中藥制劑分析第三章雜質(zhì)的檢查

關(guān)于中藥制劑分析第三章雜質(zhì)的檢查第一頁，共三十九頁，2022年，8月28日【目的要求】掌握重金屬、砷鹽的檢查原理和方法熟悉《中國(guó)藥典》現(xiàn)行版制劑通則的檢查項(xiàng)目及特殊雜質(zhì)的檢查原理了解農(nóng)藥殘留量的檢查原理和方法了解黃曲霉毒素的檢查方法第二頁，共三十九頁，2022年，8月28日中藥制劑的檢查項(xiàng)目：制劑通則檢查一般雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查微生物限度檢查第三頁，共三十九頁，2022年，8月28日§1中藥制劑雜質(zhì)檢查一、中藥制劑的雜質(zhì)指能危害人體健康或影響藥物質(zhì)量的物質(zhì)。（一）雜質(zhì)的分類一般雜質(zhì)（如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽）特殊雜質(zhì)：根據(jù)其來源、生產(chǎn)工藝及藥品的性質(zhì)有可能引入的雜質(zhì)。（二）雜質(zhì)來源中藥材原料中帶入生產(chǎn)制備過程中引入貯存過程中引起的中藥制劑自身理化性質(zhì)的改變第四頁，共三十九頁，2022年，8月28日二、雜質(zhì)的限量檢查1、雜質(zhì)限量：藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，通常用%或ppm表示。2、雜質(zhì)限量檢查及計(jì)算方法1）限量檢查：規(guī)定一定限度，要求所檢測(cè)的樣品中某組分的含量不超過此限度。2）檢查方法對(duì)照品比較法：取一定量與被測(cè)雜質(zhì)相同的純物質(zhì)或其它對(duì)照品配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液，與一定量供試藥物的溶液，在相同處理?xiàng)l件下，比較反應(yīng)結(jié)果，從而確定雜質(zhì)限量是否超過規(guī)定。靈敏度法：在供試品溶液中加入試劑，在一定反應(yīng)條件下，觀察有無正反應(yīng)出現(xiàn)?！?中藥制劑雜質(zhì)檢查第五頁，共三十九頁，2022年，8月28日§1中藥制劑雜質(zhì)檢查3）計(jì)算方法第六頁，共三十九頁，2022年，8月28日§1中藥制劑雜質(zhì)檢查例1：注射用雙黃連（凍干）中砷鹽限量檢查

取本品0.4g，加2%硝酸鎂乙醇溶液3ml，點(diǎn)燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500～600℃熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，依法檢查（中國(guó)藥典2000版附錄ⅨF）如果標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（1μgAs/ml）取用量為2ml，計(jì)算雜質(zhì)限量。第七頁，共三十九頁，2022年，8月28日§1中藥制劑雜質(zhì)檢查規(guī)定：含重金屬≯百萬分之五(5ppm)計(jì)算：應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液(10gPb/ml)多少ml？例2.葡萄糖中重金屬的檢查方法：第八頁，共三十九頁，2022年，8月28日§1中藥制劑雜質(zhì)檢查例4.肉桂油中重金屬檢查取肉桂油10ml，加水10ml與鹽酸1滴，振搖后，通硫化氫氣使飽和，水層與油層均不得變色。例3.溴化鈉中砷鹽檢查S==C.VL2.0X1/1064x106

方法：中國(guó)藥典規(guī)定，取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2.0mL(每1mL相當(dāng)于1μg砷)

制備砷斑規(guī)定：含砷量不得超過4ppm計(jì)算：應(yīng)取供試品量(g)？=0.5g第九頁，共三十九頁，2022年，8月28日一、重金屬檢查法1、重金屬的概念重金屬是指在實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用呈色的金屬.如：Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、Sb、Sn、As、Ni、Co、Zn等.重金屬存在影響藥物的穩(wěn)定性及安全性.

鉛易在體內(nèi)積蓄中毒,以Pb為代表.§2一般雜質(zhì)檢查第十頁，共三十九頁，2022年，8月28日一、重金屬檢查法（一）第一法：硫代乙酰胺法1、原理：§2一般雜質(zhì)檢查2、適用范圍：適用于供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查。第十一頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查2操作方法樣品管對(duì)照管結(jié)果觀察

樣品對(duì)照生成有色的硫化物，觀察顏色的變化第十二頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查3．討論①

標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度：27ml溶液中Pb2+標(biāo)準(zhǔn)溶液10g/ml

1~2ml②

硫代乙酰胺試液：95版藥典改用硫代乙酰胺為顯色劑③

溶液的pH：pH在3.0~3.5時(shí),呈色較完全.④

供試品溶液有顏色時(shí)的處理a.外消色法：Ⅰ.稀焦糖溶液調(diào)節(jié)，

Ⅱ.指示劑調(diào)節(jié)b.內(nèi)消色

第十三頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查3．討論⑤

干擾物的排除方法a.供試品中微量高價(jià)Fe3+存在干擾：弱酸性溶液中Fe3+氧化H2S析出S,產(chǎn)生混濁影響檢查.排除：加入抗壞血酸或鹽酸羥胺使Fe3+還原為Fe2+.如：葡萄糖酸亞鐵中重金屬的檢查.b.供試品為鐵鹽（大量的Fe3+）Fe3+在HCl溶液中能形成配位化合物用乙醚提取Fe3++HCl→[HFeCl6]2-（六氯合鐵離子）黃色或水層加氨試液調(diào)至堿性,殘存的Fe3+可用KCN掩蔽,按第三法檢查.

如：枸櫞酸鐵銨的重金屬檢查第十四頁，共三十九頁，2022年，8月28日一、重金屬檢查法（二）第二法：灼燒后檢查1、原理：供試品先熾灼破壞后,使有機(jī)結(jié)合的重金屬游離,再按第一法檢查.§2一般雜質(zhì)檢查2、適用范圍：適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，?jīng)處理后在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查適用于絕大多數(shù)的中藥第十五頁，共三十九頁，2022年，8月28日一、重金屬檢查法（二）第二法：灼燒后檢查3、操作：§2一般雜質(zhì)檢查

緩緩熾灼放冷H2SO40.5-1.0ml供試品炭化

加熱

HNO3

500-600℃H2SO4

除盡放冷完全灰化

蒸干HCl2ml

水15ml

中性按第一法檢查

蒸干氨試液注意：做空白試驗(yàn)

第十六頁，共三十九頁，2022年，8月28日一、重金屬檢查法（二）第二法：灼燒后檢查4、討論：a.HNO3處理后,必須蒸干除盡NO.b.熾灼溫度嚴(yán)格控制：500-600℃c.含鈉鹽或氟的有機(jī)藥物在熾灼時(shí)改用鉑坩堝或硬質(zhì)玻璃

(瑪瑙)蒸發(fā)皿.§2一般雜質(zhì)檢查第十七頁，共三十九頁，2022年，8月28日一、重金屬檢查法（三）第三法：硫化鈉法1、原理在堿性介質(zhì)中,以Na2S為顯色劑,使Pb2+與S2-作用生成PbS的混懸液,與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理所呈顏色比較,不得更深.2、適用范圍

適用于難溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）但能溶解于堿性溶液的藥物中重金屬的檢查.3、方法取供試品適量,加NaOH試液5ml和水20ml使溶解后,置納氏比色管中,加Na2S試液5滴,搖勻,與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理所呈顏色比較.§2一般雜質(zhì)檢查第十八頁，共三十九頁，2022年，8月28日一、重金屬檢查法（四）第四法：微孔濾膜法1、原理同第一法2、適用范圍當(dāng)重金屬含量低(2-5g)時(shí),在比色管中難于目視觀察,采用本法.3、方法使重金屬生成的硫化物富集于微孔濾膜上(鉛斑)提高檢查的靈敏度.§2一般雜質(zhì)檢查第十九頁，共三十九頁，2022年，8月28日二、砷鹽檢查法（一）古蔡氏法Gutzeit（法定方法）1、原理：§2一般雜質(zhì)檢查①AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O砷化氫與溴化汞試紙作用：②AsH3+2HgBr2→2HBr+AsH(HgBr)2(黃色)AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3(棕色)As5+反應(yīng)速度慢，需將As5+轉(zhuǎn)化為As3+初生態(tài)的氫溴化亞汞砷化氫第二十頁，共三十九頁，2022年，8月28日二、砷鹽檢查法（一）古蔡氏法Gutzeit1、原理：故加入碘化鉀、酸性氯化亞錫還原劑，將5價(jià)砷還原為3價(jià)砷AsO43-+2I-+2H+

→AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+→2I-+Sn4+4I-+Zn2+→[ZnI4]2-Sn2++Zn→Sn+Zn2+§2一般雜質(zhì)檢查促進(jìn)反應(yīng)向右進(jìn)行形成鋅錫齊，有利于反應(yīng)平穩(wěn)的進(jìn)行第二十一頁，共三十九頁，2022年，8月28日二、砷鹽檢查法（一）古蔡氏法Gutzeit2、裝置：3、操作：①A瓶：標(biāo)準(zhǔn)砷溶液(1μg/ml)2ml+鹽酸5ml+水21ml+KI試液5ml+酸性SnCl2試液5滴，室溫放置10min②A瓶＋鋅粒2g，接導(dǎo)氣管C③25℃-40℃水浴45min取出，比較砷斑顏色深淺§2一般雜質(zhì)檢查HgBr2試紙醋酸鉛棉60mg(裝管高度6-8cm)第二十二頁，共三十九頁，2022年，8月28日二、砷鹽檢查法（一）古蔡氏法Gutzeit4、討論1）Zn粒2）溴化汞試紙的選擇3）適宜的PH值及反應(yīng)溫度和時(shí)間4）

干擾物的排除a、供試品是硫化物,亞硫酸鹽,硫代硫酸鹽干擾：排除方法：加入濃硝酸處理b、供試品是鐵鹽(Fe3+)干擾：Fe3+能消耗還原劑(KI、SnCl2),并能氧化砷化氫.排除方法：先加酸性SnCl2試液使

Fe3+→Fe2+§2一般雜質(zhì)檢查第二十三頁，共三十九頁，2022年，8月28日二、砷鹽檢查法（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）（法定）第一步：同古蔡氏法生成砷化氫第二步：砷化氫還原Ag-DDC溶液,產(chǎn)生紅色的膠態(tài)銀.目視比色法儀器分析510nm，可定量§2一般雜質(zhì)檢查SSHAg63+AsC2H5NC2H5CSS+C2H5NC2H5CAsH3

C2H5NC2H5CSSAgNCSS+6第二十四頁，共三十九頁，2022年，8月28日二、砷鹽檢查法（三）白田道夫法（靈敏度低）1、原理：SnCl2在HCl中能將砷鹽還原為棕褐色的膠態(tài)砷,與一定量的標(biāo)準(zhǔn)砷溶液按同法處理后進(jìn)行比較,判斷供試品中砷鹽的限量.§2一般雜質(zhì)檢查2As3++3SnCl2+6HCl2As+3SnCl4+6H+棕褐色2、對(duì)含銻藥物中砷鹽的檢查不能用古蔡氏法,需用白田道夫法.第二十五頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查二、砷鹽檢查法（四）奇列氏法（次磷酸法）1、原理：在鹽酸酸性溶液中,次磷酸還原砷鹽為棕色的游離砷,與標(biāo)準(zhǔn)砷溶液同法處理后比較顏色.NaH2PO2+HCl→H3PO2+NaCl3H3PO2+H3AsO3→3H3PO3+2AS↓2.特點(diǎn)不受S2-,SO32-,Sb干擾靈敏度較古蔡氏法低第二十六頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查三、鐵鹽檢查法第一法硫氰酸鹽法1.原理

鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸銨生成紅色可溶性硫氰酸鐵配離子,與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后所呈的顏色進(jìn)行比較.2.操作4ml25mld.HCl30%硫氰酸銨過硫酸銨50mgH2O50mlH2O

樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液影響藥物穩(wěn)定性第二十七頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查四、硫酸鹽檢查指示性雜質(zhì)1、原理硫酸鹽與氯化鋇在鹽酸酸性溶液中生成硫酸鋇的白色渾濁液,與一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液與氯化鋇在相同條件下生成的渾濁比較.2.操作法2ml40mld.HCl25%BaCl25mlH2O50mlH2O

樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度范圍：0.1mg~0.5mgSO42-/50ml第二十八頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查五、氯化物檢查指示性雜質(zhì)1.原理利用氯化物在硝酸酸性條件下與硝酸銀反應(yīng),生成氯化銀白色渾濁液,與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下產(chǎn)生的氯化銀渾濁程度比較,濁度不得更大.Cl-+Ag+AgCl↓H+5mlHNO3/50ml，30-40℃，置暗處反應(yīng))※適宜的濃度范圍：50-80μgCl-/50ml第二十九頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查六、干燥失重藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的重量，包括水分及其他揮發(fā)性成分。檢查方法常壓恒溫干燥（烘干法）----受熱較穩(wěn)定的中藥制劑恒重：連續(xù)2次干燥后的重量差異不超過0.3mg干燥劑干燥----受熱易分解或揮發(fā)的供試品硅膠，五氧化二磷，硫酸等干燥劑減壓干燥—熔點(diǎn)低、受熱不穩(wěn)定及較難趕除水分的供試品第三十頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查七、水分測(cè)定法檢查方法烘干法----不含或含少量揮發(fā)性成分的供試甲苯法----含揮發(fā)性成分的供試品減壓干燥----含揮發(fā)性成分的貴重藥品氣相色譜法----散劑、顆粒劑、丸劑、片劑等各類型中藥制劑中微量水分的測(cè)定第三十一頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查八、熾灼殘?jiān)?、定義：有機(jī)物經(jīng)高溫?zé)胱坪髿埩舻姆菗]發(fā)性物及雜質(zhì)，多為金屬的氧化物或無機(jī)鹽類。2、操作：供試品1.0～2.0g→置已恒重的坩堝中→精密稱定→熾灼至炭化→放冷→硫酸0.5～1ml使?jié)駶?rùn)→低溫除盡硫酸蒸氣→700～800℃至灰化→精密稱定→恒重3、注意：如需將殘?jiān)糇髦亟饘贆z查，則熾灼溫度必須控制在500～600℃。第三十二頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查九、灰分測(cè)定1、總灰分：中藥經(jīng)粉碎后加熱，高溫?zé)胱浦粱一?，則其細(xì)胞組織及其內(nèi)含物成為灰燼而殘留，由此所得灰分為“生理灰分”，即總灰分

2．酸不溶性灰分

中藥經(jīng)高溫?zé)胱频玫降目偦曳旨欲}酸處理，得到不溶于鹽酸的灰分，成為酸不溶性灰分。注意：當(dāng)灰分本身差異較大時(shí)，增加酸不溶性灰分的測(cè)定灰分是指一種物質(zhì)中的固體無機(jī)物的含量。這種物質(zhì)可以是食品也可以是非食品，可以是包含有機(jī)物的無機(jī)物也可是不含有機(jī)物的無機(jī)物，可以是鍛燒后的殘留物也可以是烘干后的剩余物。但灰分一定是某種物質(zhì)中的固體部分而不是氣體或液體部分第三十三頁，共三十九頁，2022年，8月28日§2一般雜質(zhì)檢查十、有害元素的測(cè)定05版藥典增加“鉛、鎘、砷、汞、銅”的限量測(cè)定測(cè)定方法：原子吸收分光光度法電感耦合等離子體質(zhì)譜法