【生物】第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制課件

第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制本章主要內(nèi)容：氨基酸代謝調(diào)控機(jī)制核酸與核苷酸代謝調(diào)控機(jī)制抗生素代謝調(diào)控機(jī)制1第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制本章主要內(nèi)容：氨基酸代謝§1氨基酸代謝調(diào)控機(jī)制

代謝控制發(fā)酵是用遺傳學(xué)或其他生物化學(xué)的方法，人為地在DNA分子水平上改變和控制微生物的代謝，打破微生物正常的代謝調(diào)節(jié)，使有用產(chǎn)物大量生成和積累。氨基酸發(fā)酵和核酸發(fā)酵是典型的代謝控制發(fā)酵。2第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制§1氨基酸代謝調(diào)控機(jī)制代謝控制發(fā)酵是用遺傳學(xué)或其他生物化谷氨酸與瓜氨酸、鳥氨酸、精氨酸同屬于谷氨酸族氨基酸，其合成途徑是首先由-酮戊二酸生成谷氨酸，再進(jìn)一步合成鳥氨酸、瓜氨酸、精氨酸一、谷氨酸、鳥氨酸、瓜氨酸、精氨酸生物

合成途徑及其代謝調(diào)節(jié)機(jī)制葡萄糖→→→谷氨酸→鳥氨酸→瓜氨酸→精氨酸3第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制谷氨酸與瓜氨酸、鳥氨酸、精氨酸同屬于谷氨酸族氨基酸，其合成途谷氨酸屬“非必需”氨基酸，是體內(nèi)代謝的基本氨基酸之一。在谷氨酰胺合成酶催化下，能與氨反應(yīng)生成谷氨酰胺由尿排出，起到解除氨毒作用；它還參與腦內(nèi)蛋白質(zhì)和糖代謝，促進(jìn)氧化過程，改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能；在體內(nèi)它能轉(zhuǎn)化為丙酮或葡萄糖，因而升高血糖，減少糖原異生，從而減少脂肪分解，減少酮體。1.谷氨酸族氨基酸生物合成途徑及代謝調(diào)節(jié)機(jī)制谷氨酸的功能4第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制谷氨酸屬“非必需”氨基酸，是體內(nèi)代謝的基本氨基酸之一。1.谷肝昏迷預(yù)防；防止癲癇；減輕酮尿癥和酮血癥；胃酸不足；一種腦營養(yǎng)劑；食品保鮮劑。藥物保健品食品L-谷氨酸的用途5第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制肝昏迷預(yù)防；藥物保健品食品L-谷氨酸HMP途徑谷氨酸代謝途徑6第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制HMP途徑谷氨酸代謝途徑6第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制由葡萄糖生物合成谷氨酸的代謝途徑7第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制由7第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制EMP途徑HMP途徑TCA循環(huán)DCA循環(huán)CO2固定由葡萄糖生成谷氨酸的總反應(yīng)式：C6H12O6+NH3+O2→C5H9O4N+CO2+3H2O代謝途徑：8第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制EMP途徑HMP途徑由葡萄糖生成谷氨酸的總由二羧酸和三羧酸生成谷氨酸9第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制由二羧酸和三羧酸生成谷氨酸9第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制研究證明：谷氨酸生產(chǎn)菌種存在EMP途徑的全部酶和HMP途徑有關(guān)的酶TCA循環(huán)中的檸檬酸、順烏頭酸、異檸檬酸能定量地生成谷氨酸，其相應(yīng)的酶與谷氨酸合成有關(guān)以醋酸和乙醇為原料進(jìn)行谷氨酸發(fā)酵時(shí)，DCA循環(huán)是C4二羧酸的唯一補(bǔ)充來源；但是以葡萄糖為原料時(shí)，在谷氨酸生成期此循環(huán)應(yīng)關(guān)閉谷氨酸菌存在CO2固定生成草酰乙酸的PEP羧化酶和蘋果酸酶，與谷氨酸得率正相關(guān)10第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制研究證明：谷氨酸生產(chǎn)菌種存在EMP途徑的全部酶和HMP途大腸桿菌及枯草芽孢桿菌等從谷氨酸到精氨酸生物合成途徑及調(diào)節(jié)機(jī)制11第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制大腸桿菌及枯草芽孢桿菌等從谷氨酸到精氨酸生物合成途徑及調(diào)節(jié)機(jī)谷氨酸生產(chǎn)菌及酵母菌等從谷氨酸到精氨酸生物合成及代謝調(diào)節(jié)機(jī)制12第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制谷氨酸生產(chǎn)菌及酵母菌等從谷氨酸到精氨酸生物合成及代謝調(diào)節(jié)機(jī)制在黃色短桿菌中谷氨酸、天冬氨酸生物合成的調(diào)節(jié)機(jī)制2.谷氨酸代謝調(diào)節(jié)機(jī)制①谷氨酸脫氫酶②-酮戊二酸脫氫酶③磷酸烯醇丙酮酸羧化酶④檸檬酸合成酶NH4+13第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制在黃色短桿菌中谷氨酸、天冬氨酸生物合成的調(diào)節(jié)機(jī)制2.谷氨酸在微生物的代謝中，Glu比Asp優(yōu)先合成；合成過量時(shí)則抑制谷氨酸脫氫酶，使代謝轉(zhuǎn)向合成Asp；Asp過量時(shí)反饋抑制PEP羧化酶的活力，停止合成草酰乙酸。NH4+的導(dǎo)入不僅僅證明Glu是氮素同化發(fā)酵，它還會抑制Glu生成的逆反應(yīng)，因此當(dāng)NH4+存在時(shí)，葡萄糖的消耗速度很快，Glu的生成很高；但是當(dāng)生物素充足時(shí)，NH4+幾乎不影響糖代謝。14第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制在微生物的代謝中，Glu比Asp優(yōu)先合成；NH4+的導(dǎo)入Glu生產(chǎn)菌大多是生物素缺陷型，發(fā)酵時(shí)控制生物素亞適量，使細(xì)胞變形拉長，改變了細(xì)胞膜的通透性引起代謝失調(diào)使Glu得以積累。生物素貧乏時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的Glu含量少而且容易析出，而培養(yǎng)基中積累大量的Glu；生物素豐富時(shí)，培養(yǎng)基中幾乎不積累Glu，而細(xì)胞內(nèi)卻含有大量的Glu，且不易被析出。這說明生物素對細(xì)胞膜通透性有重要影響。15第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制Glu生產(chǎn)菌大多是生物素缺陷型，發(fā)酵時(shí)控制生物素亞適生物16第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制16第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制表面活性劑拮抗作用部位油酸缺陷型遺傳阻礙部位糖質(zhì)或醋酸為碳源的磷脂合成途徑甘油缺陷型的遺傳阻礙部位石蠟為碳源的磷脂合成途徑細(xì)菌細(xì)胞Glu排出控制機(jī)制17第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制表面活性劑拮抗作用部位油酸缺陷型遺傳阻礙部位糖質(zhì)或醋酸為碳源喪失或有微弱的-酮戊二酸脫氫酶活力，使-酮戊二酸不能繼續(xù)氧化；CO2固定能力強(qiáng)，使四碳二羧酸全部由CO2固定反應(yīng)提供，而不走乙醛酸循環(huán)；谷氨酸脫氫酶的活力很強(qiáng)，并喪失谷氨酸對谷氨酸脫氫酶的反饋抑制和反饋?zhàn)瓒?，同時(shí)，NADPH2再氧化能力弱，這會使-酮戊二酸到琥珀酸的過程受阻；有過量的NH4+存在，-酮戊二酸經(jīng)氧化還原共軛氨基化反應(yīng)而生成谷氨酸卻不形成蛋白質(zhì)，從而分泌泄漏于菌體外；同時(shí)，谷氨酸生產(chǎn)菌應(yīng)不利用體外的谷氨酸，使谷氨酸成為最終產(chǎn)物。3.谷氨酸高產(chǎn)菌模型特征18第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制喪失或有微弱的-酮戊二酸脫氫酶活力，使-酮戊二酸不能繼續(xù)從前圖還可以看出：生產(chǎn)菌株還應(yīng)該具有生物素合成缺陷、油酸合成缺陷和甘油合成缺陷等特點(diǎn)。19第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制從前圖還可以看出：19第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制-生物素缺陷型-油酸缺陷型-甘油缺陷型-溫度敏感缺陷型-其它缺陷型當(dāng)前Glu生產(chǎn)中的幾種缺陷型：20第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制-生物素缺陷型當(dāng)前Glu生產(chǎn)中的幾種缺陷型：20第四章生物谷氨酸——味精工業(yè)生產(chǎn)

味精是Glu單鈉鹽，學(xué)名：-氨基戊二酸一鈉，商品中有一分子結(jié)晶水COOHCNH2CH2CH2COOHCOONa·H2OCNH2CH2CH2COOHL-谷氨酸L-谷氨酸鈉（味精）HH21第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制谷氨酸——味精工業(yè)生產(chǎn)味精是Glu單鈉鹽，學(xué)名：-氨4.生產(chǎn)工藝流程：淀粉葡萄糖糖蜜稀釋蜜配料種子罐發(fā)酵罐玉米漿糖蜜磷酸二氫鉀硫酸鎂無菌空氣Fe2+、Mn2+NH3菌種22第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制4.生產(chǎn)工藝流程：淀粉葡萄糖糖蜜等電提取中和除鐵脫色濃縮、結(jié)晶離心干燥味精發(fā)酵罐Na2CO323第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制等電提取中和除鐵脫色濃縮、結(jié)晶離心干燥味谷氨酸族氨基酸的生物合成，是由葡萄糖開始，經(jīng)EMP途徑、HMP途徑、TCA循環(huán)、DCA循環(huán)和CO2固定等，首先合成谷氨酸，再從谷氨酸依次經(jīng)鳥氨酸、瓜氨酸生物合成精氨酸。谷氨酸→N-乙酰谷氨酸→→→鳥氨酸→瓜氨酸→→精氨酸GluOrnCitArg5.鳥氨酸發(fā)酵機(jī)制24第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制谷氨酸族氨基酸的生物合成，是由葡萄糖開始，經(jīng)EMP途徑、HM鳥氨酸發(fā)酵與瓜氨酸發(fā)酵的遺傳缺陷位置(谷氨酸棒桿菌為生產(chǎn)菌)25第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制鳥氨酸發(fā)酵與瓜氨酸發(fā)酵的遺傳缺陷位置25第四章生物產(chǎn)品代謝選育瓜氨酸缺陷型（Cit－）菌株，即喪失鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶，解除精氨酸的反饋抑制；向發(fā)酵液中提供瓜氨酸或精氨酸（亞適量），缺陷型才能生長；在瓜氨酸缺陷型（Cit－）的基礎(chǔ)上，再選育精氨酸結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株（如選育抗精氨酸氧肟酸ArgHx和抗D-精氨酸等），就能遺傳性的解除精氨酸的反饋調(diào)節(jié)。鳥氨酸生產(chǎn)菌選育模型26第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制選育瓜氨酸缺陷型（Cit－）菌株，即喪失鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶，解6.瓜氨酸生物合成與發(fā)酵機(jī)制（討論）27第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制6.瓜氨酸生物合成與發(fā)酵機(jī)制（討論）27第四章生物產(chǎn)品代鳥氨酸發(fā)酵與瓜氨酸發(fā)酵的遺傳缺陷位置(谷氨酸棒桿菌為生產(chǎn)菌)28第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制鳥氨酸發(fā)酵與瓜氨酸發(fā)酵的遺傳缺陷位置28第四章生物產(chǎn)品代謝精氨酸發(fā)酵不能用阻斷代謝流和營養(yǎng)缺陷型來進(jìn)行，而應(yīng)用抗反饋調(diào)節(jié)突變株，選育抗L-精氨酸結(jié)構(gòu)類似物突變株（如D-ArgR、ArgHx等），解除精氨酸自身調(diào)節(jié)，使精氨酸積累。7.精氨酸生物合成與發(fā)酵機(jī)制29第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制精氨酸發(fā)酵不能用阻斷代謝流和營養(yǎng)缺陷型來進(jìn)行，而應(yīng)用抗反饋調(diào)二、天冬氨酸、賴氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸

生物合成途徑與發(fā)酵機(jī)制天冬氨酸——Asp，C4H7O4N賴氨酸——Lys，C6H14O2N2蘇氨酸——Thr，C4H9O3N蛋氨酸——Met，C5H11O2SN異亮氨酸——Ile，C6H13O2N天冬氨酸與賴氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸同屬于天冬氨酸族的氨基酸30第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制二、天冬氨酸、賴氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸

生物合HMP途徑31第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制HMP途徑31第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制①天冬氨酸激酶（AK）②高絲氨酸脫氫酶（HD）③二氫吡啶-2,6-二羧酸（DDP）合成酶④高絲氨酸激酶⑤O-琥珀酰高絲氨酸轉(zhuǎn)琥珀酰酶⑥半胱氨酸脫硫化氫酶⑦蘇氨酸脫氨酶⑧天冬氨酸半醛脫氨酶⑨二氫吡啶-2,6-二羧酸（DDP）還原酶1.天冬氨酸族氨基酸的生物合成途徑葡萄糖→四碳二羧酸→32第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制①天冬氨酸激酶（AK）1.天冬氨酸族氨基酸的生物合成途徑葡2.天冬氨酸族氨基酸生物合成的代謝調(diào)節(jié)機(jī)制(1)大腸桿菌中天冬氨酸族氨基酸生物合成的調(diào)節(jié)機(jī)制33第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制2.天冬氨酸族氨基酸生物合成的代謝調(diào)節(jié)機(jī)制(1)大腸桿菌中在黃色短桿菌中賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸和異亮氨酸生物合成的代謝調(diào)節(jié)(2)谷氨酸棒桿菌、黃色短桿菌等天冬氨酸族氨基酸的代謝調(diào)節(jié)機(jī)制34第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制在黃色短桿菌中賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸(2)谷氨酸棒桿菌、黃優(yōu)先合成：⑴葡萄糖經(jīng)酵解途徑生成PYR，PYR經(jīng)CO2固定和氧化脫羧進(jìn)入TCA循環(huán)，生成草酰乙酸，再經(jīng)氨基化反應(yīng)生成Asp；⑵Met比Thr、Lys優(yōu)先合成，Thr比Lys優(yōu)先合成。天冬氨酸激酶是關(guān)鍵酶，AK是變構(gòu)酶，具有兩個變構(gòu)部位，可以與終產(chǎn)物L(fēng)ys和Thr結(jié)合，受終產(chǎn)物的反饋控制。35第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制優(yōu)先合成：⑴葡萄糖經(jīng)酵解途徑生成PYR，PYR經(jīng)CO2在黃色短桿菌、谷氨酸棒桿菌等微生物中，AK是單一的，并且受Lys和Thr的協(xié)同反饋抑制，反饋調(diào)節(jié)易于解除，使育種簡單化，所以常常被用作氨基酸發(fā)酵育種的出發(fā)菌株。黃色短桿菌的AK受Lys和Thr協(xié)同反饋情況36第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制在黃色短桿菌、谷氨酸棒桿菌等微生物中，AK是單一的，并且受L“代謝互鎖”乳糖發(fā)酵短桿菌中賴氨酸及其前體物生物合成的代謝調(diào)節(jié)37第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制“代謝互鎖”乳糖發(fā)酵短桿菌中賴氨酸及其前體物生物合成的代謝調(diào)在黃色短桿菌中天冬氨酸與乙酰CoA形成的平衡合成PC平衡合成：Asp和乙酰CoA形成平衡合成，當(dāng)乙酰CoA合成過量時(shí)，能解除Asp對PEP羧化酶的反饋抑制。38第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制在黃色短桿菌中天冬氨酸與乙酰CoA形成的平衡合成PC平衡L-天冬氨酸是酸性氨基酸，屬“非必需”氨基酸?？梢宰鳛镵+、Mg2+離子的載體向心肌輸送電解質(zhì)，從而改善心肌收縮功能，同時(shí)降低氧消耗，在冠狀動脈循環(huán)障礙缺氧時(shí)，對心肌有保護(hù)作用。參與鳥氨酸循環(huán)，促使氨和二氧化碳生成尿素，降低血液中氨和二氧化碳的量，增強(qiáng)肝臟功能，消除疲勞。新型甜味劑的原料。39第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制L-天冬氨酸是酸性氨基酸，屬“非必需”氨基酸。39第四章生

高產(chǎn)賴氨酸菌的遺傳標(biāo)記位置3.賴氨酸發(fā)酵機(jī)制（高絲氨酸脫氫酶缺失）AK40第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制高產(chǎn)賴氨酸菌的遺傳標(biāo)記位置3.賴氨酸發(fā)酵機(jī)制（高絲1）切斷或減弱支路代謝，選育高絲氨酸缺陷型（Hom－）突變株，或蛋氨酸和蘇氨酸或異亮氨酸缺陷型（Met－+Thr－、Ile－）突變株；2）解除Thr和Lys的協(xié)同反饋抑制作用，選育結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株，使賴氨酸大量積累，如：①S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸抗性株（AECr）②L-賴氨酸氧肟酸鹽抗性株（LysHxr）③蘇氨酸氧肟酸鹽抗性突變株（ThrHxr）等；3）增加Lys前體物Asp的量：切斷生成丙酮酸的支路，同時(shí)解除Asp對PEP羧化酶（即PC）的反饋抑制；選育丙氨酸缺陷型（Ala－）或溫度敏感突變株（tmps），中斷丙酮酸到Ala的反應(yīng)；選育AspHxr、磺胺類藥物抗性突變株；41第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制1）切斷或減弱支路代謝，選育高絲氨酸缺陷型（Hom－）突變株賴氨酸發(fā)酵育種所使用的一些結(jié)構(gòu)類似物42第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制賴氨酸發(fā)酵育種所使用的一些結(jié)構(gòu)類似物42第四章生物產(chǎn)品代謝4）在乳糖發(fā)酵短桿菌中，Lys的生物合成與亮氨酸（Leu）之間存在著“代謝互鎖”，即賴氨酸分支途徑的初始酶二氫吡啶-2,6-二羧酸（DDP）合成酶受Leu的反饋?zhàn)瓒簦ㄈ鐖D）選育Leu－+LeuHxr或Leu溫度敏感突變株乳酸發(fā)酵短桿菌中Lys與Leu生物合成間的相互關(guān)系43第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制4）在乳糖發(fā)酵短桿菌中，Lys的生物合成與亮氨酸（Leu）之⑴選擇亮氨酸缺陷型菌株；⑵選育抗亮氨酸結(jié)構(gòu)類似物突變株；⑶選育對苯醌或喹啉衍生物敏感株——這是一種尋找亮氨酸滲漏缺陷型菌株的育種方法。為解除代謝互鎖，可選育：44第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制⑴選擇亮氨酸缺陷型菌株；為解除代謝互鎖，可選育：44第⑴選擇丙氨酸缺陷型菌株；⑵選育抗天冬氨酸結(jié)構(gòu)類似物突變株；⑶選育適宜的CO2固定酶/TCA循環(huán)酶活性比的菌株。增加前體物的合成和阻塞副產(chǎn)物生成：45第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制⑴選擇丙氨酸缺陷型菌株；增加前體物的合成和阻塞副產(chǎn)物生添加豐富的生物素，既可以使Glu不排出體外，并使代謝流轉(zhuǎn)向Lys的合成，又能提高PEP羧化酶（PC）的活性，促使PEP生成草酰乙酸，再生成Asp。

選育溫度敏感突變株：如，乳糖發(fā)酵短桿菌AJ11093AJ1099在發(fā)酵前期于29～33℃生長良好，而到34℃以上時(shí)則不能生長，發(fā)酵積累賴氨酸鹽酸鹽。其它措施：46第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制添加豐富的生物素，既可以使Glu不排出體外，并使代謝選育；+：回復(fù)突變。某些賴氨酸產(chǎn)生菌及其產(chǎn)酸能力47第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制；+：回復(fù)突變。某些賴氨酸產(chǎn)生菌及其產(chǎn)酸能力47第四章生物L(fēng)ys的結(jié)構(gòu)類似物的作用：起到假反饋抑制作用。Lys的結(jié)構(gòu)類似物的結(jié)構(gòu)與Lys相似為AK所誤認(rèn)，與Thr一起在AK的變構(gòu)部位上結(jié)合，協(xié)同抑制酶的活性。但當(dāng)Lys的結(jié)構(gòu)類似物（AEC）單獨(dú)存在時(shí)，對酶活性沒有抑制作用。通過改變AK編碼的結(jié)構(gòu)基因，可以使AK對Lys及結(jié)構(gòu)類似物不敏感，即使在過量Thr存在時(shí)，該酶也不與Lys或結(jié)構(gòu)類似物結(jié)合，但酶的活性中心不變。（具有這一特性的的菌株叫做抗結(jié)構(gòu)類似物突變株或代謝調(diào)節(jié)突變株。）具有抗性并兼有營養(yǎng)缺陷型的菌株，Lys才能高產(chǎn)。48第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制Lys的結(jié)構(gòu)類似物的作用：起到假反饋抑制作用。48第四章賴氨酸工業(yè)化生產(chǎn)賴氨酸，Lysine，化學(xué)名稱2,6-二氨基乙酸化學(xué)組成C6H14O2N2CH2NH2CH2CH2CH2CH·NH2COOHL-賴氨酸Lys是人體必需的8種氨基酸之一產(chǎn)量在氨基酸中占第三位，僅次于谷氨酸和蛋氨酸49第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制賴氨酸工業(yè)化生產(chǎn)賴氨酸，Lysine，化學(xué)名稱2,6糖蜜配料滅菌發(fā)酵罐菌種斜面搖瓶種子種子罐壓縮空氣總過濾器分過濾器N,P,K,Mg提取、精制LysLys發(fā)酵工藝流程：50第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制糖蜜菌種斜面壓縮空氣N,P,K,Mg提取、精制Lys

溫度：發(fā)酵前期32℃中后期34℃pH：6.5～7.5

種齡和接種量：二級種子接種量約2%，種齡8～12h三級種子···10%，···6～28h

通風(fēng)供氧：Lys的最大生成量是在供氧充足、細(xì)菌呼吸充足的時(shí)候51第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制溫度：發(fā)酵前期32℃51第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制生物素：要充足，20～30g/L以上維生素B1：有促進(jìn)作用

醋酸：加入醋酸比單獨(dú)采用糖質(zhì)原料Lys產(chǎn)量高

硫酸銨：適當(dāng)增加，4%～4.5%

Cu2+：一定濃度的CuSO4·5H2O，可提高產(chǎn)量

流加糖和其它生長因子52第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制生物素：要充足，20～30g/L以上52第四章生物產(chǎn)品代發(fā)酵液→菌體分離→上清液→離子交換→真空濃縮離子分離←重結(jié)晶←粗結(jié)晶←離子分離←結(jié)晶結(jié)晶→干燥→Lys成品菌體→水洗→二次菌體分離→上清液飼料←菌體母液二次母液調(diào)pH，加入絮凝劑Lys提取與精制工藝：53第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制發(fā)酵液→菌體分離→上清液→離子交換→真空濃縮1）發(fā)酵液的處理：用草酸除去發(fā)酵液中的Ca3+，調(diào)節(jié)pH至2～32）菌體分離：用碟片式自動卸渣高速離心機(jī)，分離菌體和草酸鈣等3）離子交換吸附及洗脫：銨型陽離子交換樹脂，洗脫劑為氨水加氯化銨；用茚三酮檢查流出液，pH9.5～12，得率可達(dá)90%～95%4）真空濃縮：去除氨，并提高Lys含量，真空時(shí)溫度65℃，濃度22～23°Bé5）中和結(jié)晶：加入工業(yè)鹽酸，攪拌，pH5.2，自然冷卻結(jié)晶，至5℃結(jié)晶完全（粗結(jié)晶，含一分子結(jié)晶水的粗L-Lys鹽酸鹽）6）重結(jié)晶：用蒸餾水溶解，11～12°Bé，加入活性炭脫色，壓濾，再真空濃縮至22°Bé，再結(jié)晶、冷卻、離心分離并水洗7）干燥：60℃熱風(fēng)干燥，去結(jié)晶水，得到L-Lys鹽酸鹽，含水0.1%以下54第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制1）發(fā)酵液的處理：用草酸除去發(fā)酵液中的Ca3+，調(diào)節(jié)pH至4.蘇氨酸高產(chǎn)菌

的生化模型特

征（討論）異亮氨酸反饋控制55第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制4.蘇氨酸高產(chǎn)菌

的生化模型特

征切斷支路代謝，選育Met－、Lys－的突變株；選育抗Thr和Lys結(jié)構(gòu)類似物的突變株，遺傳性的解除Thr對高絲氨酸脫氫酶的反饋調(diào)節(jié)，以及遺傳性的解除Thr、Lys對天冬氨酸激酶的協(xié)同反饋抑制；切斷Thr進(jìn)一步代謝途徑，選育Ile－的突變株，或異亮氨酸滲漏突變株（IleL），或異亮氨酸缺陷回復(fù)突變株（Ile+）；增強(qiáng)Asp的生物合成。蘇氨酸高產(chǎn)菌的生化模型特征：56第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制蘇氨酸高產(chǎn)菌的生化模型特征：56第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵利用現(xiàn)代生物技術(shù)選育蘇氨酸生產(chǎn)菌⑴利用轉(zhuǎn)導(dǎo)和原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法選育Thr生產(chǎn)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)作用就是利用轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體為媒介，將供體菌的部分基因?qū)氲绞荏w菌中從而使受體均獲得供體菌的部分遺傳性狀的過程。特點(diǎn)：過程容易；易獲得優(yōu)良性狀；選育時(shí)間短。57第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制利用現(xiàn)代生物技術(shù)選育蘇氨酸生產(chǎn)菌⑴利用轉(zhuǎn)導(dǎo)和原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法大腸桿菌中天冬氨酸族氨基酸生物合成的調(diào)節(jié)機(jī)制58第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制大腸桿菌中天冬氨酸族氨基酸生物合成的調(diào)節(jié)機(jī)制58第四章生大腸桿菌野生型B1雙缺突變株B2（TDH－＋TD－）羥纈氨酸抗性標(biāo)記B3AKⅠ、HDⅠ反饋抑制脫敏株B4AKⅠ、HDⅠ去阻遏突變株B5AECr反饋抑制脫敏株B6B7B84種調(diào)節(jié)變異組合在一起的轉(zhuǎn)導(dǎo)子B9具有6種調(diào)節(jié)變異組合的轉(zhuǎn)導(dǎo)子B122次誘變帶上Thr－帶上Thr－2次轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)入解除AKⅠ和HDⅠ反饋?zhàn)瓒舻腂10基因?qū)虢獬鼳KⅠ和HDⅡ反饋?zhàn)瓒舻腂11基因發(fā)酵Thr達(dá)40g/LTDH——Thr脫氫酶TD——Thr脫氨酶AK——Asp激酶HD——Hom脫氫酶帶上羥纈氨酸抗性標(biāo)記木柱等：利用轉(zhuǎn)導(dǎo)和原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法選育Thr生產(chǎn)菌方法59第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制大腸桿菌野生型B1雙缺突變株B2（TDH－＋TD－）羥纈⑵利用原生質(zhì)體融合技術(shù)選育Thr生產(chǎn)菌60第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制⑵利用原生質(zhì)體融合技術(shù)選育Thr生產(chǎn)菌60第四章生物產(chǎn)品代⑶利用基因工程技術(shù)構(gòu)建Thr工程菌利用重組DNA技術(shù)構(gòu)建Thr工程菌株，即可采用簡單的鳥槍法單克隆，也可采用整個Thr操縱子的體外誘變及體外重組。最基本的方法是：將Thr生物合成途徑中起限速作用的限速酶AK和HD的基因連續(xù)在多拷貝的載體質(zhì)粒上并克隆化，使該基因進(jìn)行擴(kuò)增，通過發(fā)揮基因的基因擴(kuò)增效應(yīng)，排除生物合成中的“瓶頸”效應(yīng)，從而使Thr產(chǎn)量得以大大提高。61第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制⑶利用基因工程技術(shù)構(gòu)建Thr工程菌利用重組DNA技術(shù)構(gòu)建Th蘇氨酸的生物合成及蘇氨酸操縱子的結(jié)構(gòu)62第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制蘇氨酸的生物合成及蘇氨酸操縱子的結(jié)構(gòu)62第四章生物產(chǎn)品代謝將Thr合成酶系HD基因、HK基因、thr合成基因組入L-Lys產(chǎn)生菌谷氨酸棒桿菌中，由積累L-Lys62g/L變成積累L-Thr51g/L。據(jù)田邊制藥公司報(bào)道，將改良后不再受反饋抑制的蘇氨酸合成酶（AK、HD）基因?qū)敫牧夹驼迟|(zhì)沙雷氏菌（Serratiamarcescens），以蔗糖為碳源進(jìn)行發(fā)酵，積累蘇氨酸60mgml。63第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制將Thr合成酶系HD基因、HK基因、thr合成基因組入L-L高產(chǎn)蛋氨酸菌的遺傳標(biāo)記位置解除反饋抑制；切斷支路代謝；切斷Met向下反應(yīng)的通路；增加前體物的合成。5.蛋氨酸發(fā)酵機(jī)制（討論）（SAM）64第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制高產(chǎn)蛋氨酸菌的遺傳標(biāo)記位置解除反饋抑制；5.蛋氨酸發(fā)酵機(jī)制三、分支鏈氨基酸族氨基酸生物合成途徑與纈

氨酸、亮氨酸、異亮氨酸發(fā)酵機(jī)制亮氨酸Leu，C6H13O2N異亮氨酸Ile，C6H13O2N纈氨酸Val，C5H11O2N65第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制三、分支鏈氨基酸族氨基酸生物合成途徑與纈

1.分支鏈氨基酸族氨基酸生物合成途徑和代謝調(diào)節(jié)機(jī)制天冬氨酸葡萄糖生物合成途徑66第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制1.分支鏈氨基酸族氨基酸生物合成途徑和代謝調(diào)節(jié)機(jī)制天冬氨酸分支鏈氨基酸族氨基酸生物合成途徑調(diào)節(jié)L-蘇氨酸脫氨酶L-蘇氨酸TDASTD——L-蘇氨酸脫氨酶AS——-乙酰乳酸合成酶67第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制分支鏈氨基酸L-蘇氨酸L-蘇氨酸TDASTD——L-蘇氨酸脫1）分枝鏈氨基酸生物合成的優(yōu)先順序?yàn)椋篒le、Leu、Val2）TD受Ile的強(qiáng)烈反饋抑制；3）AS受Val的反饋抑制；4）-異丙基蘋果酸合成酶受Leu的反饋抑制；5）分枝鏈氨基酸合成酶系的各個酶的生成，受這三種末端氨基酸——Ile+Val+Leu的多價(jià)阻遏。分枝鏈氨基酸生物合成途徑和自我調(diào)節(jié)的特點(diǎn)：68第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制1）分枝鏈氨基酸生物合成的優(yōu)先順序?yàn)椋篒le、Leu、

添加D-蘇氨酸、α-溴丁酸、α-氨基丁酸等前提物，繞過反饋調(diào)節(jié)；添加的D-蘇氨酸脫氫酶是誘導(dǎo)酶，不受反饋抑制，并選育Ile結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株，從而解除Ile對TD和對AS的反饋調(diào)節(jié)；由于添加D-蘇氨酸，則會使Ile、Val、Leu在菌體內(nèi)的貯存平衡受到破壞，使Ile大量積累；注意控制培養(yǎng)基中Val和Ｇ亞適量，并選育Leu－突變株；增加前體物質(zhì)的生成量。2.異亮氨酸代謝調(diào)節(jié)的解除及育種途徑69第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制2.異亮氨酸代謝調(diào)節(jié)的解除及育種途徑69第四章生物

切斷支路代謝，選育Ile－＋Leu－突變株；解除Ile、Val、Leu對合成酶系（AS）的多價(jià)阻遏（篩選結(jié)構(gòu)類似物突變株）；解除Val對α-乙酰乳酸合成酶的反饋抑制。Val生產(chǎn)菌的遺傳標(biāo)記：Ile－＋Leu－＋α-ABr＋2-TAr＋CMr（-氨基丁酸）（2-噻唑丙氨酸）3.纈氨酸育種機(jī)制（討論）（“共系的生物合成途徑”——分別為共同的酶所催化）70第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制（-氨基丁酸）（2-噻唑丙氨酸）3.纈氨酸育種

首先必須解除Leu對-異丙基蘋果酸合成酶的反饋抑制，選育抗Leu結(jié)構(gòu)類似物(如2-TA)突變株；選育抗Val結(jié)構(gòu)類似物(如2-AB)的突變株；切斷支路代謝，選育Ile－突變株。4.亮氨酸發(fā)酵機(jī)制（討論）71第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制4.亮氨酸發(fā)酵機(jī)制（討論）71第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵四、芳香族氨基酸生物合成途徑與色氨酸、

苯丙氨酸、酪氨酸的發(fā)酵機(jī)制1.芳香族氨基酸生物合成途徑色氨酸Trp苯丙氨酸Phe酪氨酸Tyr分子中都含有苯環(huán)72第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制四、芳香族氨基酸生物合成途徑與色氨酸、

苯丙1.芳香族氨基酸的生物合成途徑73第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制1.芳香族氨基酸的生物合成途徑73第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)從4-磷酸赤蘚糖與磷酸烯醇丙酮酸合成3-脫氧-D-阿拉伯糖型庚酮糖-7-磷酸（DAHP）到分支酸，是Phe、Tyr和Trp的共同途徑；從分支酸到預(yù)苯酸（PPA），是Phe和Tyr的共同途徑；在分枝酸處，傾向于優(yōu)先合成氨茴酸；在預(yù)苯酸處，傾向于優(yōu)先合成對羥苯丙酮酸。即優(yōu)先合成順序是：Trp-Tyr-Phe。合成途徑特點(diǎn)：74第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制從4-磷酸赤蘚糖與磷酸烯醇丙酮酸合成3-脫氧-D-阿拉伯糖型大腸桿菌中有三種DAHP合成酶谷氨酸棒桿菌中，在芳香族氨基酸生物合成途徑中受調(diào)節(jié)控制的關(guān)鍵酶：DAHP合成酶（DS）、分枝酸變位酶（CM）、預(yù)苯酸脫氫酶（PD）、預(yù)苯酸脫水酶（PT）和氨茴酸合成酶（AS）黃色短桿菌中有一種DAHP合成酶，代謝調(diào)節(jié)較易控制2.芳香族氨基酸的代謝調(diào)控機(jī)制75第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制大腸桿菌中有三種DAHP合成酶谷氨酸棒桿菌中，在芳香族氨大腸桿菌中芳香族氨基酸生物合成途徑與代謝控制①DAHP合成酶②分支酸變位酶③PPA脫氫酶④PPA脫水酶⑤氨茴酸合成酶76第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制大腸桿菌中芳香族氨基酸生物合成途徑與代謝控制①DAHP合成酶在黃色短桿菌中芳香族氨基酸生物合成的調(diào)節(jié)機(jī)制DS－DAHP合成酶CM－分支酸變位酶PD－預(yù)苯酸脫氫酶PT－預(yù)苯酸脫水酶AS－氨茴酸合成酶77第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制在黃色短桿菌中芳香族氨基酸生物合成的調(diào)節(jié)機(jī)制DS－DAHP合色氨酸生產(chǎn)菌的遺傳標(biāo)記位置3.色氨酸發(fā)酵機(jī)制（討論）78第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制色氨酸生產(chǎn)菌的遺傳標(biāo)記位置3.色氨酸發(fā)酵機(jī)制（討論）78第色氨酸代謝調(diào)控機(jī)制（大量生成和積累色氨酸）：切斷支路代謝，選育苯丙氨酸和酪氨酸雙重缺陷型（phe-+tyr-）的突變株；然后遺傳性的解除色氨酸自身的反饋抑制和阻遏及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸對DAHP合成酶的反饋調(diào)節(jié)；選育色氨酸多重結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株；在發(fā)酵過程中限量添加苯丙氨酸和酪氨酸。79第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制色氨酸代謝調(diào)控機(jī)制（大量生成和積累色氨酸）：切斷支路代謝苯丙氨酸生產(chǎn)菌的遺傳標(biāo)記位置4.苯丙氨酸和酪氨酸發(fā)酵機(jī)制（討論）80第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制苯丙氨酸生產(chǎn)菌的遺傳標(biāo)記位置4.苯丙氨酸和酪氨酸發(fā)酵機(jī)制（苯丙氨酸代謝調(diào)控機(jī)制：首先切斷芳香族氨基酸生物合成向酪氨酸和色氨酸的代謝支路，選育色氨酸和酪氨酸雙重缺陷型（tyr-+trp-）突變株；然后遺傳性的解除苯丙氨酸自身對預(yù)苯酸脫水酶和分支酸變位酶的反饋抑制和阻遏，及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸對DAHP合成酶的反饋調(diào)節(jié)；選育苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸多重結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株；發(fā)酵中限量添加酪氨酸和色氨酸，使苯丙氨酸大量積累。81第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制苯丙氨酸代謝調(diào)控機(jī)制：首先切斷芳香族氨基酸生物合成向酪氨§2核酸類物質(zhì)的代謝調(diào)控機(jī)制一、核苷酸的生物合成途徑核酸發(fā)酵是在氨基酸發(fā)酵基礎(chǔ)上的進(jìn)一步深化和發(fā)展的代謝控制發(fā)酵1.嘌呤核苷酸的全合成途徑（“從無到有”途徑）IMP－肌苷酸SAICAR－5-氨基-(N-琥珀基)代氨甲AMP－腺苷酸酰咪唑核苷酸GMP－鳥苷酸AICAR－5-氨基-4-氨甲酰咪唑核苷酸XMP－黃苷酸PRPP－磷酸核糖焦磷酸SAMP－腺苷琥珀酸PRA－5-磷酸核糖胺（次黃嘌呤核苷一磷酸）（腺嘌呤核苷一磷酸）（黃嘌呤核苷一磷酸）82第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制§2核酸類物質(zhì)的代謝調(diào)控機(jī)制一、核苷酸的生物合成途徑嘌呤核苷酸的全合成途徑(1)——5'-IMP的生成（“從無到有”）83第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制嘌呤核苷酸的全合成途徑(1)——5'-IMP的生成（“84第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制84第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制嘌呤核苷酸的全合成途徑(2)——AMP和GMP的互變（枯草芽孢桿菌）85第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制嘌呤核苷酸的全合成途徑(2)——AMP和GMP的互變（枯各種微生物合成IMP的途徑是一樣的,但是從IMP分別生成AMP和GMP的途徑是不同的。從IMP開始，

枯草桿菌以IMP為中心分出兩條環(huán)形路線，由此AMP與GMP可以互相轉(zhuǎn)換；

產(chǎn)黃短桿菌分出的兩條路線不是環(huán)形，而是單項(xiàng)分枝的，AMP與GMP不能互相轉(zhuǎn)換86第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制各種微生物合成IMP的途徑是一樣的,但是從IMP分別生成AM枯草桿菌的嘌呤核苷酸生物合成途徑葡萄糖→→→5-磷酸核糖→（磷酸核糖焦磷酸）（5-磷酸核糖胺）（5-胺基-4-（N-琥珀基）代氨甲酰咪唑核苷酸）（5-胺基-4-氨甲酰咪唑核苷酸）肌苷酸黃苷酸鳥苷酸腺苷酸琥珀酰腺苷酸87第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制枯草桿菌的嘌呤核苷酸生物合成途徑葡萄糖→→→5-磷酸核糖→（產(chǎn)黃短桿菌的嘌呤核苷酸生物合成途徑88第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制產(chǎn)黃短桿菌的嘌呤核苷酸生物合成途徑88第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)2.嘧啶核苷酸的全合成途徑（略）89第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制2.嘧啶核苷酸的全合成途徑（略）89第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)3.核苷酸生物合成的補(bǔ)救途徑當(dāng)全合成受阻時(shí)，微生物可從培養(yǎng)基中取得完整的嘌呤或嘧啶，和戊糖、磷酸通過酶的作用直接合成單核苷酸所以稱為“補(bǔ)救途徑”。嘌呤堿基、核苷和核苷酸之間能通過分段合成互相轉(zhuǎn)變其中最重要的反應(yīng)是：堿基+PRPP5'-核苷酸+PPi核苷酸焦磷酸化酶90第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制3.核苷酸生物合成的補(bǔ)救途徑當(dāng)全合成受阻時(shí)，微生物可從培養(yǎng)嘌呤核苷酸的補(bǔ)救合成途徑——嘌呤堿基、核苷和核苷酸的相互轉(zhuǎn)換91第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制嘌呤核苷酸的補(bǔ)救合成途徑91第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制IMP合成系的代謝控制及嘌呤核苷酸互變的代謝控制二、嘌呤核苷酸的代謝調(diào)節(jié)機(jī)制92第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制IMP合成系的代謝控制及嘌呤核苷酸互變的代謝控制二、嘌呤核苷嘌呤核苷酸可以分為GMP、IMP等6-羥基嘌呤核苷酸與ADP、AMP等的6-氨基嘌呤核苷酸兩類。如果同時(shí)添加這兩類嘌呤核苷酸（GMP+AMP或IMP+ADP），抑制作用就會相乘的提高，這種現(xiàn)象叫做“合作終產(chǎn)物抑制”。93第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制嘌呤核苷酸可以分為GMP、IMP等6-羥基嘌呤核苷酸與ADP嘌呤核苷酸相互轉(zhuǎn)換系的代謝控制調(diào)節(jié)位點(diǎn)A①②③④⑤⑥PR-ATP1-（5'-磷酸核糖基）-三磷酸腺苷⑥AMP脫氨酶⑤SAMP裂解酶④SAMP合成酶③XMP氨化酶②GMP還原酶①IMP脫氫酶94第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制嘌呤核苷酸相互轉(zhuǎn)換系的代謝控制調(diào)節(jié)位點(diǎn)A①②③④⑤⑥PR-A以IMP為中心的兩個循環(huán)，各個反應(yīng)是不可逆的IMP脫氫酶受GMP的反饋抑制，也被GMP阻遏；GMP還原酶受ATP的反饋抑制。同樣的，AMP抑制SAMP合成酶，GTP抑制AMP脫氨酶SAMP→AMP反應(yīng)的供能體為GTP，XMP→GMP反應(yīng)的供能體為ATP95第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制以IMP為中心的兩個循環(huán)，各個反應(yīng)是不可逆的IMP脫氫酶受G根據(jù)上述調(diào)節(jié)機(jī)制，當(dāng)細(xì)胞中的GMP水平提高到一定程度時(shí)，從IMP的代謝流就自動地轉(zhuǎn)向AMP方面；反之，當(dāng)細(xì)胞的AM水平高到一定程度時(shí)，從IMP的代謝流就自動地轉(zhuǎn)向GMP方面。另一方面，核苷酸的代謝也與組氨酸的生物合成有關(guān)：AICAR→IMP→AMP→ATP→PR-ATP→AICAR形成一個循環(huán)，由PRATP經(jīng)咪唑甘油磷酸生成組氨酸。假入組氨酸過剩，則不走此途徑。96第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制根據(jù)上述調(diào)節(jié)機(jī)制，當(dāng)細(xì)胞中的GMP水平提高到一定程度時(shí)，從I三、肌苷和肌苷酸高產(chǎn)菌的選育模型1）切斷兩條支路代謝，選育腺嘌呤缺陷型（Ade－）和黃嘌呤缺陷型（Xan－）的雙重缺陷型突變株；2）通過限量腺嘌呤和鳥嘌呤來解除腺嘌呤系和鳥嘌呤系化合物對IMP生物合成的酶的反饋抑制；3）進(jìn)一步選育抗腺嘌呤、鳥嘌呤類似物和（或）抗磺胺劑突變株，從遺傳上解除正常代謝控制；（選育抗性突變株時(shí)，應(yīng)采用喪失腺嘌呤脫氫酶（dea－）的菌株為出發(fā)菌株）97第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制三、肌苷和肌苷酸高產(chǎn)菌的選育模型1）切斷兩條支路代謝，選育腺4）選育Mn2+脫敏突變株（MnINS），或控制培養(yǎng)基中Mn2+的濃度，解除細(xì)胞膜滲透型障礙。5）生產(chǎn)肌苷時(shí)，肌苷酸酶活性要強(qiáng)，而肌苷酸化酶要越弱越好，以使生成的肌苷不再分解。模型：Ade－+Xa－+dea－+GMPred－+8AGr（或8AXr、ARr）+SGr+NP－+ARr+Smr（符號見《微生物工程工藝原理》p.116）98第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制4）選育Mn2+脫敏突變株（MnINS），或控制培養(yǎng)基中Mn5-IMP發(fā)酵應(yīng)具備的條件：選擇肌苷酸酶弱或喪失的出發(fā)菌株；切斷IMP向下的兩條支路，使IMP大量生成和積累；選育結(jié)構(gòu)類似物雙重抗性突變株；限量添加Mn2+，解除細(xì)胞膜滲透型障礙。肌苷酸發(fā)酵機(jī)制99第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制肌苷酸發(fā)酵機(jī)制99第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制鳥苷酸發(fā)酵機(jī)制(討論)100第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制鳥苷酸發(fā)酵機(jī)制(討論)100第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制END101第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制END101第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制我勸一個草率結(jié)婚的朋友離婚。她平靜的告訴我，如果說當(dāng)初魯莽結(jié)婚是個錯誤。那么，現(xiàn)在草率離婚是一錯再錯。這位朋友后來還是離婚了，大家一致認(rèn)為她的行為很理性。

同樣的故事正在互聯(lián)網(wǎng)搜索巨頭谷歌身上發(fā)生，但是谷歌選擇了草率“離婚”。

飲鴆止渴

由于急于抑制蘋果iphone手機(jī)翻天覆地的產(chǎn)業(yè)沖擊，谷歌采取急功近利的粗糙型開放策略。飲鴆止渴的策略一時(shí)取得了成果。市場研究公司尼爾森最近公布的數(shù)據(jù)顯示，在通過VerizonWireless、AT&T和SprintNextel三大運(yùn)營商經(jīng)銷后，谷歌Android手機(jī)在美國市場上的銷售量已經(jīng)超過iPhone。另一家市場研究公司iSuppli甚至認(rèn)為，全球范圍內(nèi)使用Android操作系統(tǒng)的手機(jī)數(shù)量將在2012年超過蘋果iPhone。

表面繁華的背后，是Android生態(tài)系統(tǒng)的一團(tuán)糟，谷歌正在為自己的粗放型開放策略買單。

用戶對谷歌手機(jī)的態(tài)度從開始的好奇、后來的猶豫，變成強(qiáng)烈的批評。“大多Android手機(jī)程序都是垃圾，亂七八糟的”，一位手機(jī)發(fā)燒友迅速投奔了iphone的陣營：“同樣的植物人大戰(zhàn)僵尸游戲，在谷歌手機(jī)和iphone手機(jī)上的體驗(yàn)簡直沒法比”

混亂，還是混亂。一切一切的亂象，折射出谷歌已經(jīng)失去對Android生態(tài)系統(tǒng)的控制。這一切的根源，我的判斷是開放策略初期過于寬松，導(dǎo)致失去控制權(quán)?；靵y的生態(tài)系統(tǒng)表現(xiàn)在用戶手機(jī)上，就是應(yīng)用程序的混亂和粗燥。

一錯再錯

為此，谷歌開始采取對策。最近，有國內(nèi)廠商稱新的Android3.0開始關(guān)閉應(yīng)用程序的API(應(yīng)用程序編程接口)，統(tǒng)一Android界面。這意味著，谷歌將放棄其初始開放策略，開始封閉管理。

粗看之下，谷歌認(rèn)識到自己的錯誤。既然是過度開放導(dǎo)致的錯誤，那么收緊開放尺度是很自然的邏輯，無懈可擊。但我認(rèn)為，谷歌倉促收緊開放策略仍然是個錯誤。打個比喻。如果過度開放的政策是草率結(jié)婚，那么草率的封閉就是草率離婚。這么判斷的原因很簡單，谷歌把Android開放出去的那一天，Android已經(jīng)不屬于谷歌。谷歌沒有認(rèn)識到這一點(diǎn)，還以為Android只是自己的。

合作伙伴對谷歌封閉政策的反應(yīng)加強(qiáng)了我的判斷結(jié)論。經(jīng)濟(jì)觀察報(bào)報(bào)道，國內(nèi)第一家生產(chǎn)基于Android平臺手機(jī)的設(shè)計(jì)公司創(chuàng)楊通信，近日已經(jīng)被迫出售。創(chuàng)楊通信負(fù)責(zé)人給出的出售理由是，“因?yàn)椴辉敢飧十?dāng)炮灰而選擇放棄?！?/p>

按照目前Android3.0將統(tǒng)一界面的想法，未來的手機(jī)市場將出現(xiàn)毫無差異化的產(chǎn)品。這對于企業(yè)來說，幾乎意味著不可避免的價(jià)格戰(zhàn)。利潤空間的微薄，導(dǎo)致合作伙伴生存環(huán)境惡劣。于是大量退出幾乎是一種必然。

除了為合作伙伴找到新的利益空間，谷歌還將面臨開放陣營精神層面的聲討，這對谷歌的挑戰(zhàn)會更大。如果說谷歌為了自己競爭的私利利用了開放，贏得了名聲。那么，谷歌不能一腳把開放踢開，他現(xiàn)在還需要為這種名聲買單。

如果只顧自己收網(wǎng)，谷歌會被面臨鋪天蓋地的道德譴責(zé)。谷歌，希望你準(zhǔn)備好了，三思而行。

木桶效應(yīng)就是指一個水桶無論有多高，它盛水的高度取決于其中最低的那塊木板。這在選購手機(jī)的時(shí)候也同樣適用。尤其是很多用戶在購買手機(jī)的時(shí)候，都會專注于某一個參數(shù)，比如要求處理器主頻要高達(dá)1GHz，但一部手機(jī)的整機(jī)表現(xiàn)是由多個因素組成，所以在購買手機(jī)的時(shí)候一定要從整體的角度上來看一部手機(jī)的性除了處理器主頻以外，其實(shí)還有很多影響整機(jī)表現(xiàn)的元素，比如運(yùn)行內(nèi)存(RAM)、機(jī)身內(nèi)存(ROM)、操作系統(tǒng)、廠商對系統(tǒng)的優(yōu)化都會有所影響。不過在很多用戶眼中，這幾項(xiàng)卻遠(yuǎn)沒有處理器主頻重要。而如果忽略這幾項(xiàng)的話，可能買到一個主頻很高，但整機(jī)性能卻仍然不令人滿意的機(jī)型。

用戶在選機(jī)過程中切勿只關(guān)注一個硬件參數(shù)，這樣很可能并不能買到一款理想的機(jī)型，就算買的手機(jī)主頻再高，運(yùn)行內(nèi)存低的話仍然無法同時(shí)運(yùn)行數(shù)個程序、機(jī)身內(nèi)存小的話則無法把太多的軟件安裝到機(jī)器上，這對整機(jī)耗電和運(yùn)行速度方面都有所影響、而廠商優(yōu)化更是決定著一部手機(jī)的穩(wěn)定性和部分運(yùn)行速度。綜上所述，大家在選購手機(jī)的時(shí)候一定要綜合考慮一款手機(jī)的硬件規(guī)格。除此之外，也不要把硬件看的太過重要，就比如蘋果iPhone3GS在硬件配置上并不出眾，但卻在操控手感以及軟件資源上目前難有機(jī)型企及。更高分辨率能獲得更為逼真細(xì)膩的顯示效果，所以對于屏幕的分辨率絕大多數(shù)人都會偏向于分辨率更高的機(jī)型。但對于筆者所說的高分辨率未必是好事會有所懷疑。其實(shí)這里說的高分辨率“不好”更多是指采用非主流的高分辨率機(jī)型。在此前，就有幾款“悲情”機(jī)型在分辨率上吃了不小的虧。

大名鼎鼎的HTCDiamond就是一款頗具代表意義的機(jī)型，Diamond上市的手機(jī)市場還處于QVGA時(shí)代、只有少數(shù)旗艦機(jī)皇采用WVGA這樣級別的屏幕，由于HTCDiamond卻采用了VGA這一過渡型的分辨率，而也正是因?yàn)檫@一點(diǎn)，Diamond很多軟件都未有支持或無法完美運(yùn)行，可謂是一個不小的遺憾。除此之外，曾經(jīng)非常經(jīng)典的

102第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制我勸一個草率結(jié)婚的朋友離婚。她平靜的告訴我，如果說當(dāng)初魯莽結(jié)附贈人生心語人生太短，聰明太晚人生太短，聰明太晚(1)

我們都老得太快

卻聰明得太遲把錢省下來，等待退休后再去享受結(jié)果退休后，因?yàn)槟昙o(jì)大，身體差，行動不方便，哪里也去不成。錢存下來等養(yǎng)老，結(jié)果孩子長大了，要出國留學(xué)，要創(chuàng)業(yè)做生意，要花錢娶老婆，自己的退休金都被拗走了。人生太短，聰明太晚(2)

當(dāng)自己有足夠的能力善待自己時(shí)，就立刻去做，老年人有時(shí)候是無法做中年人或是青少年人可以做的事，年紀(jì)和健康就是一大因素。小孩子從小就告訴他，養(yǎng)你到高中，大學(xué)以后就要自立更生，要留學(xué)，創(chuàng)業(yè)，娶老婆，自己想辦法，自己要留多一點(diǎn)錢，不要為了小孩子而活我們都老得太快卻聰明得太遲，我的學(xué)長去年喪妻。這突如其來的事故，實(shí)在叫人難以接受，但是死亡的到來不總是如此。學(xué)長說他太太最希望他能送鮮花給他，但是他覺得太浪費(fèi)，總推說等到下次再買，結(jié)果卻是在她死后，用鮮花布置她的靈堂。這不是太蠢愚了嗎？！等到......、等到.....，似乎我們所有的生命，都用在等待。人生太短，聰明太晚(3)

「等到我大學(xué)畢業(yè)以后，我就會如何如何」我們對自己說「等到我買房子以后！」「等我最小的孩子結(jié)婚之后！」「等我把這筆生意談成之后！」「等到我死了以后」人人都很愿意犧牲當(dāng)下，去換取未知的等待；犧牲今生今世的辛苦錢，去購買后世的安逸在臺灣只要往有山的道路上走一走，就隨處都可看到「農(nóng)舍」變「精舍」，山坡地變靈塔，無非也是為了等到死后，能圖個保障，不必再受苦。許多人認(rèn)為必須等到某時(shí)或某事完成之后再采取行動。明天我就開始運(yùn)動，明天我就會對他好一點(diǎn)，下星期我們就找時(shí)間出去走走；退休后，我們就要好好享受一下。人生太短，聰明太晚(4)

然而，生活總是一直變動，環(huán)境總是不可預(yù)知，現(xiàn)實(shí)生活中，各種突發(fā)狀況總是層出不窮。身為一個醫(yī)生，我所見過的死人，比一般人要來得多。這些人早上醒來時(shí)，原本預(yù)期過的是另一個平凡無奇的日子，沒想到一個意料之外的事；交通意外、腦溢血、心臟病發(fā)作等等。剎那間生命的巨輪傾覆離軌，突然闖進(jìn)一片黑暗之中。那么我們要如何面對生命呢？我們毋需等到生活完美無瑕，也毋需等到一切都平穩(wěn)，想做什么，現(xiàn)在就可以開始做起。

一個人永遠(yuǎn)也無法預(yù)料未來，所以不要延緩想過的生活，不要吝于表達(dá)心中的話，

因?yàn)樯辉谝凰查g。人生太短，聰明太晚(5)

記?。〗o活人送一朵鮮花，強(qiáng)過給死人送貴重的花圈，每個人的生命都有盡頭，許多人經(jīng)常在生命即將結(jié)束時(shí)，才發(fā)現(xiàn)自己還有很多事沒有做，有許多話來不及說，這實(shí)在是人生最大的遺憾。別讓自己徒留「為時(shí)已晚」的空余恨。逝者不可追，來者猶未卜，最珍貴、最需要實(shí)時(shí)掌握的「當(dāng)下」，往往在這兩者蹉跎間，轉(zhuǎn)眼錯失。人生太短，聰明太晚(6)

人生短暫飄忽，包得有一首小詩這樣寫：高天與原地，悠悠人生路；行行向何方，轉(zhuǎn)眼即長暮。正是道盡了人生如寄，轉(zhuǎn)眼即逝的惶恐。有許多事，在你還不懂得珍惜之前已成舊事；有許多人，在你還來不及用心之前

已成舊人。

遺憾的事一再發(fā)生，但過后再追悔「早知道如何如何」是沒有用的，「那時(shí)候」已經(jīng)過去，你追念的人也已走過了你。人生太短，聰明太晚(7)

一句瑞典格言說：「我們老得太快，卻聰明得太遲?！共还苣闶欠癫煊X，生命都一直在前進(jìn)。人生并未售來回票，失去的便永遠(yuǎn)不再得到。將希望寄予「等到方便的時(shí)間才享受」人生太短，聰明太晚(8)

我們不知失去了多少可能的幸福不要再等待有一天你「可以松口氣」，或是「麻煩都過去了」。生命中大部分的美好事物都是短暫易逝的，享受它們、品嘗它們，

善待你周圍的每一個人，別把時(shí)間浪費(fèi)在等待所有難題的「完滿結(jié)局」上。-找回迷失的生命-死亡也許是免費(fèi)的─但是，卻要付出生命的代價(jià)。-勸大家一句話：把握當(dāng)下，莫等待。成功人生的十堂課

人生成功第1課

做一個終生學(xué)習(xí)的人，離開學(xué)校并不意味著學(xué)習(xí)就結(jié)束了。

學(xué)習(xí)可以成為一種生活方式，幫助你發(fā)揮最大的潛能。

我們從未停止學(xué)習(xí)，總會有新的，有趣的東西等待我們?nèi)グl(fā)現(xiàn)。

學(xué)習(xí)新的技能可能讓人感到有一點(diǎn)恐懼，但每當(dāng)我們在個人學(xué)習(xí)上停滯不前時(shí)，我們都需要去學(xué)習(xí)新的東西。

積極地尋求支援和建議，突破停滯期。

103第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制附贈人生心語103第四章生物產(chǎn)品代謝調(diào)控發(fā)酵機(jī)制【大學(xué)課件】出品

版權(quán)歸原作者所有!參加一些培訓(xùn)，進(jìn)修，夜校－任何新的興趣都將會有助于發(fā)展你的優(yōu)勢。

多看，多聽，讓你的頭腦保持活躍?；畹嚼希瑢W(xué)到老。人生成功第2課

令自己感到沮喪的秘訣就是用空閑時(shí)間去煩惱自己是否快樂。所以不要費(fèi)事去想它！摩拳擦掌干起來吧。你將熱血沸騰，你會頭腦清醒。很快，在你身體中的這種高漲的積極人生觀將把煩惱從你的頭腦中趕出去。

行動起來，忙碌起來。這是世界上最便宜的一種藥，也是最好的一種。

人生成功第3課

在困境中尋找成功的希望

逆境是一所最好的學(xué)校。每一次失敗，每一次打擊，每一次損失，都蘊(yùn)育著成功的萌芽，都教會我在下一次有更出色的表現(xiàn)。我再也不會逃避現(xiàn)實(shí)，也不會拒絕從以往的錯誤中獲取經(jīng)驗(yàn)，我不再因此而促成自己的失敗。因?yàn)槲抑?，寶玉不?jīng)磨礪就不能發(fā)光，沒有，我也不能完善自我。

現(xiàn)在我知道，靈魂倍受煎熬的時(shí)刻，也正是生命中最多選擇與機(jī)會的時(shí)刻。任何事情的成敗取決于我在尋求幫助時(shí)是抬起頭還是低下頭。無論何時(shí)，當(dāng)我被可怕的失敗擊倒，在最初的陣痛過去之后，我都要想方設(shè)法將苦難變成好事。偉大的機(jī)遇就在這一刻閃現(xiàn)－這苦澀的根必將迎來滿園芬芳！我將一直在困境中尋找成功的希望。人生成功第4課

沒有人可以使你感到自卑

我選擇自我感覺良好，這樣我能更加開放地學(xué)習(xí)。如果人們給我負(fù)面的回應(yīng)或是批評我做的事情，我不會認(rèn)為他們所說的就表明我是一個“差勁的”人。我堅(jiān)信自尊由我掌控，這讓我毫無戒心地去聽取別人的反饋，想看看是否有我可以學(xué)習(xí)的東西。

我們每天都有兩種選擇。我們可以感到自己很棒，也可以感到自己很差勁。難道有人會選擇后者嗎？

人生成功第5課

緊緊抓住夢想

我們每個人都有夢想。我們每個人都希望能發(fā)自內(nèi)心地相信自已有一種特殊的天賦，相信自己能發(fā)揮重要的作用，相信自己能以一種特殊的方式感動他人，相信自己能夠把世界變得更加美好。

在一生中，我們都曾經(jīng)對自己渴望并追求的生活品質(zhì)抱有憧憬。然而，對我們大多數(shù)人來說，這些憧憬在日常生活的成規(guī)和挫敗中已經(jīng)變得如此渺茫，以到于我們甚至不再努力去實(shí)現(xiàn)它們。對太多人來說，夢想已經(jīng)遠(yuǎn)離，隨之遠(yuǎn)離的還有塑造我們命運(yùn)的意愿。很多人已經(jīng)推動了堅(jiān)定的信念，而正是堅(jiān)定的信念為勝利者創(chuàng)造了優(yōu)勢。

我們所要做的就是重拴夢想，并實(shí)現(xiàn)夢想，讓我們每個人都記住，并去運(yùn)用深藏在自己身上的無限潛能。

人生成功第6課

毅力無法替代

世界上沒有任何東西可以替代毅力。才干不可以，無所作為的能人十分普遍；天分不可以，碌碌無為的天才盡人皆知;教育不可以，受過良好教育的沒落者更是隨處可見。只要有毅力和決心，就是無所不能的。

毅力并不總是意味著永遠(yuǎn)堅(jiān)持做同一件事。它意味著無論你做任何事情，你都要立刻全心投入，竭盡全力；它意味著先做艱苦的工作，再去期待隨之而來的滿足和回報(bào)。它意味著開心地工作，渴望更多的知識和進(jìn)步。它意味著多打幾個電話，多夏裝幾里路，多除草，早起床，意味著總是尋求更好的方式去做你在做的事情。毅力就是經(jīng)歷考驗(yàn)和過失的成功。人生成功第7課

駐足片刻聞花香

在現(xiàn)代生活的忙忙碌碌中，人們很少會停下來欣賞自然的美。

問問自己，你有多少次傾聽過鳥兒的歌唱。你最近一次抬頭仰望閃耀的星空又是在什么時(shí)候？

時(shí)光飛逝，人生苦短。不要忘記駐足聞聞花香。我們在急于謀生的過程中，往往忽視了我們生活的品質(zhì)。多少次，你聽見人們?yōu)檫@為那說“我忙死了?！倍嗫上О?！有一天，當(dāng)他們真的找到時(shí)間能夠駐足片刻聞花香時(shí)，可能已經(jīng)太遲了。人生成功第8課

加入到微笑者和贊美者的行列來

當(dāng)你對別人，別人也會對你報(bào)以，你自然會感覺很棒。即使他有對你報(bào)以，你也會感覺很棒，因?yàn)槟阏J(rèn)識到世界上最貧窮的人就是從不微笑的人，當(dāng)你對那個人微笑，你立刻變得更加富有。

贊美也是這個道理。當(dāng)你真誠地毛病抑或恭維一個人時(shí)，他將立刻受益，更喜歡自己。當(dāng)你讓別人感覺更好時(shí)，你自己也會感覺更好。

人生成功第9課讓自己快樂。

調(diào)查表明，我們當(dāng)中70%的人在生活中時(shí)間有臨床性的抑郁現(xiàn)象。

如今我們有這么多的機(jī)遇，為什么我們還這么不快樂呢？

人們嘗試各種東西：金錢，權(quán)利，事業(yè)，婚姻，離婚，酒精，搖滾甚至毒品，但我們大多數(shù)人只是想要得到一樣?xùn)|西－快樂。

快樂是人的一種自然的身心狀態(tài)；我們只要去相信快樂，讓自己感受快樂。

要宣稱：我應(yīng)當(dāng)?shù)玫娇鞓?。說出來，唱出來，喊出來。

優(yōu)先考慮快樂，讓快樂成為你最重要的事情。

對你所擁有的一切抱以感激之情吧。人生成功第10課我擁有無與倫比的想象力

現(xiàn)在我將通過這種神奇的力量得到我想要的。如果我害怕發(fā)表演講，我就想象自己在公眾場合無所畏懼，充滿信心；如果我在病魔的煎熬，我就想象我以前健康的樣子；如果我感到貧窮，我就想象我將要富有。

現(xiàn)在我明白了：人類惟一的限制就是想象力。我之所以沒有成功，原因就在于我不知道如何使用我的想象力?，F(xiàn)在，我精通這個技巧，我將從中受益。最大的回報(bào)將是成功和愈加快樂。你會管理時(shí)間嗎?

如何讓自己一天的時(shí)間不止24小時(shí)呢?這里有一些總結(jié):你會管理時(shí)間嗎?

（1）1.對目標(biāo)、任務(wù)、會議等事件分別按優(yōu)先級進(jìn)行排序；2.從優(yōu)先級最高的事物著手；3.和拖延做斗爭，如果事情重要，從現(xiàn)在開始做；4.把大的、艱難的任務(wù)細(xì)分為小的、容易的部分；5.為自己創(chuàng)造一小時(shí)的寧靜，哪怕這需要很強(qiáng)的意志力，或者有時(shí)不起作用；你會管理時(shí)間嗎?

（2）6.找到一個隱蔽的地方，如圖書館或空閑的辦公室；7.當(dāng)你有重要的事情要處理時(shí)，學(xué)會對別人說“不”；8.學(xué)會委派別人做事；9.歸納相似的事情，把它們放在一起處理；10.減少例行事務(wù)：它們不值得花費(fèi)過多時(shí)間。縮短低價(jià)值的事件。拋開沒有價(jià)值的信件和文書工作。委派別人完成、減少或推遲優(yōu)先級很低的任務(wù)；你會管理時(shí)間嗎?

（3）11.避免完美主義。記住80/20定律；12.避免做出過多許諾。對你在有限時(shí)間內(nèi)能完成的工作持現(xiàn)實(shí)態(tài)度；13.不要把時(shí)間表排得滿滿的，為自己留下一定機(jī)動時(shí)間應(yīng)付突發(fā)事件；14.設(shè)置時(shí)間限制。例如，做某些決定時(shí)，不應(yīng)超過3分鐘；15.聚精會神地做手頭的事情；你會管理時(shí)間嗎?

（4）16.處理重要事情時(shí)，使用大塊的時(shí)間；17.迅速處理困難的事情，等待和拖延不會使它們變?nèi)菀祝?8.文書工作爭取只處理一次；19.在行動以前，徹底地思索整件工作；20.第一次就做好。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的

成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（1）

1：找方法，不找借口。2：遇到挫折時(shí)，對自己說“太棒了”。3：不說消極的話，不落入消極的情緒，一旦出現(xiàn)立即正面處理。4：隨時(shí)用零碎時(shí)間做零碎的事。5：寫下來，不要太依靠腦袋記憶。6：隨時(shí)記錄靈感。7：守時(shí)8：把重要的觀念方法寫下來，并隨時(shí)提醒自己。9：走路時(shí)，比平時(shí)快30%，肢體語言要健康，有力，不懶惰，不萎靡。10：每天自我反省一次。11：每天堅(jiān)持一次運(yùn)動。12：開會坐在前排。13：微笑。14：說話時(shí)，聲音有力。15：說話之前，先考慮對方的感受16：每天有意識或真誠地贊美別人3次17:不要用訓(xùn)斥指責(zé)的口吻跟別人說話.18:每天做一件分外事.19:節(jié)儉.20:恪守誠信,說到做到.成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（2）“好的習(xí)慣讓人立于不敗之地，壞的習(xí)慣則讓人從成功的寶座上跌下來”。拿破侖希爾認(rèn)為，

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聯(lián)系QQ：910670854保羅·蓋蒂的這句話很有道理。有一段時(shí)期，蓋蒂抽煙抽得很兇。一天，他去法國度假的途中，在一個小旅館投宿。晚上下起了大雨，地面特別泥濘，開了好幾個鐘頭的車之后，蓋蒂實(shí)在是累極了。吃過晚飯，他就回到自己的房間里，睡著了。但是清晨時(shí)分蓋蒂突然醒了過來，他很想抽支煙，于是他就打開了燈，很自然的伸手去摸他一般都會放在床頭的煙，但是沒有。他下了床，到衣服的口袋里去找，也沒有。于是他又在行李袋里找，結(jié)果他又一次失望了。他知道這個時(shí)候旅館的酒吧和餐廳早就關(guān)門了。他想，這個時(shí)候把不耐煩的門房叫過來，實(shí)在是不可能。現(xiàn)在他唯一能得到香煙的方法就是穿好衣服，到火車站去，但是那還在6條街之外呢。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（3）看來情形并不樂觀，外面還下著雨。他的汽車也停在離旅館還有一段距離的車房里。而且，在他住店的時(shí)候，別人也提醒過他了。車房的門是午夜關(guān)，第二天早上6點(diǎn)才開門，現(xiàn)在能叫到出租車的機(jī)率也相當(dāng)于零。顯然，要是他真的迫切地需要一支煙，那么他只能在雨里走到黑暗中。抽煙的欲望不斷地折磨著他。于是，他下了床，脫下睡衣，穿好衣服，準(zhǔn)備出去。正在他伸手拿雨衣的時(shí)候，他突然笑了起來，笑自己傻。他突然覺得，自己的行為多荒唐可笑。蓋蒂站在那里，心里不停地想著，一個所謂的知識分子，一個商人，一個認(rèn)為自己有足夠的智慧可以對別人下命令的人，居然在三更半夜要離開舒適的旅館，冒著大雨走上好幾條街去買香煙。蓋蒂也是生平第一次注意到，他現(xiàn)在早就養(yǎng)成了一個壞習(xí)慣，那就是為了一個不好的習(xí)慣，他可以放棄極大的舒適?？磥?，這個習(xí)慣對他并沒有什么好處，于是，他的頭腦立刻就清醒了過來，很快他就做出了決定。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（4）他已經(jīng)決定好了，就走到桌子旁邊把那個煙盒團(tuán)起來扔出去，然后重新?lián)Q上睡衣，回到舒服的床上。心里懷著一種解脫，甚至是一種勝利的感覺，很滿足地關(guān)上燈，合上了眼睛。在窗外的雨聲里，他進(jìn)入了一個從來沒有過的深沉的睡眠。自從那個晚上之后，他再也沒抽過一根煙，也再沒有想過要抽煙。蓋蒂說，他并不是想用這件事來指責(zé)那些有抽煙習(xí)慣的人。但是他經(jīng)?；貞浤翘焱砩系那樾危皇菫榱吮硎?，按照他當(dāng)時(shí)的情況，他差點(diǎn)被一種惡習(xí)俘虜。經(jīng)常做一件事就會形成習(xí)慣，而習(xí)慣的力量是難以抗拒的。但是人類還有一種潛藏的緩沖能力，也不容小覷。既然人有可能養(yǎng)成一種習(xí)慣，那肯定他也有能力改掉這種習(xí)慣。還有些人說，奇怪的是，養(yǎng)成好習(xí)慣很難，但是一個壞習(xí)慣卻在不知不覺中就已經(jīng)形成了。但是，事實(shí)并非如此，這還要看一個人的毅力。不管怎么說，習(xí)慣終歸是習(xí)慣，并沒有合理的理論說壞習(xí)慣要比好習(xí)慣更容易養(yǎng)成。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（5）動作敏捷或遲緩只是個時(shí)間的問題，一個人要么習(xí)慣了準(zhǔn)時(shí)，要么他就會習(xí)慣遲到。一個準(zhǔn)時(shí)的人，總會體會到這種習(xí)慣給他帶來的好處，無論是約會，會議，還是什么別的方面的承諾。如果別人請你吃飯，你遲到了，那就會給主人和其他的客人造成不便。你可能會因此而變得很不受歡迎，以后人家都不會再請你吃飯了。拿破侖希爾認(rèn)為，對商人來說，準(zhǔn)時(shí)是一項(xiàng)特別寶貴的資產(chǎn)。俗話說得好，“時(shí)間就是金錢”，這句話永遠(yuǎn)是正確的，現(xiàn)在這個時(shí)代里，這個原則比以前更加重要?，F(xiàn)代企業(yè)的步調(diào)是一日千里，分秒必爭。主管和高級職員的每日安排都是滿滿的，因?yàn)樗麄兛蓻]有多余的時(shí)間可以浪費(fèi)，就像生產(chǎn)線不能耽擱一樣。守信對生意人來說，是個難得的品德，最有希望成功的商人和公司，他們一定是準(zhǔn)時(shí)接受定單，準(zhǔn)時(shí)回復(fù)并交貨，提供服務(wù)，準(zhǔn)時(shí)付款，準(zhǔn)時(shí)還債。如果等時(shí)間已過去了，訂貨還沒到，那顧客下次可能就不找你了。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（6）節(jié)儉是另外一種可以養(yǎng)成的習(xí)慣，對天生節(jié)儉的人來說，這個習(xí)慣給他帶來的成功的機(jī)會要比別人多。而習(xí)慣了節(jié)儉的人，他只知道在乎時(shí)就要注意節(jié)減開支和成本。受用一生的教誨：職場10只魔戒N條箴言

第１只魔戒第一條箴言：習(xí)慣仿佛像一根纜繩，我們每天給它纏上一股新索，要不了多久，它就會變得牢不可破。第二條箴言：人類所有優(yōu)點(diǎn)都要變成習(xí)慣才有價(jià)值，即使"愛"這樣一個永恒的主題，你也必須通過不斷的修煉，變成你的習(xí)慣，才真正會化為你的行動。第三條箴言：很多好的觀念、原則，我們"知道"是一回事，但知道了是否能"做到"是另一碼事。這中間必須架起一座橋，這橋便是習(xí)慣。第四條箴言：科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，一個習(xí)慣的養(yǎng)成需要２１天的時(shí)間，這２１天是個平均數(shù)，但習(xí)慣一旦養(yǎng)成就將終生受用。第五條箴言：任何一個習(xí)慣的培養(yǎng)都不會是輕而易舉的，因此一定要遵循循序漸進(jìn)、由淺入深、由近及遠(yuǎn)、由漸變到突變的原則。第２只魔戒第一條箴言：人生來是簡單的，和文明打交道之后變得復(fù)雜了，陷入了某種復(fù)雜的旋渦中無法自拔，這些羈絆使人忘記人性的最終追求是平靜、簡單、自由。

第二條箴言：不經(jīng)過復(fù)雜的簡單是一種蒼白，我曾經(jīng)很人為地把金錢放在一邊它卻不安分，但今天當(dāng)我駕馭了金錢，它就能很安分地呆在一邊。第三條箴言：要鍛煉一個人的財(cái)商，讓他具有富人心態(tài)，首先他確實(shí)要學(xué)會放棄，同時(shí)也要學(xué)會克服，要學(xué)會走出很多障礙和陰影。第四條箴言：財(cái)商教育的根本目的是讓人們獲得自由，增加收入、減少財(cái)務(wù)問題的初衷是減少人們在金錢上的虛榮心和攀比風(fēng)。第五條箴言：財(cái)商教育要解決人類面對金錢的兩大問題：恐懼與貪婪。而為了生活穩(wěn)定這個假象，人們常常淪為金錢的奴隸。第六條箴言：對于金錢，不是說你要成為它的主人，而是要做到與之和諧、平等，因?yàn)樗从车氖悄阕约?，所以對它要多一分寬容。第３只魔戒第一條箴言：成功的實(shí)質(zhì)就是獲得自由度，就是當(dāng)你想當(dāng)?shù)娜?，做你想做的事，去你想去的地方，說你想說的話。第二條箴言：世上沒有懶惰的人，只有沒有目標(biāo)的人。世界上最貧窮的人就是沒有目標(biāo)的人，因?yàn)檫B"夢想"都沒有，還會擁有什么？第三條箴言：只有明確而具體的目標(biāo)才可衡量，而只有可衡量的目標(biāo)才可能達(dá)到。第四條箴言：付出就表示富有，索取就是貧窮，快行動起來，用行動表現(xiàn)你的"富有"。第五條箴言：心態(tài)、目標(biāo)、時(shí)間管理三者的集中點(diǎn)就是在行動上，三者的表現(xiàn)特征也是"行動"。它們共同形成"知行合一"的統(tǒng)一體。第４只魔戒第一條箴言：人的一生就是不斷地闖入一個又一個圈子并不斷爭取承認(rèn)的過程。第二條箴言：在西方社會，特別是在北美，只有那些樹立自我推銷和成功意識的人，才有可能贏得機(jī)會與成功。第三條箴言：國際化人才不是一個地理意義上的概念，而是文化、心理層面的概念。是否是國際化人才取決于一個人的涵養(yǎng)、知識構(gòu)成和思維模式。第四條箴言：創(chuàng)業(yè)的失敗率是非常高的，在美國，每年有幾十萬人開公司，每年也有幾十萬家公司倒閉，所以創(chuàng)業(yè)只適合一部分人。第五條箴言：我時(shí)常摸著跳動的心口，數(shù)著那一下一下的脈搏，計(jì)算著我的生命長河究竟能卷起多少浪花。我要讓短暫的生命，爆發(fā)出火花。第六條箴言：命運(yùn)不是機(jī)遇，而是一種選擇。命運(yùn)從來都不是一種可以等到的東西，而是一件需要去完成的事情。第５只魔戒第一條箴言：不管你對成功如何定義，積極總是有價(jià)值的。積極不一定成功，但消極肯定失敗。第二條箴言：成功學(xué)的最大的特征就是強(qiáng)調(diào)標(biāo)準(zhǔn)化和量化，把認(rèn)為說不清楚、不可琢磨的東西都變成可琢磨、可操作的東西。第三條箴言：成功絕對有捷徑，當(dāng)然它的捷徑絕對不是整個過程，這個捷徑告訴我們的是必須按照最