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硫酸軟骨素:〔因其成分,在軟骨組織中以蛋白多糖形式存在,不同動(dòng)物體內(nèi)所存在的CAS、CSC及各種硫酸軟骨素的混合的軟骨中主要含有硫酸軟骨素C。糖定義為糖。糖胺聚糖:1〕蛋白聚糖由三局部組成---核心蛋白、糖胺聚糖、接(糖肽鍵〕外,糖胺聚糖還通過(guò)靜電作用或立體化學(xué)效應(yīng)與其他蛋而蛋白多糖的聚攏體則通過(guò)次級(jí)鍵〔氫鍵和鹽鍵〔氨基葡萄糖和氨基半乳糖之一和兩種己〔葡萄糖醛酸和艾杜糖醛酸4〕除透亮質(zhì)酸〔屬于非蛋白多糖提取〕外,糖胺聚糖分子中的氨基己糖糖分子顯酸性,所以糖胺聚糖又被稱為酸性粘多糖。:1、物理性質(zhì):硫酸軟骨素,簡(jiǎn)稱C,分子式〔C H NO S),成品外觀白色14 21 14 n粉末狀,無(wú)臭無(wú)味,易溶于水,不溶于乙醇和丙酮、冰醋酸等有機(jī)溶劑,遇水后快速膨脹,對(duì)熱不穩(wěn)定,需避光密封保存。在高溫、堿性、酸性環(huán)境溶液中易〔游離的硫酸軟骨〕2、化學(xué)性質(zhì):硫酸軟骨素是來(lái)自動(dòng)物軟骨組織的一類自然的酸性粘多糖——分子,作為動(dòng)物糖胺聚糖中的代表物質(zhì),硫酸軟骨素由D-葡萄糖醛N-乙酰-D-氨基半乳糖〔構(gòu)造圖如下所示〕1,3糖苷鍵連接形成雙糖,雙糖單位之間以1,4糖苷鍵連接。一般硫酸軟骨素約含有50-70260000。46位可硫酸化。圖1 圖275注:乙酰不是一種物質(zhì),它是一種基團(tuán),或者說(shuō)是官能團(tuán),是乙酸去掉羥基后剩下的局部,寫為-COCH3。其中硫酸軟骨素可被濃硫酸降解成小分增加,在30℃-50℃溫度下,2h可使平均分子量降至3000-4000;也可在稀鹽酸溶液中水解而成為小分子產(chǎn)物,溫度越高水解速率越快。-SOH和3-COOH-COOH等基團(tuán),易與Na+、K+、Ca2+、Mg2+等陽(yáng)離子結(jié)合,故其都是以金屬鹽成分制成藥品。故其都是以金屬鹽成分制成藥品。依據(jù)糖胺聚糖雙糖中單糖分子類型、羧基和硫酸基位置的不同,AC其中透亮D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖;硫酸軟骨素A組成單糖為D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-半乳糖-4-硫酸;硫酸軟骨素C組成單糖為D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-半乳糖-6-硫酸;的硫酸化位置和數(shù)量與其生理功能親熱相關(guān)。三、分別提純?cè)砑胺椒ê?jiǎn)介:1、制備原理降解法和非降解法。非降解法僅用于非蛋白多糖的粘多糖--透亮質(zhì)堿鹽法、堿提取法、酶提取法、超聲波法等。O-糖苷鍵可在放出來(lái),但在強(qiáng)堿作用下硫酸軟骨素也易發(fā)生降解。鹽法提?。夯诳隙x子強(qiáng)度下軟骨中的某些蛋白質(zhì)會(huì)產(chǎn)生沉淀,從而實(shí)現(xiàn)硫酸軟骨素與蛋白質(zhì)分別的目的。堿鹽法:利用堿性條件下,連接硫酸軟骨素和蛋白質(zhì)的糖肽強(qiáng)度,使軟骨中的某些蛋白質(zhì)沉淀析出,便于濾除??隙ǚ秶鷥?nèi),提取物中硫酸軟骨素的含量和得率是隨著堿液濃度的增加而提高。超聲關(guān)心法:是利用超聲波的空化作用,使物料四周形成空原理是在堿性條件下蛋白質(zhì)易離解和超聲波的熱學(xué)機(jī)制可促進(jìn)蛋白質(zhì)快速解離而到達(dá)去雜蛋白質(zhì)的目的,升溫〔85-90℃〕均可使解離的蛋白質(zhì)變性吸附到白陶土承受超聲關(guān)心并無(wú)明顯提高,但可大大縮短提取時(shí)間。酶法:軟骨中的膠原蛋白和粘蛋白等在中性或弱酸性條件下酶法是利用不同蛋白酶水解蛋白質(zhì)的特酶法是利用不同蛋白酶水解蛋白質(zhì)的特解,常用的酶制劑有胰酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和鏈霉2、純化方法丙酮等有機(jī)溶劑。雜質(zhì)分別,而得到分子量范圍較窄且純度較高的硫酸軟骨素的方法。并溶解,利用該性質(zhì)可使硫酸軟骨素得到分別純化。離子交換色譜法:是依靠庫(kù)侖力的作用將物質(zhì)吸附在交換劑上,骨素純化陰離子交換劑有樹脂、纖維素和葡聚糖凝膠等。收率較高的特點(diǎn)。四、酶法制作工藝試驗(yàn)流程:1、具體提取方法:從鱘魚頭中取出軟骨,洗凈,切成小塊,置于大燒杯中100℃水浴加熱12h,中途換水兩次以除去表層油脂,冷卻后漂洗,瀝干水后605h,枯燥完全后粉碎得到軟骨粉。液水浴加熱進(jìn)展酶滅活處理,冷卻后調(diào)至中性,離心取清夜,并參加24h50℃枯燥箱枯燥約3h,得硫酸軟骨素粗品。酶最適溫度50℃~60℃,胃蛋白酶不耐低溫,胰蛋白酶最適溫度為45℃.本試驗(yàn)綜合三種酶最適溫度,設(shè)定反響溫度為38℃,故溫度不作為單因素考慮。酶濃度因素:酶濃度不同,其他因素一樣,隨著酶濃度的提不再增大。時(shí)間因素:反響時(shí)間不同,其他因素一樣,隨著反響時(shí)間的增長(zhǎng),粗品提取率隨之上升,但反響時(shí)間超過(guò)50h,提取率雖然有所提取時(shí)間應(yīng)以軟骨全部溶解為準(zhǔn)。固液比因素:固液比不同,其他因素一樣,隨著固液比的增高,粗品提取率隨之上升,但固液比上升到肯定值1:1,提取率不再增大。原理:硫酸軟骨素分子具有很高的吸濕性,由于其中的硫酸軟骨素分子是以多聚陰離子的形式存在的羧基和硫酸基可吸附帶正電荷的水分子,吸附相當(dāng)于自身重量的數(shù)百倍的水分。在反響體系中,反響速率低。故高固液比,可使溶液變稀,降低溶液的粘度,從而提高提取率。2、硫酸軟骨素各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定方法1〕葡萄糖醛酸含量測(cè)定承受咔唑比色法,繪制葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線2〕樣品純度測(cè)定承受咔唑比色法,繪制硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)曲線3〕蛋白質(zhì)的標(biāo)定595nm吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。4〕脂肪含量測(cè)定依據(jù)GB50009.6-85,索氏抽提法測(cè)定硫酸軟骨素中脂肪含量。5〕PH五、綜述1除軟骨上的肌肉、脂肪、結(jié)締組織;其次,應(yīng)將軟骨盡量粉碎,以提所承受的原料部位有關(guān)。2、酶法反響條件溫
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