賴氨酸發(fā)酵工藝研究指導書

1賴氨酸的發(fā)酵調控爭辯一、試驗目的1L-賴氨酸發(fā)酵的工藝把握過程和方法。案，并依據試驗方案進展試驗爭辯二、試驗原理天冬氨酸天冬氨酰磷酸天冬氨酸半醛高絲氨酸脫氫酶用雙氫吡啶羧酸絲氨酸蘇氨酸甲硫氨酸賴氨酸賴氨酸的生產方法有水解法(已淘汰)天冬氨酸天冬氨酰磷酸天冬氨酸半醛高絲氨酸脫氫酶用雙氫吡啶羧酸絲氨酸蘇氨酸甲硫氨酸賴氨酸異亮氨酸異亮氨酸1谷氨酸棒桿菌合成賴氨酸的自身產物調整作用三、材料與分析方法1。20.5%，20min。0.4%，CaCO3種子,。〔3201.0〔氮源0.6%(N42SO42%，K2HPO40.1%，MgSO40.05%，FeSO40.2%，MnSO40.2%，pH7.0，于250mL25mL0.1Mpa20min。3、分析方法絲氨酸的測定承受變色酸-分光光度法測定〔1。賴氨酸的測定2發(fā)酵液中賴氨酸含量的測定承受茚三酮比色法，并加以改進。吸取發(fā)酵液1.25g94mL乙二醇甲醚中；B液：CuCl·2H2O1.97g32mL20.1mol/LB曲線得知發(fā)酵液中賴氨酸的濃度。參照《工業(yè)微生物試驗技術手冊》的方法.。高絲氨酸脫氫酶活力的測定個酶活力單位〔U〕1U=1ug/min。①粗酶液的制備Tris-HCL緩沖液1:1的比例混合，32℃水浴保溫〔關于酶與底物反響的量要進展試驗調整，以上僅供參考。四、試驗方法與步驟1、將活化的斜面培育菌接種于種子培育基中，置于往復搖床上30℃振蕩培育24h，得到種子培育物。64×107個菌體/mL1∶10的接種量將30±2℃、pH7.0～7.272h。五、結果與分析、該發(fā)酵菌種的生長特性，繪制菌種生長及代謝產物形成與培育時間的特征曲線；2、找出該菌株發(fā)酵生產賴氨酸的主要影響因素，確定調控措施，確定其最正確發(fā)酵條件。附錄1、標準曲線的制作

絲氨酸含量的測定方法1.0mg/mL0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL10mL刻度試管中，滴一滴甲基紅試液〔0.1g100mL95%乙醇中1.0mol·1NaOH0.075mol·L-1NaI4min10%10%NaHSO3mL10mL具塞離心管中，加50mg100mL75%硫酸中〕2.0mL，加塞(20度1371000ml蒸餾水中，充分攪拌，使其充分570nm處的吸光度。將吸光度對濃度進展直線回歸，得絲氨酸標準曲線方程。2、樣品測定標準曲線繪制的方法測定吸光度，從標準曲線上查得絲氨酸的質量濃度。底物復原糖含量的測定試驗原理3,5－二硝基水楊酸〔DNS〕與復原糖共熱后被復原生成氨基化合物。在過量的NaOH堿性溶液中此化合物呈桔紅色，在540nm波特長有最大吸取，品中的含糖量。試劑3,5－二硝基水楊酸〔DNS〕試劑：稱取6.5gDNS溶于少量熱蒸餾水中，溶解后操作方法葡萄糖標準曲線制作2.0mg/mL葡萄糖標準液和蒸餾水。001010.20.80.420.40.60.830.60.41.240.80.21.65102管號(mg/mL)A540管號(mg/mL)A540樣品測定標準曲線繪制的方法測定吸光度，從標準曲線上查得復原糖的質量濃度。谷氨酸棒桿菌菌體生長量的測定每隔肯定時間取樣,測定菌液的光密度值(OD620)，已未接種的培育基作為參比溶液，繪制菌體生長狀況曲線。種子培育基細菌計數搖床振蕩過液培育18小時；培育過程中取菌液測量菌體數，測量方法如下：1cm的正方形，將玻片置于其上；10ul的菌液，用接種針涂抹均勻，保持在正方形區(qū)域內，待干；30~50=30~50107~108即可賴氨酸的發(fā)酵調控爭辯的可能爭辯點不同的碳氮源對賴氨酸發(fā)酵的影響；離子，