感染的檢查與防治

第十章病原微生物感染的檢查及防治原則第一節(jié)細(xì)菌感染的檢查2022/12/11第1頁，共32頁。標(biāo)本的采集和送檢避免雜菌污染運送注意保存不同期不同標(biāo)本用抗菌素以前采集病變明顯部位標(biāo)本必須新鮮2022/12/12第2頁，共32頁。一、細(xì)菌學(xué)診斷，病原菌的檢查程序藥物敏感試驗標(biāo)本直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)生化試驗血清學(xué)試驗動物試驗明確診斷初步診斷檢測核酸（雜交、PCR、DNA指紋）其他檢測技術(shù)（測抗原）（檢測病原菌）2022/12/13第3頁，共32頁。原理二、血清學(xué)診斷雙份血清標(biāo)本，恢復(fù)期血清中抗體效價比急性期血清中抗體效價升高≥4倍者方有意義種類

標(biāo)本凝集試驗：沉淀試驗：補體結(jié)合試驗：中和試驗：

肥達(dá)試驗、外斐試驗、顯微鏡凝集試驗等梅毒VDRL、RPR試驗等抗“O”試驗等Q熱柯克斯體抗體檢測等2022/12/14第4頁，共32頁。將疫苗或類毒素接種于人體，使機(jī)體獲得免疫力的一種防治微生物感染的措施。第二節(jié)細(xì)菌感染的免疫防治一、人工主動免疫主要生物制品死疫苗活疫苗類毒素亞單位疫苗DNA重組疫苗核酸疫苗治療性疫苗2022/12/15第5頁，共32頁?？苟舅丶?xì)胞免疫制劑二、人工被動免疫注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白抗體，或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體獲得特異性免疫力主要生物制品抗菌血清胎盤球蛋白丙種球蛋白2022/12/16第6頁，共32頁。人工主動免疫與人工被動免疫區(qū)別要點人工主動免疫人工被動免疫免疫物質(zhì)抗原抗體或細(xì)胞因子等免疫出現(xiàn)時間滿，2~4周快，立即免疫維持時間長，數(shù)年~數(shù)月短，2~3周主要用途預(yù)防治療或緊急預(yù)防比較2022/12/17第7頁，共32頁。比較死疫苗與活疫苗區(qū)別點死疫苗活疫苗制劑特點死，強毒株活減毒株接種劑量與特點量較大，2~3次量較小，1次保存及有效期易保存，約1年不易保存，4℃數(shù)周免疫效果較低，維持?jǐn)?shù)月~2年較高，維持3~5年甚至更長2022/12/18第8頁，共32頁。.

第三節(jié)病毒感染的檢查標(biāo)本的采集與送檢用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本：a、采集急性期標(biāo)本b、采集感染部位標(biāo)本c、冷藏血清學(xué)診斷的標(biāo)本：急性期和恢復(fù)期雙份血清，-20℃保存2022/12/19第9頁，共32頁。.

一、檢測活病毒病毒的分離培養(yǎng)與鑒定1.最常用細(xì)胞培養(yǎng)2.雞胚接種：主要用于流感病毒的分離3.動物接種少用：主要用于狂犬病病毒乙型腦炎病毒的分離

2022/12/110第10頁，共32頁。動物接種雞胚接種組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)移植培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)

原代細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)傳代細(xì)胞培養(yǎng)一、檢測活病毒（一）三大培養(yǎng)方法2022/12/111第11頁，共32頁。常用的細(xì)胞培養(yǎng)2022/12/112第12頁，共32頁。2022/12/113第13頁，共32頁。（二）病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指標(biāo)1、CPE2、紅細(xì)胞吸附正常細(xì)胞病變細(xì)胞2022/12/114第14頁，共32頁?？袢《景w（Negribody）3.包涵體2022/12/115第15頁，共32頁。巨細(xì)胞病毒包涵體4.免疫技術(shù)2022/12/116第16頁，共32頁。（三）病毒數(shù)量和感染性測定1、蝕斑試驗2、ID50或TCID50病毒感染雞胚、動物或細(xì)胞后，引起50%發(fā)生死亡或病變的最小量。病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑，蝕斑是由一個感染性病毒體復(fù)制形成的，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位PFU來表示。2022/12/117第17頁，共32頁。病毒的快速診斷光鏡-----包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學(xué)技術(shù)雜交SouthernblotPCRNorthernblot2022/12/118第18頁，共32頁。.二、檢測病毒抗原與抗體已知抗體測病毒感染脫落細(xì)胞或分泌物細(xì)胞中的抗原已知抗原測血清中抗體測IgM，或動態(tài)測IgG（雙份血清）三、檢測病毒核酸PCR試驗引物核酸雜交試驗探針

基因芯片技術(shù)2022/12/119第19頁，共32頁。第四節(jié)病毒感染的防治一、病毒感染的治療（一）藥物治療

1.核苷類藥物2.蛋白酶抑制劑3.天然藥物（二）基因治療

1.反義寡核脫氧核酸2.核酶（三）免疫治療2022/12/120第20頁，共32頁。

1.核苷類藥物（1）抑制病毒基因復(fù)制碘尿苷(皰疹凈)用異常嘧啶取代胸腺嘧啶,眼皰疹病毒感染。也可滲入細(xì)胞DNA,故有毒性。

無環(huán)鳥苷(啊昔洛韋)，競爭病毒復(fù)制酶。（2）抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄

病毒唑2.蛋白酶抑制劑“雞尾酒”治療HIV，3TC加蛋白酶抑制物3.天然藥物中草藥治療：黃芪、板藍(lán)根、大青葉2022/12/121第21頁，共32頁。

（二）基因治療

1.反義寡核脫氧核酸(反義DNA)與病毒DNA關(guān)鍵基因互補反義寡核苷酸(反義RNA)與病毒RNA關(guān)鍵基因互補2.核酶與病毒RNA結(jié)合,切割降解靶RNA（三）免疫治療細(xì)胞因子：干擾素、TNF、IL-12等2022/12/122第22頁，共32頁。.策略：阻斷病毒復(fù)制周期中吸附穿入、

脫殼、核酸復(fù)制、或裝配釋放任一環(huán)節(jié)，從而抑制病毒復(fù)制要求：抗病毒藥物能穿入細(xì)胞選擇性地抑制病毒復(fù)制又不損傷宿主細(xì)胞1、阻斷吸附特異免疫球蛋白—中和抗體如：乙腦病毒包膜抗原的單抗2022/12/123第23頁，共32頁。.

可溶性的病毒受體如：HIV用可溶性CD4（不理想）2、抑制脫殼如：金剛烷胺，用于流感病毒的防治（副作用大）3、抑制核酸復(fù)制a.核苷類化合物(最早用于臨床治療)用異常嘧啶取代胸腺嘧啶如:碘尿苷(皰疹凈),眼皰疹病毒感染

2022/12/124第24頁，共32頁。.

也可滲入細(xì)胞DNA,故有毒性無環(huán)鳥苷(啊昔洛韋)毒性作用小b.抗病毒基因治療反義寡核脫氧核酸(反義DNA)與病毒DNA關(guān)鍵基因互補反義寡核苷酸(反義RNA)與病毒RNA關(guān)鍵基因互補核酶與病毒RNA結(jié)合,切割降解靶RNA2022/12/125第25頁，共32頁。.

c.病毒蛋白酶抑制物病毒蛋白酶:病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄后剪接、加工如：“雞尾酒”治療HIV3TC加蛋白酶抑制物d.細(xì)胞因子：干擾素、TNF、IL-12等4、疫苗治療如：乙肝、HIV、狂犬病疫苗5、中草藥治療：黃芪、板藍(lán)根、大青葉

2022/12/126第26頁，共32頁。.

二、病毒感染的預(yù)防（一）人工主動免疫（artificialactiveimmunity）定義：是將疫苗或類毒素接種于人體，使機(jī)體產(chǎn)生獲得性免疫力，抵抗微生物感染，主要用于預(yù)防。

2022/12/127第27頁，共32頁。.

制劑：1）死疫苗：選用免疫原性強的病原，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法殺死或滅活。2）活疫苗：用減毒的或無毒力的活病原體制成3）類毒素：細(xì)菌外毒素經(jīng)0.3%-0.4%甲醛處理獲得2022/12/128第28頁，共32頁。.

4)基因工程疫苗:重組DNA表答的病原蛋白5)核酸疫苗:DNA和RNA疫苗,由載體和編碼病原體某種抗原的cDNA或mRNA組成6)其它:合成肽疫苗、抗獨特型疫苗等2022/12/129第29頁，共32頁。（二）人工被動免疫（artificialpassiveimmunization）

定義：注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白抗體，或細(xì)胞因子等細(xì)胞免疫制劑，使機(jī)體即刻獲得特異性免疫，主要用于治療或緊急預(yù)防。2022/12/130第30頁，共32頁。.如：血清免疫球蛋白用于甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎預(yù)防高效價含乙肝病毒表面抗體的免疫球蛋白用于預(yù)防母嬰乙肝傳播2022/12/131第31頁，共32頁。內(nèi)容梗概第十章病原微生物感染的檢查及防治原則。第十章病原微生物感染的檢查及防治原則。第一節(jié)細(xì)菌感染的檢查。2022/11/18。雙份血清標(biāo)本，恢復(fù)期血清中抗體效價比急性期。肥達(dá)試驗、外斐試驗、顯微鏡凝集試驗等。將疫苗或類毒素接種于人體，使機(jī)體獲得免疫力的一種防治微生物感染的措施。第二節(jié)細(xì)菌感染的免疫防治。注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白抗體，或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體獲得特異性免疫力。人工主動免疫與人工被動免疫。第三節(jié)病毒感染的檢查。2、ID50或TCID50。病毒感染雞胚、動物或細(xì)胞后，引起50%發(fā)生死亡或病變的最小量。病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑