結(jié)核分枝桿菌及其實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)課件

結(jié)核分枝桿菌

及其實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)趙俊偉（,主管技師）聯(lián)系方式：鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科河南省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室年月中國鄭州結(jié)核分枝桿菌

及其實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)趙俊偉（,主管技師結(jié)核病又稱為癆病和白色瘟疫。公元三世紀(jì)以前，我國古代醫(yī)學(xué)還只是認(rèn)識到該病可能是一種極為嚴(yán)重的慢性傳染病，“累年積月，漸就頓滯，以至于死，死后復(fù)轉(zhuǎn)旁人，乃至滅門”。以后逐漸認(rèn)識到這是一種“肺癆”，其病因?yàn)椤鞍A蟲”所致。后來，西方的一些科學(xué)家發(fā)現(xiàn)這類病人的肺內(nèi)有一個個堅(jiān)實(shí)的團(tuán)塊，摸上去像土豆或花生這類植物的根上塊莖，就將該病稱之為，即結(jié)節(jié)的意思，這就是結(jié)核病命名的由來。結(jié)核病結(jié)核病又稱為癆病和白色瘟疫。公元三世紀(jì)《紅樓夢》：香魂一縷隨風(fēng)散，愁緒??三更入夢遙。雖然說《紅樓夢》與醫(yī)學(xué)無關(guān)，但其作者筆下的“癆病”代表林黛玉卻驚動全世界。上世紀(jì)年代，美國細(xì)菌學(xué)家杜博斯所寫的《》(白色瘟疫)，就曾提到了林黛玉的肺結(jié)核，可見在當(dāng)時《紅樓夢》中林黛玉的病癥已是結(jié)核病的典型癥狀?！饵S帝內(nèi)經(jīng)素問》：“大骨枯稿，大肉陷下。胸中氣滿，喘息不便，內(nèi)痛引肩項(xiàng)，身熱，脫肉破腘?！苯Y(jié)核病《紅樓夢》：香魂一縷隨風(fēng)散，愁緒??三更入夢遙。雖然年全球結(jié)核病發(fā)病率（世界衛(wèi)生組織年結(jié)核病報告）結(jié)核病目前仍然是一個全球性的嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。結(jié)核病年全球結(jié)核病發(fā)病率（世界衛(wèi)生組織年結(jié)核病報告）結(jié)核病目前流行過程傳染源痰涂片陽性的肺結(jié)核病人傳播途徑空氣傳播易感人群普遍易感第二節(jié)流行病特征影響流行的因素自然因素季節(jié)、環(huán)境、居室通風(fēng)社會因素社會、經(jīng)濟(jì)、醫(yī)療服務(wù)其他因素，結(jié)核病流行過程第二節(jié)流行病特征影響流行的因素結(jié)核病結(jié)核病防控的三大手段臨床診斷常常結(jié)合痰涂片，胸片，癥狀和體征結(jié)核病世界防治結(jié)核病日月日結(jié)核病防控的三大手段臨床診斷常常結(jié)合痰涂片，胸片，癥狀和體結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的。。（）年發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌，年獲得諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎。()（）染色法（分枝桿菌抗酸染色的基礎(chǔ)）結(jié)核分枝桿菌結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的。。（）()染色法結(jié)核分結(jié)核分枝桿菌（一）生物學(xué)性狀.形態(tài)與染色細(xì)長略帶彎曲，分枝狀，有莢膜，抗酸染色陽性結(jié)核分枝桿菌（一）生物學(xué)性狀.培養(yǎng)與生長特性特點(diǎn)專性需氧生長緩慢營養(yǎng)要求高，常用羅氏培養(yǎng)基生長現(xiàn)象液體：表面生長（菌膜）固體：顆粒、結(jié)節(jié)、花菜狀菌落乳白或米黃，不透明.生化反應(yīng)不發(fā)酵糖類，觸酶試驗(yàn)陽性，而熱觸酶試驗(yàn)陰性結(jié)核分枝桿菌.培養(yǎng)與生長特性.生化反應(yīng)結(jié)核分枝桿菌9.抵抗力四不怕干燥堿性染料青霉素等抗生素對酸或堿有抵抗力（或、）四怕乙醇濕熱紫外線抗癆藥物（異煙肼、利福平等）.變異性形態(tài)結(jié)構(gòu)變異：結(jié)核桿菌的型：顆粒狀、絲狀毒力變異：卡介苗：和é牛分枝桿菌年次耐藥性變異：耐異煙肼及其他抗結(jié)核藥物的結(jié)核菌株日益增多結(jié)核分枝桿菌.抵抗力四不怕四怕.變異性結(jié)核分枝桿菌致病物質(zhì)（二）致病性莢膜與細(xì)胞表面受體結(jié)合（粘附與入侵作用）含多種酶（分解利用營養(yǎng)物質(zhì)）保護(hù)（阻止有害物質(zhì)的進(jìn)入菌體）脂質(zhì)索狀因子（破壞細(xì)胞，引起肉芽腫）磷脂（形成結(jié)核結(jié)節(jié)）硫酸腦苷脂（抑制吞噬體與溶酶體結(jié)合）蠟質(zhì)（引起遲發(fā)性過敏反應(yīng)）蛋白質(zhì)引起遲發(fā)性過敏反應(yīng)感染方式呼吸道、消化道或皮膚損傷侵入機(jī)體所致疾病結(jié)核病，以肺結(jié)核常見結(jié)核分枝桿菌致（二）致病性莢膜與細(xì)胞表面受體結(jié)合（粘附與入侵作用）含多種（三）免疫性.機(jī)體抗結(jié)核免疫特點(diǎn)：傳染、免疫、超敏反應(yīng)共存.屬于感染免疫()，又稱有菌免疫.細(xì)胞免疫為主，遲發(fā)型超敏反應(yīng)同時存在.郭霍現(xiàn)象:注射結(jié)核桿菌于豚鼠皮下初次注射局部反應(yīng)小全身擴(kuò)散無免疫無超敏反應(yīng)再次注射局部反應(yīng)大不擴(kuò)散有免疫有超敏反應(yīng).結(jié)核菌素試驗(yàn)（試驗(yàn)）：應(yīng)用結(jié)核菌素進(jìn)行皮膚試驗(yàn)來測定機(jī)體對結(jié)核分枝桿菌是否能引起遲發(fā)型超敏反應(yīng)（Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)）的一種試驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌（三）免疫性結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本處理：濃縮集菌（氫氧化鈉處理）直接鏡檢：抗酸染色分離培養(yǎng)：培養(yǎng)基、時間（周后見結(jié)果）痰液等實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)分離培養(yǎng)（一）傳統(tǒng)微生物學(xué)檢查直接涂片標(biāo)本處理：濃縮集菌（氫氧化鈉處理）痰液等實(shí)實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)（二）技術(shù),,,..,,():.實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)（二）技術(shù),,,.（三）核酸分子診斷技術(shù)和靶基因菌種鑒定

異煙肼、、、、、利福平乙胺丁醇吡嗪酰胺鏈霉素、喹諾酮類藥物、,.,,():.,.,,():.實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)（三）核酸分子診斷技術(shù)和靶基因菌種鑒定異煙肼、、、、、基因水平技術(shù)..實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)基因水平技術(shù)..實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù).技術(shù)（仁度）作為臨床分子診斷靶標(biāo)的優(yōu)點(diǎn)拷貝數(shù)≥拷貝數(shù)更具臨床意義生命力旺盛的病原體轉(zhuǎn)錄活躍遠(yuǎn)不如穩(wěn)定病原體死亡，很快降解 .交叉污染少 .較好的愈后指標(biāo)實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù).技術(shù)作為臨床分子診斷靶標(biāo)的優(yōu)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)恒溫擴(kuò)增技術(shù)技術(shù)原理實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)恒溫擴(kuò)增技術(shù)技術(shù)原理實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)提取恒溫擴(kuò)增實(shí)時檢測°°超聲儀（）

痰液預(yù)處理°

稀釋液操作步驟實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)提取恒溫擴(kuò)增°超聲儀（）痰液預(yù)處理°稀釋液操作步驟培養(yǎng)鑒定結(jié)果結(jié)果合計檢測結(jié)果陽性陰性陽性陰性合計敏感度×特異性×準(zhǔn)確度()×恒溫擴(kuò)增技術(shù)檢測的敏感度和特異性實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)培養(yǎng)鑒定結(jié)果結(jié)果合計檢測結(jié)果陽性陰性陽性陰性合計敏感度×恒溫（四）蛋白分子診斷技術(shù)γ干擾素釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異的效應(yīng)淋巴細(xì)胞，效應(yīng)淋巴細(xì)胞再次受到結(jié)核抗原刺激時會分泌多種細(xì)胞因子（γ）由于效應(yīng)細(xì)胞存活時間很短，而且具有特異性，因此可以作為機(jī)體是否正處于被感染的指標(biāo)，無論是否有臨床癥狀。基于原理的產(chǎn)品目前已被美國、加拿大、英國、德國、法國、日本等二十余個國家寫入本國的結(jié)核診療指南中（，）實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)（四）蛋白分子診斷技術(shù)γ干擾素釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異檢測過程與結(jié)果判斷陰性結(jié)果陽性結(jié)果空白對照抗原A抗原B陽性對照（PHA）實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)檢測過程與結(jié)果判斷陰性結(jié)果陽性結(jié)果實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)美國認(rèn)證臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)培養(yǎng)確診的結(jié)核病患者樣本例敏感度()例入伍新兵特異性()檢測的敏感度和特異性國內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)確診病例合計試驗(yàn)組對照組陽性陰性合計靈敏度；特異性；準(zhǔn)確性特點(diǎn)：特異性好，不受卡介苗（）接種和環(huán)境分枝桿菌影響敏感度高，在免疫力低下受抑制人群中有很高的檢出率快速，小時報告結(jié)果實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)美國認(rèn)證臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)檢測的敏感度和特異性國內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)確題目

結(jié)核分枝桿菌

及其實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)敬請各位專家批評指正！鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科/河南省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室趙俊偉2015年12月題目

結(jié)核分枝桿菌

及其實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)敬請各位專家批評指正結(jié)核分枝桿菌

及其實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)趙俊偉（,主管技師）聯(lián)系方式：鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科河南省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室年月中國鄭州結(jié)核分枝桿菌

及其實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)趙俊偉（,主管技師結(jié)核病又稱為癆病和白色瘟疫。公元三世紀(jì)以前，我國古代醫(yī)學(xué)還只是認(rèn)識到該病可能是一種極為嚴(yán)重的慢性傳染病，“累年積月，漸就頓滯，以至于死，死后復(fù)轉(zhuǎn)旁人，乃至滅門”。以后逐漸認(rèn)識到這是一種“肺癆”，其病因?yàn)椤鞍A蟲”所致。后來，西方的一些科學(xué)家發(fā)現(xiàn)這類病人的肺內(nèi)有一個個堅(jiān)實(shí)的團(tuán)塊，摸上去像土豆或花生這類植物的根上塊莖，就將該病稱之為，即結(jié)節(jié)的意思，這就是結(jié)核病命名的由來。結(jié)核病結(jié)核病又稱為癆病和白色瘟疫。公元三世紀(jì)《紅樓夢》：香魂一縷隨風(fēng)散，愁緒??三更入夢遙。雖然說《紅樓夢》與醫(yī)學(xué)無關(guān)，但其作者筆下的“癆病”代表林黛玉卻驚動全世界。上世紀(jì)年代，美國細(xì)菌學(xué)家杜博斯所寫的《》(白色瘟疫)，就曾提到了林黛玉的肺結(jié)核，可見在當(dāng)時《紅樓夢》中林黛玉的病癥已是結(jié)核病的典型癥狀。《黃帝內(nèi)經(jīng)素問》：“大骨枯稿，大肉陷下。胸中氣滿，喘息不便，內(nèi)痛引肩項(xiàng)，身熱，脫肉破腘。”結(jié)核病《紅樓夢》：香魂一縷隨風(fēng)散，愁緒??三更入夢遙。雖然年全球結(jié)核病發(fā)病率（世界衛(wèi)生組織年結(jié)核病報告）結(jié)核病目前仍然是一個全球性的嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。結(jié)核病年全球結(jié)核病發(fā)病率（世界衛(wèi)生組織年結(jié)核病報告）結(jié)核病目前流行過程傳染源痰涂片陽性的肺結(jié)核病人傳播途徑空氣傳播易感人群普遍易感第二節(jié)流行病特征影響流行的因素自然因素季節(jié)、環(huán)境、居室通風(fēng)社會因素社會、經(jīng)濟(jì)、醫(yī)療服務(wù)其他因素，結(jié)核病流行過程第二節(jié)流行病特征影響流行的因素結(jié)核病結(jié)核病防控的三大手段臨床診斷常常結(jié)合痰涂片，胸片，癥狀和體征結(jié)核病世界防治結(jié)核病日月日結(jié)核病防控的三大手段臨床診斷常常結(jié)合痰涂片，胸片，癥狀和體結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的。。（）年發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌，年獲得諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎。()（）染色法（分枝桿菌抗酸染色的基礎(chǔ)）結(jié)核分枝桿菌結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的。。（）()染色法結(jié)核分結(jié)核分枝桿菌（一）生物學(xué)性狀.形態(tài)與染色細(xì)長略帶彎曲，分枝狀，有莢膜，抗酸染色陽性結(jié)核分枝桿菌（一）生物學(xué)性狀.培養(yǎng)與生長特性特點(diǎn)專性需氧生長緩慢營養(yǎng)要求高，常用羅氏培養(yǎng)基生長現(xiàn)象液體：表面生長（菌膜）固體：顆粒、結(jié)節(jié)、花菜狀菌落乳白或米黃，不透明.生化反應(yīng)不發(fā)酵糖類，觸酶試驗(yàn)陽性，而熱觸酶試驗(yàn)陰性結(jié)核分枝桿菌.培養(yǎng)與生長特性.生化反應(yīng)結(jié)核分枝桿菌33.抵抗力四不怕干燥堿性染料青霉素等抗生素對酸或堿有抵抗力（或、）四怕乙醇濕熱紫外線抗癆藥物（異煙肼、利福平等）.變異性形態(tài)結(jié)構(gòu)變異：結(jié)核桿菌的型：顆粒狀、絲狀毒力變異：卡介苗：和é牛分枝桿菌年次耐藥性變異：耐異煙肼及其他抗結(jié)核藥物的結(jié)核菌株日益增多結(jié)核分枝桿菌.抵抗力四不怕四怕.變異性結(jié)核分枝桿菌致病物質(zhì)（二）致病性莢膜與細(xì)胞表面受體結(jié)合（粘附與入侵作用）含多種酶（分解利用營養(yǎng)物質(zhì)）保護(hù)（阻止有害物質(zhì)的進(jìn)入菌體）脂質(zhì)索狀因子（破壞細(xì)胞，引起肉芽腫）磷脂（形成結(jié)核結(jié)節(jié)）硫酸腦苷脂（抑制吞噬體與溶酶體結(jié)合）蠟質(zhì)（引起遲發(fā)性過敏反應(yīng)）蛋白質(zhì)引起遲發(fā)性過敏反應(yīng)感染方式呼吸道、消化道或皮膚損傷侵入機(jī)體所致疾病結(jié)核病，以肺結(jié)核常見結(jié)核分枝桿菌致（二）致病性莢膜與細(xì)胞表面受體結(jié)合（粘附與入侵作用）含多種（三）免疫性.機(jī)體抗結(jié)核免疫特點(diǎn)：傳染、免疫、超敏反應(yīng)共存.屬于感染免疫()，又稱有菌免疫.細(xì)胞免疫為主，遲發(fā)型超敏反應(yīng)同時存在.郭霍現(xiàn)象:注射結(jié)核桿菌于豚鼠皮下初次注射局部反應(yīng)小全身擴(kuò)散無免疫無超敏反應(yīng)再次注射局部反應(yīng)大不擴(kuò)散有免疫有超敏反應(yīng).結(jié)核菌素試驗(yàn)（試驗(yàn)）：應(yīng)用結(jié)核菌素進(jìn)行皮膚試驗(yàn)來測定機(jī)體對結(jié)核分枝桿菌是否能引起遲發(fā)型超敏反應(yīng)（Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)）的一種試驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌（三）免疫性結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本處理：濃縮集菌（氫氧化鈉處理）直接鏡檢：抗酸染色分離培養(yǎng)：培養(yǎng)基、時間（周后見結(jié)果）痰液等實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)分離培養(yǎng)（一）傳統(tǒng)微生物學(xué)檢查直接涂片標(biāo)本處理：濃縮集菌（氫氧化鈉處理）痰液等實(shí)實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)（二）技術(shù),,,..,,():.實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)（二）技術(shù),,,.（三）核酸分子診斷技術(shù)和靶基因菌種鑒定

異煙肼、、、、、利福平乙胺丁醇吡嗪酰胺鏈霉素、喹諾酮類藥物、,.,,():.,.,,():.實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)（三）核酸分子診斷技術(shù)和靶基因菌種鑒定異煙肼、、、、、基因水平技術(shù)..實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)基因水平技術(shù)..實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù).技術(shù)（仁度）作為臨床分子診斷靶標(biāo)的優(yōu)點(diǎn)拷貝數(shù)≥拷貝數(shù)更具臨床意義生命力旺盛的病原體轉(zhuǎn)錄活躍遠(yuǎn)不如穩(wěn)定病原體死亡，很快降解 .交叉污染少 .較好的愈后指標(biāo)實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù).技術(shù)作為臨床分子診斷靶標(biāo)的優(yōu)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)恒溫擴(kuò)增技術(shù)技術(shù)原理實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)恒溫擴(kuò)增技術(shù)技術(shù)原理實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)提取恒溫擴(kuò)增實(shí)時檢測°°超聲儀（）

痰液預(yù)處理°

稀釋液操作步驟實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)提取恒溫擴(kuò)增°超聲儀（）痰液預(yù)處理°稀釋液操作步驟培養(yǎng)鑒定結(jié)果結(jié)果合計檢測結(jié)果陽性陰性陽性陰性合計敏感度×特異性×準(zhǔn)確度()×恒溫擴(kuò)增技術(shù)檢測的敏感度和特異性實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)培養(yǎng)鑒定結(jié)果結(jié)果合計檢測結(jié)果陽性陰性陽性陰性合計敏感度×恒溫（四）蛋白分子診斷技術(shù)