輸血前血型血清學檢驗

關于輸血前血型血清學檢驗第1頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六2輸血前要做三項檢查：血型鑒定；抗體篩選；交叉配血試驗。目的有二：使輸入的血液成分有效存活；不會引起受血者的紅細胞發(fā)生破壞。三者有互補作用，缺一不可。第2頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六3在檢驗醫(yī)學中，沒有幾項檢驗像輸血前檢驗一樣，臨床醫(yī)生幾乎完全依賴其結果的正確性。輸血前檢驗的每一個環(huán)節(jié)均可能發(fā)生差錯，標本搞錯最為常見。給患者輸入不相容的血液成分導致嚴重不良后果：急性溶血反應：多由ABO血型不相容輸血引起，人為差錯是其主要原因；遲發(fā)性溶血反應：多由ABO以外血型不相容輸血所致，輸血前檢驗不規(guī)范是其主要原因。第3頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六4常規(guī)ABO血型鑒定應包括正反定型，二者起到互相驗證和質控的作用。ABO正定型采用單克隆抗-A、抗-B血型試劑，抗-B試劑不應該與獲得性B抗原反應。ABO、RhD血型抗原檢測第4頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六5ABO、RhD血型卡檢測每個血型檢測卡都帶自身質控（ctl）對照，實質就是一個陰性質控。如果是陽性，則檢測結果無效。優(yōu)點為：避免病人自身凝集引起誤判結果。監(jiān)控操作規(guī)范性。監(jiān)測試劑卡質量。第5頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六6ABO、RhD血型卡檢測操作步驟a.制備1%待檢紅細胞生理鹽水(1mlN.S+10ul壓積紅細胞)；b.撕開檢測卡的封膜，于A、B、D、Control微柱管反應腔中加入1%待檢RBC懸液各50ul；c.將檢測卡置離心機，1800r/min2min，2500r/min1min離心；第6頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六7ABO、RhD血型抗原檢測卡4+表示RBC絕大部分凝聚于凝膠表層。3+表示RBC多數(shù)凝聚于凝膠表層，少數(shù)RBC凝集顆粒懸浮于近膠表層。2+表示部分RBC沉積于膠底，部分RBC凝集顆粒懸浮于凝膠中。1+表示RBC多數(shù)沉積于膠底，可見少數(shù)RBC凝集顆粒懸浮于凝膠中?！辣硎綬BC絕大多數(shù)沉積于膠底，極少數(shù)RBC凝集顆粒懸浮于近膠底。-表示RBC全部沉積于膠底。PH表示部分溶血，凝膠管中液體呈清澈透明紅色，凝膠中有殘留紅細胞。H表示完全溶血，凝膠管中液體呈清澈透明紅色，凝膠中無紅細胞。dcp表示混合凝集外觀，部分紅細胞凝集顆粒集結于凝膠表層，部分紅細胞沉于膠底。第7頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六8ABO、RhD血型抗原檢測卡多發(fā)生在異型輸血、異卵雙生、雙精受精和異型骨髓移植后。異型輸血、異型骨髓移植屬于暫時性嵌合（人工嵌合），雙卵雙生、雙精受精是遺傳嵌合屬于永久性嵌合?；旌夏庥^：一般出現(xiàn)在嵌合體血型中第8頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六9檢驗結果的解釋A、B管凝膠強度<3+，可疑為A、B亞型結果或其他原因引起的抗原減弱；

RhD凝集強度<3+，可疑為變異株。ABO、RhD血型抗原檢測卡第9頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六10ABO正反定型不符結果分析假陰性結果a.試劑和細胞比例不當；b.沒能認識溶血也是陽性反應；c.加錯樣本；d.離心時間、速度不足；e.試劑失效、用法錯誤；f.記錄或結果判讀錯誤。第10頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六11假陽性結果a.試劑、紅細胞或鹽水受到細菌污染；b.加樣時交叉污染；c.加錯樣本;d.離心時間、速度過大;e.實驗容器不潔;f.記錄或結果判讀錯誤。ABO正反定型不符結果分析第11頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六12ABO正反定型矛盾

抗體問題正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc-----第12頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六13抗體減弱或不產(chǎn)生原因新生兒（新生兒ABO抗體很弱，通常在三個月后進行反定)老年人白血病、淋巴瘤患者使用免疫抑制劑的患者免疫缺陷患者(先天性丙種球蛋白缺乏癥等)骨髓移植患者第13頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六14ABO正反定型矛盾

抗原問題正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc4++4+-4+第14頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六15獲得性“B”現(xiàn)象由腸梗阻、結腸或直腸癌和其他低位腸道有關的疾病引起。腸壁滲透性增加，細菌多糖吸附到紅細胞上產(chǎn)生B特異性。也見于普通變形桿菌引起的敗血癥。第15頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六16紅細胞血型抗原減弱或消失A亞型和/或B亞型白血病、何杰金氏病等某些疾病引起的血型物質增多，如胃癌，胰腺癌第16頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六17ABO正反定型矛盾

血漿異常（1）：緡錢狀凝集正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc

4+2+4+2+4+第17頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六18緡錢狀凝集原因白/球蛋白倒置血漿擴容劑，如右旋糖酐華通氏膠狀物（Wharton’sjelly)：存在于臍帶血中。第18頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六19ABO正反定型矛盾

血漿異常（2）：多凝集正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc

2+1+4+4+4+第19頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六20多凝集現(xiàn)象原因病人紅細胞被細菌或病毒感染，使T抗原激活。所有正常人血清均含有T抗體。反應強度取決于血清中T抗體的量。第20頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六21ABO正反定型矛盾

血漿異常（3）：丫啶黃抗體正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc

-3+-4+4+第21頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六22ABO正反定型矛盾

血漿異常（4）：不規(guī)則抗體正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc

4+4+4+++第22頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六23ABO正反定型矛盾

血漿異常（5）：其他原因高效價冷凝集素抗A1（A2,A2B型）抗H（A1,A1B型）第23頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六24正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc

4+2+4+-+ABO正反定型矛盾

cisAB型、AB亞型第24頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六25ABO正反定型矛盾的處理方法重復所有試驗直接抗人球蛋白試驗受檢RBC用N.S洗3次，用抗A、抗B、抗A1、抗H和抗AB檢查抗A1用來鑒定A亞型（A型中A1和A2這兩種亞型占99.99%，A1約占80%，A2約占20%，抗-A1與A2不反應）；抗H用于鑒定亞型及孟買型（亞型細胞上有較多的H抗原，與抗-H反應較強，而孟買型紅細胞上無H抗原）抗AB用來確認弱A和弱B抗原（這種抗-A和抗-B的混合物與弱A和弱B親和力強，發(fā)生強烈反應）用A1、A2、B、O細胞反定型抗體篩選自身對照第25頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六26處理方法

超量血型物質用N.S洗滌被檢紅細胞多次，將紅細胞配成鹽水溶液，即可得到正確的正定型。第26頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六27處理方法

獲得性“B”現(xiàn)象將抗B試劑酸化到pH6.0，就可區(qū)別“真B”和獲得性“B”。酸化的抗B試劑僅與“真B”反應。第27頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六28處理方法

緡錢狀凝集用N.S洗滌被檢紅細胞，或在反應管中滴加1~2滴N.S。臍帶血用N.S洗滌6~8次。第28頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六29處理方法

冷凝集將反應管置37°C水浴，晃動3~5min冷吸收放散試驗第29頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六30對受血者常規(guī)只測Rh(D)抗原；而對獻血者不僅要檢測Rh(D)抗原，在初篩為陰性時必須進一步確定是否為弱D(即Du)。

；Rh(D)陰性及弱D的受血者只能提供Rh(D)陰性血，不得使用D陽性及弱D的血。即弱D針對受血者而言為D陰性，而對于供血者而言則為D陽性Rh（D）血型鑒定原則第30頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六31對直抗陽性的Rh(D)陰性紅細胞進行Rh(D)定型時，易引起假陽性反應，因此必須按照試劑生產(chǎn)商的試劑使用說明書要求，增加對照試驗。Rh（D）血型鑒定原則第31頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六32抗體篩選對受血者作抗體篩選的目的是檢出有臨床意義的抗體，并可在配血前有足夠的時間來選擇缺乏相應抗原的相配合的血液，避免盲目配血。方法是用受檢者血清與試劑紅細胞起反應，以發(fā)現(xiàn)在37℃有臨床意義的抗體。如抗體篩選試驗陽性，缺乏譜細胞鑒定其特異性時，可送有條件的單位鑒定。第32頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六33抗體篩選抗體鑒定試驗包括：自身細胞檢查：確定患者血清內是否有自身抗體或自身抗體與同種抗體并存；使用試劑譜細胞：譜細胞一般是由8～16單人份的已知血型表型的O型紅細胞配套組成，具有各種不同的抗原成分；根據(jù)譜細胞的反應格局一般可以鑒定常見的抗體。第33頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六34交叉配血主側交叉：由患者血清和供者紅細胞組成；次側交叉：由患者紅細胞和供者血清（漿）組成（由于我國尚未對供者進行抗體篩選，故次側交叉是有必要的，尤其是輸全血時）；自身對照：由患者自身血清和患者自身紅細胞組成（自身對照有助于分析解釋交叉配血試驗中出現(xiàn)的陽性結果）。第34頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六35凝聚胺試驗原理凝聚胺（Polybrene）是一種陽離子聚合物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可中和紅細胞表面負電荷，引起紅細胞非特異性凝聚，這種凝聚是可逆的；如果是抗體致敏的紅細胞在凝聚胺作用下發(fā)生凝集，這種凝集是不可逆的；交叉配血第35頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六36在凝聚胺試驗中，首先讓紅細胞和血清在低離子介質中孵育，促進抗體與紅細胞抗原結合，然后加入凝聚胺使紅細胞凝聚，再加入枸櫞酸鈉重懸液（枸櫞酸根帶負電荷）中和凝聚胺正電荷，恢復紅細胞表面的負電荷；重懸后如果是非特異性凝聚，則由于紅細胞表面負電荷的排斥作用，紅細胞散開，結果為陰性；若是由于抗原抗體引起的特異性凝集則不會散開，結果為陽性。交叉配血第36頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六37凝聚胺試驗的注意事項加入重懸液后，應盡快觀察結果，最好在1min內，最長不要超過3min，以免弱反應消失；凝聚胺溶液若放玻璃瓶中太久作用會變弱，所以必須保存在黑色塑料瓶中；凝聚胺是一種抗肝素藥物，所以使用含肝素的血標本要稍稍多加一些凝聚胺來中和肝素。交叉配血第37頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六38交叉配血實驗中，離心力、離心時間不當，可造成假陰性或假陽性結果。恒溫水浴箱溫度不正確也會造成錯誤結果。對于高效價O型血清出現(xiàn)前帶現(xiàn)象時，應當用EDTA鹽水適當稀釋，以阻止補體C1引起的凝集。出現(xiàn)溶血或部分溶血應判為陽性結果（標本本身溶血例外）。交叉配血第38頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六39含有冷凝集素的患者交叉配血時可采用37℃生理鹽水洗滌3次，如還顯弱凝集，再用42℃或45℃鹽水洗1次再配血。溫抗體型的自身免疫性溶血性貧血患者血清中的游離抗體有時很難吸收完全，導致配血困難。在排除同種抗體的情況下可選擇凝集反應弱的同型血液輸注，亦可輸注O型洗滌紅細胞。交叉配血第39頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六40某些緊急情況下需要快速配血，建議血清（血漿）與細胞比例為2:1，細胞懸液濃度為2%～3%。同時離心前孵育2～5min，有利于檢測弱的ABO抗體。嬰兒輸注O型血或ABO同型血，應當采用母親的血清（血漿）進行交叉配血。交叉配血第40頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六41在任何情況下，一定要選擇ABO和Rh（D）同型的血液。如果同型血不夠用，可以輸注O型相合的添加劑紅細胞（紅細胞懸液、懸浮紅細胞），這種紅細胞所含血漿量很少。AB型血液不能滿足供應，可選擇A型或B型紅細胞，盡量不用O型，O型紅細胞以備它用。交叉配血第41頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六42Rh（D）陰性血不夠用，可以選擇Rh（D）陽性血，但有生育能力的婦女不能用。在大量輸血時如果輸?shù)氖峭拖嗪系奶砑觿┘t細胞（未輸全血），供者之間可以不做交叉配血試驗。若是輸了ABO不同型的相合紅細胞，以后要盡快輸注與患者同型的紅細胞，不要堅持一直應用ABO不同型的相合紅細胞。交叉配血第42頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六43交叉配血不合分析及處理主側（+）、自身（-）、抗體篩選（-）患者或供者ABO血型錯誤：重新定型，患者血清可能含ABO抗體：檢查患者亞型、輸血史及移植史患者血清中有抗體，但篩選細胞上無相應抗原：對患者進行抗體鑒定供者紅細胞已被致敏：對供者做直接抗球蛋白試驗第43頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六44主側（+）、自身（-）、抗體篩選（+）：患者血清中的同種抗體與供者紅細胞上相應抗原起反應：對患者進行抗體鑒定，選擇無對應抗原的血液輸注。交叉配血不合分析及處理第44頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六45主側（+）、自身（+）、抗體篩選（+）患者血清中可能同時存在自身抗體和同種抗體；對患者血清自身吸收及抗體鑒定，用吸收后血清配血白/球蛋白比值不正常：鹽水添加法解決緡錢狀假凝集）血漿擴容劑（如右旋糖酐）的影響；洗滌細胞或重新抽取標本）污染:使用潔凈的器具和符合要求的試劑交叉配血不合分析及處理第45頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六46交叉配血中的疑難問題次側交叉配血不合受血者紅細胞被致敏：對受血者做直接抗球蛋白試驗獻血者存在不規(guī)則抗體：第46頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六47雙側交叉配血不合多見于自身免疫性溶貧患者高冷凝集素患者或供血者交叉配血中的疑難問題第47頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六48交叉配血不合的處理復核受血者和供血者血型鑒定結果抗體篩選試驗和抗體鑒定試驗抗人球蛋白試驗吸收放散試驗自身交叉反應試驗試劑問題第48頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六49患者女，李×芝，39歲，農(nóng)民，因子宮肌瘤行子宮全切除術。術前定血型為A型，Hb110g/L。術中失血約400mL，手術結束時輸A型新鮮全血400mL。輸完血后，回病房約10分鐘，患者寒戰(zhàn)、腰痛、發(fā)熱39℃，1.5小時后排出醬油色尿，手術切口滲血不止，即按急性溶血反應治療，再次核定血型為B型。2天后出現(xiàn)急性腎功能衰竭。3天后，死于轉院途中。病例討論1第49頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六50調查發(fā)現(xiàn)

采集標本的醫(yī)護人員誤將39歲看成39床，錯用39床的血標本測定血型并作配血試驗。39床血型為A型，女，李×蘭。實際上，患者為28床，血型為B型。問題：該患者是什么輸血不良反應？病例討論1第50頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六51急性溶血輸血反應

1、原因：主要為ABO血型不合2、癥狀與體征開始輸血10～30min內①意識清楚患者：寒戰(zhàn)、高熱、呼吸困難、腰背酸痛、頭痛、胸悶、血紅蛋白尿。②麻醉中的病人：最早癥狀為傷口滲血與低血壓。導致休克、DIC和急性腎功能衰竭病例討論1第51頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六52急性溶血輸血反應

3、應留取哪些標本？①獻血者的配血標本②血袋殘留的獻血者血液③病人輸血前、輸血后血液標本④病人發(fā)生反應后第一次尿液病例討論1第52頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六53王某，女，44歲，因乳腺癌1年前作根治術。手術期間患者輸A型全血400ml，無不良反應。術后曾化療8次。此次入院進行第9次化療。血常規(guī)：紅細胞4.12×1012/L，血紅蛋白125g/L，白細胞3.3×109/L，血小板60×109/L。血型“A”。因白細胞和血小板偏低，為了能順利進行第9次化療，給病例討論2第53頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六54患者輸當天新鮮全血400ml，輸血過程無任何反應?；燀樌?。輸血后第7天血紅蛋白降為90g/L。再輸新鮮全血400ml，輸后約20分鐘，患者覺腰痛，繼而出現(xiàn)畏寒、頭痛、惡心、體溫39℃，尿呈醬油樣。經(jīng)及時搶救，患者轉危為安。病例討論2第54頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六55復查血型及交叉配血試驗患者血型“A”（CCDee)；供者血型“A”(CCDEe)交叉配血試驗：鹽水介質不發(fā)生凝集反應；抗球蛋白和酶介質中，主側發(fā)生強凝集反應,次側無凝集反應?？贵w鑒定:患者血清中存在抗E抗體，效價:512。問題:該患者是什么輸血反應？

病例討論2第55頁，共60頁，2022年，5月20日，10點0分，星期六56遲發(fā)型溶血輸血反應

1、原因：多由ABO以外血型不合引起，RhD、RhE、Kidd、Duffy等血型不合較多見。2、癥狀與體征輸血后3～7天發(fā)熱（多為低熱）、黃疸、貧血、網(wǎng)織紅細胞增加，多數(shù)無血紅蛋白尿（血管外溶血）。一般不重，易漏診。病例討論2第56頁，共60頁，20