HIV抗體檢測與質量控制培訓課件

HIV抗體檢測與質量控制HIV抗體檢測與質量控制滋病毒（人類免疫缺陷病毒）艾滋病毒（即人類免疫缺陷病毒）是一種逆轉錄病毒，它具有極強的迅速變異能力，這一特征不僅使人體的免疫系統(tǒng)難以抵御其侵害，而且給特效治療藥物和預防用疫苗的研制帶來困難。艾滋病毒直接侵犯人體的免疫系統(tǒng)，破壞人體的細胞免疫和體液免疫。它主要存在于感染者和病人的體液（如血液、精液、陰道分泌物、乳汁等）及多種器官中，它可通過含HIV的體液交換或器官移植而傳播。滋病毒（人類免疫缺陷病毒）艾滋病毒（即人類免疫缺陷病毒）是一病毒現(xiàn)狀

在世界范圍內導致了近1200萬人的死亡，超過3000萬人受到感染。在感染后會整合入宿主細胞的基因組中，而抗病毒治療并不能把病毒根除。在2004年底，全球有約四千萬被感染并與人類免疫缺陷病毒共同生存的人，流行狀況最為嚴重的仍是撒哈拉以南非洲。1986年7月25日，世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布公報，國際病毒分類委員會會議決定，把艾滋病病毒改稱為人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）簡稱HIV。病毒現(xiàn)狀在世界范圍內導致了近1200萬人的死亡，超過300病毒特點

HIV病毒主要攻擊人體的輔助T淋巴細胞系統(tǒng)；一旦侵入機體細胞，病毒會和細胞整合在一起終生難以消除；病毒基因變化多樣；廣泛存在于感染者的血液、精液、陰道分泌物、唾液、尿液、乳汁、腦脊液、有神經癥狀的腦組織液，其中以血液、精液、陰道分泌物中濃度最高；對外界環(huán)境的抵抗力較弱，對乙肝病毒有效的消毒方法對艾滋病病毒消毒也有效；感染者潛伏期長、死亡率高；艾滋病病毒的基因組比已知任何一種病毒基因都復雜。

病毒特點HIV病毒主要攻擊人體的輔助T淋巴細胞系統(tǒng)；一旦侵體外生存

人類免疫缺陷病毒在人體外生存能力極差，不耐高溫，抵抗力較低，離開人體不易生存，常溫下只可生存數(shù)小時至數(shù)天。HIV對熱敏感。在56℃條件下30分鐘即失去活性，但在室溫保存7天，仍保持活性。體外生存人類免疫缺陷病毒在人體外生存能力極差，不耐高溫，抵滅活方法

國際衛(wèi)生組織推薦對艾滋病病毒滅活加熱100℃持續(xù)20分鐘，效果較理想。滅活方法國際衛(wèi)生組織推薦對艾滋病病毒滅活加熱100℃持續(xù)2

病毒形態(tài)人類免疫缺陷病毒直徑約120納米，大致呈球形。

病毒形態(tài)人類免疫缺陷病毒直徑約120納米，大致呈球形。

致病機制HIV選擇性的侵犯帶有CD4分子，主要有T淋巴細胞、單核巨噬細胞、樹突狀細胞等。

致病機制HIV選擇性的侵犯帶有CD4分子，主要有T淋傳播途徑

HIV感染者是傳染源，曾從血液、精液、唾液、尿液、陰道分泌液、眼淚、乳汁等分離得HIV。性接觸傳播血液傳播

母嬰傳播傳播途徑HIV感染者是傳染源，曾從血液、精液、唾液、尿液、

疾病診斷HIV抗體篩查試驗ELISA試驗化學發(fā)光法快速檢測補充試驗抗體確證試驗：免疫印跡試劑（WB）和條帶免疫試驗（RIBA）核酸試驗：核酸定性和核酸定量試驗

疾病診斷HIV抗體篩查試驗HIV抗體檢測目的HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據特殊需要進行的體檢等。以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點人群和一般人群。HIV抗體檢測目的HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等HIV抗體篩查樣品

血清/血漿/全血濾紙干血斑口腔黏膜滲出液尿液HIV抗體篩查樣品

血清/血漿/全血篩查試劑

國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準有效期內酶聯(lián)免疫試劑應批批檢合格選擇敏感性和特異性高的試劑篩查試劑

國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準篩查方法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）化學發(fā)光或免疫熒光試驗（CIA/IFA）：采用發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測定結果快速檢測（RT）及其它檢測試驗

篩查方法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）HIV抗體檢測試劑（第三代）：檢測HIV-1/2抗體HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑（第四代）：可同時檢測血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體用酶標儀測定結果有效試驗的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）HIV抗體檢測試劑（第三代）：ELISA試驗中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試劑盒本身的原因）測定的重復性差1.加樣本及試劑量不準2.加樣過快，孔間發(fā)生污染3.加錯樣本4.加樣本和試劑時，加在孔壁上部非包被區(qū)5.溫育時間、洗板、顯色時間不一致6.酶標儀濾光片問題ELISA試驗中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試ELISA試驗中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試劑盒本身的原因）白板（陽性對照不顯色）1.漏加酶結合物2.洗液配制問題，量筒不干凈含酶抑制物3.漏加顯色劑A或B4.終止液當顯色劑使用全部板孔都有顯色1.洗板不干凈2.加底物的吸頭被酶污染3.洗板液受酶污染4.由于儀器或加樣頭造成的交叉污染ELISA試驗中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試ELISA測定中的干擾因素內源性干擾因素外源性干擾因素ELISA測定中的干擾因素內源性干擾因素內源性干擾因素

人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、醫(yī)源性誘導的抗體、自身抗體、溶菌酶、磷脂、藥物小分子等內源性干擾因素外源性干擾因素常常是由于血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、細菌污染、標本貯存時間過長、凝集不全、反復凍融等外源性干擾因素常常是由于血標本的采集、貯存等不當所致。如標本分析ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結果時，需綜合考慮試劑因素、操作因素和標本因素等。分析ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結果時，需綜合考慮試ELISA法結果判斷臨界值概念:將檢測的陽性和（或）陰性對照的OD值代入計算公式計算出來的判斷陽性和陰性結果的界值判斷標準:標本OD值與臨界值的比值大于等于1(S/CO≥1)為陽性注意:不同廠家、不同方法臨界值計算公式不同ELISA法結果判斷臨界值概念:將檢測的陽性和（或）陰性對酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）優(yōu)點：準確性高、價格低廉、判斷結果標準客觀、結果便于記錄和保存用途：流行病學監(jiān)測及臨床大量標本的檢測酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）優(yōu)點：準確性高、價格低廉、判斷化學發(fā)光或免疫熒光試驗采用發(fā)光或熒光底物既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體酶或熒光標記的HIV抗原或抗體，加發(fā)光或熒光底物用發(fā)光儀或熒光儀測定結果化學發(fā)光或免疫熒光試驗采用發(fā)光或熒光底物（1）免疫滲濾試驗：斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗以硝酸纖維膜為載體HIV抗原點狀固定在膜上加待檢樣品陽性結果在膜上抗原部位顯示出有色斑點有效試驗的質控點必須顯色快速檢測（RT）及其它檢測試驗（1）免疫滲濾試驗：斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗快速檢斑點免疫膠體金快速診斷試驗斑點免疫膠體金快速診斷試驗（2）免疫層析試驗：以硝酸纖維膜為載體HIV抗原線狀固定在膜上待檢樣品（血液、唾液或尿液）沿著固相載體遷移陽性結果在膜上抗原部位顯示出有色條帶有效試驗的質控帶必須顯色第四代快速試劑（SD）：可區(qū)分抗原抗體的檢測（2）免疫層析試驗：以硝酸纖維膜為載體HIV抗體檢測與質量控制培訓課件全血樣品加50ul樣品于樣品墊中手指血方法靜脈血方法加一滴緩沖液15分鐘內讀取結果快速檢測（RT）及其它檢測試驗全血樣品手指血方法靜脈血方法加一滴緩沖液15分鐘內讀取結果快病人條質控條病人條質控條HIV抗體檢測與質量控制培訓課件快速檢測（RT）及其它檢測試驗優(yōu)點:快速單份標本檢測不需額外試劑或設備操作簡便缺點:肉眼判斷較主觀價格較貴結果不易保存（建議拍照保存）快速檢測（RT）及其它檢測試驗優(yōu)點:HIV篩查試劑的選擇檢測目的實驗設施條件價格其他：檢測數(shù)量、標本用量、復檢問題、習慣等等HIV篩查試劑的選擇檢測目的試劑-1有反應

無反應

試劑1雙份或雙孔檢測或兩種試劑*均有反應

一有反應,一無反應

均無反應補充實驗報告HIV抗體陰性

圖2使用抗體檢測試劑的檢測流程*兩種試劑可以是原有試劑加另一種試劑，也可以是兩種不同試劑。臨床診斷相關的檢測策略使用抗體檢測試劑的篩查檢測流程試劑-1有反應無反應試劑1雙份或雙孔檢測或兩種試劑*均有HIV抗體篩查結果的意義及處理陰性：真陰性未感染HIV病毒假陰性注意窗口期陽性：真陽性感染HIV病毒假陽性非特異性反應操作失誤處理：篩查試驗無反應報告為“HIV抗體陰性”；有反應必須進行復檢，復檢兩次檢測均無反應報告為“HIV抗體陰性”，復檢檢測均有反應或一個有反應一個無反應需進行“補充試驗”；報告為“HIV感染待確定”，不能出具陽性報告。HIV抗體篩查結果的意義及處理陰性：真陰性未感染H補充試驗

是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體或者核酸確定艾滋病病毒感染的檢測方法。

補充試驗包括抗體確證試驗[免疫印跡試驗、條帶/線性免疫試驗，特定條件下的替代檢測（三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗），免疫層析和核酸檢測試驗（核酸定性檢測和核酸定量檢測試驗）補充試驗HIV抗體確證試驗確證試驗的試劑：必須是經國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、在有效期內的試劑。確證樣品：可采用血清、血漿、濾紙干血斑確證試驗方法：

免疫印跡試驗、條帶/線性免疫試驗，特定條件下的替代檢測（三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗），免疫層析或免疫滲濾試驗HIV抗體確證試驗確證試驗的試劑：條帶免疫試驗（RIBA）/重組免疫印跡法（萬泰）條帶免疫試驗（RIBA）/重組免疫印跡法（萬泰）陽性免疫印跡試驗（WB/RIBA）陰性不確定核酸試驗或2-4周后隨訪出現(xiàn)HIV-2指示帶根據情況進一步檢測HIV-2報告HIV-1抗體陰性報告HIV-1抗體陽性圖5免疫印跡試劑（WB/RIBA）試驗流程抗體確證試驗檢測流程陽性免疫印跡試驗（WB/RIBA）陰性不確定核酸試驗或2-4HIV抗體WB及RIBA/LIA試驗結果報告：（1）符合HIV-1抗體陽性判斷標準，報告“HIV-1抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。符合HIV-2抗體陽性判斷標準，報告“HIV-2抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。（2）符合HIV抗體陰性判斷標準，報告“HIV抗體陰性”。如疑似“窗口期”感染，建議2-4周后隨訪或進一步做HIV核酸檢測，盡早明確診斷。（3）符合HIV抗體不確定判斷標準，報告“HIV抗體不確定”，在備注中應注明“2-4周后復檢”或盡快做核酸檢測。抗體確證試驗檢測報告HIV抗體WB及RIBA/LIA試驗結果報告：抗體確證試驗WB不確定結果原因：HIV感染早期HIV感染晚期非特異性反應污染處理：核酸檢測2-4周后隨訪重采血

WB不確定結果原因：HIV感染早期HIV-1核酸檢測HIV-1核酸定性檢測HIV-1核酸定量試驗有反應報告HIV-1核酸陽性無反應報告HIV-1核酸陰性報告低于檢測限>5000cps/ml,報告檢測值≤5000cps/ml重新采樣檢測高于檢測限低于檢測限圖８ＨＩＶ核酸試驗流程臨床診斷相關的檢測策略HIV-1核酸檢測HIV-1核酸定性檢測HIV-1核酸定量試核酸補充試驗報告定性檢測結果有反應，報告“HIV-1核酸陽性”；無反應，報告“HIV核酸陰性”。定量檢測結果低于檢測限，報告低于檢測限；檢測結果大于5000CPs/ml，報告檢測值；檢測結果低于等于5000CPs/ml，盡快再次嚴格按核酸檢測的要求采樣檢測，報告檢測值。臨床醫(yī)生可結合臨床及流行病史、CD4+T淋巴細胞檢測值或者HIV-1抗體隨訪檢測結果等進行診斷或排除診斷。核酸補充試驗報告定性檢測結果有反應，報告“HIV-1核酸陽性HIV抗體母親HIV抗體經胎盤進入胎兒，出生時新生兒和嬰兒早期抗體陽性，不一定是感染出生時母親的抗體，80~90%在生后9~12個月消失，出生后18個月基本上全部消失18個月后兒童HIV抗體仍然陽性，視為自身感染產生的抗體18個月以下嬰幼兒的HIV診斷HIV抗體18個月以下嬰幼兒的HIV診斷嬰幼兒HIV感染的抗體檢測適用于：HIV感染產婦所生嬰幼兒；母親HIV感染狀態(tài)不詳，兒童出現(xiàn)HIV相關臨床表現(xiàn)，臨床懷疑HIV感染的兒童。嬰兒12個月時進行HIV抗體檢測

陰性排除感染，納入正常兒童保??；

陽性者繼續(xù)追蹤隨訪，至18個月再次進行HIV抗體檢測，結果陰性排除感染。嬰幼兒HIV感染的抗體檢測適用于：HIV抗體檢測的要點根據目的選擇檢測方法及檢測策略。嚴格遵守實驗室標準操作程序（SOP）。結果判定以試劑盒說明書為標準。篩查試驗有反應，須作補充試驗HIV抗體檢測的要點根據目的選擇檢測方法及檢測策略。質量控制

質量控制是指為確保實驗工作正常進行而在每一次實驗過程中必須采取的各種措施。以保證檢驗結果達到允許的準確度。質量控制

質量控制是指為確保實驗工作正常進行而在實驗前質量控制

正確的標本采集和處理正確及時的運送樣品實驗前正確地處理和保存樣品實驗中質量控制

儀器校準選擇合格試劑，采用正確的檢測方法標準程序質控品的準備開展質控圖質控

實驗后質量控制

結果記錄記錄核對結果解釋記錄保存

質量控制實驗前質量控制質量控制實驗前質量控制樣品的采集：實驗室應根據待測項目選用適當?shù)姆椒ú杉瘶悠贰？贵w檢測可采集血清、血漿和全血；CD4+T淋巴細胞檢測可采集K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉抗凝全血，并在24小時內室溫送檢；HIV-1病毒載量測定可采集EDTA或枸櫞酸鈉(ACD)抗凝全血，最好在6小時內離心分離血漿和血細胞。將分離的血漿分裝到2-3支，冰凍保存，在凍存管上編號。做好樣品處理記錄并注明分裝時間。實驗前質量控制樣品的采集：實驗室應根據待測項目選用適當?shù)姆椒▽嶒炃百|量控制樣品的保存：用于HIV抗體檢測的血清和血漿樣品,應存放于-20℃以下，短期（1周）內進行檢測的樣品可存放于2-8℃；用于CD4+T淋巴細胞檢測的樣品應在室溫下（1823℃）保存，避免極端溫度（冷凍或過熱）,樣品采集時間超過72h則不可檢測；用于病毒載量檢測的樣品的保存條件應根據血漿檢測時間而定，4天內可在4℃暫時保存，3個月以內凍存于-20℃以下，3個月以上應置于-70℃以下保存。血漿樣品凍融次數(shù)不可超過3次。每次凍融在樣品上標明。實驗前質量控制樣品的保存：實驗前質量控制樣品的運輸：1、樣品送檢時需與相應送樣單同時送檢。2、血清和血漿樣品在2-8℃條件下由專人低溫運輸。3、CD4+T淋巴細胞檢測樣品需在在室溫下（1823℃）運送，避免極端溫度（冷凍或過熱）。超過37℃的溫度會破壞細胞，對血液學和流式細胞儀的檢測有影響。4、病毒載量測定樣品的運送：凍存的血漿樣品在運輸過程中要保持樣品在冷凍狀態(tài)，防止樣品凍融。在4℃暫時保存的樣品，在2-8℃條件下低溫運輸?？鼓獦悠吩?4小時內2-8℃條件下低溫運輸。實驗前質量控制樣品的運輸：實驗前質量控制運輸采用WHO提出的三級包裝系統(tǒng)

第一層容器：裝樣品，要求防滲漏第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內，應易于消毒實驗前質量控制運輸采用WHO提出的三級包裝系統(tǒng)實驗前質量控制樣品編號:實驗室應建立和規(guī)范對待檢樣品的唯一識別標記的編碼規(guī)則，不同檢測項目（抗體檢測、CD4+T淋巴細胞檢測和病毒載量檢測）要采用不同的編號系統(tǒng)。一般應包括檢測項目、年份代碼、樣品順序號等?？稍谑諛訒r用不干膠紙打出編號條，也可用記號筆在樣品或其包裝容器上標注。實驗前質量控制樣品編號:實驗中質量控制1.儀器校準

2.選擇合格試劑，采用正確的檢測方法

3.不同檢測方法對樣品有不同要求

4.檢測方法提高準確性

5.標準程序

6.做好實驗室原始記錄

7.質控品的準備

8.商用(定值和非定值）和自制（小量分裝保存，便于每日使用）開展質控圖。

實驗中質量控制1.儀器校準實驗中質量控制開展質控圖針對每次檢測所得到的質控數(shù)據進行描點作圖，判斷該次檢測的可接受性進行長期監(jiān)控，對重復檢測的精密度進行評價定期對數(shù)據表進行復查實驗中質量控制開展質控圖質控規(guī)則及使用實驗室在報告實驗結果之前必須評價質控數(shù)據?？赏ㄟ^圖形記錄的檢查或由計算機審核結果來決定許多質控規(guī)則已被采用，常用的有12s和13s等規(guī)則。質控規(guī)則及使用實驗室在報告實驗結果之前必須評價質控數(shù)據。實驗后質量控制

實驗后準確填寫檢驗結果；及時發(fā)出報告；正確地解釋檢驗結果的臨床意義。實驗后質量控制實驗后準確填寫檢驗結果；謝謝！謝謝！謝謝！謝謝！HIV抗體檢測與質量控制HIV抗體檢測與質量控制滋病毒（人類免疫缺陷病毒）艾滋病毒（即人類免疫缺陷病毒）是一種逆轉錄病毒，它具有極強的迅速變異能力，這一特征不僅使人體的免疫系統(tǒng)難以抵御其侵害，而且給特效治療藥物和預防用疫苗的研制帶來困難。艾滋病毒直接侵犯人體的免疫系統(tǒng)，破壞人體的細胞免疫和體液免疫。它主要存在于感染者和病人的體液（如血液、精液、陰道分泌物、乳汁等）及多種器官中，它可通過含HIV的體液交換或器官移植而傳播。滋病毒（人類免疫缺陷病毒）艾滋病毒（即人類免疫缺陷病毒）是一病毒現(xiàn)狀

在世界范圍內導致了近1200萬人的死亡，超過3000萬人受到感染。在感染后會整合入宿主細胞的基因組中，而抗病毒治療并不能把病毒根除。在2004年底，全球有約四千萬被感染并與人類免疫缺陷病毒共同生存的人，流行狀況最為嚴重的仍是撒哈拉以南非洲。1986年7月25日，世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布公報，國際病毒分類委員會會議決定，把艾滋病病毒改稱為人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）簡稱HIV。病毒現(xiàn)狀在世界范圍內導致了近1200萬人的死亡，超過300病毒特點

HIV病毒主要攻擊人體的輔助T淋巴細胞系統(tǒng)；一旦侵入機體細胞，病毒會和細胞整合在一起終生難以消除；病毒基因變化多樣；廣泛存在于感染者的血液、精液、陰道分泌物、唾液、尿液、乳汁、腦脊液、有神經癥狀的腦組織液，其中以血液、精液、陰道分泌物中濃度最高；對外界環(huán)境的抵抗力較弱，對乙肝病毒有效的消毒方法對艾滋病病毒消毒也有效；感染者潛伏期長、死亡率高；艾滋病病毒的基因組比已知任何一種病毒基因都復雜。

病毒特點HIV病毒主要攻擊人體的輔助T淋巴細胞系統(tǒng)；一旦侵體外生存

人類免疫缺陷病毒在人體外生存能力極差，不耐高溫，抵抗力較低，離開人體不易生存，常溫下只可生存數(shù)小時至數(shù)天。HIV對熱敏感。在56℃條件下30分鐘即失去活性，但在室溫保存7天，仍保持活性。體外生存人類免疫缺陷病毒在人體外生存能力極差，不耐高溫，抵滅活方法

國際衛(wèi)生組織推薦對艾滋病病毒滅活加熱100℃持續(xù)20分鐘，效果較理想。滅活方法國際衛(wèi)生組織推薦對艾滋病病毒滅活加熱100℃持續(xù)2

病毒形態(tài)人類免疫缺陷病毒直徑約120納米，大致呈球形。

病毒形態(tài)人類免疫缺陷病毒直徑約120納米，大致呈球形。

致病機制HIV選擇性的侵犯帶有CD4分子，主要有T淋巴細胞、單核巨噬細胞、樹突狀細胞等。

致病機制HIV選擇性的侵犯帶有CD4分子，主要有T淋傳播途徑

HIV感染者是傳染源，曾從血液、精液、唾液、尿液、陰道分泌液、眼淚、乳汁等分離得HIV。性接觸傳播血液傳播

母嬰傳播傳播途徑HIV感染者是傳染源，曾從血液、精液、唾液、尿液、

疾病診斷HIV抗體篩查試驗ELISA試驗化學發(fā)光法快速檢測補充試驗抗體確證試驗：免疫印跡試劑（WB）和條帶免疫試驗（RIBA）核酸試驗：核酸定性和核酸定量試驗

疾病診斷HIV抗體篩查試驗HIV抗體檢測目的HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據特殊需要進行的體檢等。以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點人群和一般人群。HIV抗體檢測目的HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等HIV抗體篩查樣品

血清/血漿/全血濾紙干血斑口腔黏膜滲出液尿液HIV抗體篩查樣品

血清/血漿/全血篩查試劑

國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準有效期內酶聯(lián)免疫試劑應批批檢合格選擇敏感性和特異性高的試劑篩查試劑

國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準篩查方法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）化學發(fā)光或免疫熒光試驗（CIA/IFA）：采用發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測定結果快速檢測（RT）及其它檢測試驗

篩查方法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）HIV抗體檢測試劑（第三代）：檢測HIV-1/2抗體HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑（第四代）：可同時檢測血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體用酶標儀測定結果有效試驗的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）HIV抗體檢測試劑（第三代）：ELISA試驗中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試劑盒本身的原因）測定的重復性差1.加樣本及試劑量不準2.加樣過快，孔間發(fā)生污染3.加錯樣本4.加樣本和試劑時，加在孔壁上部非包被區(qū)5.溫育時間、洗板、顯色時間不一致6.酶標儀濾光片問題ELISA試驗中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試ELISA試驗中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試劑盒本身的原因）白板（陽性對照不顯色）1.漏加酶結合物2.洗液配制問題，量筒不干凈含酶抑制物3.漏加顯色劑A或B4.終止液當顯色劑使用全部板孔都有顯色1.洗板不干凈2.加底物的吸頭被酶污染3.洗板液受酶污染4.由于儀器或加樣頭造成的交叉污染ELISA試驗中可能出現(xiàn)的問題和原因分析問題可能的原因（非試ELISA測定中的干擾因素內源性干擾因素外源性干擾因素ELISA測定中的干擾因素內源性干擾因素內源性干擾因素

人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、醫(yī)源性誘導的抗體、自身抗體、溶菌酶、磷脂、藥物小分子等內源性干擾因素外源性干擾因素常常是由于血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、細菌污染、標本貯存時間過長、凝集不全、反復凍融等外源性干擾因素常常是由于血標本的采集、貯存等不當所致。如標本分析ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結果時，需綜合考慮試劑因素、操作因素和標本因素等。分析ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結果時，需綜合考慮試ELISA法結果判斷臨界值概念:將檢測的陽性和（或）陰性對照的OD值代入計算公式計算出來的判斷陽性和陰性結果的界值判斷標準:標本OD值與臨界值的比值大于等于1(S/CO≥1)為陽性注意:不同廠家、不同方法臨界值計算公式不同ELISA法結果判斷臨界值概念:將檢測的陽性和（或）陰性對酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）優(yōu)點：準確性高、價格低廉、判斷結果標準客觀、結果便于記錄和保存用途：流行病學監(jiān)測及臨床大量標本的檢測酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）優(yōu)點：準確性高、價格低廉、判斷化學發(fā)光或免疫熒光試驗采用發(fā)光或熒光底物既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體酶或熒光標記的HIV抗原或抗體，加發(fā)光或熒光底物用發(fā)光儀或熒光儀測定結果化學發(fā)光或免疫熒光試驗采用發(fā)光或熒光底物（1）免疫滲濾試驗：斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗以硝酸纖維膜為載體HIV抗原點狀固定在膜上加待檢樣品陽性結果在膜上抗原部位顯示出有色斑點有效試驗的質控點必須顯色快速檢測（RT）及其它檢測試驗（1）免疫滲濾試驗：斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗快速檢斑點免疫膠體金快速診斷試驗斑點免疫膠體金快速診斷試驗（2）免疫層析試驗：以硝酸纖維膜為載體HIV抗原線狀固定在膜上待檢樣品（血液、唾液或尿液）沿著固相載體遷移陽性結果在膜上抗原部位顯示出有色條帶有效試驗的質控帶必須顯色第四代快速試劑（SD）：可區(qū)分抗原抗體的檢測（2）免疫層析試驗：以硝酸纖維膜為載體HIV抗體檢測與質量控制培訓課件全血樣品加50ul樣品于樣品墊中手指血方法靜脈血方法加一滴緩沖液15分鐘內讀取結果快速檢測（RT）及其它檢測試驗全血樣品手指血方法靜脈血方法加一滴緩沖液15分鐘內讀取結果快病人條質控條病人條質控條HIV抗體檢測與質量控制培訓課件快速檢測（RT）及其它檢測試驗優(yōu)點:快速單份標本檢測不需額外試劑或設備操作簡便缺點:肉眼判斷較主觀價格較貴結果不易保存（建議拍照保存）快速檢測（RT）及其它檢測試驗優(yōu)點:HIV篩查試劑的選擇檢測目的實驗設施條件價格其他：檢測數(shù)量、標本用量、復檢問題、習慣等等HIV篩查試劑的選擇檢測目的試劑-1有反應

無反應

試劑1雙份或雙孔檢測或兩種試劑*均有反應

一有反應,一無反應

均無反應補充實驗報告HIV抗體陰性

圖2使用抗體檢測試劑的檢測流程*兩種試劑可以是原有試劑加另一種試劑，也可以是兩種不同試劑。臨床診斷相關的檢測策略使用抗體檢測試劑的篩查檢測流程試劑-1有反應無反應試劑1雙份或雙孔檢測或兩種試劑*均有HIV抗體篩查結果的意義及處理陰性：真陰性未感染HIV病毒假陰性注意窗口期陽性：真陽性感染HIV病毒假陽性非特異性反應操作失誤處理：篩查試驗無反應報告為“HIV抗體陰性”；有反應必須進行復檢，復檢兩次檢測均無反應報告為“HIV抗體陰性”，復檢檢測均有反應或一個有反應一個無反應需進行“補充試驗”；報告為“HIV感染待確定”，不能出具陽性報告。HIV抗體篩查結果的意義及處理陰性：真陰性未感染H補充試驗

是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體或者核酸確定艾滋病病毒感染的檢測方法。

補充試驗包括抗體確證試驗[免疫印跡試驗、條帶/線性免疫試驗，特定條件下的替代檢測（三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗），免疫層析和核酸檢測試驗（核酸定性檢測和核酸定量檢測試驗）補充試驗HIV抗體確證試驗確證試驗的試劑：必須是經國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、在有效期內的試劑。確證樣品：可采用血清、血漿、濾紙干血斑確證試驗方法：

免疫印跡試驗、條帶/線性免疫試驗，特定條件下的替代檢測（三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗），免疫層析或免疫滲濾試驗HIV抗體確證試驗確證試驗的試劑：條帶免疫試驗（RIBA）/重組免疫印跡法（萬泰）條帶免疫試驗（RIBA）/重組免疫印跡法（萬泰）陽性免疫印跡試驗（WB/RIBA）陰性不確定核酸試驗或2-4周后隨訪出現(xiàn)HIV-2指示帶根據情況進一步檢測HIV-2報告HIV-1抗體陰性報告HIV-1抗體陽性圖5免疫印跡試劑（WB/RIBA）試驗流程抗體確證試驗檢測流程陽性免疫印跡試驗（WB/RIBA）陰性不確定核酸試驗或2-4HIV抗體WB及RIBA/LIA試驗結果報告：（1）符合HIV-1抗體陽性判斷標準，報告“HIV-1抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。符合HIV-2抗體陽性判斷標準，報告“HIV-2抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。（2）符合HIV抗體陰性判斷標準，報告“HIV抗體陰性”。如疑似“窗口期”感染，建議2-4周后隨訪或進一步做HIV核酸檢測，盡早明確診斷。（3）符合HIV抗體不確定判斷標準，報告“HIV抗體不確定”，在備注中應注明“2-4周后復檢”或盡快做核酸檢測?？贵w確證試驗檢測報告HIV抗體WB及RIBA/LIA試驗結果報告：抗體確證試驗WB不確定結果原因：HIV感染早期HIV感染晚期非特異性反應污染處理：核酸檢測2-4周后隨訪重采血

WB不確定結果原因：HIV感染早期HIV-1核酸檢測HIV-1核酸定性檢測HIV-1核酸定量試驗有反應報告HIV-1核酸陽性無反應報告HIV-1核酸陰性報告低于檢測限>5000cps/ml,報告檢測值≤5000cps/ml重新采樣檢測高于檢測限低于檢測限圖８ＨＩＶ核酸試驗流程臨床診斷相關的檢測策略HIV-1核酸檢測HIV-1核酸定性檢測HIV-1核酸定量試核酸補充試驗報告定性檢測結果有反應，報告“HIV-1核酸陽性”；無反應，報告“HIV核酸陰性”。定量檢測結果低于檢測限，報告低于檢測限；檢測結果大于5000CPs/ml，報告檢測值；檢測結果低于等于5000CPs/ml，盡快再次嚴格按核酸檢測的要求采樣檢測，報告檢測值。臨床醫(yī)生可結合臨床及流行病史、CD4+T淋巴細胞檢測值或者HIV-1抗體隨訪檢測結果等進行診斷或排除診斷。核酸補充試驗報告定性檢測結果有反應，報告“HIV-1核酸陽性HIV抗體母親HIV抗體經胎盤進入胎兒，出生時新生兒和嬰兒早期抗體陽性，不一定是感染出生時母親的抗體，80~90%在生后9~12個月消失，出生后18個月基本上全部消失18個月后兒童HIV抗體仍然陽性，視為自身感染產生的抗體18個月以下嬰幼兒的HIV診斷HIV抗體18個月以下嬰幼兒的HIV診斷嬰幼兒HIV感染的抗體檢測適用于：HIV感染產婦所生嬰幼兒；母親HIV感染狀態(tài)不詳，兒童出現(xiàn)HIV相關臨床表現(xiàn)，臨床懷疑HIV感染的兒童。嬰兒12個月時進行HIV抗體檢測

陰性排除感染，納入正常兒童保??；

陽性者繼續(xù)追蹤隨訪，至18個月再次進行HIV抗體檢測，結果陰性排除感染。嬰幼兒HIV感染的抗體檢測適用于：HIV抗體檢測的要點根據目的選擇檢測方法及檢測策略。嚴格遵守實驗室標準操作程序（SOP）。結果判定以試劑盒說明書為標準。篩查試驗有反應，須作補充試驗HIV抗體檢測的要點根據目的選擇檢測方法及檢測策略。質量控制

質量控制是指為確保實驗工作正常進行而在每一次實驗過程中必須采取的各種措施。以保證檢驗結果達到允許的準確度。質量控制

質量控制是指為確保實驗工作正常進行而在實驗前質量控制

正確的標本采集和處理正確及時的運送樣品實驗前正確地處理和保存樣品實驗中質量控制

儀器校準選擇合格試劑，采用正確的檢測方法標準程序質控品的準備開展質控圖質控

實驗后質量控制

結果記錄記錄核對結果解釋記錄保存

質量控制實驗前質量控制質量控制