微生物學(xué) 實驗 培養(yǎng)基的配制、器具的包裝和滅菌課件

實驗五培養(yǎng)基的制備、器具包扎和滅菌

一、實驗?zāi)康牧私馀囵B(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。

了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。

熟悉分離、培養(yǎng)微生物前的有關(guān)準備工作及操作方法。二、實驗原理培養(yǎng)基據(jù)組成成分可分為:

1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。2.半合成培養(yǎng)基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。

3.天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機物配制而成。

據(jù)用途可分為

1.基礎(chǔ)培養(yǎng)基：能滿足各種微生物的營養(yǎng)需求

加富培養(yǎng)基：加入某種微生物生長繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)，使其快速生長，便于分離

2.選擇培養(yǎng)基：加入某種物質(zhì)抑制其他微生物生長，使目標微生物得到富集，便于分離

3.鑒別培養(yǎng)基：用來檢測微生物的某些代謝特性。消毒：使用理化因素方法殺死物體表面絕大多數(shù)微生物的方法。滅菌：采用強烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有微生物的方法。干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器加壓蒸汽滅菌法.其步驟如下：

1.滅菌器內(nèi)加入一定量的水，將包扎好的物品放入其中。

2.接通電源，進行加熱

3.排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開，待排出空氣后關(guān)閉排氣閥；或關(guān)閉排氣閥，待壓力上升到0.5kg/cm2時再打開排氣閥，待壓力回復(fù)到0時再關(guān)閉排氣閥。

4.當壓力達1.05kg/cm2時，此時滅菌器內(nèi)的溫度為1210C，維持30min。對熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸等物時，應(yīng)適當降低壓力，延長時間。

5.滅菌時間一到，切斷電源，待壓力降至零時，才能打開排氣閥，然后打開滅菌器蓋，取出物品。間歇滅菌法：待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，連續(xù)3d重復(fù)進行。在每兩次蒸煮之間，將物品（指培養(yǎng)基）放在370C恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，以便下次蒸煮時殺滅。過濾除菌法：不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、血清），一般可用細菌過濾器進行除菌。紫外線滅菌法：一般30W燈管，9m3空間，距地面2m每次打開紫外線照射0.5h，就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射紫外線時先噴灑石炭酸等化學(xué)消毒劑，可增強滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣及表面殺菌。

化學(xué)藥劑消毒滅菌：微生物實驗室中常用的化學(xué)殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液，它們有的是殺菌劑，有的是抑菌劑。三、實驗材料藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O等。高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫干熱滅菌箱。其它：天平、牛角匙、電磁爐、1NHCl、1NNaOH、pH試紙、刻度搪瓷杯、量筒、玻棒、帶玻璃珠的三角瓶、帶棉塞的無菌試管、培養(yǎng)皿、槍頭、槍頭盒、標簽等。培養(yǎng)基的配制方法和步驟稱量：按照配方正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。調(diào)pH值：用NaOH或HCl調(diào)pH，用pH試紙對照。加瓊脂溶化：加熱過程中要不斷攪拌，可適當補水。分裝：注意不要污染棉塞。包扎成捆，掛上標簽（最好用鉛筆寫），注明何種培養(yǎng)基。滅菌備用：培養(yǎng)基滅菌后必須在370C下恒溫培養(yǎng)24h，確定無菌生長，方可使用。馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(用于分離和培養(yǎng)真菌之用，是一種半合成培養(yǎng)基)

去皮馬鈴薯（或鮮豆芽）200g

(去皮，切成小塊，放水中煮沸，保持20min，用雙層紗布過濾取汁)蔗糖20g

自來水1000mL

瓊脂20g

pH自然

滅菌：（含蔗糖）1.05kg/cm220min高氏一號培養(yǎng)基(用于分離和培養(yǎng)放線菌，是一種合成培養(yǎng)基)可溶性淀粉20.0gKNO31.0gK2HPO40.5gMgSO4?7H2O0.5gNaCl0.5gFeSO4?7H2O0.01g

pH7.4~7.6瓊脂20g自來水1000mL滅菌：1.05kg/cm230min制備無菌水無菌水為下一次微生物分離實驗中所需要的材料。