)物有足夠的濃度處于反應(yīng)活化狀態(tài)，使反應(yīng)生成物處于穩(wěn)定和易于觀測(cè)的狀態(tài)。第33頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（四）干擾成分的存在在鑒別試驗(yàn)中，如藥物結(jié)構(gòu)中的其它部分或藥物制劑中的其它組分也可參加鑒別反應(yīng)，產(chǎn)生干擾，應(yīng)選擇專屬性更高的鑒別反應(yīng)將其消除或?qū)⑵浞蛛x。第34頁(yè)，共37頁(yè)，2022年，5月20日，4點(diǎn)13分，星期六（五）試驗(yàn)時(shí)間有機(jī)化合物的化學(xué)反應(yīng)和無(wú)機(jī)化合物不同，一般反應(yīng)速度較慢，達(dá)到預(yù)期試驗(yàn)結(jié)果需要較長(zhǎng)的