紫杉醇的提取課件

紫杉醇的提取XXX藥學(xué)6班1440XXXX紫杉醇簡介紫杉醇紫杉醇是紅豆杉屬植物中的一種復(fù)雜的次生代謝產(chǎn)物，屬二萜類化合物。其抗癌機(jī)理獨(dú)特，活性廣譜高效，是目前所發(fā)現(xiàn)的惟一一種通過促進(jìn)微管聚合和穩(wěn)定已聚合微管來使細(xì)胞分裂停止于有絲分裂期，阻斷了細(xì)胞的正常分裂的抗癌藥物。紫杉醇主要用于治療卵巢癌和乳腺癌，對(duì)肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。紫杉醇的來源1963年美國化學(xué)家瓦尼和沃爾首次從一種生長在美國西部大森林中的短葉紅豆杉樹皮和木材中得到了紫杉醇的粗提物并發(fā)現(xiàn)其具有抗癌活性。但直到1969年，紫杉醇單體才被分離出來。此后，在紅豆杉屬的多種植物中均發(fā)現(xiàn)有紫杉醇存在。迄今為止，紅豆杉屬植仍是紫杉醇的最重要的來源。除了可從其樹皮和枝葉中直接分離得到紫杉醇外，其樹葉中含量很高的10一去乙酰巴卡亭III也是人工半合成紫杉醇的原料。此外，紫杉醇還可以從全人工合成、真菌發(fā)酵、細(xì)胞培養(yǎng)及生物合成等途徑獲得。紫杉醇的提取紫杉醇的提取紫杉醇的粗提多采用甲醇、乙醇、甲醇一二氯甲烷(1：1)，但所得浸膏中雜質(zhì)量較高。研究發(fā)現(xiàn)，在乙酸乙酯、乙醚等溶劑中，乙酸乙酯一丙酮(1：1)混和溶劑提取紫杉醇效果最佳，浸膏中紫杉醇含量高達(dá)甲醇提取的3倍。余廣鱉等‘。發(fā)現(xiàn)，在甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚7種單一溶劑中，浸提效果以甲醇最好。常用的方法有冷浸、滲漉和索氏提取法。又有人在提取過程中引入超聲和微波技術(shù)，從而大大縮短了提取時(shí)間。液液萃取法粗提浸膏用二氯甲烷一水、三氯甲烷一水或環(huán)己烷一二氯甲烷等進(jìn)行萃?。灰灿腥瞬捎眉状己驼和榧叭燃淄楹?．5mol／LNa2CO體系萃取。液液萃取操作簡單，但提取物含雜質(zhì)量多，回收率不高。固液萃取法紅豆杉粗提浸膏用低極性有機(jī)溶劑如石油醚、正己烷等有機(jī)溶劑進(jìn)行脫脂處理，以除去樹脂、油脂、精油、甾醇等低極性雜質(zhì)。固相萃取法Supelco固相萃取法(SPE)是近2O年來發(fā)展起來的一項(xiàng)具有省時(shí)、省溶劑、萃取效率高以及有更好的選擇性等優(yōu)點(diǎn)的新型萃取方法。此方法可快速去除樣品中的與被分離物極性相差較大的雜質(zhì)。張志強(qiáng)等人研究了硅膠、C18硅膠和氧化鋁3種固相柱對(duì)紫杉醇的萃取效果，發(fā)現(xiàn)氧化鋁固相柱的萃取效果最好。紫杉醇的純化柱層析法柱層析法是目前分離紫杉醇最常采用的方法，包括正相的硅膠、氧化鋁柱層析，反相的C柱層析以及吸附的大孔樹脂等。其中堿性氧化鋁柱層析在分離紫杉醇中的表現(xiàn)突出，由于紅豆杉體內(nèi)的糖基化紫杉醇在浸膏與氧化鋁接觸時(shí)發(fā)生的放熱反應(yīng)中轉(zhuǎn)化為紫杉醇，使基水溶性大大降低，易于被有機(jī)溶劑洗脫下來，使糖基化紫杉醇和游離態(tài)紫杉醇都得到有效分離¨。紫杉醇具多環(huán)結(jié)構(gòu)，容易被聚苯乙烯等帶有苯環(huán)的樹脂特異性吸附。張志強(qiáng)等¨采用聚苯乙烯型大孔樹脂有效地從紅豆杉甲醇浸膏中脫除色素，分離得到紫杉醇并且將紫杉醇含量提高到2．15％。郭立佳利用H7~18型大孔樹脂純化紫杉醇，并且適用于從大量真菌培養(yǎng)液中分離紫杉醇。薄層層析法利用TLC的梯度展開來分離紫杉醇，將粗提液在薄層板上進(jìn)行兩梯度展開，可使紫杉醇與其它紫杉烷類達(dá)到滿意的分離效果。莊曉蕾將TLC結(jié)合紫外分光光度法測(cè)定紫杉醇取得較好效果。董慧茹以正己烷一二氯甲烷一甲醇一三乙胺(體積比4．5：3．5：0．5：1．O)四元體系為展開劑，在硅膠薄層板上成功地分離了紫杉醇和三尖杉寧堿，所得斑點(diǎn)清晰、無拖尾。同時(shí)以該體系為展開劑，使用薄層色譜法指導(dǎo)分離提取紫杉醇和三尖杉寧堿過程中反相色譜流分的合并，方法快速、簡單、成本低，取得了滿意的結(jié)果。紫杉醇的純化離心分配色譜法離心分配色譜法(CPC)是一種液一液分配的色譜技術(shù)，具有分離時(shí)間短、無樣品吸附以及使用不同的溶媒系統(tǒng)精制不同的化合物的優(yōu)點(diǎn)，使其廣泛用于天然產(chǎn)物的制備性分離。Durand等人將此方法應(yīng)用到提取分離紫杉醇，只使用了一個(gè)色譜柱就可以從大量的粗原料中得到純度很高的紫杉醇。高速逆流色譜高速逆流色譜HSCCC是2O世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種連續(xù)高效的液液分配色譜分離技術(shù)，具有樣品無損失、無污染、高效、快速和大制備量分離等優(yōu)點(diǎn)。由于HSCCC與傳統(tǒng)的分離純化方法相比具有明顯的優(yōu)勢(shì)，因此此項(xiàng)技術(shù)己被廣泛應(yīng)用于中藥成分分離。有望成為紫杉醇大規(guī)模生產(chǎn)技術(shù)。膠束動(dòng)電毛細(xì)管色譜法膠束動(dòng)電毛細(xì)管色譜法MECC是一種新型的分離提純技術(shù)，具有高效、使用溶劑少、分離快速等特點(diǎn)。陳菁等采用MECC，以脫氧膽酸鈉為(SDC)為手性拆分劑，建立了紅豆杉中7種紫杉烷類化合物的膠束動(dòng)電毛細(xì)管色譜分離方法。MECC的局限是其處理量小，操作復(fù)雜。膜分離法膜分離法是分離紫杉醇的有效方法。有人采用平板式、中空纖維式和管式膜組件，對(duì)超濾膜和反滲透膜在紫杉烷類的分離過程中的應(yīng)用進(jìn)行研究，表明膜分離技術(shù)可使浸膏中紫杉烷濃度提高5倍。還有人發(fā)現(xiàn)0．2m尼龍或PVDF膜對(duì)紫杉烷有攔截作用。說明該方法分離植物細(xì)胞或真菌培養(yǎng)液中的紫杉醇是一種非?？尚械募夹g(shù)。紫杉醇的純化制備型高效液相色譜制備型HPLC在分離紫杉醇方面有起重要作用。有人研究發(fā)現(xiàn)，用ZorbaxSW—Taxane柱無論在正相和反相條件下都有較好的分離效果，純度可達(dá)98％。但由于HPLC制備量小，應(yīng)用受到限制。化學(xué)反應(yīng)法紫杉醇和三尖杉寧堿的結(jié)構(gòu)非常相似，常規(guī)分離手段很難將它們分開。有學(xué)者嘗試用化學(xué)反應(yīng)的方法將三尖杉寧堿C一13側(cè)鏈末端的雙鍵氧化，從而將其與紫杉醇分離。Murry和KingstonIz分別用含1—10％的臭氧空氣和液溴作氧化劑氧化三尖杉寧堿