泌尿外科解剖與生理

泌尿系統(tǒng)解剖與生理第1頁，共62頁。泌尿系統(tǒng)的解剖腎上腺腎輸尿管膀胱尿道前列腺陰囊內(nèi)容物第2頁，共62頁。腎上腺的解剖腎上腺（suprarenalgland）位于腹膜后隙，腎臟的上方,左側(cè)為半月形，右側(cè)似三角形。腎上腺的動(dòng)脈有三支：膈下動(dòng)脈－－腎上腺上動(dòng)脈腹主動(dòng)脈－－腎上腺中動(dòng)脈腎動(dòng)脈－－腎上腺下動(dòng)脈一、腎上腺的解剖第3頁，共62頁。左腎上腺靜脈－左腎靜脈右腎上腺靜脈－下腔靜脈少數(shù)匯入右膈下靜脈右腎靜脈第4頁，共62頁。二、腎上腺的生理

腎上腺皮質(zhì)由外向內(nèi)可分為３層即球狀帶、束狀帶和網(wǎng)狀帶。球狀帶主要分泌醛固酮，又稱為鹽皮質(zhì)激素，其主要功能是促進(jìn)腎臟對(duì)鈉離子的主動(dòng)重吸收和對(duì)鉀離子的排泄，維持體內(nèi)水的恒定，增加組織液和血量，這對(duì)生命至關(guān)重要。束狀帶及網(wǎng)狀帶分泌糖皮質(zhì)激素，主要為皮質(zhì)醇。皮質(zhì)醇主要作用是促進(jìn)糖異生和升高血糖。促使蛋白質(zhì)分解，使脂肪組織中脂肪分解并在體內(nèi)重新分布。皮質(zhì)醇在機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)可提高其耐受能力。皮質(zhì)醇還具有抗炎抗過敏和抑制免疫功能的作用。

腎上腺髓質(zhì)由嗜鉻細(xì)胞構(gòu)成，主要分泌腎上腺素，也可分泌少量去甲腎上腺素。腎上腺素和去甲腎上腺素對(duì)心血管、內(nèi)臟平滑肌的活動(dòng)有調(diào)節(jié)作用。腎上腺髓質(zhì)是人體極重要的內(nèi)分泌腺，髓質(zhì)分泌功能障礙將引起人體失去有效的應(yīng)急能力第5頁，共62頁。腎臟的解剖與生理一、腎臟的解剖：腎的位置腎（kidney）位于脊柱兩側(cè)，貼附于腹后壁

第6頁，共62頁。腎的毗鄰（前面觀）第7頁，共62頁。腎的毗鄰（后面觀）第8頁，共62頁。腎蒂的結(jié)構(gòu)和排列腎蒂（renalpedicle）由出入腎門的腎血管、腎盂、神經(jīng)和淋巴管組成。由前向后為：靜、動(dòng)、盂；由上向下為：動(dòng)、靜、盂。第9頁，共62頁。腎血管與腎段第10頁，共62頁。腎靜脈第11頁，共62頁。腎的被膜腎的被膜有三層：由外向內(nèi)依次為腎筋膜、脂肪囊和纖維囊。第12頁，共62頁。腎的被膜（縱面觀）第13頁，共62頁。輸尿管的解剖輸尿管(ureters)：全長25－30cm?？煞秩浚孩鸥共浚ㄑ危?，從腎盂與輸尿管交界處至跨越髂血管處；⑵盆部（盆段），從跨越髂血管處至膀胱壁；⑶壁內(nèi)部（膀胱壁段），斜行穿膀胱壁。第14頁，共62頁。輸尿管動(dòng)脈第15頁，共62頁。腹膜后大血管第16頁，共62頁。膀胱的位置與毗鄰膀胱(urinarybladder)位于盆腔前部，空虛時(shí)上界約與骨盆上口相當(dāng)，膀胱體上面有腹膜覆蓋，下外側(cè)面緊貼恥骨后隙的疏松結(jié)締組織、肛提肌和閉孔內(nèi)肌。男性膀胱底上部借直腸膀胱陷凹與直腸相鄰，下部與精囊和輸精管壺腹相鄰；膀胱頸與前列腺相接。女性的膀胱底與子宮頸和陰道前壁相貼，膀胱頸與尿生殖膈相鄰。第17頁，共62頁。膀胱的血供髂內(nèi)動(dòng)脈前干膀胱上動(dòng)脈膀胱下動(dòng)脈膀胱上中部膀胱下部髂內(nèi)靜脈第18頁，共62頁。前列腺的位置第19頁，共62頁。陰囊的層次第20頁，共62頁。腎上腺的解剖1.選題背景

2.研究現(xiàn)狀3.研究目標(biāo)和研究內(nèi)容4.技術(shù)路線5.本課題特點(diǎn)6.部分預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果7.實(shí)驗(yàn)進(jìn)展安排第21頁，共62頁。第22頁，共62頁。2HIF-1α結(jié)構(gòu)功能及其靶基因

1胃癌化療及多藥耐藥研究概況3HIF-1α腫瘤中表達(dá)及與生物行為關(guān)系4HIF-1α與化療耐藥的關(guān)系5p53基因與HIF-1α表達(dá)的關(guān)系第23頁，共62頁。

1胃癌化療及多藥耐藥研究概況胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，化療仍是治療中晚期胃癌的主要手段，但由于腫瘤的多藥耐藥（MDR），化療的效果并不理想。目前認(rèn)為mdr-1基因與MDR有關(guān)，其編碼p-糖蛋白(p-gp)，能把結(jié)構(gòu)功能不同的藥物泵出細(xì)胞外而降低藥物濃度,從而引發(fā)腫瘤耐藥．但是對(duì)于癌癥中p-gp過表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制目前尚不清楚。第24頁，共62頁。MDR的基本概念

MDR是指抗某種細(xì)胞毒藥物的耐藥細(xì)胞系對(duì)許多結(jié)構(gòu)上無關(guān)的和作用機(jī)制不同的其它抗癌藥物產(chǎn)生的交叉抗藥性,是一種獨(dú)特的廣譜耐藥現(xiàn)象第25頁，共62頁。耐藥分類:

原藥耐藥PDR多藥耐藥MDR

腫瘤耐藥機(jī)制

藥理耐藥.生化耐藥

凋亡耐藥

細(xì)胞動(dòng)力學(xué)耐藥第26頁，共62頁。經(jīng)典MDRMDR1的基因產(chǎn)物一種細(xì)胞膜糖蛋白稱為P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)分子量為170KD(P170)P-gp具有能量依賴性“藥泵”功能表達(dá)水平與耐藥程度成正比第27頁，共62頁。P-gp介導(dǎo)的抗癌藥物阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素米托蒽醌長春花堿、長春新堿乙托泊苷（Etoposide）紫杉醇、泰素帝ActinomycinD第28頁，共62頁。惡性腫瘤生長迅速,當(dāng)腫瘤細(xì)胞生長超過血管生成的速度時(shí),極易發(fā)生缺氧.因此腫瘤缺氧是腫瘤惡性進(jìn)展的重要特征.腫瘤細(xì)胞可通過多種途徑對(duì)缺氧進(jìn)行適應(yīng)性調(diào)節(jié).缺氧誘導(dǎo)因子－1（Hypoxiainduciblefactor1,HIF-1）是調(diào)節(jié)細(xì)胞缺氧反應(yīng)的主要轉(zhuǎn)錄因子.第29頁，共62頁。第30頁，共62頁。TillAcker，etal.Aroleforhypoxiaandhypoxia-inducibletranscriptionfactorsintumorphysiology。

JMolMed,2002,80:562–575.第31頁，共62頁。缺氧誘導(dǎo)因子－1（Hypoxiainduciblefactor1,HIF-1）HIF-1α活性調(diào)節(jié)亞單位HIF-1β可能與穩(wěn)定HIF-1及二聚化有關(guān)

2.HIF-1α結(jié)構(gòu)功能代謝及其靶基因

第32頁，共62頁。第33頁，共62頁。第34頁，共62頁。第35頁，共62頁。缺氧誘導(dǎo)因子1－α的代謝第36頁，共62頁。

缺氧癌基因激活HER2FRAPHRASCSRC抑癌基因失活VHLPTENp53生長因子或細(xì)胞因子

IGR、Insulin、EGF、IL-1

HIF-1α的表達(dá)調(diào)節(jié)因素第37頁，共62頁。二.研究現(xiàn)狀1.HIF-1α在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)位于細(xì)胞核內(nèi).

2.HIF-1α在多種腫瘤中的表達(dá),在腫瘤附近正常組織中不能測及.

3.在結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌及前列腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，HIF-1α蛋白表達(dá)隨乳腺癌惡性度升高而增加，且與浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)第38頁，共62頁。4.發(fā)現(xiàn)HIF-1α-/-組劑量反應(yīng)曲線較HIF-1α+/+組明顯左移,IC50也顯著減少.5.對(duì)腫瘤細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α-/-腫瘤細(xì)胞對(duì)放療和化療藥物的敏感度都有所增加。6.多藥耐藥基因MDR1是HIF-1α的靶基因。第39頁，共62頁。7.利用乏氧誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞459表達(dá)HIF-1α，發(fā)現(xiàn)p-gp和MRP隨著HIF-1α表達(dá)而增加，并且對(duì)表阿霉素和順鉑的耐藥性增強(qiáng)。8.國外的研究也發(fā)現(xiàn)，缺氧能導(dǎo)致p-gp和HIF-1α過表達(dá)，從而產(chǎn)生對(duì)VP-16、博萊霉素和蒽環(huán)類耐藥。9.國外對(duì)卵巢癌的研究已表明突變型P53過表達(dá)會(huì)引起HIF-1α表達(dá)升高.第40頁，共62頁。待解決問題目前關(guān)于HIF-1α與胃癌生物行為及多藥耐藥機(jī)制關(guān)系的研究報(bào)道甚少。

目前對(duì)于HIF-1α與ＭＤＲ的研究多用基因轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)用原代胃癌體外細(xì)胞藥物敏感性進(jìn)行研究的報(bào)道甚少．第41頁，共62頁。三.研究目標(biāo)和研究內(nèi)容1.研究目標(biāo)研究HIF-1α蛋白表達(dá)與p-gp表達(dá)的相關(guān)性，探討其與胃癌細(xì)胞多藥耐藥的關(guān)系。探討HIF-1α表達(dá)與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系.探討HIF-1α蛋白表達(dá)與突變P53過表達(dá)的相關(guān)性.

第42頁，共62頁。2.研究內(nèi)容

１對(duì)６０例新鮮胃癌標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞純化，短期原代培養(yǎng)，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)和MTT法檢測其對(duì)常用化療藥物的敏感性．２應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測60例胃癌石蠟標(biāo)本P53、P-gp、HIF-1α蛋白表達(dá)，并收集臨床病理資料。第43頁，共62頁。３應(yīng)用RT-PCR方法檢測相同60例新鮮胃癌細(xì)胞HIF-1αmRNA的表達(dá)水平。

４應(yīng)用TUNEL、熒光顯微鏡等方法檢測化療藥誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡后的形態(tài)學(xué)改變。第44頁，共62頁。四.技術(shù)路線HIF-1αRT-PCR免疫組化胃癌手術(shù)標(biāo)本細(xì)胞分離、短期培養(yǎng)ＭＴＴ及流式技術(shù)檢測化療藥物體外敏感性HIF-1α、p-gp、P53免疫組化化療藥誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡后形態(tài)學(xué)改變對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析第45頁，共62頁。五.本課題的特點(diǎn)

從細(xì)胞缺氧角度探討HIF-1α蛋白表達(dá)與p-gp表達(dá)的相關(guān)性，探討其與胃癌細(xì)胞多藥耐藥的關(guān)系。國外有類似研究，國內(nèi)未見報(bào)道關(guān)于HIF-1α表達(dá)與胃癌生物學(xué)行為的研究國內(nèi)未見報(bào)道。

新穎性關(guān)于胃癌中HIF-1α蛋白表達(dá)與P53過表達(dá)關(guān)系在國內(nèi)未見報(bào)道第46頁，共62頁。

實(shí)用性探討HIF-1α蛋白表達(dá)與p-gp表達(dá)的相關(guān)性，可望從一新角度闡述耐藥發(fā)生機(jī)制。

研究HIF-1α表達(dá)與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系，探討其作為一種新的獨(dú)立預(yù)后參數(shù)的可能性。

探討HIF-1α蛋白表達(dá)與P53過表達(dá)關(guān)系有助于更好理解胃癌病理生物學(xué)特征。第47頁，共62頁。

國外已有類似的文獻(xiàn)報(bào)道?？尚行允中g(shù)標(biāo)本充足，設(shè)備齊全，預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

科學(xué)性第48頁，共62頁。免疫組化判斷標(biāo)準(zhǔn)：P53:無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞<5%為陰性,<

２５％(+),<

５０％(２＋)，<

７５％強(qiáng)陽性(３＋)，＞７５％為（４＋）。

P-gp為胞質(zhì)和(或)胞膜陽性,陽性細(xì)胞<5%為陰性,5%～15%為+,≥16%為２＋

。HIF-1α判斷標(biāo)準(zhǔn)：＜１％為陰性，＜１０％為（＋），１１－５０％為（２＋），＞５０％為（３＋）．第49頁，共62頁。藥物敏感性判斷：高度敏感:抑制率<50%;中度敏感:抑制率30%～50%;不敏感:抑制率<30%。

第50頁，共62頁。HIF-1α陽性HIF-1α陰性p-gp陽性p-gp陰性HIF-1α陽性HIF-1α陰性藥物敏感性與HIF-1α的關(guān)系第51頁，共62頁。HIF-1α表達(dá)與胃癌生物學(xué)行為的研究

按臨床病理分期、組織類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否分組

第52頁，共62頁。HIF-1α蛋白表達(dá)與P53過表達(dá)關(guān)系HIF-1α陽性HIF-1α陰性P53陽性p53陰性第53頁，共62頁。６部分預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果第54頁，共62頁。胃癌中突變p53蛋白的表達(dá)（10*20倍）細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)

第55頁，共62頁。胃癌中p-gp的表達(dá)（10*20倍）細(xì)胞膜/漿表達(dá)第56頁，共62頁。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果小結(jié)１基本掌握胃癌細(xì)胞分離和短期原代培養(yǎng)的方法２原代胃癌細(xì)胞ＭＴＴ法體外藥物敏感實(shí)驗(yàn)３基本掌握免疫組織化學(xué)的實(shí)驗(yàn)流程第57頁，共62頁。凋亡細(xì)胞DNA片斷電泳分析1.未加化療藥組2.順鉑1ppc24小時(shí)3.順鉑10ppc24小時(shí)4.順鉑10ppc48小時(shí)5.順鉑10ppc72小時(shí)12345第58頁，共62頁。第59頁，共62頁。七.課題研究進(jìn)度安排

2003年9月-12月文獻(xiàn)檢索、資料收集

2004年1月-5月預(yù)試驗(yàn)

2004年6月開題報(bào)告、調(diào)整方案

2004年7月-2005年2月正式試驗(yàn)

2005年3月-6月統(tǒng)計(jì)資料、撰寫論文