紅三葉新品系種質(zhì)鑒定及無性繁殖特性研究

紅三葉新品系（TrifoliumpratenseL.）是內(nèi)以內(nèi)牙克石地區(qū)自無性繁殖做了較為系統(tǒng)的鑒定評價和研究并首次對內(nèi)牙克石自然分布的紅三葉根據(jù)第二年期長短可分為早熟型、中熟型和晚熟型，期分別64d，71.96d和接近紅三葉群體平均水平。試驗材料在呼和浩特越冬率變化范圍為0%~88.89%，紅三葉新品系越冬率88.89%，抗寒性突出。29，35，3，41，5，19，2，67號等材料形態(tài)特征比較相似。st和t4種類型，其中6份材料出現(xiàn)隨體，有1A、2A、1B、2B和3B5種核2=2=14=8+6s（2STLanglet形態(tài)劃分標(biāo)準(zhǔn)，紅三葉新品系類型屬于相對原始的T型。4、32份紅三葉材料，8對引物擴(kuò)增共獲得多態(tài)性條帶219100%，有效等位數(shù)Ne為1.1636。Nei多樣性指數(shù)H為0.1229，Shannon信息指數(shù)I為0.2241，材料間的總變異Ht0.1218，種群間遺傳變異Hs0.0387，遺傳分化系數(shù)于種群內(nèi)。本試驗獲得紅三葉新品系的圖譜，可有效區(qū)分2份國內(nèi)已登記紅三葉56~76.38，分枝期整枝扦插效率較高，最高增殖系數(shù)為6.40。組織培養(yǎng)研究表明：紅三葉新品系的最佳方法為75%預(yù)處理，0.1%HgCl210min；最適無菌苗培養(yǎng)基為不添加mg·L-12,4-D培養(yǎng)基上都極易誘導(dǎo)出愈傷組織；最佳繼代培養(yǎng)基為MS+0.5mg.L-16-BA+1.0mg·L-12,4-D；最佳分化培養(yǎng)基為MS+0.75mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA，16.67%；莖芽增殖最佳培養(yǎng)基為MS+0.5mg·L-16-BA+1.0mg·L-1IBA；50mg·L-1濃度的IBA1h0.5mg·L-1IBAMS中，生根率達(dá)80%1mg·L-1BA0.5mg·L-1NAACharacteristicsinNewLineofRedCloverThenewlineofredclover（TrifoliumpratenseL.）isanexcellentcoldresistantmaterialsuitableforalpineregioninChina,whichfilledtheblankofredcloverbreedinginInnerMongolia.Redclovernewlineandsomeredclovermaterialswerestudiedbymorphologicalfeatures,chromosome,SSRmarkers,andasexualreproduction.TeticoriginofredcloverwhichisnaturaldistributedinYakeshiinInnerMongoliawasdiscussedatfirsttimeinthispaper.Thereisagreatsignificanceoftheuseandinnovationofelitegermplasminredclover.Obtainedthefollowingresults:1、70materialscanbedividedintotheearlyflowering,themiddlefloweringandlateflowering,respectively,accountedfor22.86%,68.57%and8.57%.Accordingtogrowthperiodinsecondyear,redclovercanbedividedintotheearly,mediumandlatematuritygroups,andgrowthperiodwere64d,71.96dand84.17d,respectively.Newlinesofredcloverisalatefloweringtype.Growthperiodwas74dbelongstothemedium.Averagegrowthratesindailywas0.44cm/dwhichclosetotheaveragelevelofredcloverWintersurvivalrateswerefrom0%to88.89%in70materialsatHohhot.Thenewlineofredcloverwinterratewas88.89%,andcold wasoutstanding.2、Thestudiesofmorphologicalcharacteristicshaveshownthatredcloverorganshavegreatgeneticvariation.Thecoefficientofvariationonleafmark,branches,inflorescencesperstem,seedcolor,internodelength,lateralbranchnumber,leafarea,naturalheightwererelativelylarger.Theorderofgeneticdiversityfromthelargesttothesmallestwasbranches>leaves>seeds>flowers>roots.Thecrownwidth,heightandbranchesweremainindicatorstodividemorphologicaltypesofredclover.Newlinesofredcloverhadtanroots,andusuallygreenstemwhichwassemi-erect.Strainsclumpsizewasthemiddleintheredclovergroups.Leafmarkweremiddleornomarkmainly.Leafareawasbiggerrelatively,andleafshapewaswiderandshorter.Themainflowercolorwaspurple,thenlightpurpleandpink,whiteoccasionally.Seedcolorwasrelativelyshallow,andalargenumberofseedswasyellow.Seedsizewasmiddle,and1000-grainweightwassmallerrelativetotheredclovergroups.Thenewlineofredcloverwassimilartothenumberof29,35,3,41,5,19,2,67inmorphologicalcharacteristics.3、 mberof43redcloverwas2n=2x=14,x=7.Chromosomeincludedm,sm,st,andt,sixofwhichhadsalite.Therewere5kindskaryotype（1A,2A,1B,2Band3Band8kindsofkaryotypeformula.Thekaryotypeformulaofnewlineofredcloverwas2n=2x=14=8m+6sm(2SAT).Theasymmetryofinterchromosomalisgreaterthanintrachromosomal,andwasrelativelyhighintheredcloverpopulations.AccordingtothetheLanglet’schromosomemorphologycriteriafortheclassification,thenewlineofredcloverchromosometypeistheT-type,primitiverelatively.4、TheysisofSSRmarkershowedthatusing8pairsofprimersin32obtain219polymorphicbandstotally.Thepolymorphismpercentagewas100%,andthenumberofeffectivealleleswas1.1636.TheNei’diversityindex,shannoninformationindex,totalvariance,variancebetweenthematerials,coefficientofgeneticdifferentiationandgeneflowwere0.1229,0.2241,0.1218,0.0387,0.3179respectively.31.79%geneticvariationoftheredcloverexistsinexternalpopulations,68.21%wasininternalpopulations.Thefingerprintsoftheredclovernewlinewasobtained,whichcaneffectivelydistinguishfromtworegisteredvarietiesofredcloverinChina.TheNeidiversityindexofredclovernewlinewas0.0665,andShannon'sinformationindexwas0.1065,lowerthantheaveragepopulationdiversitylevel.SSRgeneticdistanceshowedthatthenewlineofredcloverwassimilartothenumberof60,22,53,whichwerefromRussia,SpainandRussiarespectively.5、Thebestrametsperplantwas6~7indivisionpropagation,andthehighestproliferationcoefficientwas6.38;Thehighestproliferationcoefficientofcuttingcanupto6.40usingentirebranchesinbranchingperiod.Thestudyoftissuecultureshowed:thebestmethodofseedssterilizationforredcloveristhe75%ethylalcoholtreatmentfollowedbydisinfectionwith0.1%HgCl2for10min.1/4MSmediumwith1.5%sucrosewithouthormoneswasmosteffectiveforseedculture.Cotyledons,hypocotyl,petiole,leafandrootcalluswereeasytobeinducedinmediumofMScontaining0.5mg·L-16-BAand1~2mg·L-12,4-D.ThebestcallussubculturemediumwasMScontaining0.5mg·L-16-BAand1.0mg·L-12,4-D.ThebestmediumfordifferentiationwasMSplus0.75mg·L-16-BA0.5mg·L-1NAA,thedifferentiationratecanreachupto16.67%.Corm-budcouldbemultiplicatedgreatlyinMSmediumplus0.5mg·L-16-BAand1.0mg·L-1IBA.Regeneratedplantswereimmersedin50mg·L-1IBAfor1h,thenvaccinatedinMSmediumplusIBA0.5mg·L-1,therootingratewas80%.1mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAAhormonecombinationwassuitableforgerminationofshoottipsandaxillarybudsinred6、WeconcludedthatredcloverthatdistributedatYakeshiinInnerMongoliaislikelytocomefromwesternRussiaandwasaEuropeandescent.:Redclovernewline(TrifoliumPratenseL.)；GermplasmIdentification；morphologicalvariation；chromosomekaryotype；SSRMarker；VegetativeSupervisedby：Prof.YUNApplicantforDoctordegree:GAOXueqin(ForageGermplasmResourcesandBreeding)(CollegeofEcologyandEnvironmentalScience,InnerMongoliaAgriculturalUniversity,Huhhot,010018,引 紅三葉的遺傳...............................................................................................紅三葉的發(fā)展歷 紅三葉屬間、種間關(guān)系與遺傳進(jìn) 紅三葉種質(zhì)資源的搜集與保 紅三葉種質(zhì)的保護(hù)與搜 紅三葉種質(zhì)資源保 種質(zhì)資源研究內(nèi)容和現(xiàn)狀概 紅三葉形態(tài)學(xué)性狀研 紅三葉的研 紅三葉分子標(biāo)記的研 紅三葉無性繁殖特性的研 無性繁殖概 紅三葉常規(guī)無性繁殖研 紅三葉組織培養(yǎng)研 本研究的目的和意 紅三葉新品系農(nóng)藝性狀的鑒定和評 材料與方 試驗材料來 試驗材料的地理分 試驗地概 測定內(nèi)容與方 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分 結(jié)果與分 物候期的差異分 紅三葉生長速度差異分 紅三葉越冬 紅三葉農(nóng)藝性狀的相關(guān)分 紅三葉農(nóng)藝性狀聚類分 小結(jié)與討 紅三葉新品系形態(tài)特征鑒定及評 試驗材料與方 試驗材 測定內(nèi)容與方 計算公式的說 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分 結(jié)果與分 紅三葉新品系根系的形態(tài)鑒 紅三葉新品系莖的形態(tài)特征鑒 紅三葉新品系葉片的形態(tài)特征鑒 紅三葉新品系花部特征鑒 紅三葉及莢果的形態(tài)特 紅三葉形態(tài)特征的主成分分 紅三葉主要形態(tài)特征多樣性分 紅三葉主要形態(tài)性狀的系統(tǒng)聚類分 紅三葉主要形態(tài)性狀的逐步聚類分 小結(jié)與討 紅三葉新品系研 材料與方 研究材 研究方 結(jié)果分 紅三葉數(shù)目與倍 紅三葉T型和R型劃 紅三葉核型分 紅三葉的ROMERO核不對稱 基于ROMERO不對稱參數(shù)與總長度（TCL）的三維進(jìn)化趨勢 小結(jié)與討 紅三葉新品系SSR鑒定及遺傳多樣性分 材料與方 試驗材 試驗方 結(jié)果與分 紅三葉新品系SSR圖譜構(gòu)建及特征帶鑒 SSR標(biāo)記多態(tài)性分 SSR遺傳多樣性分 基于SSR紅三葉遺傳變異及分 紅三葉種間遺傳距離及遺傳相似度研 紅三葉遺傳分 紅三葉NEI’S遺傳距離與地理距離的回歸分 小結(jié)與討 紅三葉新品系圖譜的構(gòu) 紅三葉種群的遺傳多樣 紅三葉種群遺傳結(jié)構(gòu)及分 紅三葉新品系SSR親緣關(guān)系分 紅三葉新品系無性繁殖特性研 試驗材 試驗方 紅三葉分株繁 紅三葉扦插繁 不定芽增殖繁 側(cè)芽增殖途 數(shù)據(jù)處 結(jié)果與分 切塊大小對紅三葉分株繁殖的影 紅三葉新品系組織培養(yǎng)和植株再 紅三葉外植體的直接分 側(cè)芽增殖途 小結(jié)與討 綜合討論與結(jié) 討 紅三葉種質(zhì)資源遺傳變 紅三葉種質(zhì)資源鑒定評價與分 形態(tài)標(biāo)記、以及SSR標(biāo)記遺傳距離的相關(guān) 內(nèi)牙克石紅三葉遺傳與途 結(jié) 參 文 作 簡 圖1-1紅三葉相關(guān)種間雜交關(guān)系分 圖1-2車軸草屬種間（SECT.TRIFOLIUM）系統(tǒng)進(jìn)化親緣關(guān)系分 圖2-1紅三葉材料搜集分布 圖2-2紅三葉第二年物候期聚類分 圖2-3紅三葉日平均增長速率變 圖2-4組間自然高度動態(tài)變化趨勢 圖2-5組間絕對高度動態(tài)變化趨勢 圖2-6基于農(nóng)藝形狀的紅三葉聚類分 圖3-1紅三葉根顏色變異及所占比 圖3-2紅三葉莖的顏色變 圖3-3紅三葉新品系莖顏色變異的分布頻 圖3-4紅三葉莖顏色變異類型及所占比 圖3-5生長類型劃分及出現(xiàn)頻 圖3-6基于莖形態(tài)特征的聚類分 圖3-7紅三葉葉斑強(qiáng)度變 圖3-8紅三葉種群葉片斑紋變異的聚類分 圖3-9基于葉片形態(tài)特征的聚類分 圖4-1紅三葉T型圖4-2紅三葉R型圖4-343份材料核型不同類別所占比 圖4-4不同類型材料的ROMERO不對稱參數(shù)散點 圖4-5不同地區(qū)材料的ROMERO不對稱參數(shù)散點 圖4-6ROMERO不對稱參數(shù)聚類 圖4-7紅三葉核型進(jìn)化趨 圖4-8ROMERO不對稱參數(shù)與總長度TCL三維曲面 圖5-1引物RCS2185在1號、69號和70號材料間的圖 圖5-2引物RCS3052在1號、69號和70號材料間的圖 圖5-3引物RCS3095在4號種群的擴(kuò)增條 圖5-4引物RCS3015在32號種群的擴(kuò)增條 圖5-5引物RCS1920在26號種群的擴(kuò)增條 圖5-6引物RCS1868在45號種群的擴(kuò)增條 圖5-7引物RCS2185在12號種群中的擴(kuò)增條 圖5-8引物RCS0793在4號種群中的擴(kuò)增條 圖5-9引物RCS2343在58號種群的擴(kuò)增條 圖6-1不同外植體在不同培養(yǎng)基上的出愈 圖6-2不同外植體的直接分化 表1-1VICIOID分支成員分類和地理分 表1-2車軸草屬亞屬分類及相應(yīng)的類群分 表2-1樣品的來源地及生 表2-2紅三葉第一年物候 表2-3紅三葉第二年的物候 表2-4紅三葉37個材料的物候期進(jìn) 表2-5不同生長類型紅三葉物候期性狀F檢 表2-6不同生長類型紅三葉物候期性狀方差分 表2-7不同生長類型紅三葉物候期進(jìn)程的基本統(tǒng)計分 表2-8紅三葉不同期生長速度比 表2-970份材料越冬率....................................................................................................... 表2-11紅三葉農(nóng)藝性狀的PEARSON相關(guān)分 表3-1紅三葉形態(tài)性狀測定項目與記載標(biāo) 表3-2紅三葉根系基本特 表3-3不同地理來源紅三葉莖顏色的變 表3-4紅三葉莖的被毛類 表3-5紅三葉莖數(shù)量性狀變異及統(tǒng)計分 表3-6葉斑形態(tài)變異類型及出現(xiàn)的頻 表3-7紅三葉第一年葉片相關(guān)性狀差異分 表3-8晚花類型紅三葉葉片指標(biāo)方差分 表3-9紅三葉花及花序的基本性狀變異特 表3-13主要形態(tài)特征的SHANNON’S多樣性指 表4-1核型分析標(biāo) 表4-2核型不對稱性分類 表4-3紅三葉數(shù)目及核型特征參 表5-1PCR基本反應(yīng)體系混和液成分的加入量及終濃 表5-2供試的紅三葉微引物和序 表5-3紅三葉新品系SSR圖 表5-43個主要育成品種的特征帶分 表5-5不同材料SSR擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性比 表5-6不同材料類型SSR擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性比 表5-7基于不同引物的遺傳多樣性分 表5-8紅三葉材料間的遺傳多樣性分 表5-9不同材料類型紅三葉遺傳多樣性比 表6-1愈傷組織的誘導(dǎo)因素水平及處 表6-2不同切塊大小對紅三葉分株和增殖系數(shù)的影 表6-3紅三葉扦插時間和插穗部位對的影 表6-4不同方法的效果及對萌發(fā)特性的影 表6-5不同培養(yǎng)基對紅三葉萌發(fā)及無菌苗生長的影 表6-6愈傷組織生長和胚性愈傷組織的改 表6-7不同激素配比對愈傷組織分化的影 表6-8分化苗的增殖培 表6-9再生苗的生根 表7-13種標(biāo)記方法遺傳距離的相關(guān) 及腸癌等功效,被世界各地廣泛地用作優(yōu)質(zhì)牧草、綠地植物、水土保持植物和藥用植物。目前是歐洲、、、澳大利亞及新西蘭等地區(qū)最重要的栽培豆科歐洲南部尤其是伊比利亞、意大利、巴爾干、高加索及里海附些地區(qū)成為許多物種的中心和遺傳多樣性區(qū)域[1，2]。Nick等認(rèn)為地中海盆地，美國西北部和非洲東部是車軸草屬物種三大多樣性區(qū)域[3]。紅三葉于歐洲東南部的地中海盆地，是三大多樣性的主要中心地。3~4世紀(jì)開始，紅三葉就在歐洲開始栽培種植，13AbertusMagnus第一次文字記錄了紅三葉的栽培，1550年第一次在意大利有文獻(xiàn)記載，隨后法蘭德斯（1566年，法國（1585年（1645年（1663年，德國（1776年）等許多國家相繼出現(xiàn)了紅三葉的栽培記錄[4]。紅三亞南部，然后進(jìn)入歐亞大陸的前；隨后進(jìn)入最南部到福羅里達(dá)州和得克薩斯州南部，再到，阿拉斯加州和南美洲的北部；隨后從南美洲北部傳入智利和阿（1）吉林、云貴高原、鄂、等地均存在逸生種，以野生狀態(tài)分布。沒有牧草，就沒有家畜；沒有家畜，就沒有糞肥，沒有糞肥就沒有作物‖，三葉草，沒有人能稱得上佛蘭芒的農(nóng)民，因此，佛蘭芒是歐洲畜牧業(yè)成長的搖籃，]。紅三葉研究的早期文獻(xiàn)主要集中在歐洲的一些地區(qū)，1783年德國紅三葉栽培的威爾士，1800年取得了一項重大的突破，研究者發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)氐募t三葉品系是由不同的在，1729年4月10日一份殖民報紙上第一次登銷售紅三葉，同葉比較零散的文獻(xiàn)在早期的農(nóng)業(yè)文章中開始出現(xiàn)，隨后相關(guān)科學(xué)性文章在出現(xiàn) 和Hillman，1911 即普通型（雙刈割）和單刈割型。Westgate和Hillman研究發(fā)現(xiàn)俄羅斯紅三葉在Pieters和Hollowell，1937年強(qiáng)調(diào)三葉草在南部種植失敗，和易感南部炭疽病有密切關(guān)系[12]1906年Bain最早進(jìn)行的，他們同時也被稱為真菌研究[13]。1931年，肯塔基Fergus啟動了闡明三葉草種植失敗原因的研究，可能1645年第一次從英國引入以來，之所以很多品種能發(fā)展起一個品種“Maas”，葉子上完全沒有“V”子的白斑，在，粗糙的被毛能把紅三葉和歐洲的祖先區(qū)分開。他們推測，這種多毛能葉蟬的。Rahn，PortGibson和VanFossen等品種[4]。OttawaDollard，單刈割品種AltaswedeManhardy。英國育成了一個可以利三葉品種（如：OtofteEarly，OtofteSemilateOtofate。瑞典培育出能夠抵抗菌核病和莖炭疽病的SvalofPurebredMerkur品種。捷克斯洛伐克和俄羅斯也培育了植物。1931年威爾士植物育種站，對紅三葉和不育方面做了大量的工作，并且設(shè)計了品系建立，同胞交配和雙列雜交3種紅三葉育種方法[14]。第二次后，紅三葉新品種培育工作快速發(fā)展，首先育成的品種是系選育而成。1947年，肯塔基農(nóng)業(yè)試驗站和農(nóng)業(yè)部聯(lián)合育成抗南部炭疽病Kenland[16]。Whyte，1953年列舉了歐洲各國最有名紅三葉品系類型，雙刈割紅三葉有Silesian（歐洲中心，Broadred或cowgrass（英國，mattenkee（，，Otofte，Essi（Dorsearab（MerkurResistent（，Goto（，Ultuna（，Molstad（，Tammisto（德國的Julen和的Gergus和Hollowell，分別于1956年和1960年，總結(jié)了大部分知識已經(jīng)被認(rèn)知，同時也總結(jié)了大量關(guān)于育種、遺傳、生產(chǎn)、施肥和管理的研究[18]。Gergus和Hollowell高溫對生殖的影響，越冬率低的原因，光對生物的研究放在了重點位置。Smith1996年列舉40多年在紅三葉持久性和抗病性育種上取得的成就，Lakeland，Arlington，Marathon，和Wisconsin等育成品種在表現(xiàn)型方面得到了不斷的改善[23]1988年Bilis和Pivoryunas利用秋水仙素處理方法，發(fā)展了很多的四倍體紅三葉品種[24]。1991Anderson等成功的應(yīng)用體外秋水仙素處理，使種間雜交種成功加倍[25]。20世紀(jì)隨著分子技術(shù)的發(fā)展和完善，在轉(zhuǎn)研究磷酸轉(zhuǎn)移酶[26]。2003Ding等以紅三葉草子葉為轉(zhuǎn)化體，用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將外源的苜蓿花葉外殼蛋白（AMV）轉(zhuǎn)入紅三葉植株[27]。2004年Sullivan等成功的研究都是由國家農(nóng)業(yè)部和國家試驗站承擔(dān)的[4]?，F(xiàn)在公共部門將大多數(shù)20世紀(jì)，三葉草屬，尤其是紅、白三葉草，一直以來都是歐洲國家及重要的畜禽飼料。Kjaergaard認(rèn)為，三葉草最早被馴化大約是在1000多前，快速在整個歐洲蔓延，三葉草是人們種植禾谷類作物氮素的主要的提供者[30]。13、14世紀(jì)，由缺氮農(nóng)業(yè)因此暫時緩解。17世紀(jì)末，三葉草在歐洲南部廣泛，三葉草在氮素革加。Kjaergaard闡述了歐洲南部三葉草引入和瘧疾下降的關(guān)系。認(rèn)為，多數(shù)蚊蟲相對麗的花園，引來無數(shù)詩人、畫家和作家浪漫的描述。三葉草對馬鈴薯(Solanum三葉的發(fā)展并不是一帆風(fēng)順的，生產(chǎn)除了以外的大多數(shù)國家在1950年達(dá)到，20世紀(jì)50年代過后，紅三葉的生產(chǎn)在世界范圍內(nèi)都大幅度的下降[4]。1909年是三葉草種植數(shù)量下降的決定性一年，這一年德國化學(xué)家FritzHaber發(fā)現(xiàn)了通發(fā)，了人們對產(chǎn)品的，例如乙醇和生物柴油。特別是在玉米種植帶，風(fēng)景轉(zhuǎn)變成了單一的大豆（Glycinemax(.)Merr.或者是玉米(ZeamaysL.)，牲畜減少 屬（TrifoliumL.）是豆科中最大的屬之一[34-36]。車軸草屬是豆科缺失葉綠體反向重復(fù)序列的一個大的分支成員[36-37]“vicioid分支vicioid分支組成有車軸草族，山黧豆族，鷹嘴豆屬，豆屬和紫雀花屬，見表1-1[38-41]。Steele和Wojciechowski用cpDNAmatK分析了山黧豆族和車軸草族系統(tǒng)發(fā)育，1-1Vicioid支成員分類和地理分布（引自：NickW.Tab.1-1ClassificationandgeographicaldistributionofthebranchofvicioidTribe 種TrifolieaeMedicagoL.苜蓿 Eurasia,EandSMelilotusMill.草木犀 Eurasia,EOnonisL.芒柄花 Mediterraneanregion-CentralAsia,ETrifoliumL.車軸草 seeTab.1-TrigonellaL.胡盧巴 MediterraneanregionCentralAsia,SFabeaeLathyrusL.山黧豆 Eurasia,EAfrica,NandSLensMill.兵豆 4PisumL.豌豆 3ViciaL.野豌豆 Eurasia,EAfrica,NandSOtherCicerL.鷹嘴豆 MediterraneanregionCentralAsia,EGalegaL.豆 Eurasia,E6ParochetusD.Don紫雀花 MountainsoftropicalAsia,E2注：物種數(shù)量和分布來源于Lewisetal.(Note：SpeciesnumbersanddistributiondatafromLewisetal.vicioid255個種。Zohary根據(jù)分類學(xué)將紅三葉分為8個類群（見表1-2），紅三葉被劃分在Trifolium類群，共73個種，這個類群裹，周圍被毛；花冠聯(lián)合在一起，一般能結(jié)實，結(jié)1~2粒[4]。

1-2車軸草Tab.1-2Asub-classificationandthecorrespondinggroupsclassifiedinsubgenusChronosemium

（Zohary 種sect. subgenussect.Glycyrrhizum

T.alpinumandT.ofsect.

BerchtoldandJ.Presl

sect.

T.eximium,T.gordejeviiT.lupinasterofsect.

EEurope- sect. sect. SAfricasect.Trichocephalum sect. sect.Vesicastrum sects.Mistyllus,Vesicaria,Lotoideain

Madagascar(1)sect.TrifoliastrumS.F. sect.Lotoideain sect.Involucrarium sects.LotoideaandLotoideain NandS Note:TheMediterraneanregionincludestheareaborderingtheMediterraneanSea,extendingtoEuropeandSouthwest（2n=14.s..incanatum.（2n=16）1-1關(guān)系分析（引自：NLTaylorKHQuesenberry，1996）Fig.1-1Crossingrelationshipamongspeciesrelatedtoredclover紅三葉與ifolium類群的兩個一年生植物.difuum（展枝三葉草）216和.pallidum（216）雜交成功4,]。紅三葉（x）.difuum（2x）在二倍體水平獲僅得了少量的，當(dāng)父母本都加倍雙二體紅三葉（4）.diffuu（4x）大多89%（2n142n16雜交植株，一般理論期望是2n15。通過分析期Ⅰ會發(fā)多價體生頻很高伴著復(fù)的格到15條[8]現(xiàn)67%以8:7分，二倍體水平上聯(lián)會，暗示出幾乎紅三葉每個都有與.dfuum（展枝三葉草）有同源片段[]4x紅三葉4x.difuum（230減數(shù)分析支持以上的結(jié)論[8]。4x紅三葉×2xT.pallidum雜交，獲得了雜交植株[47]。紅三葉相關(guān)種間雜交關(guān)系分析見和T.pallidum分為一組，認(rèn)為紅三葉與Trifolium類群中n=8的種T.diffusum和T.pallidum親緣較近[4]。1-2車軸草屬種間（sect.Trifolium）系統(tǒng)進(jìn)化親緣關(guān)系分Fig1-2 ysisofphylogeneticandphylogeneticinsectTrifolium（引自：NickW2006年Elon體NA體trL來自vcod1218[]rA和Aifolium12。并認(rèn)為，216軸草祖的數(shù)目祖生史一生的一生多生之的換常見。另外再次證實，車軸草屬是在中世紀(jì)早期，產(chǎn)于地中海地區(qū)的物種。iflium類群系統(tǒng)進(jìn)化親緣關(guān)系見圖12.dfuum和.pallidum以及.andicum2n14，表現(xiàn)出比較獨特的進(jìn)化途徑[]。形態(tài)分類使人很迷惑[49]，80年代，基于被毛，莖長，多頭和莖分枝等，出現(xiàn)了大量特征，可以通過選擇輕易地控制[51,52]。自然和人工選擇的影響，已經(jīng)有了較廣泛的分布和較為豐富的遺傳變異和遺傳多樣據(jù)20（過09020035%的為紅三葉，21%的白三葉，車軸屬其它材料18%2294份紅三葉種質(zhì)材料的護(hù)照信息數(shù)906個商業(yè)品種，90個育種家品系，480個古老或地方栽培材料，578個野生或半自然生態(tài)型以及127個類型不詳?shù)牟牧?。我國已搜集三葉草屬種質(zhì)資源不足和“巫溪”3個紅三葉地方品種，目前尚沒有育成品種登記。由此可見，我國紅三葉庫是種質(zhì)交換和使用期間供臨時保存的工作庫。保存的溫度為20℃，相對濕度即使頻繁的解凍，也只是對有輕微的一些影響[55]。Taylor認(rèn)為較為理想的紅三葉貯藏條件是10%濕度或者更低，溫度在-18℃[4]。在Ft.Collins的國家種此外，從20世紀(jì)70年始，一種依據(jù)植物細(xì)胞全能性理論而發(fā)展起來的新方紅三葉屬一年生或多年生草本，2~5(~9)年。主根深入土層達(dá)1m。莖粗壯，側(cè)具脈紋8~9條，基部抱莖，先端離生部分漸尖，具錐刺狀尖頭；葉柄較長，部端鈍，有時微凹，基部闊楔形，兩面疏生褐色長柔毛，葉面上常有V字形白斑，側(cè)脈約15對，作20°角展開在葉邊處分叉隆起，伸出形成不明顯的鈍齒；小葉柄短，長30~7012~14(~18mm；幾無花梗；萼鐘形，被長柔毛，具脈紋10條，萼齒絲狀，錐尖，比萼筒長，最下方1齒比其余萼花柱絲狀細(xì)長，胚珠1~2粒。莢果卵形；通常有1粒扁圓形?；ü?~9月。1983年Mosley研究發(fā)現(xiàn)紅三葉莖、葉以及葉柄，在正常的田間生長環(huán)境下會產(chǎn)成成分，而且能水分的流失，在干旱環(huán)境中，增加抗干旱的能力[57]。Bowley以Kenstar品種為材料，對莖長進(jìn)行選擇Kenstar品種第一次收獲時的高度Retallach發(fā)現(xiàn)在紅三葉莖以其他上都有腺毛，由表皮細(xì)胞產(chǎn)生的腺毛不管是平伏的還是直立的都是頭狀具厚壁的，2種類型的腺毛都是植物的保護(hù)[59]。沒有腺毛是由一個隱性控制的[60]Collins等認(rèn)為南美洲品種密集的柔毛是自然選擇下抗蟲個小葉的變異，如：英國的品種S-123大多第一片真葉具一個小葉，也有兩個小葉狀和色彩亮度也存在差異[63]。但是早在二十世紀(jì)30年代就發(fā)現(xiàn)，在一些野生和栽培型控制的[63-68]。Smith在紅三葉種質(zhì)搜集中將葉片斑紋作為一個種質(zhì)搜集的描述符，但是產(chǎn)生無斑紋紅三葉水平的隱性發(fā)生的頻率尚未確定[69]。Bortnem等研究顯示，目前國際上已經(jīng)搜集的紅三葉種質(zhì)資源中無葉斑隱性8221份材料未出現(xiàn)無葉斑植株，隱性頻率為0，1份來自希臘的紅三葉種質(zhì)無葉斑植株最多，隱性發(fā)生頻率為0.67。全部82份紅三葉種質(zhì)中，無葉斑隱性必要通過自然和人工選擇來提高紅三葉種質(zhì)中這一顯著特征的頻率[70]。的花序間幾乎沒有營養(yǎng)組織存在[4]。Taylor61.88增加到7.40，觀察到的最大花序頭達(dá)到12，但是次級分枝數(shù)明顯降低，每個的生長點比例回到了原有的基礎(chǔ)上?；ㄐ虬l(fā)育種群平衡的最佳水平是每個莖1.75個花序[71]。單個小花是左右對稱，包含一個花萼，花萼有5個齒，10條脈紋。Heslop發(fā)粉是雙核，有三個氣孔，然而二倍體花粉多于3（多數(shù)的）[72]。二倍體花粉通常是立三葉莖在節(jié)點會生根，如：Astred是來自澳大利亞東南部的塔斯馬尼亞島一個新品種，紅三葉屬長日照植物，喜濕潤海洋性氣候，在平均氣溫大于或等于10℃、年積500mm以下的干旱又無灌溉條件的地區(qū)不即可出苗，萌發(fā)的最適溫度為25℃，溫度高于35℃發(fā)芽受影響。紅三葉出苗后20~35d后進(jìn)行分枝，分枝較多。紅三葉花期長，可達(dá)5個月，產(chǎn)量豐富。第2要使紅三葉根系有充足積累碳水化合物的時間，秋季收獲后，紅三葉大概需要45d紅三葉持久性下降。病蟲害也會降低紅三葉的持久性。國外學(xué)者對紅三葉產(chǎn)量的研究較多，了很多提高產(chǎn)量的田間管理方法，主要包括單播和混播[4]。紅三葉單播第一年干草的產(chǎn)量能達(dá)到14900kg/ha，第二年10500kg/ha，而混播羊茅和貓尾草的產(chǎn)量要比單播高[80]N75kg/ha條件下，再施N肥150kg/ha和單播施N肥300kg/ha時產(chǎn)量沒有顯著的差異[82]。東南部研乎相等，而粗蛋白含量增加了1%~3%[84]。紅三葉再生性相對苜蓿較差。在2次刈割比3次刈割有優(yōu)勢，2次刈割根2001年的研究發(fā)現(xiàn)，紅三葉隨著刈割次數(shù)的增加，再生草達(dá)到相間縮短20%~30%，株高降低15%~20%，單枝重下降10%~20%，產(chǎn)草量降低了（ID）（P）[4]。一般來說葉子的uton8g/kg/節(jié)（莖的頂端到底端，而苜蓿和百脈根能達(dá)到20g/kg/節(jié)。紅三葉的品質(zhì)介于白三葉（最高）和苜蓿之間，開花前紅6[7][][9]13%[25%[1]。30%~48%[92]。干草會降低紅三葉的礦物質(zhì)、氨基酸以及消化率。Kouame15個形態(tài)和生理指標(biāo)41個國家800多份紅三葉種質(zhì)資源數(shù)前、芬蘭等10個國家的39份紅三葉種質(zhì)的14個形態(tài)和表型性狀進(jìn)行鑒定評價后認(rèn)為，39份紅三葉種質(zhì)在許多性狀上存在較大的表型變異，變異最大的是再生習(xí)23個紅三葉品種在蘭州地區(qū)都能正常完成生長發(fā)育和繁殖，新西蘭紅三葉的葉量豐富,植株高度、所對引自的5個三葉草品種的物候期和產(chǎn)量等進(jìn)行了初步鑒定和評價，其中1個紅三葉品種在黔西南地區(qū)表現(xiàn)較好，但其他性狀尚未鑒定[96]。在青海省化隆縣與循化縣接壤的河谷區(qū)域（海拔1900m）對國外2份白三葉和1份紅三葉的引種試驗顯示，紅三葉品種“Rajah”作為草坪草的表現(xiàn)不佳，越冬率很低，不適應(yīng)改變和差異必然導(dǎo)致遺傳變異的發(fā)生，變異是生物遺傳變異的重要來源[101]堿、酸、鹽、溫度等外界處理，染色后，使細(xì)胞呈現(xiàn)出深淺不同的帶紋區(qū)段，可以更好的鑒別和研究的結(jié)構(gòu)和功能，常見的分帶方法有GNx=8[35,102,103]。非整倍體（2n=10，12，14）3124（12x有3個數(shù)目達(dá)到四倍體以上水平[104]。Trifolium類群里種的基數(shù)為x=5，6，7，8[35]。Trifolium類群，多倍體物Sibth（2n=4x=28出現(xiàn)，由于的改變，紅三葉很有可能從x=8演化到x=7，紅三葉比Trifolium類群的其他多年生物種具有更高的進(jìn)化性[105]。組大小為440MB，由于其強(qiáng)大的自交不親和系統(tǒng)，紅三葉組具有高度多態(tài)性[106]。葉Ⅰ在短臂上有個隨體；Ⅳ和Ⅴ著絲點是居中的，即等臂（m）；Ⅲ是亞中部著絲點，即sm型，ⅥⅦ是近端著絲粒，即st型，這個結(jié)果僅和Angulo等，1972年的紅三葉核型分析有部分的相似[4,108]。2n=16的核型分析最早內(nèi)的[109]，這個核型沒有包括一個明顯的隨體（sat是由7對m型和1對sm型組成。此外，俄羅斯Abramova沒有x=8和x=7之間的核型的[4]。Weir發(fā)現(xiàn)了一個特殊情況，紅三葉根尖中的數(shù)目是2n=14，而在莖節(jié)的分生組織中檢測出的數(shù)目卻為2n=28[111]。紅三葉2x-3x，3x-2x，3x-3x，3x-4x和4x-3x雜交組合的后代鑒定結(jié)果顯示，15162大約1/3是三體(2n=15)，約6%為雙三體(2n=16)，還有約4%的雜種有更高的染色x=7和x=8[112]。數(shù)目為16（2n=2x=16）的紅三葉，核型為2A型，核型公式為2n=2x=14m+2sm，最長與最短比值為1.37[109]。而數(shù)目為14（2n=2x=14）1B2n=2x=14=2M+12m，最長染色16、28、32、561A型、1B型、2A3種核型。不同地理來源或種早在1923年，Sax等已經(jīng)提出利用微效與主的緊密連鎖，對微效DNA變異水平的新技術(shù)，即分子標(biāo)記技術(shù)。1980年Bostein利用生物之間DNA的堿基排列順序為研究對象，在植物體的各個組織、發(fā)的型與雜合的型，提供完整的DNA遺傳信息。常用的分子標(biāo)記技術(shù)主要有（1）（RFLP（VNTR（RAPD（SAPRFLPDNA標(biāo)記技術(shù)之一，比較穩(wěn)定，它是一種用到放射性同位素，成本高。Isobe利用cDNA-RFLP技術(shù)，第一次構(gòu)建紅三葉遺傳兩個標(biāo)記之間的平均距離為3.4cm[114]。利用RAPD標(biāo)記，對15個來自歐洲，和的紅三葉品種，進(jìn)行遺傳距離和RAPD標(biāo)記對紅三葉自然選擇變化的評價效率，認(rèn)為形態(tài)和RAPD標(biāo)記各有，VandaPaplauskien?2008年使用ISSR技術(shù)研究了立陶宛一些紅三葉品種的遺傳多(98.1%，SSR是研究種群內(nèi)多樣性的較好樣本數(shù)，并發(fā)現(xiàn)野生紅三葉遺傳多樣性最為豐富，Nei遺傳距離聚類和地理位置沒有明顯的相關(guān)，分子標(biāo)記估算種群內(nèi)的變化是種群間變化的2.6倍[123]。術(shù)，建立了紅三葉微標(biāo)記的高密度遺傳連鎖圖譜，確定出7159對簡單序列擴(kuò)增重復(fù)（SSR，基于序列相似性分析，82%的SSR可能與有關(guān)。以1.4MB的隨機(jī)組序列的分析，研究發(fā)現(xiàn)紅三葉葉綠體、線粒體和核組的GC平均含量為33.8%，42.95和34.2％。共收集了26356表達(dá)序列（EST，組合成9339非冗余序列，ESTs顯示有78％的與 序列相似，主要是擬南芥和水稻。選定的1305個微標(biāo)記以及以前開發(fā)的167限制性片段長度多態(tài)性標(biāo)記（RFLP）進(jìn)行連鎖分析，1434位點中共有1399標(biāo)記位點，利用FISH探針成功地到7個連鎖組，總圖距共計868.7cm[106]。ShuseiSato對紅三葉高密度連鎖圖譜的構(gòu)建，使細(xì)胞學(xué)和基Linn.生殖的細(xì)胞孢子，由孢子萌發(fā)長出新。如：青霉、曲霉、衣藻、苔蘚（4）營養(yǎng)生殖：植物體的營養(yǎng)（根、莖、葉）的一部分，發(fā)育成為一個新的，如：馬18世紀(jì)初，主要用于林木的繁殖[125,126]。1902年，法國植物學(xué)家Habarland提出了植物細(xì)胞全能性學(xué)說，但是直到1958年，Steward和Shantz用胡蘿卜韌皮部誘導(dǎo)出體 1984年，杜慶哲研究了紅三葉扦插技術(shù)，在沒有使用任何激素的條件下，紅三20~30cm莖稈的任何一段創(chuàng)面均能經(jīng)扦插長出新根，由葉柄基部生出新芽，形成新植株的特點，莖稈扦插在93.3%以上，葉片扦插為0。杜慶哲發(fā)現(xiàn)紅三葉扦插時，剪掉多余葉片及頂芽1968年。1968Kendall第一次開展了紅三葉體外花粉萌發(fā)花粉管生長的研究[128]。BeachPhillips認(rèn)為其他植物的再生體系不能分生組織培養(yǎng)主要應(yīng)用于三個方面，如植物的脫毒、快速的繁殖、有用有成功[131]。ChurovaMS0.6μMIAA18μMBA使紅三葉分生組織快使用紅三葉莖尖脫毒發(fā)現(xiàn)，51%的植株未AMV，76%未BYMY，38%的兩種都沒有[133]。Dale進(jìn)一步研究白三葉花葉（WCMV）和紅三葉壞死花（RCNMV時，100%脫毒但僅有12%的；2.5mm大小的莖尖，外植體＜0.6mm時，76%脫毒率，有30%的[134]。Phillips1979125種不同L2最適合紅三葉組織培養(yǎng)[130]。隨后，SmithB5培養(yǎng)基上添加11μMNAA，10μM2,4D10μMKT的培養(yǎng)基上也誘導(dǎo)出愈傷組織[129]。Parrot成功地從愈傷途徑和莖尖生長點直接再生途徑得到紅三葉的再生植株[135]。Nancy利用紅三葉下胚軸和葉柄獲得了再生植株[136]。盡管紅三葉植株再生研究較多，但是從生組織衍生的愈傷組織再生頻率為1%左右[130]。大部分紅三葉組織培養(yǎng)都Keyes通過加性遺傳方差的方法研究了紅三葉無性系雙列雜交愈傷組織的形態(tài)Quesenberry利用5代選擇最終將紅三葉原始群體葉柄再生效率從4%提高到效率的提高提供了一個新的方法，即選擇。2004年Carrillo優(yōu)化了紅三葉直成活的植株明顯的再生性比不處理的高[141]。Phillip發(fā)現(xiàn)低P的培養(yǎng)可以誘導(dǎo)紅三葉無性系的變異[142]。低P培養(yǎng)基產(chǎn)生的再生苗，在進(jìn)一步的大田鑒定中發(fā)現(xiàn)大多數(shù)的再生苗不育，盡管數(shù)目還是正常的2n=14[143]。紅三葉原生研究及胚拯救技Grosser最早的開展了紅三葉原生研究。芬蘭和的相繼了紅三葉L212.5%的蔗糖、5μM腺嘌呤、25μM毒莠定，培養(yǎng)8~14d，移植LSP2培養(yǎng)基中，添2.5%的蔗糖、0.66μMBA、4μM毒莠定50%可以萌發(fā)[147]。MerkerPhillips分別研究了紅三葉×T.medium以及紅三葉×T.alpestre+500mg/L肌醇+3%蔗糖的液體培養(yǎng)基獲得胚性細(xì)胞懸浮系[152]。谷文英研究紅三葉不[153]。厚彥道了岷山紅三葉愈傷組織誘導(dǎo)和再生植株的體系，獲得了較好的再生 為最優(yōu)良的牧草之一而廣泛種植和利用。同時，紅三葉具有很強(qiáng)的繁殖能力，種古以內(nèi)大興安嶺地區(qū)自然分布的紅三葉種質(zhì)為材料，經(jīng)過10余年的栽中西部能夠安全越冬，在內(nèi)東部地區(qū)也有良好的抗寒性能，是目前唯一可在62-1樣品的來源地Tab.2-Thecollectionareasofred材洲地 經(jīng)緯海1亞2亞3歐瑞4亞不5歐不6非7亞伊不8洲79歐歐德歐歐瑞歐瑞歐芬歐丹歐歐希亞伊歐黑歐不歐不歐歐波亞不洲歐洲非南智歐英歐亞亞不洲歐歐歐續(xù)表2-材洲地材料類經(jīng)緯海歐育成品歐野生材歐希野生材歐野生材亞育種材亞育種材亞育種材歐野生材智地方品洲育成品歐野生材歐野生材歐野生材歐野生材歐野生材歐野生材歐克拉達(dá)野生材歐克拉雅爾斯野生材歐野生材歐野生材歐野生材洲育成品亞不亞不亞不亞不亞野生材洲育成品岷亞地方品巴亞地方品Note:Theeastlongitudeandnorthlatitudeispositive,westlongitudeandsouthlatitudeisrepresentedby RedcloverNewlines Thewildredcloverdistributionin2-1紅三葉材料搜集分布Fig.2-1Collectlocationsof70174°16′~78°88′60°1′~41°18′。試驗地位于內(nèi)呼和浩特市區(qū)南邊的和林格爾縣公鄉(xiāng)，(E111°92′,N40°64′，H1063m)。公鄉(xiāng)位于和林格爾縣西北部平原區(qū)，屬于土默川平原向蠻20個單株，2010~2011年連續(xù)兩年觀察記錄各小區(qū)單株物候，記“某個期的“百分率”為標(biāo)準(zhǔn)，50%以上植株進(jìn)入該時期就記錄相應(yīng)日期。每個小區(qū)隨機(jī)標(biāo)定20株，返青后每隔15d測定植株自然高度和絕對高度，另外，各物候期，再測定自然高度和絕對高度1次。（ANOA（CLUSTER年物候期見表2-2。2-2紅三葉第一年Tab.2-2ThePhenologyofofredcloverinfirst材材1---23456789---------------51日育苗，61日移栽于大田，8月中旬材料大部分進(jìn)入開花期，9月中旬14，15，16，25，37，52，53，56，65，70號等材料期不太一致，一半能在8月下旬進(jìn)入開花期完成期而一半左右不能完成。根據(jù)當(dāng)年生長發(fā)育表現(xiàn)，將7067，68等，屬晚花型品種，占8.57%。第二類，生長迅速，在第一年完成期，且4，18，19，24，26，28，32，34，41，42，43，44，45，61，63，69等屬早花紅三葉，占22.86%。第三類，介于二者之間，當(dāng)年能完成期但2-3紅三葉第二年的物候期Tab.2-3ThePhenologyofredcloverinsecond材12345789 紅Tab.2-4ThePhenologicalstageofredcloverin37材12345極425比較晚的51日，材66最晚55日前后返青，返青10d。分枝最早的9、2052號材料，511日左右進(jìn)入分枝期，最晚的為材1366，52514d637381345d?？梢姼鞑牧线M(jìn)入物候期的時間在返青期差距最小，其次為不同材料物候期進(jìn)程有明顯差異，其中期的差距最為明顯，材料66號的生（100d6643d3541號材料，能持續(xù)期，期相對較短聚為一類為早熟型，13、60、62、66、67、68號期較長，為晚熟型，其中66號材料最特殊，在晚熟中期最長。其余28份為中熟型。2-2紅三葉第二年物候期聚類分Fig.2-2Theclusterysisofredcloverphenologyinthesecond2-5不同生長類型紅三葉物候期性狀FTab.2-5TheF-testofphenophaseindifferentgrowthtypesofred均F返2分2現(xiàn)2開2結(jié)2期222-6Tab.Tab.2-6 ysisofphenologycharacterinthedifferentgrowthtypesofred 返分現(xiàn)開結(jié)期2-7分Tab.2-7Thebasicstatisticdataofredcloverindifferentareabasedon變 類均Ⅰ0返 ⅢⅠ0分 ⅢⅠ0現(xiàn) ⅢⅠ0開 ⅢⅠ0結(jié) ⅢⅠ0 ⅢⅠ0 ⅢNote:Ⅰ,Ⅱ,Ⅲonbehalfoftheprecocioustype,theintermediatetype,thelate-maturingtype 枝和現(xiàn)蕾期提前，且持續(xù)時間較短。早熟期64d，中熟71.96d，晚熟84.17d，三者516日進(jìn)入分枝，613日進(jìn)入現(xiàn)蕾期，623日進(jìn)入開花期，78日進(jìn)入結(jié)于中熟型，期約74d，生長天數(shù)183d。不同期生長速度比葉生長速度測定結(jié)果見表2-8。料較為特殊，如9、16號，進(jìn)入結(jié)實期后仍有枝條的更新和緩慢生長。1.00cm/d，22、4、2、10.74~0.82cm/d之間。分枝至開花期，52、9、19、41、1、42、5、31、35、17號等生長緩慢，生長速度都小最高達(dá)到3.38cm/d，其余介于2.00~3.00cm/d之間。變異系數(shù)達(dá)90.06%，結(jié)實期有些材料已經(jīng)完全停止生長，而有些則緩慢生長，導(dǎo)致表2-8紅三葉不同期生長速度比 Thegrowthrateofredcloverindifferentphenological1234578937個材料在整個期的平均日增長速度，圖2-3所示，綜合分析比較，我們可4組。第一組，19，41，5，520.40cm/d，生長68號日平均增長速在平均速度423879152-3紅三葉日平均增長速率變化Fig.2-3thechangesofaveragegrowthrateinRed1日）到結(jié)實（81日8月上旬株高達(dá)到最大，之2-556月間，4組材料的絕對高度趨勢線幾乎一致，紅三葉生長速率沒有明顯的差異。6月中旬以后，也就紅三葉新品系返青~分枝期生長速度為0.79cm/d，生長較快高于平均水平0.63cm/d，分枝~1.80cm/d2.28，開花~0.08cm/d也小于平均值0.21，返青~成熟期生長速度0.44cm/d比平均生長速度0.50cm/d小。紅三葉不同期生長速度進(jìn)行聚類分析，紅三葉新品系生長速度和西班牙22號、希臘17自

高

5-15-166-16-167- 8-110-日期m-2-4組間自然高度動態(tài)變化趨勢圖

第四

度

5-15-166-16-167- 8-110-日期m-2-5組間絕對高度動態(tài)變化趨勢圖

第四Fig.2-4Naturalheightdynamicchangesin Fig.2-5Absoluteheightdynamicchangesin.6℃，最低氣溫34.5℃的半干旱的中溫帶季風(fēng)氣候的呼和浩特和林格爾縣表現(xiàn)出極大的不適應(yīng)。參試材料的越冬率大小見表29，70份材料中第一年越冬率超過37.17%的有1322689566671號等8材料越冬率為0%2-970材料越Tab.2-9Thewinterratein70材越冬率材越冬率材越冬率材835679241 ，2，2由表2-10可知，第一年不開花的材料即晚花型紅三葉越冬率平均為62.43%，顯著2-10不同紅三葉生長類型的 Thewinterrateindifferentgrowthtypesofred類6的抗寒材料。該品系在內(nèi)中西部的耐寒性和適應(yīng)性表現(xiàn)突出，填補(bǔ)了內(nèi)乃至Pearson相關(guān)系數(shù)可知（2-11），（r=0.6557，晚花型越冬率明顯高于早花和中間類型。晚花型和天數(shù)也成顯著的正相關(guān)（r=0.3864，可見晚花型一般具有較長的期，屬晚熟型。晚花型和平著地正相關(guān)（r=0.3603，越冬率越高，期相對較長，生長發(fā)育緩慢的晚熟型比（r=0.36342-11Pearson關(guān)分Tab.2-11Pearson ysisonagronomic1---1--1-1Note:**verysignificantP＜0.01;*Significant利用早花晚花類型、越冬率、平均日增長速率以及天數(shù)等4項指標(biāo)進(jìn)行類平根據(jù)紅三葉種植當(dāng)年是否進(jìn)入開花結(jié)實的特性 葉、中間紅三葉和晚花紅三葉3類，以中間型為主。根據(jù)第二年期長短可將期屬中熟型，期74d，生長天數(shù)183d。紅三葉返青~分枝生長速度為0.63cm/d，分枝~開花2.28cm/d，開花~0.21cm/d，整個期平均生長速度為0.50cm/d。紅三葉新品系平均生長速度發(fā)育的關(guān)鍵時期，這個時期很大程度上影響著整個期的生長狀況，也決定著材料20d后的生長速率影響最大，抽穗后20d生長速率的增加能增加水稻產(chǎn)量，但不顯著[159]。70份材料中第一年越冬率超過37.17%~88.89%的有8較相近，紅三葉新品系是由內(nèi)牙克石自然分布的材料馴化而來，農(nóng)藝性狀與6740度以上地區(qū)的材料或者選擇抗寒性比較優(yōu)秀的晚花型6ADis4Be2C0圖2-6基于農(nóng)藝形狀的紅三葉聚類分2011 29352325圖2-6基于農(nóng)藝形狀的紅三葉聚類分Fig.2-6Dendrogramof ysisbasedonagriculturalcharactersforred雖然形態(tài)學(xué)性狀的變異往往與環(huán)境飾變密切相關(guān)，但是Turesson最早的生態(tài)型可以遺傳‖后由的生態(tài)學(xué)家Clausen證實，將不同生態(tài)型的植物移植于不同同生態(tài)型的植物有不同的遺傳，這是植物適應(yīng)自然環(huán)境的結(jié)果[161]。盡管還不能3-1。形態(tài)性狀中質(zhì)量性狀如，莖、葉、花的顏色、葉斑、莖70份，由于一些材料不能安全越冬，種植第二年（2011年）測定的部分指標(biāo)都是以37份材料為研究對象。3-1紅三葉 Themainmorphologicalcharactersandtheircriteriaforred形態(tài)性狀觀測記根頸粗度隨機(jī)取20株，測定根頸的橫切長度，取平均值根頸入土深度隨機(jī)取20株，測定根頸離地表的垂直距離，取平均值（cm） 支根數(shù)隨機(jī)取20株，測定支根的條數(shù)，取平均值（cm）根系顏色1＝黃白色；2＝黃褐色；3＝褐 隨機(jī)取20株，測定植株自然狀態(tài)下地表至植株頂端的最大長度，取平均值（cm） 隨機(jī)取20株，測定植株被拉直狀態(tài)下地表至植株頂端的最大長度，取平均值（cm） 隨機(jī)取20株，水平方向測定自然狀態(tài)下植株中心到頂端的最大長度，取平均值（cm） 隨機(jī)取20株，數(shù)每個植株的莖數(shù)，取平均值（cm） 開花期，隨機(jī)選取20株，每株5個莖，測定莖基部的直徑，取平均值（cm） （取材同上）測定由莖基部向上第3段莖節(jié)的直徑，取平均值（cm） （取材同上）測定由莖基部向上第3段莖節(jié)的長度，取平均值（cm） 自然高/絕對高0.45～0.65；4＝直立，自然高/絕對高＞0.65（王俊杰，2008）莖的顏 莖的被 葉面積及葉型

開花期，隨機(jī)選取20株，選取第35個葉片CI-202型葉面積葉斑變 隨機(jī)取20株，每株5個花序，測定花序基部至頂端的垂直距離，取平均值（cm） 隨機(jī)取20株，每株5個莖，測定每個的花序個數(shù)，取平均值 隨機(jī)取20株，每株5個花序，測定每個花序所含的小花數(shù)，取平均值（個） 花 長 寬 隨機(jī)取20粒，胚根朝下，種臍正面朝上，測定與種臍同一平面的最寬點，取平均值（cm） 隨機(jī)取1000粒，稱其重量，重復(fù)3次，取平均值（g） 顏 變異系數(shù)又稱標(biāo)準(zhǔn)差率‖，是衡量各觀測值變異程度的一個統(tǒng)計量。變異系數(shù)CV（%）=標(biāo)準(zhǔn)差/平均數(shù)×100CX等級指數(shù)值，參照RobinBortnem2003紅三葉顏色評價指數(shù)。CX=∑（每個級別的樣品數(shù)×對應(yīng)級別數(shù)）/總的樣品數(shù)，CX值反映該材料在各分級葉形指數(shù)(ShapefactorF)：也稱形狀因子，表示葉的形狀與圓形接近的程度Shannon’s多樣性指數(shù)分析：在計算Shannon’s多樣性指數(shù)時，采用數(shù)值性狀的分級數(shù)據(jù)。數(shù)值性狀的劃級方法如下，先計算參試材料總體平均數(shù)（X）和（S10級，從第一級[X<(X－2S)]到第十級[Xi>(X＋2S)]，每0.5S為一級，每一級的相對頻率用于計算多樣性指數(shù)。多樣性指數(shù)H=-∑Pi㏑Pi，式中Pi為某性狀第i級別內(nèi)的材料份數(shù)占總份數(shù)的百分比，㏑為自然對數(shù)。分分析、相關(guān)以及聚類分析，并用Excel2003做基本的統(tǒng)計計算和作圖。根系的顏色的差異除了受型限制外與環(huán)和生長發(fā)育階段、病害等密切相關(guān)自身生長發(fā)育不同階段根系的顏色會有別一般認(rèn)為隨著根系的生長發(fā)育顏色會逐漸加深，根的 和吸收能力逐漸降，衰老的根系顏色通常較深12。另外顏色的變 染如土壤線蟲[163]

3-1紅三葉根顏色變異及所占比Fig.3-1Redcloverrootcolorvariationand312.88%，41.67%45.45%，總體來說，紅三葉根系顏色主要以黃褐色和褐色根為主，紅三葉37份紅三葉根系基本都有較粗壯的根頸，根頸下方形成粗細(xì)相近的發(fā)化，結(jié)果見表3-2。3-2紅三葉根系基Tab.3-2Thebasiccharacteristicsofredclover根長1234578929.75~56.00cm3.00~10.33條。根頸粗的變異最大，變異系數(shù)37SAS系統(tǒng)聚類法2.6891478號，整29份材料，四個指標(biāo)都相紅三葉新品系根系主要以黃褐色為主，紅三葉新品系根頸粗平均為5.50cm，根5.67cm40.67cm6.00cm，被劃分在第四類群，聚類顯示紅三葉新品系根系與18，16，3，19，5號材料根系比較相似。1123注：1色莖，2綠色莖，3色Note:1purplestems,2purple-greenstems,3green3-2紅三葉莖的顏Fig.3- Stemcolorvariationinred綠莖和綠色相差不多，紫色莖最少，三種顏色的在70份材料中分布頻率分別約為30%左右的為紫-綠色莖，幾乎沒有紫色莖的出現(xiàn)（見圖3-3。其他材其他材紫 綠 紫-3-3紅三葉Fig.3-3Redclovernewlinestemcolorvariationanddistribution70間顏差大3在材的占（圖34的5的66，約1%的紫利3437211號材料莖的顏色相對于其他品種很深，主要以紫莖為主，有少部分紫綠莖，幾乎沒有綠莖的出現(xiàn)。、、、、、、、、、、1713份材料，莖的顏色較深以紫-18，17，、、、、、、、、、9、、、、、、、、、34、16、22、46、4926份材料，莖的顏15，19，45，51，54號等材料最為相似。各類群三種莖色分布頻率見圖3-4。分布頻率 3-4紅三葉莖顏色變異類型及所占比Fig.3-4Stemcolorvariationandpercentagein70red3-3不同地理來源紅三葉莖顏色的變Tab.3-3Redcloverstemcolorvariationindifferentgeographical材CX1北52南83西24中5東16洲77489亞5非214CX2.10~2.60之間，平均值達(dá)到了葉的中心，莖的顏色變異廣泛，遺傳資源比較豐富。莖的被毛通常認(rèn)為是植物保護(hù)的。三葉草莖的被毛情況通常以0無、1中、3-4紅三葉莖的被Tab.3-4Coattypesofsteminred2323參試紅三葉材料的被毛情況可分為3類，見表3-4。第一類，直立長柔毛型，莖上分布密集直立生長的柔毛，明顯的可以看到，70份材料中大多屬于這種類型，有中；第三類，混雜型，兩種被毛方式都存在，有16份材料，占到參試材料的22.86%。Tab.3-5Redcloverstemmorphologicalvariationand Tab.3-5Redcloverstemmorphologicalvariationand 材絕對高莖基部徑第三莖長二級側(cè)數(shù)(個12345789525%3.02~8.30cm2.73~7.40個，變異較小的莖基部直自然高度較小，莖基部直徑較粗。4、11、64號，突出特點為分枝數(shù)較多，第三莖節(jié)節(jié)間長較長，植株較高大。16，36號，分枝數(shù)較少，莖基部以及第三莖節(jié)直徑也較、、、、、、、、、69、63、2、5、22號，占40.50%；第二類，所占百分率所占百分率 圖3-5生長習(xí)性類型劃分及出現(xiàn)頻率Fig.3-5Thegrowthhabitanddistribution對莖的數(shù)量性狀以及莖的顏色和被毛特征11個指標(biāo)利用SAS類平均法進(jìn)行系統(tǒng)聚類，結(jié)果見圖3-6，66號紅三葉比較特殊，單獨距為一類。紅三葉新品系與俄羅斯56號莖的形態(tài)最為相近，其次與葡萄牙6號，埃塞俄比亞3號，25號，內(nèi)蒙古67號等比較相近。這些材料主要特點是莖色多為綠色，有直立長柔毛，半直8864w201563256728341722522931695236519352773694120426418113-6基于莖形態(tài)特征的聚類分析Fig.3-6Theclusteringysisbasedonthestemmorphological345Note:1nomark,2weakmarks,3middlemarks,4strongmarks,5verystrong3-7紅三葉葉斑強(qiáng)Fig.3-7Leafstripeintensityinred劃分為5個類型，分別為無斑、弱斑、中斑、強(qiáng)斑和非常強(qiáng)（3-7），結(jié)果顯示，70份材料中無斑、弱斑、中斑、強(qiáng)斑和非常強(qiáng)平均所占比例分別為13.90%，31.95%，42.95%，9.04%和2.17%，紅三葉葉片以中斑居多。材料間斑紋存在明顯的差異，見3-6，一部分材料整體斑紋較強(qiáng)，而一部分則斑紋較弱。7014份材其余材料無斑表型介于5%~30%之間。3-6葉斑形態(tài)變異類型及出現(xiàn)的頻Tab.3-6Leafmarkvariationandfrequencyin70材非常強(qiáng)CX北瑞3瑞瑞芬丹南希5希中黑德波西9英東歐續(xù)表3-來源區(qū)來源國材非常強(qiáng)CX824伊伊7亞洲東內(nèi)1內(nèi)非6南厄瓜多智智哥倫比----------6480%65，6660%和52.36%，巧合的是這三個材料都是來自亞洲西部，分別為別克斯坦、塔吉克斯坦、斯坦。由于這三個材料的來源還沒有確定，很有可能是無斑表型周期選擇的結(jié)果，