衛(wèi)生微生物學(xué)全套課件282p

衛(wèi)生微生物學(xué)1緒論（1）學(xué)習(xí)目的：通過對衛(wèi)生微生物學(xué)的歷史、現(xiàn)狀和未來發(fā)展的全面認識與了解，為人類健康服務(wù)。（2）掌握衛(wèi)生微生物學(xué)定義與相關(guān)慨念。（3）熟習(xí)衛(wèi)生微生物學(xué)研究的內(nèi)容、范疇和基本方法，研究的意義與前景。教學(xué)過程核心文化少領(lǐng)同學(xué)背書，培養(yǎng)學(xué)習(xí)興趣！促發(fā)集中、發(fā)散思維，領(lǐng)悟課程核心意義。集中思維（邏輯思維）—學(xué)習(xí)與學(xué)分發(fā)散思維（立體思維）—學(xué)習(xí)-應(yīng)用價值我至今還在癡癡崇拜海納百川，有容乃大？！適者生存—無能改變，就去適應(yīng)！1.1衛(wèi)生微生物學(xué)的發(fā)展歷史人類與微生物的的共生、伴生、寄生相互作用和斗爭是一個永恒的話題。1.1.1啟蒙時期對病原的認識

在中國、古埃及、印度、古希臘和古羅馬對病原的認識，是隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展逐漸發(fā)展的1.1.2衛(wèi)生學(xué)的啟蒙

埃及建筑金字塔用防腐技術(shù)保存木乃伊有3000多年的埃及木乃伊歐洲瘟疫橫行

鼠疫流行尸體橫呈1.2微生物的初創(chuàng)和奠基時期1.2.1微生物的發(fā)現(xiàn)荷蘭人列文虎克發(fā)明了世界上第一部能放大266倍的顯微鏡。AntonyvanLeeuwen-hoek1676年，荷蘭人列文虎克發(fā)明的單式顯微鏡A、C、F、Q：桿菌E：球菌H：球菌的聚集體列文虎克向英國皇家學(xué)會的信中描繪的細菌形態(tài)1.2.2對微生物的衛(wèi)生學(xué)認識19世紀初葉,匈牙利人塞麥爾（Semmelweis,1818～1865年，在他的教學(xué)醫(yī)院里（1847年）主張用石灰消毒病室。1.2.3微生物學(xué)學(xué)科的形成

巴斯德是微生物學(xué)的奠基人

LouisPasteurwasprobablythegreatestbiologistofthenineteenthcentury.

Hedevelopedthegermtheoryofdisease,whichwasasignificantbreakthroughinmedicinethatultimatelyimprovedthehealthofeveryoneontheplanet巴斯德的成就1、巴氏消毒法：加熱殺滅微生物，用于食品、飲料加工。2、每種傳染病都由一種微生物引起。3、引起傳染病的微生物在特殊培養(yǎng)下可減毒，可變成預(yù)防該病的疫苗。建立了微生物學(xué)理論。Developmentofaseptictechnique

病原微生物研究的成就德國的郭霍是微生物學(xué)的另一位奠基人

RobertKoch

GermanscientistRobertKochprovidedtheproofbycultivatinganthraxbacteriaapartfromanyothertypeoforganism.Hetheninjectedpureculturesofthebacilliintomiceandshowedthatthebacilliinvariablycausedanthrax.TheproceduresusedbyKochcametobeknownasKoch'spostulates(Figure).

德國科學(xué)家羅伯特.郭霍提出假設(shè)證明,從炭疽患者機體分離出炭疽菌,然后將該菌的純培養(yǎng)物注射到老鼠體內(nèi),結(jié)果表明,該菌總會引發(fā)炭疽.該實驗程序被郭霍用來介紹郭霍假設(shè)。Theyprovidedasetofprincipleswherebyothermicroorganismscouldberelatedtootherdiseases.

他假設(shè)一套原則，借以說明其他微生物可能與引起其他疾病有關(guān)。FigureThestepsofKoch'spostulatesusedtorelateaspecificmicroorganismtoaspecificdisease.郭霍假設(shè)的步驟：用以闡明某一特定微生物可引起某種特定的疾病。(a)Microorganismsareobservedinasickanimaland(b)cultivatedinthelab.(c)Theorganismsareinjectedintoahealthyanimal,and(d)theanimaldevelopsthedisease.(e)Theorganismsareobservedinthesickanimaland(f)reisolatedinthelab.

證明微生物是某疾病病原菌的原則

1、在患病動物體內(nèi)可觀測到某微生物；

2、可在實驗室培養(yǎng)出該微生物;3、將該微生物注射到健康動物體內(nèi),可引起該動物發(fā)病;4、在患病動物體內(nèi)可觀測到該微生物，

5、并在實驗室可分離到該微生物。

同一時期,俄國的伊凡諾夫斯基（ИвановскийИ.Д）于1892年發(fā)現(xiàn)了第一個病毒——煙草花葉病毒。煙草花葉病病毒

1.3.近代與現(xiàn)代微生物學(xué)時期1.3.1疾病預(yù)防的衛(wèi)生學(xué)起源1998～1022AD我國北宋真宗時傳說峨眉山人為王旦之子種痘。天花患者1348年突尼斯港成立檢疫所。1376年拉格撒（Ragusa）制定30d（后改為40日）檢疫制度。1383年馬賽港第一次檢疫。18世紀末，英國琴納才創(chuàng)用牛痘預(yù)防天花，為疾病預(yù)防學(xué)開創(chuàng)了廣闊途徑。天花患者3.1.2衛(wèi)生學(xué)學(xué)科的形成

德國的彼騰科費爾（M.Pettenkofer，1818～1901）采用實驗研究的方法，給衛(wèi)生學(xué)打下了科學(xué)的基礎(chǔ)?？茖W(xué)的發(fā)展促進學(xué)科的分化19世紀末至20世紀初，是微生物學(xué)發(fā)展的黃金年代。疫情促進了公共衛(wèi)生事業(yè)和醫(yī)學(xué)的發(fā)展。

1865～1875年霍亂第四次大流行，迫使人們注意水源、食品、環(huán)境等的衛(wèi)生狀況，促成了公共衛(wèi)生學(xué)的建立。1919年美國在耶魯大學(xué)和霍普金斯大學(xué)分別建立了衛(wèi)生系。1920年莫斯科成立國家科學(xué)公共衛(wèi)生研究所。1929年我國（民國）設(shè)立衛(wèi)生部，下設(shè)醫(yī)政、保健、防疫、統(tǒng)計等科1930年設(shè)立海關(guān)檢疫處，1932年衛(wèi)生部設(shè)立中央衛(wèi)生設(shè)施實驗處等3.1.2,2衛(wèi)生微生物學(xué)學(xué)科的確立20世紀是現(xiàn)代微生物學(xué)快速、深入和現(xiàn)代化發(fā)展的時期。微生物學(xué)分成了很多分支學(xué)科:1、細菌學(xué)（Bacteriology）；

2、真菌（mycology）；

3、病毒學(xué)（Virology）；

4、衛(wèi)生微生物學(xué)（SanitaryMicrobiology）等。世界各國的衛(wèi)生微生物學(xué)我國的衛(wèi)生微生物學(xué)1.4．衛(wèi)生微生物學(xué)的定義1.4.1定義衛(wèi)生微生物學(xué)(SanitaryMicrobiology)是研究微生物與其環(huán)境相互作用的規(guī)律、對人類健康的影響以及應(yīng)對方略的科學(xué)。1.4.2衛(wèi)生微生物學(xué)定義的范疇

狹義:不包括引起傳染病流行的病原微生物（pathogenicmicrobe）。廣義；包括致病和與人體健康相關(guān)的微生物。微生物與人相互依存與斗爭，相伴始終。微生物對人類的利弊一、有害：致病、害命。二、有益：1、從胃腸道的正常菌群獲得營養(yǎng)物質(zhì)；2、細菌參與宿主代謝和吸收；3、參與宿主消化、吸收和利用；4、參與宿主免疫；5、發(fā)揮生物拮抗作用；6、保健和為生產(chǎn)生活利用。破傷風(fēng)桿菌弧菌鏈球菌

乳酸桿菌

酵母菌

動物-自然疫源性-人獸共患病非洲綠猴與aidsHIV典型卡波濟紫斑1.5衛(wèi)生微生物學(xué)與相關(guān)學(xué)科的關(guān)系

相得益彰1.6.衛(wèi)生微生物學(xué)的應(yīng)用與研究前景1.6.1在感染性疾病控制和治療中的應(yīng)用1.6.2在感染性疾病預(yù)防中的應(yīng)用1.6.3在生物病原性突發(fā)事件中的應(yīng)用1.6.4在制定國家標準和行業(yè)規(guī)范服務(wù)中的應(yīng)用1.6.5在應(yīng)對生物危害和恐怖中的應(yīng)用第二章微生物生態(tài)基本概念與研究范疇微生物生態(tài)學(xué)的基本規(guī)律微生物在自然界的分布及其主要類群微生物生態(tài)學(xué)的應(yīng)用及研究前景第一節(jié)微生物生態(tài)學(xué)基本概念生態(tài)學(xué)

——研究生命系統(tǒng)與環(huán)境系統(tǒng)間相互作用規(guī)律的科學(xué)。生物圈生態(tài)系統(tǒng)群落種群個體器官組織細胞細胞器分子生態(tài)系統(tǒng)(ecosystem)

在一定的空間內(nèi)存在的各種生物體所組成的生物群落與非生物的環(huán)境因子之間相互依存、相互制約，具有一定功能和獨立性的體系。生物圈(biosphere)

地球表面全部生物及與之相關(guān)的自然環(huán)境的總稱。

生態(tài)系統(tǒng)研究內(nèi)容1、天文地質(zhì)過程所形成的物理因子及其變化2、參加物質(zhì)環(huán)境的無機物的豐度及其變化規(guī)律3、連結(jié)非生命物質(zhì)和生命物質(zhì)的有機物的豐度及其變化規(guī)律4、初級生產(chǎn)者、消費者和分解者生物間的相互作用和功能二、微生物生態(tài)學(xué)(microbialecology)是研究微生物與環(huán)境之間相互作用的科學(xué)，是生態(tài)學(xué)的一個分支。非生物環(huán)境：除生物以外的環(huán)境（生物生存的場所環(huán)境）。生物環(huán)境：研究對象以外的其他生物的作用和影響。

微環(huán)境(microenvironment)

微生物個體微小，能在微小環(huán)境中生存，并執(zhí)行其特定功能，微生物生態(tài)學(xué)家稱之為微環(huán)境或生境（habitat）。包含有比生態(tài)境更為廣泛的含義，它不但包含了生物生存的空間概念，還蘊涵著功能作用以及在不同溫度、濕度等環(huán)境變化中的位置，也稱為生態(tài)位。種群（population）

具有相似特性和生活在一定空間內(nèi)的同種個體群。種群是組成群落的基本部分。群落(cormnunity)

一定區(qū)域內(nèi)或一定生境中各種微生物種群相互松散結(jié)合的一種結(jié)構(gòu)和功能單位。微生物生態(tài)研究的核心內(nèi)容

微生物的正常生態(tài)規(guī)律、生態(tài)平衡、生態(tài)失調(diào)微生物生態(tài)研究的目的

1、了解環(huán)境對微生物的種群、數(shù)量分布、增殖速度及活力的影響；2、了解微生物群體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性及可修飾性，以及微生物群體對環(huán)境的功能；3、了解微生物與其生存環(huán)境之間、微生物與其他各種生物之間的相互關(guān)系、作用和演變規(guī)律等。主要研究內(nèi)容

1、在正常自然環(huán)境中的微生物種類、分布及其隨著不同的環(huán)境條件變化而發(fā)生的變化規(guī)律

2、在自然界中微生物之間的相互關(guān)系，微生物與動植物之間的相互關(guān)系，這些相互關(guān)系對自然界的影響和環(huán)境因素對這些相互關(guān)系的影響

3、在正常自然環(huán)境中，微生物代謝活動對自然界的影響，環(huán)境條件的變化對這些代謝活動的影響

4、在極端自然環(huán)境中的微生物種類和它們所起的作用，在極端環(huán)境中微生物的生命機理

5、環(huán)境污染對微生物的影響，以及微生物對污染物的凈化作用

6、研究微生物生態(tài)學(xué)所用的傳統(tǒng)和現(xiàn)代分子生物學(xué)方法美國國家黃石公園火山口熱水中的嗜熱桿菌DNA聚合酶聚合酶聯(lián)反應(yīng)（PCR）與DNA聚合酶的關(guān)系第二節(jié)微生物生態(tài)學(xué)的基本規(guī)律微生物與環(huán)境相互作用的基本規(guī)律微生物生態(tài)演化的自然選擇與適應(yīng)微生物與生物環(huán)境間相互作用的生態(tài)規(guī)律一、微生物與環(huán)境相互作用的基本規(guī)律

微生物與環(huán)境之間相互作用一般遵循三定律。（一）最小因子定律（lawofthemininum/利比希定律(Lisbiglaw)：適用于“穩(wěn)定狀態(tài)”的環(huán)境，即物質(zhì)的進入與流出處于平衡狀態(tài)。基本核心：任何生物的總產(chǎn)量或生物量決定于所存在環(huán)境中該生物生長所需的最少或濃度最低營養(yǎng)。竹林最小面積承受的熊貓生存量——最小定律（二）耐受性定律

(lawoftolerance)

生物生長和存活的條件是在他們所生活的環(huán)境中的各種物理、化學(xué)因子必須處于它們的耐受范圍內(nèi)。耐受限度（limitsoftolerance）：生物對生態(tài)因子所能耐受的最大值和最小值之間的范圍。在耐受限度內(nèi)有一個最適范圍，在此范圍內(nèi)生物生長最好。（三）綜合作用定律

(combinedlaw)

Odum結(jié)合耐受性定律與限制因子定律提出，核心是一個生物或一群生物的生存和繁殖取決于綜合環(huán)境。環(huán)境中各種生態(tài)因子并非孤立存在，他們之間相互密切有機地聯(lián)系著。在生態(tài)因子綜合作用中，兩個或兩個以上因子同時作用時可有增效、減效、補償結(jié)果發(fā)生。因子間的影響作用1、增效——增加另外一個因子對生物的生態(tài)效果

2、減效——降低或減弱了另外一個因子的作用效果

3、補償——某一生態(tài)因子的減弱對生物生長不利，但可由另一生態(tài)因子的增加而得到補償?shù)纳鷳B(tài)效果二、微生物生態(tài)演化的自然選擇與適應(yīng)（一）變異（variation）（二）選擇

1、自然選擇（naturalselection）：在長期的自然選擇過程中，生物逐漸發(fā)生變異已適應(yīng)其環(huán)境（適應(yīng)性），而環(huán)境對生物的生存具有選擇性，~。（三）適應(yīng)性（adaptability）

生物能適應(yīng)在一定時間內(nèi)的環(huán)境波動或劇變以保證其本身生活和生存的能力。

1、是微生物進化中最重要的因素。

2、是生物的基因型與環(huán)境因子共同作用的結(jié)果。

3、以基因型為主，環(huán)境因子次之分為遺傳適應(yīng)性和表型適應(yīng)性；超級細菌是多種細菌對抗菌素環(huán)境壓力下的適應(yīng)性變異遺傳適應(yīng)性

進化適應(yīng)性，是某一環(huán)境中的一種微生物受到來自環(huán)境的不利因素的壓力后，多數(shù)微生物的生命活動受到抑制甚至死亡，而個別個體通過改變自己的基因型獲得適應(yīng)新的環(huán)境條件的生理特性，并且通過生長繁殖形成新的種群。獲得新的遺傳特性的方式1、由某種不利因素誘發(fā)個別個體發(fā)生基因突變獲得新的遺傳特性；2、通過基因轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)和細胞融合使個別個體獲得適應(yīng)性基因片段，并且生存下來，發(fā)展成新的種群。表型適應(yīng)性（生理學(xué)適應(yīng)）

是微生物對環(huán)境條件變化的暫時反應(yīng)，在這種適應(yīng)中，微生物的基因型不發(fā)生變化，只是由于環(huán)境條件的變化使微生物的某個或某些基因失去表達能力，或使原來未能表達的基因得到表達。變異性(variability)

微生物因生殖率大和世代時間短，一方面能在較短的時間內(nèi)形成大的群體，另一方面，也可在一定時間內(nèi)產(chǎn)生較多的突變體（mutant），有利于適應(yīng)變化劇烈的新環(huán)境，抵抗惡劣的環(huán)境。遺傳保守性：后代總與親代相似，以保持親代的類型，因而得以保持生物物種的穩(wěn)定性。遺傳變異性：后代個體在形態(tài)、生態(tài)或生理性狀方面不同于親生物適應(yīng)演化，長期生存選擇性（selectivity）

達爾文提出生物進化的自然選擇(naturalselection)學(xué)說，認為物種在不斷地發(fā)生變異，在變異的物種中僅是那些能適應(yīng)環(huán)境條件者才能獲得生存和繁殖，即適者生存。在長期的自然選擇過程中，生物逐漸發(fā)生變異以適應(yīng)其環(huán)境，即生物的適應(yīng)性；環(huán)境對生物的生存也具有選擇性，即自然選擇。人工選擇（artificialselection）

按照人類的意愿使生物發(fā)生某些對人類有益的變異，并將這種變異保留、遺傳給后代。人工選擇是人為的，也稱其為馴化（domestication）。自然選擇由自然環(huán)境條件決定過程緩慢變異對生物本身有利人工選擇以人的意志為主決定過程較快變異只對人類有利三、生物與其所處環(huán)境之間的相互作用關(guān)系1、每一種生物的基因型都是由特定環(huán)境條件塑造的，或者說是生物長期適應(yīng)某種環(huán)境的結(jié)果2、生物的生命活動又隨時在改變著其周圍的環(huán)境條件，其關(guān)系存在八種形式；（1）種間共處（中性共生現(xiàn)象）：指兩生物間同時生存在于同一棲息場所內(nèi)，但兩者之間互不影響，不發(fā)生關(guān)系，至少是沒有直接的生態(tài)關(guān)系。生物與其環(huán)境間的關(guān)系形式種間共處（中性共生現(xiàn)象）：指兩生物間同時生存在于同一棲息場所內(nèi)，但兩者之間互不影響，不發(fā)生關(guān)系，至少是沒有直接的生態(tài)關(guān)系。互生（alternation）兩種可以單獨生活的生物在一起時，通過各自的代謝活動而有利于對方或偏利于一方的生活方式。1、偏利互生（commensalism）——兩種種群共同存在于一個生境中，其中一個獲益，而另一個不受影響。2、互利互生（mutualism）——生活在同一生境的兩種微生物互換產(chǎn)物，相互依賴，共同有利，在生理上形成一個整體。3、互惠互生（synergism）——兩個種群的共同生存可以互相受益，但不是一種固定的關(guān)系，解除關(guān)系后雙方都能獨立存在。互惠互生—大腸桿菌與人消化道的關(guān)系競爭（competition）兩個種群共同生活同一環(huán)境中，因需要相同的生長因子或其他環(huán)境條件發(fā)生的確爭奪現(xiàn)象。拮抗（amensalism）也稱偏害共棲，指兩個種群共同生長，由某種生物所產(chǎn)生的特定代謝產(chǎn)物可干擾其他種生物的代謝活動，抑制其生長和繁殖甚至殺死他們的一種相互關(guān)系。寄生（parasitism）一種生物侵入到另一種生物體，從宿主體內(nèi)獲得自己所需要的營養(yǎng)物質(zhì)并生長繁殖，使后者蒙受損害甚至被殺死的一種。第三節(jié)微生物生態(tài)的平衡與失調(diào)

1、自然環(huán)境中微生物的生態(tài)平衡與失調(diào)2、人體環(huán)境中微生物的生態(tài)平衡與失調(diào)

（一）自然環(huán)境中微生物的生態(tài)平衡與失調(diào)

1、生態(tài)平衡（ecologicalbalance）生態(tài)系統(tǒng)各組成部分的內(nèi)部或相互之間，在長期的發(fā)展演化過程中，通過相互制約、轉(zhuǎn)化、補償、交換及適應(yīng)而建立起來的一種相互協(xié)調(diào)的動態(tài)平衡關(guān)系。達到生態(tài)平衡的生態(tài)系統(tǒng)相應(yīng)地也就達到了相對穩(wěn)定的階段，這種生態(tài)系統(tǒng)的生物量相對最大，生產(chǎn)力也最高，因而自我調(diào)節(jié)能力也就更強一些。2、演替（succession）在特定的生態(tài)系統(tǒng)中，不同生物群落相繼更替的過程。3、生態(tài)失調(diào)(ecologicaldisturbance)微生物生長代謝的產(chǎn)物影響著環(huán)境，改變了的環(huán)境反來也影響存在的微生物，即打破了微生物原來的生態(tài)平衡，發(fā)生（生態(tài)失調(diào))。（二）人體環(huán)境中微生物的生態(tài)平衡與失調(diào)菌群失調(diào)（dysbacteriosis）1、概念：是指在原生態(tài)環(huán)境內(nèi)正常微生物群發(fā)生種類、總菌數(shù)和各種群落成員的活菌數(shù)的異常變化。2、誘發(fā)因素：1）射線照射；2）使用抗生素；3）外科手術(shù)；4）其他因素等。第四節(jié)微生物生態(tài)研究的應(yīng)用（一）在病因研究中的作用：（二）在認識疾病本質(zhì)中的作用：（三）在疾病防治中的應(yīng)用：（四）在環(huán)境污染研究中的作用：第五節(jié)微生物生態(tài)研究的前景1、了解生物與環(huán)境間相互關(guān)系的有利工具，成為改造自然的有利武器；2、為微生物污染環(huán)境和微生物修復(fù)環(huán)境提供一定理論基礎(chǔ)；3、為人群健康提供可靠的微生態(tài)研究思路。第三章環(huán)境中微生物的主要類群細胞型微生物非細胞型微生物原核細胞型微生物真核細胞型微生物病原微生物條件致病微生物非致病性微生物按細胞結(jié)構(gòu)分類按細胞結(jié)構(gòu)分類第一節(jié)原核細胞生物

第一節(jié)原核細胞生物一、細菌（一）環(huán)境中常見致病菌與條件致病菌1、葡萄球菌2、鏈球菌屬3、埃希菌屬4、其他等（P24）（二）其他常見環(huán)境細菌不能引起傳染病但常污染環(huán)境的細菌，如熒光假單孢菌、生黑色腐敗假單孢菌、黃桿菌等。二、放線菌（Actionmycetes）（一）一般特征：屬原核細胞生物，細胞含胞壁酸，對抗菌素敏感，僅有無性繁殖，可形成菌絲及菌絲體，且以菌絲斷裂，形成分生孢子或孢子囊的形式增殖，其特點與真菌相同。（二）放線菌的代表屬1、鏈霉菌屬：2、諾卡菌屬：3、小單孢菌屬：三、鞘細菌為單細胞連成的絲狀體，外包圍一層有機物或無機物形成的鞘套，故稱鞘細胞。代表菌有；球衣菌：四、滑動細菌是不借鞭毛靠菌體蠕動進行滑動的一類細菌。形態(tài)對為絲狀體，也有桿狀和球狀。常見的代表菌有貝氏硫菌屬等。五、藍細菌（一）一般特征：過去歸入藻類。稱為藍藻或藍綠藻。多數(shù)藍細菌可滑行運動，分裂繁殖，可長期休眠度過不良環(huán)境，環(huán)境適宜孢子萌發(fā)再進行繁殖。為光合型微生物，光合色素為葉綠素α及藍藻素。衛(wèi)生學(xué)意義：水污染，溫度合適時可過度生長，造成“水華”，使水質(zhì)進一步惡化。海洋中可形成“赤潮”。（二）藍細菌的常見菌1、微囊藻菌2、魚腥藻菌3、顫藻菌

水華與赤潮第二節(jié)真核細胞型生物一、真菌（fungus）：真菌的細胞壁與細菌不同點——不含肽聚糖，多含幾丁質(zhì)（殼多糖）。單核真菌常見的有酵母菌和類酵母菌。（一）環(huán)境中常見酵母菌的代表屬1、酵母菌屬2、假絲酵母菌3、紅酵母菌屬4、球擬酵母菌屬5、畢赤酵母菌屬（二）環(huán)境中常見霉菌代表屬1、曲霉屬：2、青霉屬：3、鐮刀菌屬：4、交鏈菌屬：5、芽枝菌屬：6、根霉屬：7、毛霉屬：8、木霉屬：多為需氧性腐生菌，少數(shù)厭氧寄生部分可對人致病，在我國主要是星形諾卡菌,可經(jīng)外環(huán)境侵入傷口或吸入肺部，引起有特殊癥狀的化膿性感染在自然環(huán)境中可將有機質(zhì)轉(zhuǎn)化，如烴類的降解、氰類的轉(zhuǎn)化，在污水處理中起重要作用諾卡菌屬（Nocardia）小單孢菌屬（Micromonospora）不形成氣生菌絲，孢子梗頂端著生一個分生孢子多分布于土壤及污泥中具有分解有機質(zhì)及產(chǎn)生抗生素能力可產(chǎn)生多種抗生素單細胞：酵母菌、類酵母菌、分布廣泛大多為腐生，少數(shù)為寄生常引起食品的變質(zhì)和衣物、器具的霉爛少數(shù)能引起動植物病害和人類疾患在發(fā)酵、制藥、食品、制革、紡織工業(yè)和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。二、藻類（algae）是一大類低等植物，因單細胞或多細胞藻類很小而列入微生物范疇，無根、莖、葉、花分化，生殖方式也很低級。三、原生生物是單細胞低等生物，在環(huán)境中分布很廣，海洋、湖泊、河水、池水及土壤中均有存在。

原生動物（protozoa）是單細胞低等動物水中重要的浮游生物在凈化污水中起一定作用常見的原生動物：鞭毛綱、肉足綱、纖毛綱和孢子綱運動細胞器是鞭毛多生活在含有機質(zhì)較多的污水中常見的有綠眼蟲，波豆蟲、滴蟲等

鞭毛綱（Mastigophora）

運動器官是偽足，也是攝食細胞器生活在富有藻類、含氧量較高的水塘或溝渠中，或潮濕土壤的表層。最常見的代表有變形蟲（amoeba）

肉足綱（Sarcodina）肉足綱運動細胞器是纖毛，亦為攝食細胞器結(jié)構(gòu)較復(fù)雜分游泳型（如草履蟲）和固著型（如鐘蟲類）在活性污泥污水處理池中，常以原生動物的類群與比例作為污水凈化的指標。

纖毛綱（Ciliata）纖毛綱無運動細胞器，有些種類在某一時期有鞭毛或偽足有復(fù)雜的生活史原蟲為寄生，環(huán)境中少見

孢子蟲綱（Sporozoa）間日瘧原蟲第三節(jié)非細胞型微生物是由蛋白質(zhì)外殼包裹一種核酸（RNA或DNA）形成的顆粒，不具細胞結(jié)構(gòu)體積極小、結(jié)構(gòu)簡單、專性寄生、抵抗力特殊等特點。主要為病毒（virus）空氣、土壤、水和食品等各種外環(huán)境均可作為病毒的生境并成為傳播疾病的媒介。病毒（virus）

由核酸（DNA或RNA）和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成的非細胞形態(tài)的專營細胞內(nèi)生存的寄生物。環(huán)境中的病毒

1、空氣中：流感病毒、鼻病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、天花病毒、水痘病毒、風(fēng)疹病毒和腺病毒等2、水中：多為腸道內(nèi)病毒3、土壤中：土壤中病毒可吸附于顆粒內(nèi)而延長存活時間4、食品中：主要引發(fā)甲型傳染性肝炎和胃腸炎等食源性疾病HAV和脊髓灰質(zhì)炎病毒病毒（virus）

由核酸（DNA或RNA）和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成的非細胞形態(tài)的專營細胞內(nèi)生存的寄生物。環(huán)境中的病毒1、空氣中：流感病毒、鼻病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、天花病毒、水痘病毒、風(fēng)疹病毒和腺病毒等2、水中：多為腸道內(nèi)病毒3、土壤中：土壤中病毒可吸附于顆粒內(nèi)而延長存活時間。4、食品中：主要引發(fā)甲型傳染性肝炎和胃腸炎等食源性疾病。毛蚶攜帶HAV

是感染細菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒。

噬菌體、噬真菌體1、宿主特異性，只寄居在易感宿主菌體內(nèi)，故可利用噬菌體進行細菌的鑒定與分型2、結(jié)構(gòu)簡單、基因數(shù)少，是分子生物學(xué)與基因工程的良好實驗工具噬菌體（bacteriophage）噬菌體結(jié)構(gòu)模式圖第四章衛(wèi)生微生物研究和檢測方法衛(wèi)生微生物檢測的特點與原則衛(wèi)生指示微生物衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法衛(wèi)生微生物研究和檢測方法的前景第一節(jié)衛(wèi)生微生物檢測的特點及基本原則1、檢測對象：病原微生物、非致病微生物、條件致病菌；2、標本來源：人體、空氣、水、食物等環(huán)境；3、判定待測物有無、種類、數(shù)量、毒力等。4、探明感染性疾病的傳染源、傳播途徑、易感人群、流行情況；5、檢測方法可靠性：采樣方法、采樣量、樣品處理方法和可靠、敏感、快速的檢測方法。一、樣本的采集原則（一）代表性（二）采樣的注意事項１、避免采樣時外界微生物對樣本的污染；２、避免引入殺滅和抑制樣本目的菌的物質(zhì)或因素；３、注意詳細記錄和標記；二、樣本的運送原則（一）盡快送驗（二）注意保護待檢微生物（三）進行完善樣品交接三、實驗室檢驗的原則（一）具有相應(yīng)的實驗室硬件設(shè)施１、２、３級實驗室等。（二）具有合格的人員和采用標準方法（三）加強實驗室質(zhì)量控制１、儀器設(shè)備２、培養(yǎng)基３、消毒滅菌效果４、記錄和核查５、報告質(zhì)量（四）根據(jù)檢驗的特點，采取特殊措施1、應(yīng)對突發(fā)公共衛(wèi)生事件；2、微生物檢驗優(yōu)先；3、恰當(dāng)?shù)臉悠诽幚砼c檢驗；2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com136第二節(jié)衛(wèi)生指示微生物

（indicatormicroorganism衛(wèi)生指示微生物

衛(wèi)生指示微生物

1、指示微生物：是在常規(guī)衛(wèi)生監(jiān)測中，用以指示樣品狀況及安全性的（非致?。┗颍ㄖ虏⌒裕?。2、分類（1）菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)：用以評價一般衛(wèi)生質(zhì)量，污染程度和安全性；（2）大腸菌群、糞鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等：評價檢品受人、畜糞便的污染情況，間接反映腸道病源微生物存在可能性；（3）其他指示菌：包括特定環(huán)境不能檢出的特定菌（4）病毒（包括嗜菌體）：間接反映腸道病毒存在可能性；2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com138衛(wèi)生微生物檢驗中最重要的指示微生物大腸菌群指示糞便污染糞便污染的指示微生物2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com139一、指示微生物的選擇原則1、數(shù)量大,易于檢出。2、檢驗方法簡單、經(jīng)濟、方便。3、有一定的代表性，其數(shù)量變化能反映樣品衛(wèi)生狀況及安全性。2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com141作為糞便污染指示菌的條件有哪些？①大量存在于人及溫血動物腸道，未被糞便污染的樣品中無此種菌存在；②在外環(huán)境中的抵抗力，包括對消毒劑的抵抗力與腸道致病菌大致相似或稍強；③在外環(huán)境中不繁殖，存活時間與腸道致病菌大致相似或稍長；④檢驗方法簡便，易于定量計數(shù)。2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com142為什么常常通過檢測指示微生物反映樣品衛(wèi)生安全性？

①致病微生物種類多，檢測方法各異，對樣品的衛(wèi)生安全性作出評價時，不可能分別檢測各種微生物；②致病微生物的數(shù)量少，而檢測方法的靈敏度不高；或者受到檢測量的限制，可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果③分離、鑒定致病微生物需時長，不能滿足實際工作的需要

④分離、鑒定致病微生物費用高，而且對人員的技術(shù)要求也相對較高2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com143

與人類健康密切的樣品，如直接進口的食品、飲用水，除檢測衛(wèi)生指示微生物外，還要求直接檢測某些致病菌如：沙門菌志賀菌金黃色葡萄球菌二、常用的指示微生物2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com145（一）菌落總數(shù)

（AerobicPlateCount）

是指被檢樣品的單位重量(g)、容積(ml)、表面積(cm2)或體積(m3)內(nèi)，所含有的能在某種培養(yǎng)基上經(jīng)一定條件、一定時間培養(yǎng)后長出的菌落數(shù)量。以菌落形成單位數(shù)（colonyformingunit，cfu）表示。菌落總數(shù)的種類1、種類：細菌菌落總數(shù)、霉菌菌落總數(shù)和酵母菌菌落總數(shù)。2、衛(wèi)生學(xué)意義：用于判定檢樣被微生物污染的程度或動態(tài)觀察，也是某些樣品的衛(wèi)生限量標準。3、測定方法：常用標準平板計數(shù)法(standardplate-countingmethod)和表面涂布法（SpatulaMethod

）

2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com147標準平板計數(shù)法(standardplate-countingmethod)又稱為傾注平板計數(shù)法Atwhattemperatureshouldpourplatesbedispensed?Desiredtemperatureis45±1°C.菌落生長在固體培養(yǎng)基上，來源于一個細胞，肉眼可見的細胞群體。2022/11/30148裴曉方xxpeiscu@163.com菌落計算方法

（1）菌落計數(shù)方法：做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。（2）菌落計數(shù)的報告

①平板菌落數(shù)的選擇A、選取菌落數(shù)在直徑30～300mm的平板作為菌落總數(shù)測定標準。B、一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均勻即可計算半個平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時（菌落之間無明顯界線），若僅有一條鏈，可視為一個菌落數(shù)；如果有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個菌落計。②稀釋度的選擇應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之。若有兩上稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30～300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報告其平均數(shù)；若大于2則報告其中較小的數(shù)字。若所有稀釋度平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之。2022/11/30151裴曉方xxpeiscu@163.com②稀釋度的選擇

A、應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之。若有兩上稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30～300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報告其平均數(shù)大于2則報告其中較小的數(shù)字。B、若所有稀釋度平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。C、若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。D、若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之。②稀釋度的選擇

A、應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之。若有兩上稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30～300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報告其平均數(shù)；若大于2則報告其中較小的數(shù)字。B、若所有稀釋度平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。

C、若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。

D、若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之。E、所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分大于300或小于30時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com154③菌落數(shù)的報告

菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告，大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來表示。2022/11/30157裴曉方xxpeiscu@163.com2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com158表面涂布法（SpatulaMethod）表面涂布法2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com159標準平板計數(shù)法表面涂布法不透明培養(yǎng)基-+菌落生長處瓊脂表面+瓊脂內(nèi)瓊脂表面加樣量1ml0.1ml樣分散方式混勻涂布2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com160營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、平板計數(shù)瓊脂的配方及培養(yǎng)基的消毒方法？傾注培養(yǎng)法與表面涂布法的區(qū)別與優(yōu)缺點？2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com161（二）糞便污染指示菌

1、大腸菌群（coliformgroup）：是一群能在35~37C、24小時內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的、需氧或兼性厭氧的、革蘭陰性的無芽胞桿菌。是存在于人和溫血動物腸道中的一大群菌。2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com162大腸桿菌（Escherichaecoli）：

普遍存在于人和動物的腸道內(nèi)（新鮮糞便中每克可達109CFU），近年來隨著測定新方法的發(fā)現(xiàn)和建立，大腸桿菌作為糞便污染的指示菌的應(yīng)用越來越多。利用大腸桿菌產(chǎn)生的葡萄糖苷酸酶，分解吲哚葡萄糖苷酸，產(chǎn)生有色物質(zhì)，而使大腸桿菌菌落顯色，對大腸桿菌數(shù)進行測定。2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com163主要包括：四個屬的菌埃希氏菌屬(Escherichae)克雷伯氏菌屬(Klebsiella)腸桿菌屬(Enterobacter)枸櫞酸桿菌屬（Citrobacter）耐熱大腸菌群根據(jù)生長溫度的差異，將能在37C生長的稱為總大腸菌群，而在44.5C仍能生長的大腸菌群稱為耐熱大腸菌群(thermo-tolerantcoliformgroup)或糞大腸菌群（faecalcoliformFc），耐熱大腸菌群的主要成員是埃希氏菌屬的菌。2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com165糞便污染的指示菌

大腸桿菌檢出的意義最大，其次是耐熱大腸菌群，總大腸菌群的檢出意義略差一些。2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com166水樣大腸菌群MPN計數(shù)仍然為三步法？大腸菌群MPN計數(shù)—食品初發(fā)酵復(fù)發(fā)酵2022/11/30167裴曉方xxpeiscu@163.com大腸菌群月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯發(fā)酵結(jié)果初發(fā)酵陽性陽性陽性陰性2022/11/30168裴曉方xxpeiscu@163.com復(fù)發(fā)酵煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯接種樣本陰性陽性大腸菌群煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯發(fā)酵結(jié)果2022/11/30169裴曉方xxpeiscu@163.com

大腸菌群MPN計數(shù)的優(yōu)勢⑴

10版操作更簡單，適合批量檢測⑵10版檢出的概率大

乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基基本上不具備修復(fù)已損傷的細胞的作用，而月桂基硫酸鹽胰蛋白胨則可以。⑶10版減少了人為的誤差

03版需要挑選菌落，受人主觀的影響很大，沒有挑對或挑取的不夠多都會導(dǎo)致假陰性結(jié)果，而08版采取增菌液接種，會減少假陰性。2022/11/30170裴曉方xxpeiscu@163.com大腸菌群平板計數(shù)平板計數(shù)證實試驗2022/11/30171裴曉方xxpeiscu@163.com典型菌落：紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5mm或更大大腸菌群在結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）上的生長情況2022/11/30172裴曉方xxpeiscu@163.com大腸菌群PetrifilmTM測試片法2022/11/30173裴曉方xxpeiscu@163.com準備PetrifilmTM測試片接種1ml樣本液緩慢蓋上上層膜用壓板輕壓培養(yǎng)基樣本接種結(jié)果紅色有氣泡的菌落確認為大腸菌群2022/11/30174裴曉方xxpeiscu@163.com大腸桿菌MPN計數(shù)初發(fā)酵復(fù)發(fā)酵伊紅美藍平板分離培養(yǎng)營養(yǎng)瓊脂斜面或平板培養(yǎng)生化試驗2022/11/30175裴曉方xxpeiscu@163.com大腸桿菌VRB-MUG平板計數(shù)法檢驗時用已知MUG陽性菌株（如大腸桿菌ATCC25922）和產(chǎn)氣腸桿菌（如ATCC13048）做陽性和陰性對照2022/11/30176裴曉方xxpeiscu@163.com大腸桿菌PetrifilmTM測試片計數(shù)法與大腸菌群PetrifilmTM測試片計數(shù)法方法一致結(jié)果判讀大腸桿菌

大腸菌群

藍色帶氣泡的菌落紅色帶氣泡的菌落2022/11/30177裴曉方xxpeiscu@163.com糞鏈球菌（fecalStrptococcusFs）

是一類能還原亞硫酸鹽為硫化物、厭氧生長的、革蘭陽性梭狀芽胞桿菌。是人和動物，特別是食草動物腸道內(nèi)的常住菌，數(shù)量少于大腸桿菌，每克糞便約為105~106。由于該菌能形成芽孢，對含氯消毒劑及外界不良環(huán)境有較強的抵抗力，在外環(huán)境中存活時間較長。所以若樣品中產(chǎn)氣莢膜梭菌被大量檢出而大腸菌群數(shù)量很少時，則表示樣品曾受過糞便污染，即有陳舊性污染。常被作為水或土壤衛(wèi)生細菌學(xué)檢驗中的指標菌。糞鏈球菌形態(tài)與菌落180其它指示微生物

（1）不得檢出的致病菌1）沙門菌與致賀菌；2）金黃色葡萄球菌3）溶血性鏈球菌；4）銅綠假單孢菌；5）破傷風(fēng)梭菌；（2）腸道病毒的指標微生物

1）大腸桿菌噬菌體f2(coliphage)2）脊髓灰質(zhì)炎病毒(poliovirus)減毒疫苗株I第三節(jié)衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法一、樣品處理（一）樣品混勻：（二）樣品濃縮：1、沉淀法：（1）細菌樣本：普通離心法（4000rpm/min），或差速離心去除雜質(zhì)，收集菌體。（2）病毒樣本：高速離心或超速離心（10000rpm/minor100000rpm/min）。2、過濾法：通過微孔濾膜，真空負壓抽濾。3、吸附沉淀法：利用化學(xué)制劑顆粒吸附、解離，收集標本。二、損傷菌的復(fù)蘇

概念：對環(huán)境中的微生物，因受冷、熱、脫水干燥、輻射、高滲或消毒劑作用可能導(dǎo)致的亞致死性損傷，預(yù)先進行適度培養(yǎng)（增菌），使其能在一般的培養(yǎng)方法中生長并被常規(guī)檢驗程序查出的技術(shù)。三、選擇性增菌與分離2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com185基本技術(shù)無菌染色觀察生化血清分離培養(yǎng)2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com186分離培養(yǎng)2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com1872022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com1882022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com1892022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com190HE-

SALM2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com191HE-ENT2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com1922022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com193粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com194生化反應(yīng)（細菌代謝物質(zhì)分析檢測協(xié)助鑒定細菌程序）2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com195分解糖類使食管中的pH改變—致酸堿指示劑發(fā)生顏色變化。INDOLETEST（吲哚反應(yīng)）

是指對苯二胺在氧化酶的作用下由于氧化而與酚類相伴合，形成吲哚酚呈色的反應(yīng)。通常使用二甲基對苯二胺與a-萘酚反應(yīng)，呈紫色。取其開頭字母稱。通常認為是由于細胞色素c氧化酶與細胞色素c的作用引起的。且與含有VC的液體相遇會褪色（變無色）2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com197Ureasetest2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com198Oxidasetest2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com199

stain2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com200B.anthracis,Gramstain

demonstratingspores衛(wèi)生微生物樣品特點數(shù)量低——濃縮細菌受損——復(fù)蘇雜菌多——選擇性增菌和分離2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com202（一）樣品處理1．樣品混勻：2．樣品濃縮：2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com203（一）樣品處理1．樣品混勻：液體樣品常通過電動、手搖或敲打震蕩，使之混勻；固體樣品需通過置滅菌乳缽內(nèi)研磨均勻，或于高速組織搗碎機或勻漿器中在少量液體存在下，搗碎混勻后再取樣，或使用商品化的均質(zhì)器混合待檢樣品。2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2042．樣品濃縮

常用的樣品濃縮方式有沉淀法過濾法吸附法2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com205（1）沉淀法

細菌可通過普通離心機離心沉淀而濃縮，或者通過差速離心，去除雜質(zhì)，收集菌體，達到濃縮的目的。病毒濃縮需采用高速或超速離心機。2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2062022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2072022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2082022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com209（2）過濾法

是將樣品在負壓或正壓作用下，通過孔徑為0.45μm的濾膜，細菌被阻留在膜上，而達到濃縮的目的。樣品中的病毒可通過膜的靜電吸附濃縮。過濾法不但可濃縮物，還可消除樣品中的抑制劑對后續(xù)培養(yǎng)的影響。2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2102022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2112022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2122022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2132022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2142022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2152022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com216Addonedrop:-Shigellapoly.A,A-1SerologicalTestSlideAgglutinationTestforserogroupsTestculture+….PositivereactionmixShigellapoly.C,C-1,C-2,C-3Shigellapoly.DShigellapoly.BFurthertestfortypeofShigellaantisera-ve+veNegativereaction=HomogenoussuspensionPositivereaction=Clumping2022/11/30217裴曉方xxpeiscu@163.com六、細菌鑒定的其他方法微生物鑒定系統(tǒng)免疫核酸雜交PCRG+C含量基因芯片蛋白質(zhì)芯片

免疫學(xué)檢測細菌的方法微生物的分子學(xué)檢驗分子雜交技術(shù)2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2222022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com223Membranefilterassay2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2242022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2252022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2262022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com227基因芯片技術(shù)

固定有寡核苷酸、基因組DNA或互補DNA等的生物芯片。利用這類芯片與標記的生物樣品進行雜交，可對樣品的基因表達譜生物信息進行快速定性和定量分析。即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法，在一塊基片表面固定了序列已知的核苷酸的探針。當(dāng)溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG，與基因芯片上對應(yīng)位置的核酸探針產(chǎn)生互補匹配時，通過確定熒光強度最強的探針位置，獲得一組序列完全互補的探針序列。據(jù)此可重組出靶核酸的序列。

基因芯片基因芯片檢測系統(tǒng)基因芯片檢測結(jié)果蛋白芯片技術(shù)

蛋白芯片是一種高通量監(jiān)測系統(tǒng),通過靶分子和捕捉分子相互作用來監(jiān)測蛋白分子之間的相互作用。捕獲分子一般都預(yù)固定在芯片表面，由于抗體的高度特異性和與抗原強結(jié)合特性所以被廣泛的用做捕獲分子。G蛋白是一種抗體結(jié)合蛋白，他特意結(jié)合抗體FC片段。蛋白芯片的基本原理

1、是將各種蛋白質(zhì)有序地固定于載玻片等各種介質(zhì)載體上成為檢測的芯片，然后用標記了有特定熒光物質(zhì)的抗體與芯片作用，與芯片上的蛋白質(zhì)相匹配的抗體將與其對應(yīng)的蛋白質(zhì)結(jié)合，抗體上的熒光將指示對應(yīng)的蛋白質(zhì)及其表達數(shù)量。2、再將未與芯片上的蛋白質(zhì)互補結(jié)合的抗體洗去之后利用熒光掃描儀或激光共聚掃描技術(shù)，測定芯片上各點的熒光強度，通過熒光強度分析蛋白質(zhì)與蛋白之間相互作用的關(guān)系，由此達到測定各種基因表達功能的目的。蛋白芯片及檢測儀蛋白芯片結(jié)果分析2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com237聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）

polymerasechainreaction,PCR細胞內(nèi)核酸復(fù)制原理核酸樣本處理基因體外放大（擴增）技術(shù)瓊脂糖或聚丙酰胺凝膠電泳觀察核酸產(chǎn)量2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com243KaryMullis1993年因此榮獲諾貝爾化學(xué)獎

聚合酶鏈反應(yīng)是在體外酶促擴增特定DNA或RNA片段的技術(shù)。（polymerasechainreaction,PCR，isaninvitrotechniquefortheamplificationofaregionofDNAwhichliesbetweentworegionsofknownsequence.）體內(nèi)DNA的復(fù)制體系DNA聚合酶（IIIIII）拓撲異構(gòu)酶解旋酶類SSB

引物dNTPMg2+5’3’2022/11/30244裴曉方xxpeiscu@163.com1234522557294時間（min）溫度（℃）PCR的基本原理適溫延伸3高溫變性1低溫退火2重復(fù)1~3步25~30輪目的DNA片段擴增100萬倍以上DNA雙螺旋解開DNA單鏈與引物復(fù)性DNA變性形成2條單鏈子鏈延伸2022/11/30245裴曉方xxpeiscu@163.com2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com246

?2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com247體系組成

一段長的雙鏈DNA，是待擴增的目的片段，作為擴增反應(yīng)的原始模板(template)兩段單鏈寡核苷酸，其序列與待擴增片段的兩端相同，作為反應(yīng)的引物(primer)有四種脫氧核苷三磷酸（dNTPs）作為合成DNA的原料有DNA聚合酶(polymerase)，催化DNA的合成有合適的鹽、緩沖液以及溫度循環(huán)參數(shù)，以提供酶促反應(yīng)的最佳條件并保證反應(yīng)的產(chǎn)量。2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com248TheoligonucleotidesserveasprimersforDNApolymeraseandthedenaturedstrandsofthelargeDNAfragmentservesasthetemplate.2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2492022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2502022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2512022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2522022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2532022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2542022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com255

Forexample,after6cycleswewillhave1xcopyofeachoriginaltemplate1x拷貝原始模板6xcopiesofeachfragmentofindeterminantlength6x拷貝不定長度產(chǎn)物

(64-(6+1))=57xcopiesofeachfragmentofdefinedlength57x拷貝確定長度產(chǎn)物PCR特點靈敏特異快速不用純培養(yǎng)物2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2562022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2575’-GTTTGGCTGGTTGATTCAAG……………….……..........CGCCAAATCGGAAATCTTGC-3‘TaqDNA聚合酶

TaqDNApolymerase2022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com2592022/11/30裴曉方xxpeiscu@163.com260G