微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制2009課件

衛(wèi)生微生物實(shí)驗(yàn)室

的質(zhì)量保證與質(zhì)量控制二00九年四月衛(wèi)生微生物實(shí)驗(yàn)室

的質(zhì)量保證與質(zhì)量控制1微生物實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生微生物實(shí)驗(yàn)室病原微生物實(shí)驗(yàn)室臨床微生物實(shí)驗(yàn)室分子微生物實(shí)驗(yàn)室微生物實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生微生物實(shí)驗(yàn)室2微生物檢測的定義在特定的環(huán)境下(無菌)，采用適當(dāng)?shù)姆椒▽悠分心繕?biāo)微生物進(jìn)行增殖和培養(yǎng)，并對以放大后的目標(biāo)微生物進(jìn)行感官、生理、生化等到方面的特性分析和判定，以確定樣品中目標(biāo)微生物的量或質(zhì)的特性的過程。微生物檢測的定義在特定的環(huán)境下(無菌)，采用適當(dāng)?shù)姆椒▽悠?微生物檢測涉及的要素檢驗(yàn)人員檢測經(jīng)驗(yàn)的判斷能力檢測設(shè)備保證目標(biāo)菌種的生長的外部環(huán)境菌種試劑保證目標(biāo)菌種的生長的內(nèi)部環(huán)境檢測方法選擇適宜目標(biāo)菌種檢測的方法測試環(huán)境保證操作過程不受外界干擾（保護(hù)樣品和人員）微生物檢測涉及的要素檢驗(yàn)人員4檢驗(yàn)人員檢驗(yàn)人員需經(jīng)過微生物專業(yè)基礎(chǔ)知識和無菌技術(shù)的培訓(xùn)后,方可上崗操作,并應(yīng)了解本專業(yè)國內(nèi)外的最新文獻(xiàn)資料、參加專業(yè)培訓(xùn)，不斷更新專業(yè)知識和提高檢驗(yàn)質(zhì)量，從實(shí)踐中不斷提高實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范，以保證檢驗(yàn)工作科學(xué)、規(guī)范、優(yōu)質(zhì)、高效，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確和報告公正，實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化和管理科學(xué)化。檢驗(yàn)人員檢驗(yàn)人員需經(jīng)過微生物專業(yè)基礎(chǔ)知識和無菌技術(shù)的培訓(xùn)后,5質(zhì)量保證和質(zhì)量控制的目的質(zhì)量保證為使人們能確信某產(chǎn)品(這里指培養(yǎng)基)能滿足規(guī)定的質(zhì)量要求所必須的執(zhí)行的有計劃的和系統(tǒng)的活動。質(zhì)量控制為達(dá)到質(zhì)量要求所采取的作業(yè)技術(shù)和活動。為監(jiān)測整個檢測的過程，排除在具體的技術(shù)操作中導(dǎo)致不滿意的原因，以取得可靠的檢測結(jié)果。質(zhì)量保證和質(zhì)量控制的目的質(zhì)量保證6微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)施微生物檢驗(yàn)必須在無菌環(huán)境中進(jìn)行，保持樣品的原污染狀態(tài)，防止二次污染。在未普遍采用現(xiàn)代化的無菌隔離器技術(shù)之前，無菌室仍然是最常用的無菌環(huán)境之一，無菌室及配套的相關(guān)建筑設(shè)計應(yīng)充分考慮其合理布局，操作安全，使用方便等條件。微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)施微生物檢驗(yàn)必須在無菌環(huán)境中進(jìn)行，保持樣品的原7微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室應(yīng)遠(yuǎn)離交通干道、廁所及污染區(qū)，最好在二樓以上，應(yīng)選上、下水道及其他安裝適宜的位置。滅菌物品存放和傳輸、培養(yǎng)間、結(jié)果觀察、陽性對照實(shí)驗(yàn)室和辦公室等，要集中，減少污染，便于管理和使用。微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室應(yīng)遠(yuǎn)離交通干道、廁所及污染區(qū)，最好在二8微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌操作間應(yīng)具有單向流空氣凈化設(shè)備，無菌操作間面積不小于5m2,高度不超過2.4m,溫度控制在18℃～26℃，相對濕度40%～60%。新鮮空氣經(jīng)高效層流過濾后進(jìn)入操作間。潔凈度級別為局部百級、周圍環(huán)境萬級。應(yīng)保持對環(huán)境形成正壓，不同級別的潔凈室之間的壓差不低于4.9Pa，潔凈區(qū)對與其相通的非潔凈區(qū)的壓差不低于10Pa。無菌室潔凈度要定期檢查沉降菌或浮游菌及懸浮粒子。微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌操作間應(yīng)具有單向流空氣凈化設(shè)備，無菌操作9微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑、平整、無縫隙、不起灰、耐腐蝕、易清洗，墻與地面、臺面、墻壁之間連接處應(yīng)呈凹弧形，不留死角，室內(nèi)不安裝上、下水道，進(jìn)出口應(yīng)為拉門，出入操作間和緩沖間的門不應(yīng)直對。室內(nèi)的電源總控制應(yīng)設(shè)在室外。微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑、平整、無縫隙、不起灰、耐10微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室內(nèi)采光的面積要大，照明燈應(yīng)嵌裝在天花板內(nèi)，光照應(yīng)分布均勻，光照度不低于300勒克斯，緩沖間和操作間勻應(yīng)設(shè)置紫外燈（2～2.5w/m3)，距實(shí)驗(yàn)臺面高度不超過1m。微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室內(nèi)采光的面積要大，照明燈應(yīng)嵌裝在天花板11微生物實(shí)驗(yàn)室使用無菌檢查、微生物限度檢查、微生物效價檢定應(yīng)有專用的無菌室，不可混用，以免彼此干擾或交叉污染。陽性對照實(shí)驗(yàn)以及具有危險性的毒菌、毒素等檢驗(yàn)，如破傷風(fēng)梭菌、黃曲霉毒素等檢驗(yàn)，必須有單獨(dú)使用的無菌間或生物安全柜，以便控制，防止傳播。微生物實(shí)驗(yàn)室使用無菌檢查、微生物限度檢查、微生物效價檢定應(yīng)有12微生物實(shí)驗(yàn)室使用無菌室一般應(yīng)設(shè)有一更、二更、緩沖間和無菌操作間。無菌室內(nèi)應(yīng)有人凈、物凈設(shè)施，所有實(shí)驗(yàn)器材應(yīng)經(jīng)過消毒處理后，通過物流間無菌傳遞系統(tǒng)進(jìn)入無菌室，執(zhí)行人流和物流分開。微生物實(shí)驗(yàn)室使用無菌室一般應(yīng)設(shè)有一更、二更、緩沖間和無菌操作13微生物實(shí)驗(yàn)室的分級根據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB19489-2004《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》把所有操作的微生物因子的危害程度和采取的防護(hù)措施，將微生物實(shí)驗(yàn)室所處理樣本的生物危險性程度將微生物實(shí)驗(yàn)室分為四級：Ⅰ級對生物安全隔離要求最低，Ⅳ級最高。以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示微生物實(shí)驗(yàn)室的相應(yīng)生物安全防護(hù)水平。微生物實(shí)驗(yàn)室的分級根據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB19489-14微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅰ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對健康成年人巳知無致病作用的微生物，如用于教學(xué)的普通微生物實(shí)驗(yàn)室等。Ⅱ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物。微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅰ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：15微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅲ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物及其病毒，通常巳有預(yù)防傳染的疫苗。艾滋病病毒的研究（血清學(xué)實(shí)驗(yàn)除外）應(yīng)在Ⅲ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅲ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：16微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅳ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的致病微生物及毒素。與上述情況類似的不明微生物，也必須在Ⅳ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。待有充分?jǐn)?shù)據(jù)后再決定此種微生物或毒素應(yīng)在Ⅳ級還是在較低級別的實(shí)驗(yàn)室中處理。微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅳ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：17儀器設(shè)備所用的各種器械及設(shè)備應(yīng)按計量要求定期檢測，全部設(shè)備應(yīng)滿足檢測項(xiàng)目的要求，做到設(shè)備檔案齊全，每臺（件）設(shè)備需使用標(biāo)簽標(biāo)識，需檢定或校準(zhǔn)的設(shè)備表明狀態(tài)和有效期限，儀器使用作業(yè)指導(dǎo)書，手冊和使用記錄，環(huán)境監(jiān)測記錄、維修記錄等，以保證其正常使用。儀器設(shè)備所用的各種器械及設(shè)備應(yīng)按計量要求定期檢測，全部設(shè)備應(yīng)18儀器設(shè)備無菌實(shí)驗(yàn)室配備的紫外消毒裝置，使用前后進(jìn)行照射消毒，要定期進(jìn)行紫外線強(qiáng)度和空氣質(zhì)量監(jiān)測，高效過濾器應(yīng)定期進(jìn)行風(fēng)速監(jiān)測，根據(jù)檢測的情況，必要時予以更換處理。生物安全實(shí)驗(yàn)室，要正常進(jìn)行管理維護(hù)和工作人員隔離防護(hù)。高壓蒸汽滅菌器除定期校驗(yàn)表壓和溫度外，應(yīng)定期用生物指示劑對滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。儀器設(shè)備無菌實(shí)驗(yàn)室配備的紫外消毒裝置，使用前后進(jìn)行照射消毒，19儀器設(shè)備其他微生物學(xué)檢驗(yàn)所用的儀器，如培養(yǎng)箱、電熱恒溫水浴箱、電熱恒溫干燥箱、酸度計、電子天平、微量加樣器、光學(xué)光度計、冰箱、低溫冰箱、光學(xué)顯微鏡、生物安柜等，應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)定進(jìn)行檢查。培養(yǎng)箱內(nèi)保持清潔，要定期進(jìn)行細(xì)菌和霉菌的檢查。儀器設(shè)備其他微生物學(xué)檢驗(yàn)所用的儀器，如培養(yǎng)箱、電熱恒溫水浴箱20實(shí)驗(yàn)室維護(hù)工作臺面：測定樣品前或開始工作前，必須用清潔劑（消毒劑）徹底消潔臺面。工作結(jié)束（樣品制備、接種、轉(zhuǎn)移）或當(dāng)天工作結(jié)束后，臺面要再清潔消毒。處理致病菌性物質(zhì)時，用75%的乙醇，70～90%的異丙醇或次氯酸鹽溶液消毒。實(shí)驗(yàn)室維護(hù)工作臺面：21實(shí)驗(yàn)室維護(hù)生物危害性物質(zhì)：所有物質(zhì)用后立即置于廠商建議濃度的消毒液中（如5%的苯酚溶液），或直接扔到危害袋中。所有物質(zhì)在121℃持續(xù)高壓滅菌至少30分鐘。滅菌后按規(guī)定丟棄所有具器。遵守廢棄物處理規(guī)定。實(shí)驗(yàn)室維護(hù)生物危害性物質(zhì)：22培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基分類上屬于體外診斷試劑。其質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)有：中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局《商品化微生物培養(yǎng)基的質(zhì)量保證》SNCCLS-1996中華人民共和國衛(wèi)生部《商業(yè)性微生物養(yǎng)基質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程》WS/T232-2002(所謂商業(yè)性就是即買即用的一次性培養(yǎng)基)中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

YY/T0577-2005培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基分類上屬于體外診斷試劑。其質(zhì)量控制23培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局培養(yǎng)基制備指南第1部分《實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備和質(zhì)量保證通則》SN/T1538.1-2005中華人民共和國藥典2005年版中國藥品標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)操作規(guī)范2005年版中國合格評定國家認(rèn)可委員會（CNAS-CL09:2006)《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說明》培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局培養(yǎng)基24培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局培養(yǎng)基制備指南第2部分《培養(yǎng)基性能測試實(shí)用指南》SN/T1538.2-2007中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理局國食藥監(jiān)械[2008]535號培養(yǎng)基類產(chǎn)品分類界定等綜合上述的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，下面主要以SN/T1538的標(biāo)準(zhǔn)為主要內(nèi)容簡述一下培養(yǎng)基的質(zhì)量保證與質(zhì)量控制。培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局培養(yǎng)基25培養(yǎng)基制備指南:SN/T1538SN/T1538.1-2005(2005-7-1實(shí)施)第1部分：實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則提出要求并制定系統(tǒng)的控制計劃屬于質(zhì)量保證的范圍SN/T1538.2-2007(2007-10-16實(shí)施)第2部分：培養(yǎng)基性能測試實(shí)用指南為保證提出的質(zhì)量要求所需要采取的技術(shù)操作屬于質(zhì)量控制的內(nèi)容培養(yǎng)基制備指南:SN/T1538SN/T1538.1-20026SN/T1538標(biāo)準(zhǔn)制定情況本部分為SN/T1538的第1部分對應(yīng)于：ISO/TS11133-1:《食品和動物飼料培養(yǎng)基制備指南-培養(yǎng)基制備指南-實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則》(2000英文版)與其的一致性程度(2005-07-01實(shí)施）本部分為SN/T1538的第2部分對應(yīng)于：ISO/TS11133-2:2003《食品和動物飼料培養(yǎng)基制備指南》與其的一致性程度(2007-10-16實(shí)施）SN/T1538標(biāo)準(zhǔn)制定情況本部分為SN/T1538的第1部27SN/T1538標(biāo)準(zhǔn)的作用為培養(yǎng)基質(zhì)量保證和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體系，有利于對培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)化管理，提高實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量。第1部分為質(zhì)量保證和培養(yǎng)基質(zhì)量基本要求。第2部分為質(zhì)量控制技術(shù)。為中國實(shí)驗(yàn)室國家認(rèn)可委員會（CNAS）合格評定微生物實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證工作提供參考依據(jù)。SN/T1538標(biāo)準(zhǔn)的作用為培養(yǎng)基質(zhì)量保證和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體28培養(yǎng)基的類型各別成分培養(yǎng)基（自制培養(yǎng)基）：實(shí)驗(yàn)室用不同的化學(xué)試劑或生物工程試劑按照一定的配方、比例配置而成的培養(yǎng)基。即用型培養(yǎng)基（商業(yè)培養(yǎng)基）：以即用形式置于容器中（例如：平皿、試管、安瓿或其它容器）供應(yīng)的培養(yǎng)基。脫水合成培養(yǎng)基（干粉培養(yǎng)基）：不立即使用的干粉形式的（如：粉末、顆粒、凍干等形式）培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的類型各別成分培養(yǎng)基（自制培養(yǎng)基）：29培養(yǎng)基的分類培養(yǎng)基是指以液體、半固體或固體形式，包含天然或合成成分，用于促進(jìn)微生物的繁殖或保持其活力的物質(zhì)組成。培養(yǎng)基分類按狀態(tài)分類：液體、固體、半固體培養(yǎng)基。按用途分類運(yùn)送培養(yǎng)基：保護(hù)和維持微生物活性，不含有使微生物增殖的物質(zhì)。培養(yǎng)基的分類培養(yǎng)基是指以液體、半固體或固體形式，包含天然或合30培養(yǎng)基的分類保存培養(yǎng)基；在一定期限內(nèi)保護(hù)和維持微生物活力，或使微生物在長期保存后容易復(fù)蘇（如卵黃培養(yǎng)基）。復(fù)蘇培養(yǎng)基：能夠使受損或應(yīng)激的微生物修復(fù)、使微生物恢復(fù)正常生長能力，但不促進(jìn)微生物繁殖的培養(yǎng)基（如緩沖蛋白胨水）。增菌培養(yǎng)基（選擇性：如膽鹽乳糖增菌液、非選擇性：如營養(yǎng)肉湯）。培養(yǎng)基的分類保存培養(yǎng)基；在一定期限內(nèi)保護(hù)和維持微生物活力，或31培養(yǎng)基的分類分離培養(yǎng)基選擇性分離培養(yǎng)基：支持特定微生物的生長而抑制其他微生物生長（如膽鹽硫乳瓊脂）非選擇性分離培養(yǎng)基：對微生物沒有選擇性的抑制作用（如營養(yǎng)瓊脂）鑒別培養(yǎng)基：能夠進(jìn)行一項(xiàng)或多項(xiàng)微生物生理學(xué)或生化特性鑒定試驗(yàn)（如三糖鐵瓊脂）鑒定培養(yǎng)基：能夠產(chǎn)生一個特定的鑒定反應(yīng)而不需要做進(jìn)一步確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基（如MUG培養(yǎng)基）培養(yǎng)基的分類分離培養(yǎng)基32培養(yǎng)基的質(zhì)量保證生產(chǎn)企業(yè)提供的材料：培養(yǎng)基名稱、各種成分和增補(bǔ)劑名稱、產(chǎn)品批號。培養(yǎng)基使用前的PH值。儲藏條件和有效期。技術(shù)數(shù)據(jù)清單。質(zhì)控證書（性能評價和所用的測試菌種）。必要的安全及危害數(shù)據(jù)。培養(yǎng)基的質(zhì)量保證生產(chǎn)企業(yè)提供的材料：33培養(yǎng)基的質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收：保存有效的培養(yǎng)基目錄清單。包裝情況和完整性。培養(yǎng)基的名稱和批號。接收日期、有效期。首次開封日期。內(nèi)容物的感官檢查(粉末的流動性、均勻性、結(jié)塊情況和顏色變化)。培養(yǎng)基的質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收：34培養(yǎng)基的儲存例行常規(guī)檢查（干粉培養(yǎng)基）：容器密封性復(fù)查；首次開封日期；內(nèi)容物感官檢查。使用前檢查（商業(yè)性培養(yǎng)基）：顏色是否發(fā)生變化？是否蒸發(fā)/脫水？是否有微生物污染？嚴(yán)格按照供應(yīng)商提供的儲藏條件、有效期和使用方法進(jìn)行培養(yǎng)基的保存和使用。有計劃購買，先購先用。培養(yǎng)基的儲存例行常規(guī)檢查（干粉培養(yǎng)基）：35培養(yǎng)基的儲存成品培養(yǎng)基（系指配好待用的培養(yǎng)基,下同）已分裝好的培養(yǎng)基：避光、冷藏。最終成分在使用前加入的培養(yǎng)基，冰箱保存不超過三個月，室溫保存不超過一個月。不穩(wěn)定的選擇性添加成分應(yīng)在培養(yǎng)基制備的當(dāng)天使用。觀察任意顏色變化，記錄培養(yǎng)基蒸發(fā)或微生物生長情況。培養(yǎng)基的儲存成品培養(yǎng)基（系指配好待用的培養(yǎng)基,下同）36培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備使用商品化的脫水合成培養(yǎng)基時，應(yīng)嚴(yán)格按照廠商提供的使用說明配置，如重量/體積、PH值、制備的數(shù)據(jù)、滅菌條件、操作步驟。使用獨(dú)立成分制備培養(yǎng)基時，按配方準(zhǔn)確配置并記錄配置步驟。培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備使用商品化的脫水合成培養(yǎng)基時，應(yīng)嚴(yán)格按照廠37培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備水：要求使用蒸餾水或相同質(zhì)量的水，不含有抑制或影響微生物生長的物質(zhì)。稱量和復(fù)水：防止培養(yǎng)基結(jié)塊。溶解和分裝：適當(dāng)加熱重復(fù)攪拌。

pH值的測定和調(diào)整：使用pH計。

1mol/L的氫氧化鈉溶液或1mol/L的鹽酸溶液進(jìn)行pH值的調(diào)整。培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備水：要求使用蒸餾水或相同質(zhì)量的水，不含有抑38培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備分裝滅菌濕熱滅菌：按使用說明規(guī)定進(jìn)行，監(jiān)控高壓滅菌過程，保證滅菌溫度，避免過度加熱。過濾除菌：真空負(fù)壓或正壓條件下進(jìn)行，濾膜和濾墊除菌。濾器121℃滅菌20分鐘。培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備分裝39培養(yǎng)基的使用瓊脂培養(yǎng)基的融化避免過度加熱，融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，不要放置超過4小時。對熱不穩(wěn)定的添加成分應(yīng)在培養(yǎng)基冷卻至48℃±2℃時加入。平板培養(yǎng)基的保存：暗處存放一周或4℃～12℃冰箱密封袋，存放三周或按廠商提供標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。作好標(biāo)記（名稱、制備日期、有效期）。平板冷卻后裝袋避免產(chǎn)生冷凝水。培養(yǎng)基的使用瓊脂培養(yǎng)基的融化避免過度加熱，融化后的培養(yǎng)基40培養(yǎng)基的使用平板培養(yǎng)基的培養(yǎng)每垛最多堆放六個平板，平板間要留有空隙進(jìn)行空氣流通，使溫度盡快達(dá)到一致。培養(yǎng)基的棄置所有污染和未使用的培養(yǎng)基的棄置必須采用安全的方式，并且要符合相關(guān)法規(guī)（廢棄物處理程序）的規(guī)定。

培養(yǎng)基的使用平板培養(yǎng)基的培養(yǎng)41成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制物理質(zhì)量的控制20～25℃時的pH值。液體培養(yǎng)基：外觀透明、清亮、無混濁、無沉淀。固體培養(yǎng)基：具有特定顏色、表面濕潤無水氣、平整光潔無凹坑和氣泡、無雜質(zhì)厚度3～4mm。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制物理質(zhì)量的控制42成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制無菌實(shí)驗(yàn)壓力蒸汽滅菌后的固體培養(yǎng)基，隨機(jī)抽取一定數(shù)量放36℃±1℃溫箱培養(yǎng)24小時。煮沸消毒的選擇性培養(yǎng)基可取部分瓊脂，放入無菌肉湯培養(yǎng)24小時。培養(yǎng)后無細(xì)菌生長視為合格。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制無菌實(shí)驗(yàn)43成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制細(xì)菌生長實(shí)驗(yàn)：用已知標(biāo)準(zhǔn)菌株做質(zhì)控。測試菌種要求

具有穩(wěn)定特性，能代表其種并能有效證明實(shí)驗(yàn)室特定培養(yǎng)基的最佳性能?？伤菰粗羾一驀H公認(rèn)的菌種收藏中心?？墒褂脤?shí)驗(yàn)室自己分離的具有良好特性的菌種，但必須對照標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行鑒定。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制細(xì)菌生長實(shí)驗(yàn)：用已知標(biāo)準(zhǔn)菌株做質(zhì)控。44成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制質(zhì)控菌種要求具有穩(wěn)定特性，能代表其種并能有效的證明實(shí)驗(yàn)室特定培養(yǎng)基的最佳性能的菌種。測試菌種主要購于參考菌種的菌種保藏中心。中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心[CMCC]。美國細(xì)菌收集和分型中心[ATCC]。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制質(zhì)控菌種要求具有穩(wěn)定特性，能代表其種并能45成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基的測試菌種應(yīng)具備以下性能：典型反應(yīng)的強(qiáng)陽性菌種；弱生長的陽性菌種（選擇更敏感的菌種）；生化反應(yīng)菌種（顯示不同發(fā)酵和熒光反應(yīng)的菌種）；完全抑制菌種。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基的測試菌種應(yīng)具備以下性能：46成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制菌液制備將工作用的質(zhì)控菌株在培養(yǎng)平板上轉(zhuǎn)種，培養(yǎng)后取3～5個單個的菌落懸浮于少量的滅菌TSB中，培養(yǎng)4h～5h。用分光光度計調(diào)整濁度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)或在625nm吸光度值為0.08～0.1，使菌落計數(shù)達(dá)到(1～2)×108CFU/mL。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制菌液制備47成品固體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制將36±1℃培養(yǎng)18～24h的新鮮菌懸液用生理鹽水作1:10稀釋，在每個待測培養(yǎng)基上用3mm接種環(huán)或0.1mL稀釋懸液接種,使?jié)舛冗_(dá)到100CFU/碟。至少使用兩塊平板，每塊平板的菌落平均數(shù)應(yīng)為100cfu。按適宜的溫度培養(yǎng)，觀察平板上細(xì)菌的生長特征。結(jié)果應(yīng)生長良好。成品固體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制將36±1℃培養(yǎng)18～24h的新鮮菌48成品固體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制平板培養(yǎng)技術(shù)：傾注法涂布法旋轉(zhuǎn)涂布法成品固體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制平板培養(yǎng)技術(shù)：49成品液體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制將36±1℃培養(yǎng)18～24小時的新鮮菌懸液用生理鹽水作1:10稀釋，取50～100cfu接種至試驗(yàn)培養(yǎng)基和參照培養(yǎng)基中。按適宜的溫度進(jìn)行培養(yǎng)。觀察每瓶（管）細(xì)菌的生長情況，結(jié)果應(yīng)生長良好。對于不透明的培養(yǎng)基，在確定生長時需接種到瓊脂培養(yǎng)基上。成品液體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制將36±1℃培養(yǎng)18～24小時的新鮮50成品培養(yǎng)基質(zhì)量檢查記錄培養(yǎng)基質(zhì)量檢查記錄表培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家批號外觀顏色澄清度pH軟硬度微生物學(xué)性能檢定結(jié)論檢驗(yàn)者/時間備注成品培養(yǎng)基質(zhì)量檢查記錄培養(yǎng)基質(zhì)量檢查記錄表培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家51微生物檢驗(yàn)的量值溯源為滿足培養(yǎng)基、試劑盒和試劑的質(zhì)量測定和微生物工程檢測過程的質(zhì)量控制需要，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)準(zhǔn)備好足夠種類和數(shù)量的參考菌株和參考培養(yǎng)物。參考菌株和參考培養(yǎng)物可以由有資質(zhì)的單位提供或經(jīng)過準(zhǔn)確鑒定的分離株。菌種：個體形態(tài)以及菌落特征相近，而且生化反應(yīng)、基因特征、血清型均保持一致的細(xì)胞菌落。微生物檢驗(yàn)的量值溯源為滿足培養(yǎng)基、試劑盒和試劑的質(zhì)量測定和微52微生物檢驗(yàn)的量值溯源參考菌種：至少定到屬或種水平的菌種，按其特征進(jìn)行分類和描述。參考原種：將實(shí)驗(yàn)室獲得的或供應(yīng)商提供的標(biāo)準(zhǔn)菌種在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過一代轉(zhuǎn)接后獲得的一套獨(dú)立的相同的菌種。工作菌種：由參考原株轉(zhuǎn)接一代獲得的菌種。微生物檢驗(yàn)的量值溯源參考菌種：至少定到屬或種水平的菌種，按其53菌種保藏的目的菌種保藏的目的：保持菌種較高的存活率；降低菌種的變異幅度；防止其他微生物污染；在適宜條件下，菌種可以重新恢復(fù)原有生物學(xué)活性。菌種保藏的目的菌種保藏的目的：54菌種保藏的原理菌種保藏的原則是根據(jù)菌種的生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代謝強(qiáng)度，使細(xì)胞處于休眠狀態(tài)，生長繁殖受到抑制但又不至于死亡，以減少菌的變異率。低溫、干燥、缺氧、缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都有抑制微生物的代謝作用。因此低溫、干燥、真空是用于菌種保藏的重要手段。菌種保藏的原理菌種保藏的原則是根據(jù)菌種的生理、生化特性，在人55菌種的管理1、實(shí)驗(yàn)用菌、毒種的申購，應(yīng)有科室負(fù)責(zé)人簽字。申購單應(yīng)注明菌種名、菌號、數(shù)量及請購單位蓋章。2、菌種應(yīng)有專人保管，管理人員應(yīng)具有較強(qiáng)的責(zé)任心。從指定單位購到的菌毒種，應(yīng)有登記。一一核對菌種、菌號、數(shù)量，無誤后方可轉(zhuǎn)種。3、用適宜培養(yǎng)基將凍干菌種稀釋、轉(zhuǎn)種、培養(yǎng)。該菌種經(jīng)鑒定無誤后可作為對照菌用。如發(fā)現(xiàn)菌株特性不符，不得使用。菌種的管理1、實(shí)驗(yàn)用菌、毒種的申購，應(yīng)有科室負(fù)責(zé)人簽字。申購56菌種的管理4、試驗(yàn)用菌種在使用過程中，應(yīng)檢查其生物學(xué)特性。如有變異或污染雜菌，均不得使用。發(fā)現(xiàn)染菌或變異、衰退等現(xiàn)象時，應(yīng)及時恢復(fù)或廢棄。5、試驗(yàn)菌種不得任意帶出實(shí)驗(yàn)室。外單位索取菌種時，應(yīng)經(jīng)領(lǐng)導(dǎo)同意，包裝嚴(yán)密，妥善攜帶。菌種的管理4、試驗(yàn)用菌種在使用過程中，應(yīng)檢查其生物學(xué)特性。57菌種保藏菌種的保藏是微生物檢驗(yàn)工作中的一項(xiàng)常規(guī)技術(shù)，科學(xué)的保藏和管理直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的正確與否。不同微生物根據(jù)其特征選擇最適宜的保藏方法，菌種保藏方法一般分四個階段（1）挑選特征典型的純菌菌落。（2）能產(chǎn)生孢子或芽孢的微生物應(yīng)用孢子和芽孢進(jìn)行保存。（3）選擇最適宜的方法保藏。（4）定期對保藏菌種進(jìn)行檢查。菌種保藏菌種的保藏是微生物檢驗(yàn)工作中的一項(xiàng)常規(guī)技術(shù)，科學(xué)的保58標(biāo)準(zhǔn)菌株的儲備標(biāo)準(zhǔn)菌株在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過一次傳代獲得的一組完全相同的菌株。傳代菌株應(yīng)當(dāng)完全具備標(biāo)準(zhǔn)菌株的所有性狀。傳代時要保證一定的量，以減少傳代的次數(shù)每株菌株盡量避免多次使用。采用不同的保存方法保存期限不同（如斜面保存法、穿刺法，液體石蠟法等保存期限的長短都不一樣）。標(biāo)準(zhǔn)菌株的儲備標(biāo)準(zhǔn)菌株在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過一次傳代獲得的一組完全相同59常用菌種的保藏方法菌種保藏方法有多種，如瓊脂斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、干燥（沙土）保藏法、玻璃珠保藏法、冷凍真空保藏法、超低溫保藏法、液氮保藏法等。但對不同的微生物應(yīng)通過保藏試驗(yàn)來選擇最適宜的保藏方法。注意事項(xiàng):保藏的菌種均應(yīng)是新鮮純菌培養(yǎng)物,至少應(yīng)是第三代的培養(yǎng)物。不同細(xì)菌用不同培養(yǎng)基，定期檢查菌種保存環(huán)境做好記錄。1、瓊脂斜面低溫保藏方法

常用菌種的保藏方法菌種保藏方法有多種，如瓊脂斜面低溫保藏法、60常用菌種的保藏方法2、半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)3、液體石蠟覆蓋保藏法：本法是用石蠟將培養(yǎng)物與空氣隔絕，以降低菌種的生理、升化水平，延長菌種保藏時間。

方法：選擇優(yōu)質(zhì)液體石蠟，121℃高壓滅菌30min后在160℃烘箱1～2h除去掉水分冷卻后備用。取經(jīng)培養(yǎng)的高層半固體菌管加入液體石蠟，高出培養(yǎng)基面1cm為宜，放入4℃保藏。可保存半年或一年。

常用菌種的保藏方法2、半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)61常用菌種的保藏方法4、冷凍真空保藏法保護(hù)劑：有多種，多用脫脂牛奶。將牛奶煮沸、靜止、冷卻除去上面一層脂肪，重復(fù)3次后用脫脂棉過濾，滅菌。菌懸液制備：直接刮取用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)菌，懸浮于分散劑中。用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)菌，哀告離心沉淀傾出上清液，加入分散劑。菌懸液濃度：109～1012cfu/ml。低溫、冷凍、真空干燥置-35℃保存。常用菌種的保藏方法4、冷凍真空保藏法62常用菌種的保藏方法5、液氮保藏法保存：制備菌懸液，用甘油或二甲亞砜作保護(hù)劑，分裝安瓿，每管0.5ml，預(yù)凍至-40℃（控制溫度下降速率為1℃/min)，放入液氮生物貯存罐中保存?；謴?fù)：直接浸入38℃水浴中解凍5～10min，轉(zhuǎn)種于適宜培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。注意：大多數(shù)屬種適于慢速凍結(jié)和快速凍結(jié)。常用菌種的保藏方法5、液氮保藏法63蒸餾水保藏法6、蒸餾水保藏法在斜面培養(yǎng)基上加無菌蒸餾水5～6ml，用吸管輕輕吹散表面菌苔，移入滅菌螺旋口小試管中，蓋嚴(yán)蓋子在室溫保存。霉菌、酵母和放線菌、植物病原菌可在室溫保存數(shù)年。蒸餾水保藏法6、蒸餾水保藏法64玻璃珠保藏法7、玻璃珠保藏法無菌操作將菌懸液加入玻璃瓶中，充分?jǐn)噭影徊Ａе?，移去多余懸液。?biāo)記后保存-60～85℃冰柜。不同顏色有助菌株辨別。使用使取出1粒用相應(yīng)培養(yǎng)基培養(yǎng)需氧菌—營養(yǎng)肉湯，厭氧菌——強(qiáng)化梭狀芽孢桿菌培養(yǎng)基。嗜鹽菌—鹽營養(yǎng)肉湯加15%甘油。玻璃珠保藏法7、玻璃珠保藏法65甘油低溫保藏法8、甘油低溫保藏法菌種懸浮在10%～15%甘油蒸餾水，超低溫冰箱保藏（-70～80℃

）。菌種最好培養(yǎng)至對數(shù)生長期。使用液體培養(yǎng)基時，可直接加到已滅菌的甘油中，使甘油終濃度10%～30%。分裝于凍存管中，避免反復(fù)凍融?；蚬こ叹半y以冷凍干燥的絲狀真菌。甘油低溫保藏法8、甘油低溫保藏法66適用菌種的保藏方法液氮保藏法適用菌種：病毒、支原體、各類細(xì)菌、放線菌、酵母菌、絲狀真菌、動物細(xì)胞等。甘油低溫保藏法適用菌種：細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌、基放線菌和基因工程等。液體石蠟覆蓋保藏法適用菌種：真菌、酵母菌、多種細(xì)菌。不適用菌種：乳酸桿菌、分枝桿菌等。適用菌種的保藏方法液氮保藏法適用菌種：病毒、支原體、各類細(xì)菌67菌種的傳代

將在適宜的培養(yǎng)基上生長良好的培養(yǎng)物（庖肉培養(yǎng)基、半固體、高層瓊脂）放置在低溫處保存，使細(xì)菌停止生長或緩慢生長。當(dāng)培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分被利用完以前或尚未陳舊以前，將它重新移植于新鮮培養(yǎng)基，再于適宜條件培養(yǎng)，生長良好后，再置低溫保存。菌種的傳代將在適宜的培養(yǎng)基上生長良好的培養(yǎng)物（庖肉培養(yǎng)基、68菌種的傳代

最好每株接種兩管以上，需定期移種。培養(yǎng)基表面需加滅菌液體石蠟，用橡皮塞代替棉塞，以防止干燥脫水。傳代菌株采用斜面、穿刺方法、液體。多數(shù)菌株要求保藏溫度為4～5℃。

反復(fù)傳代后，在使用前需進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。一般1個月～6個月傳代一次。適用菌種：大腸、沙門、銅綠、金葡、生孢、枯草、短小、藤黃、白念、黑曲等。菌種的傳代最好每株接種兩管以上，需定期移種。69菌種檢查和復(fù)壯經(jīng)過長期保藏和傳代的菌種，由于種種原因易發(fā)生衰退、變異或死亡，因此各類菌種在保藏期間必須定期檢查，發(fā)現(xiàn)變異或衰退，應(yīng)及時給予恢復(fù)。定期檢查：在一定間隔時間需重新復(fù)活、分離、純化、鑒定再保藏。檢查項(xiàng)目：菌落形態(tài)、革蘭染色、顯微鏡下菌體形態(tài)、生化特性及血清學(xué)檢查。菌種檢查和復(fù)壯經(jīng)過長期保藏和傳代的菌種，由于種種原因易發(fā)生衰70防止菌種衰退控制傳代次數(shù)。采用有效的菌種保藏方法。創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件。利用不同類型細(xì)胞進(jìn)行接種傳代。防止菌種衰退控制傳代次數(shù)。71菌種的復(fù)蘇對已保藏的菌種進(jìn)行恢復(fù)培養(yǎng)，使其恢復(fù)至保藏前狀態(tài)。液氮超低溫保存：配置合適的培養(yǎng)基；解凍與恢復(fù)培養(yǎng)（迅速放入38℃～40℃水浴中震蕩5～10min解凍）；開啟安瓿，將菌種移入相應(yīng)的培養(yǎng)基中，在適宜的溫度下培養(yǎng)。菌種的復(fù)蘇對已保藏的菌種進(jìn)行恢復(fù)培養(yǎng)，使其恢復(fù)至保藏前狀態(tài)。72菌種的復(fù)蘇使用真空冷凍干燥保存：開啟安瓿瓶，滴入無菌生理鹽水或營養(yǎng)肉湯0.5ml，溶解后搖勻，懸液移入相應(yīng)的培養(yǎng)基中，在適宜的溫度下培養(yǎng)。冷凍菌種復(fù)原：使用復(fù)蘇培養(yǎng)液，對活性較弱的菌種（弧菌屬）可另加入其他物質(zhì)提高存活率。菌種的復(fù)蘇使用真空冷凍干燥保存：開啟安瓿瓶，滴入無菌生理鹽水73菌種的使用

專人負(fù)責(zé)詳細(xì)登記定期移種安全管理確認(rèn)實(shí)驗(yàn)復(fù)壯注意事項(xiàng)菌種的使用專人負(fù)責(zé)74菌種的使用傳代保藏的菌種，最多使用到第五代，每次轉(zhuǎn)接盡量擴(kuò)大子代管數(shù)。經(jīng)冷凍保存的菌種，復(fù)蘇時應(yīng)一次用完，避免反復(fù)凍融。菌種使用完畢，應(yīng)按規(guī)定方法滅菌后棄置，注意人員防護(hù)。菌種的使用傳代保藏的菌種，最多使用到第五代，每次轉(zhuǎn)接盡量擴(kuò)大75我所標(biāo)準(zhǔn)工作菌種復(fù)蘇方法

1、復(fù)蘇菌種前應(yīng)準(zhǔn)備適于該菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備，所有的操作應(yīng)在符合生物安保護(hù)及無菌條件下進(jìn)行。

2、扭開凍存管前，先用75%的乙醇棉球消毒菌種凍存管外壁，注意記住菌種的標(biāo)記名稱（一般要求每次只打開一種菌種），用滅菌吸管將凍存管內(nèi)的菌懸液全部吸出，接入10ml的液體培養(yǎng)基中（大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌、我所標(biāo)準(zhǔn)工作菌種復(fù)蘇方法

1、復(fù)蘇菌種前應(yīng)準(zhǔn)備適于該菌種生76我所標(biāo)準(zhǔn)工作菌種復(fù)蘇方法金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、克雷伯肺炎桿菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基；生孢梭菌接種到硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基；白色念珠菌、黑曲霉、啤酒酵母菌接種到改良馬丁培養(yǎng)基）。3、細(xì)菌置35～37℃培養(yǎng)24～48小時，真菌置25～28℃培養(yǎng)48～72小時。觀察菌種生長情況，如菌未生長，細(xì)菌繼續(xù)培養(yǎng)至72小時，真菌繼續(xù)培養(yǎng)至96小時。我所標(biāo)準(zhǔn)工作菌種復(fù)蘇方法金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、枯草芽孢77我所標(biāo)準(zhǔn)工作菌種復(fù)蘇方法

4、復(fù)蘇后的菌種再傳種一次后使用。保藏菌種用的培養(yǎng)基可用固體瓊脂斜面、半固體高層瓊脂、液體培養(yǎng)基等。

5、需保藏的菌種置于4～6℃冰箱保藏，細(xì)菌一般每隔一個月傳代一次，真菌一般每隔2～3個月傳代一次。我所標(biāo)準(zhǔn)工作菌種復(fù)蘇方法4、復(fù)蘇后的菌種再傳種一次后使用。78菌種保藏的相關(guān)記錄在菌種的采購、使用和保藏過程中，應(yīng)建立菌種的接收、傳代和使用的相關(guān)檔案，以備實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證時查案。表1：菌種接收記錄表日期菌種名稱菌種來源菌號數(shù)量保藏溫度移交人管理人備注菌種保藏的相關(guān)記錄在菌種的采購、使用和保藏過程中，應(yīng)建立菌種79菌種保藏的相關(guān)記錄表2：菌種傳代記錄表表3：菌種使用記錄表

傳代日期菌種源培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度保藏溫度代數(shù)數(shù)量傳代人備注支取日期菌種名稱數(shù)量使用人用途分發(fā)人備注菌種保藏的相關(guān)記錄表2：菌種傳代記錄表傳代日期菌種源培養(yǎng)基培80菌種的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)

根據(jù)中國合格評定國家認(rèn)可委員會（CNAS-CL09）《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》5.6.2.2.1“參照菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代,并做確認(rèn)試驗(yàn),包括實(shí)驗(yàn)室中所需要的關(guān)鍵診斷指標(biāo),實(shí)驗(yàn)室必須加以記錄并予以保存”的規(guī)定，因此，微生物實(shí)驗(yàn)室對保藏的標(biāo)準(zhǔn)工作菌種要定期進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)（即關(guān)鍵診斷）。例如：大腸埃希菌的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)菌種的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)根據(jù)中國合格評定國家認(rèn)可委員會（CNAS81菌種的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)工作菌種關(guān)鍵診斷指標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表菌種名稱：大腸埃希菌菌號：[CMCC(B)44102]檢查日期菌種源診斷指標(biāo)結(jié)論檢驗(yàn)者備注革蘭染色鏡檢靛基質(zhì)試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)乙酰甲基甲醇試驗(yàn)枸椽酸鹽利用試驗(yàn)08.10.20.44102-3Ｇ-短桿菌++--符合規(guī)定張三/09.4.25.44102-4Ｇ-短桿菌++

-

-符合規(guī)定李四

/菌種的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)工作菌種關(guān)鍵診斷指標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表菌種名稱82染色液的質(zhì)量控制初次使用時用革蘭氏陽性球菌[金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003]和革蘭氏陰性桿菌[大腸桿菌CMCC(B)44102]標(biāo)準(zhǔn)株做質(zhì)量鑒定。商品化染色液控制：試劑名稱、批號、存放條件、有效期。各種染液滴管不能混用。每月做一次質(zhì)控。發(fā)現(xiàn)問題及時更換染液。染色液的質(zhì)量控制初次使用時用革蘭氏陽性球菌[金黃色葡萄球菌83生化試劑的質(zhì)量控制保證試劑的穩(wěn)定性：避光保存（通常配制在棕色玻瓶中）；有效期限；依據(jù)說明書使用；新批號要使用標(biāo)準(zhǔn)菌株做確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。生化試劑的質(zhì)量控制保證試劑的穩(wěn)定性：84診斷血清的質(zhì)量控制避光冷藏保存，保證試劑的穩(wěn)定性。有效期。依據(jù)說明書使用。新批號要使用標(biāo)準(zhǔn)菌株做確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。診斷血清的質(zhì)量控制避光冷藏保存，保證試劑的穩(wěn)定性。85診斷血清的質(zhì)量控制生產(chǎn)廠商資質(zhì)驗(yàn)收：批號、效價、透明度、色澤。試驗(yàn)中注意無菌操作。4℃冰箱儲存，發(fā)現(xiàn)渾濁、絮狀應(yīng)停止使用。每三個月使用標(biāo)準(zhǔn)菌株對血清進(jìn)行一次質(zhì)控。診斷血清的質(zhì)量控制生產(chǎn)廠商資質(zhì)86診斷血清生化試劑的質(zhì)量控制試劑名稱陽性對照菌種陰性對照菌種監(jiān)測頻率凝固酶血漿金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌

每次沙門菌屬A～F“0”多價血清乙型副傷寒沙門菌大腸埃希菌

每次靛基質(zhì)試劑大腸埃希菌產(chǎn)氣腸桿菌

每次甲基紅試劑大腸埃希菌產(chǎn)氣腸桿菌

每次VP試劑產(chǎn)氣腸桿菌大腸埃希菌

每次氧化酶銅綠假單胞菌大腸埃希菌

每次診斷血清生化試劑的質(zhì)量控制試劑名稱陽性對照菌種陰性對照菌種監(jiān)87謝謝，再見!微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制2009課件88衛(wèi)生微生物實(shí)驗(yàn)室

的質(zhì)量保證與質(zhì)量控制二00九年四月衛(wèi)生微生物實(shí)驗(yàn)室

的質(zhì)量保證與質(zhì)量控制89微生物實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生微生物實(shí)驗(yàn)室病原微生物實(shí)驗(yàn)室臨床微生物實(shí)驗(yàn)室分子微生物實(shí)驗(yàn)室微生物實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生微生物實(shí)驗(yàn)室90微生物檢測的定義在特定的環(huán)境下(無菌)，采用適當(dāng)?shù)姆椒▽悠分心繕?biāo)微生物進(jìn)行增殖和培養(yǎng)，并對以放大后的目標(biāo)微生物進(jìn)行感官、生理、生化等到方面的特性分析和判定，以確定樣品中目標(biāo)微生物的量或質(zhì)的特性的過程。微生物檢測的定義在特定的環(huán)境下(無菌)，采用適當(dāng)?shù)姆椒▽悠?1微生物檢測涉及的要素檢驗(yàn)人員檢測經(jīng)驗(yàn)的判斷能力檢測設(shè)備保證目標(biāo)菌種的生長的外部環(huán)境菌種試劑保證目標(biāo)菌種的生長的內(nèi)部環(huán)境檢測方法選擇適宜目標(biāo)菌種檢測的方法測試環(huán)境保證操作過程不受外界干擾（保護(hù)樣品和人員）微生物檢測涉及的要素檢驗(yàn)人員92檢驗(yàn)人員檢驗(yàn)人員需經(jīng)過微生物專業(yè)基礎(chǔ)知識和無菌技術(shù)的培訓(xùn)后,方可上崗操作,并應(yīng)了解本專業(yè)國內(nèi)外的最新文獻(xiàn)資料、參加專業(yè)培訓(xùn)，不斷更新專業(yè)知識和提高檢驗(yàn)質(zhì)量，從實(shí)踐中不斷提高實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范，以保證檢驗(yàn)工作科學(xué)、規(guī)范、優(yōu)質(zhì)、高效，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確和報告公正，實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化和管理科學(xué)化。檢驗(yàn)人員檢驗(yàn)人員需經(jīng)過微生物專業(yè)基礎(chǔ)知識和無菌技術(shù)的培訓(xùn)后,93質(zhì)量保證和質(zhì)量控制的目的質(zhì)量保證為使人們能確信某產(chǎn)品(這里指培養(yǎng)基)能滿足規(guī)定的質(zhì)量要求所必須的執(zhí)行的有計劃的和系統(tǒng)的活動。質(zhì)量控制為達(dá)到質(zhì)量要求所采取的作業(yè)技術(shù)和活動。為監(jiān)測整個檢測的過程，排除在具體的技術(shù)操作中導(dǎo)致不滿意的原因，以取得可靠的檢測結(jié)果。質(zhì)量保證和質(zhì)量控制的目的質(zhì)量保證94微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)施微生物檢驗(yàn)必須在無菌環(huán)境中進(jìn)行，保持樣品的原污染狀態(tài)，防止二次污染。在未普遍采用現(xiàn)代化的無菌隔離器技術(shù)之前，無菌室仍然是最常用的無菌環(huán)境之一，無菌室及配套的相關(guān)建筑設(shè)計應(yīng)充分考慮其合理布局，操作安全，使用方便等條件。微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)施微生物檢驗(yàn)必須在無菌環(huán)境中進(jìn)行，保持樣品的原95微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室應(yīng)遠(yuǎn)離交通干道、廁所及污染區(qū)，最好在二樓以上，應(yīng)選上、下水道及其他安裝適宜的位置。滅菌物品存放和傳輸、培養(yǎng)間、結(jié)果觀察、陽性對照實(shí)驗(yàn)室和辦公室等，要集中，減少污染，便于管理和使用。微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室應(yīng)遠(yuǎn)離交通干道、廁所及污染區(qū)，最好在二96微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌操作間應(yīng)具有單向流空氣凈化設(shè)備，無菌操作間面積不小于5m2,高度不超過2.4m,溫度控制在18℃～26℃，相對濕度40%～60%。新鮮空氣經(jīng)高效層流過濾后進(jìn)入操作間。潔凈度級別為局部百級、周圍環(huán)境萬級。應(yīng)保持對環(huán)境形成正壓，不同級別的潔凈室之間的壓差不低于4.9Pa，潔凈區(qū)對與其相通的非潔凈區(qū)的壓差不低于10Pa。無菌室潔凈度要定期檢查沉降菌或浮游菌及懸浮粒子。微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌操作間應(yīng)具有單向流空氣凈化設(shè)備，無菌操作97微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑、平整、無縫隙、不起灰、耐腐蝕、易清洗，墻與地面、臺面、墻壁之間連接處應(yīng)呈凹弧形，不留死角，室內(nèi)不安裝上、下水道，進(jìn)出口應(yīng)為拉門，出入操作間和緩沖間的門不應(yīng)直對。室內(nèi)的電源總控制應(yīng)設(shè)在室外。微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑、平整、無縫隙、不起灰、耐98微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室內(nèi)采光的面積要大，照明燈應(yīng)嵌裝在天花板內(nèi)，光照應(yīng)分布均勻，光照度不低于300勒克斯，緩沖間和操作間勻應(yīng)設(shè)置紫外燈（2～2.5w/m3)，距實(shí)驗(yàn)臺面高度不超過1m。微生物實(shí)驗(yàn)室布局無菌室內(nèi)采光的面積要大，照明燈應(yīng)嵌裝在天花板99微生物實(shí)驗(yàn)室使用無菌檢查、微生物限度檢查、微生物效價檢定應(yīng)有專用的無菌室，不可混用，以免彼此干擾或交叉污染。陽性對照實(shí)驗(yàn)以及具有危險性的毒菌、毒素等檢驗(yàn)，如破傷風(fēng)梭菌、黃曲霉毒素等檢驗(yàn)，必須有單獨(dú)使用的無菌間或生物安全柜，以便控制，防止傳播。微生物實(shí)驗(yàn)室使用無菌檢查、微生物限度檢查、微生物效價檢定應(yīng)有100微生物實(shí)驗(yàn)室使用無菌室一般應(yīng)設(shè)有一更、二更、緩沖間和無菌操作間。無菌室內(nèi)應(yīng)有人凈、物凈設(shè)施，所有實(shí)驗(yàn)器材應(yīng)經(jīng)過消毒處理后，通過物流間無菌傳遞系統(tǒng)進(jìn)入無菌室，執(zhí)行人流和物流分開。微生物實(shí)驗(yàn)室使用無菌室一般應(yīng)設(shè)有一更、二更、緩沖間和無菌操作101微生物實(shí)驗(yàn)室的分級根據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB19489-2004《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》把所有操作的微生物因子的危害程度和采取的防護(hù)措施，將微生物實(shí)驗(yàn)室所處理樣本的生物危險性程度將微生物實(shí)驗(yàn)室分為四級：Ⅰ級對生物安全隔離要求最低，Ⅳ級最高。以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示微生物實(shí)驗(yàn)室的相應(yīng)生物安全防護(hù)水平。微生物實(shí)驗(yàn)室的分級根據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB19489-102微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅰ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對健康成年人巳知無致病作用的微生物，如用于教學(xué)的普通微生物實(shí)驗(yàn)室等。Ⅱ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物。微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅰ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：103微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅲ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物及其病毒，通常巳有預(yù)防傳染的疫苗。艾滋病病毒的研究（血清學(xué)實(shí)驗(yàn)除外）應(yīng)在Ⅲ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅲ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：104微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅳ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的致病微生物及毒素。與上述情況類似的不明微生物，也必須在Ⅳ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。待有充分?jǐn)?shù)據(jù)后再決定此種微生物或毒素應(yīng)在Ⅳ級還是在較低級別的實(shí)驗(yàn)室中處理。微生物實(shí)驗(yàn)室的分級Ⅳ級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：105儀器設(shè)備所用的各種器械及設(shè)備應(yīng)按計量要求定期檢測，全部設(shè)備應(yīng)滿足檢測項(xiàng)目的要求，做到設(shè)備檔案齊全，每臺（件）設(shè)備需使用標(biāo)簽標(biāo)識，需檢定或校準(zhǔn)的設(shè)備表明狀態(tài)和有效期限，儀器使用作業(yè)指導(dǎo)書，手冊和使用記錄，環(huán)境監(jiān)測記錄、維修記錄等，以保證其正常使用。儀器設(shè)備所用的各種器械及設(shè)備應(yīng)按計量要求定期檢測，全部設(shè)備應(yīng)106儀器設(shè)備無菌實(shí)驗(yàn)室配備的紫外消毒裝置，使用前后進(jìn)行照射消毒，要定期進(jìn)行紫外線強(qiáng)度和空氣質(zhì)量監(jiān)測，高效過濾器應(yīng)定期進(jìn)行風(fēng)速監(jiān)測，根據(jù)檢測的情況，必要時予以更換處理。生物安全實(shí)驗(yàn)室，要正常進(jìn)行管理維護(hù)和工作人員隔離防護(hù)。高壓蒸汽滅菌器除定期校驗(yàn)表壓和溫度外，應(yīng)定期用生物指示劑對滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。儀器設(shè)備無菌實(shí)驗(yàn)室配備的紫外消毒裝置，使用前后進(jìn)行照射消毒，107儀器設(shè)備其他微生物學(xué)檢驗(yàn)所用的儀器，如培養(yǎng)箱、電熱恒溫水浴箱、電熱恒溫干燥箱、酸度計、電子天平、微量加樣器、光學(xué)光度計、冰箱、低溫冰箱、光學(xué)顯微鏡、生物安柜等，應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)定進(jìn)行檢查。培養(yǎng)箱內(nèi)保持清潔，要定期進(jìn)行細(xì)菌和霉菌的檢查。儀器設(shè)備其他微生物學(xué)檢驗(yàn)所用的儀器，如培養(yǎng)箱、電熱恒溫水浴箱108實(shí)驗(yàn)室維護(hù)工作臺面：測定樣品前或開始工作前，必須用清潔劑（消毒劑）徹底消潔臺面。工作結(jié)束（樣品制備、接種、轉(zhuǎn)移）或當(dāng)天工作結(jié)束后，臺面要再清潔消毒。處理致病菌性物質(zhì)時，用75%的乙醇，70～90%的異丙醇或次氯酸鹽溶液消毒。實(shí)驗(yàn)室維護(hù)工作臺面：109實(shí)驗(yàn)室維護(hù)生物危害性物質(zhì)：所有物質(zhì)用后立即置于廠商建議濃度的消毒液中（如5%的苯酚溶液），或直接扔到危害袋中。所有物質(zhì)在121℃持續(xù)高壓滅菌至少30分鐘。滅菌后按規(guī)定丟棄所有具器。遵守廢棄物處理規(guī)定。實(shí)驗(yàn)室維護(hù)生物危害性物質(zhì)：110培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基分類上屬于體外診斷試劑。其質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)有：中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局《商品化微生物培養(yǎng)基的質(zhì)量保證》SNCCLS-1996中華人民共和國衛(wèi)生部《商業(yè)性微生物養(yǎng)基質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程》WS/T232-2002(所謂商業(yè)性就是即買即用的一次性培養(yǎng)基)中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

YY/T0577-2005培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基分類上屬于體外診斷試劑。其質(zhì)量控制111培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局培養(yǎng)基制備指南第1部分《實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備和質(zhì)量保證通則》SN/T1538.1-2005中華人民共和國藥典2005年版中國藥品標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)操作規(guī)范2005年版中國合格評定國家認(rèn)可委員會（CNAS-CL09:2006)《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說明》培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局培養(yǎng)基112培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局培養(yǎng)基制備指南第2部分《培養(yǎng)基性能測試實(shí)用指南》SN/T1538.2-2007中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理局國食藥監(jiān)械[2008]535號培養(yǎng)基類產(chǎn)品分類界定等綜合上述的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，下面主要以SN/T1538的標(biāo)準(zhǔn)為主要內(nèi)容簡述一下培養(yǎng)基的質(zhì)量保證與質(zhì)量控制。培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局培養(yǎng)基113培養(yǎng)基制備指南:SN/T1538SN/T1538.1-2005(2005-7-1實(shí)施)第1部分：實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則提出要求并制定系統(tǒng)的控制計劃屬于質(zhì)量保證的范圍SN/T1538.2-2007(2007-10-16實(shí)施)第2部分：培養(yǎng)基性能測試實(shí)用指南為保證提出的質(zhì)量要求所需要采取的技術(shù)操作屬于質(zhì)量控制的內(nèi)容培養(yǎng)基制備指南:SN/T1538SN/T1538.1-200114SN/T1538標(biāo)準(zhǔn)制定情況本部分為SN/T1538的第1部分對應(yīng)于：ISO/TS11133-1:《食品和動物飼料培養(yǎng)基制備指南-培養(yǎng)基制備指南-實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則》(2000英文版)與其的一致性程度(2005-07-01實(shí)施）本部分為SN/T1538的第2部分對應(yīng)于：ISO/TS11133-2:2003《食品和動物飼料培養(yǎng)基制備指南》與其的一致性程度(2007-10-16實(shí)施）SN/T1538標(biāo)準(zhǔn)制定情況本部分為SN/T1538的第1部115SN/T1538標(biāo)準(zhǔn)的作用為培養(yǎng)基質(zhì)量保證和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體系，有利于對培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)化管理，提高實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量。第1部分為質(zhì)量保證和培養(yǎng)基質(zhì)量基本要求。第2部分為質(zhì)量控制技術(shù)。為中國實(shí)驗(yàn)室國家認(rèn)可委員會（CNAS）合格評定微生物實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證工作提供參考依據(jù)。SN/T1538標(biāo)準(zhǔn)的作用為培養(yǎng)基質(zhì)量保證和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體116培養(yǎng)基的類型各別成分培養(yǎng)基（自制培養(yǎng)基）：實(shí)驗(yàn)室用不同的化學(xué)試劑或生物工程試劑按照一定的配方、比例配置而成的培養(yǎng)基。即用型培養(yǎng)基（商業(yè)培養(yǎng)基）：以即用形式置于容器中（例如：平皿、試管、安瓿或其它容器）供應(yīng)的培養(yǎng)基。脫水合成培養(yǎng)基（干粉培養(yǎng)基）：不立即使用的干粉形式的（如：粉末、顆粒、凍干等形式）培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的類型各別成分培養(yǎng)基（自制培養(yǎng)基）：117培養(yǎng)基的分類培養(yǎng)基是指以液體、半固體或固體形式，包含天然或合成成分，用于促進(jìn)微生物的繁殖或保持其活力的物質(zhì)組成。培養(yǎng)基分類按狀態(tài)分類：液體、固體、半固體培養(yǎng)基。按用途分類運(yùn)送培養(yǎng)基：保護(hù)和維持微生物活性，不含有使微生物增殖的物質(zhì)。培養(yǎng)基的分類培養(yǎng)基是指以液體、半固體或固體形式，包含天然或合118培養(yǎng)基的分類保存培養(yǎng)基；在一定期限內(nèi)保護(hù)和維持微生物活力，或使微生物在長期保存后容易復(fù)蘇（如卵黃培養(yǎng)基）。復(fù)蘇培養(yǎng)基：能夠使受損或應(yīng)激的微生物修復(fù)、使微生物恢復(fù)正常生長能力，但不促進(jìn)微生物繁殖的培養(yǎng)基（如緩沖蛋白胨水）。增菌培養(yǎng)基（選擇性：如膽鹽乳糖增菌液、非選擇性：如營養(yǎng)肉湯）。培養(yǎng)基的分類保存培養(yǎng)基；在一定期限內(nèi)保護(hù)和維持微生物活力，或119培養(yǎng)基的分類分離培養(yǎng)基選擇性分離培養(yǎng)基：支持特定微生物的生長而抑制其他微生物生長（如膽鹽硫乳瓊脂）非選擇性分離培養(yǎng)基：對微生物沒有選擇性的抑制作用（如營養(yǎng)瓊脂）鑒別培養(yǎng)基：能夠進(jìn)行一項(xiàng)或多項(xiàng)微生物生理學(xué)或生化特性鑒定試驗(yàn)（如三糖鐵瓊脂）鑒定培養(yǎng)基：能夠產(chǎn)生一個特定的鑒定反應(yīng)而不需要做進(jìn)一步確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基（如MUG培養(yǎng)基）培養(yǎng)基的分類分離培養(yǎng)基120培養(yǎng)基的質(zhì)量保證生產(chǎn)企業(yè)提供的材料：培養(yǎng)基名稱、各種成分和增補(bǔ)劑名稱、產(chǎn)品批號。培養(yǎng)基使用前的PH值。儲藏條件和有效期。技術(shù)數(shù)據(jù)清單。質(zhì)控證書（性能評價和所用的測試菌種）。必要的安全及危害數(shù)據(jù)。培養(yǎng)基的質(zhì)量保證生產(chǎn)企業(yè)提供的材料：121培養(yǎng)基的質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收：保存有效的培養(yǎng)基目錄清單。包裝情況和完整性。培養(yǎng)基的名稱和批號。接收日期、有效期。首次開封日期。內(nèi)容物的感官檢查(粉末的流動性、均勻性、結(jié)塊情況和顏色變化)。培養(yǎng)基的質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收：122培養(yǎng)基的儲存例行常規(guī)檢查（干粉培養(yǎng)基）：容器密封性復(fù)查；首次開封日期；內(nèi)容物感官檢查。使用前檢查（商業(yè)性培養(yǎng)基）：顏色是否發(fā)生變化？是否蒸發(fā)/脫水？是否有微生物污染？嚴(yán)格按照供應(yīng)商提供的儲藏條件、有效期和使用方法進(jìn)行培養(yǎng)基的保存和使用。有計劃購買，先購先用。培養(yǎng)基的儲存例行常規(guī)檢查（干粉培養(yǎng)基）：123培養(yǎng)基的儲存成品培養(yǎng)基（系指配好待用的培養(yǎng)基,下同）已分裝好的培養(yǎng)基：避光、冷藏。最終成分在使用前加入的培養(yǎng)基，冰箱保存不超過三個月，室溫保存不超過一個月。不穩(wěn)定的選擇性添加成分應(yīng)在培養(yǎng)基制備的當(dāng)天使用。觀察任意顏色變化，記錄培養(yǎng)基蒸發(fā)或微生物生長情況。培養(yǎng)基的儲存成品培養(yǎng)基（系指配好待用的培養(yǎng)基,下同）124培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備使用商品化的脫水合成培養(yǎng)基時，應(yīng)嚴(yán)格按照廠商提供的使用說明配置，如重量/體積、PH值、制備的數(shù)據(jù)、滅菌條件、操作步驟。使用獨(dú)立成分制備培養(yǎng)基時，按配方準(zhǔn)確配置并記錄配置步驟。培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備使用商品化的脫水合成培養(yǎng)基時，應(yīng)嚴(yán)格按照廠125培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備水：要求使用蒸餾水或相同質(zhì)量的水，不含有抑制或影響微生物生長的物質(zhì)。稱量和復(fù)水：防止培養(yǎng)基結(jié)塊。溶解和分裝：適當(dāng)加熱重復(fù)攪拌。

pH值的測定和調(diào)整：使用pH計。

1mol/L的氫氧化鈉溶液或1mol/L的鹽酸溶液進(jìn)行pH值的調(diào)整。培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備水：要求使用蒸餾水或相同質(zhì)量的水，不含有抑126培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備分裝滅菌濕熱滅菌：按使用說明規(guī)定進(jìn)行，監(jiān)控高壓滅菌過程，保證滅菌溫度，避免過度加熱。過濾除菌：真空負(fù)壓或正壓條件下進(jìn)行，濾膜和濾墊除菌。濾器121℃滅菌20分鐘。培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備分裝127培養(yǎng)基的使用瓊脂培養(yǎng)基的融化避免過度加熱，融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，不要放置超過4小時。對熱不穩(wěn)定的添加成分應(yīng)在培養(yǎng)基冷卻至48℃±2℃時加入。平板培養(yǎng)基的保存：暗處存放一周或4℃～12℃冰箱密封袋，存放三周或按廠商提供標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。作好標(biāo)記（名稱、制備日期、有效期）。平板冷卻后裝袋避免產(chǎn)生冷凝水。培養(yǎng)基的使用瓊脂培養(yǎng)基的融化避免過度加熱，融化后的培養(yǎng)基128培養(yǎng)基的使用平板培養(yǎng)基的培養(yǎng)每垛最多堆放六個平板，平板間要留有空隙進(jìn)行空氣流通，使溫度盡快達(dá)到一致。培養(yǎng)基的棄置所有污染和未使用的培養(yǎng)基的棄置必須采用安全的方式，并且要符合相關(guān)法規(guī)（廢棄物處理程序）的規(guī)定。

培養(yǎng)基的使用平板培養(yǎng)基的培養(yǎng)129成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制物理質(zhì)量的控制20～25℃時的pH值。液體培養(yǎng)基：外觀透明、清亮、無混濁、無沉淀。固體培養(yǎng)基：具有特定顏色、表面濕潤無水氣、平整光潔無凹坑和氣泡、無雜質(zhì)厚度3～4mm。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制物理質(zhì)量的控制130成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制無菌實(shí)驗(yàn)壓力蒸汽滅菌后的固體培養(yǎng)基，隨機(jī)抽取一定數(shù)量放36℃±1℃溫箱培養(yǎng)24小時。煮沸消毒的選擇性培養(yǎng)基可取部分瓊脂，放入無菌肉湯培養(yǎng)24小時。培養(yǎng)后無細(xì)菌生長視為合格。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制無菌實(shí)驗(yàn)131成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制細(xì)菌生長實(shí)驗(yàn)：用已知標(biāo)準(zhǔn)菌株做質(zhì)控。測試菌種要求

具有穩(wěn)定特性，能代表其種并能有效證明實(shí)驗(yàn)室特定培養(yǎng)基的最佳性能?？伤菰粗羾一驀H公認(rèn)的菌種收藏中心?？墒褂脤?shí)驗(yàn)室自己分離的具有良好特性的菌種，但必須對照標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行鑒定。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制細(xì)菌生長實(shí)驗(yàn)：用已知標(biāo)準(zhǔn)菌株做質(zhì)控。132成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制質(zhì)控菌種要求具有穩(wěn)定特性，能代表其種并能有效的證明實(shí)驗(yàn)室特定培養(yǎng)基的最佳性能的菌種。測試菌種主要購于參考菌種的菌種保藏中心。中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心[CMCC]。美國細(xì)菌收集和分型中心[ATCC]。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制質(zhì)控菌種要求具有穩(wěn)定特性，能代表其種并能133成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基的測試菌種應(yīng)具備以下性能：典型反應(yīng)的強(qiáng)陽性菌種；弱生長的陽性菌種（選擇更敏感的菌種）；生化反應(yīng)菌種（顯示不同發(fā)酵和熒光反應(yīng)的菌種）；完全抑制菌種。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基的測試菌種應(yīng)具備以下性能：134成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制菌液制備將工作用的質(zhì)控菌株在培養(yǎng)平板上轉(zhuǎn)種，培養(yǎng)后取3～5個單個的菌落懸浮于少量的滅菌TSB中，培養(yǎng)4h～5h。用分光光度計調(diào)整濁度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)或在625nm吸光度值為0.08～0.1，使菌落計數(shù)達(dá)到(1～2)×108CFU/mL。成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制菌液制備135成品固體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制將36±1℃培養(yǎng)18～24h的新鮮菌懸液用生理鹽水作1:10稀釋，在每個待測培養(yǎng)基上用3mm接種環(huán)或0.1mL稀釋懸液接種,使?jié)舛冗_(dá)到100CFU/碟。至少使用兩塊平板，每塊平板的菌落平均數(shù)應(yīng)為100cfu。按適宜的溫度培養(yǎng)，觀察平板上細(xì)菌的生長特征。結(jié)果應(yīng)生長良好。成品固體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制將36±1℃培養(yǎng)18～24h的新鮮菌136成品固體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制平板培養(yǎng)技術(shù)：傾注法涂布法旋轉(zhuǎn)涂布法成品固體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制平板培養(yǎng)技術(shù)：137成品液體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制將36±1℃培養(yǎng)18～24小時的新鮮菌懸液用生理鹽水作1:10稀釋，取50～100cfu接種至試驗(yàn)培養(yǎng)基和參照培養(yǎng)基中。按適宜的溫度進(jìn)行培養(yǎng)。觀察每瓶（管）細(xì)菌的生長情況，結(jié)果應(yīng)生長良好。對于不透明的培養(yǎng)基，在確定生長時需接種到瓊脂培養(yǎng)基上。成品液體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制將36±1℃培養(yǎng)18～24小時的新鮮138成品培養(yǎng)基質(zhì)量檢查記錄培養(yǎng)基質(zhì)量檢查記錄表培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家批號外觀顏色澄清度pH軟硬度微生物學(xué)性能檢定結(jié)論檢驗(yàn)者/時間備注成品培養(yǎng)基質(zhì)量檢查記錄培養(yǎng)基質(zhì)量檢查記錄表培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家139微生物檢驗(yàn)的量值溯源為滿足培養(yǎng)基、試劑盒和試劑的質(zhì)量測定和微生物工程檢測過程的質(zhì)量控制需要，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)準(zhǔn)備好足夠種類和數(shù)量的參考菌株和參考培養(yǎng)物。參考菌株和參考培養(yǎng)物可以由有資質(zhì)的單位提供或經(jīng)過準(zhǔn)確鑒定的分離株。菌種：個體形態(tài)以及菌落特征相近，而且生化反應(yīng)、基因特征、血清型均保持一致的細(xì)胞菌落。微生物檢驗(yàn)的量值溯源為滿足培養(yǎng)基、試劑盒和試劑的質(zhì)量測定和微140微生物檢驗(yàn)的量值溯源參考菌種：至少定到屬或種水平的菌種，按其特征進(jìn)行分類和描述。參考原種：將實(shí)驗(yàn)室獲得的或供應(yīng)商提供的標(biāo)準(zhǔn)菌種在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過一代轉(zhuǎn)接后獲得的一套獨(dú)立的相同的菌種。工作菌種：由參考原株轉(zhuǎn)接一代獲得的菌種。微生物檢驗(yàn)的量值溯源參考菌種：至少定到屬或種水平的菌種，按其141菌種保藏的目的菌種保藏的目的：保持菌種較高的存活率；降低菌種的變異幅度；防止其他微生物污染；在適宜條件下，菌種可以重新恢復(fù)原有生物學(xué)活性。菌種保藏的目的菌種保藏的目的：142菌種保藏的原理菌種保藏的原則是根據(jù)菌種的生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代謝強(qiáng)度，使細(xì)胞處于休眠狀態(tài)，生長繁殖受到抑制但又不至于死亡，以減少菌的變異率。低溫、干燥、缺氧、缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都有抑制微生物的代謝作用。因此低溫、干燥、真空是用于菌種保藏的重要手段。菌種保藏的原理菌種保藏的原則是根據(jù)菌種的生理、生化特性，在人143菌種的管理1、實(shí)驗(yàn)用菌、毒種的申購，應(yīng)有科室負(fù)責(zé)人簽字。申購單應(yīng)注明菌種名、菌號、數(shù)量及請購單位蓋章。2、菌種應(yīng)有專人保管，管理人員應(yīng)具有較強(qiáng)的責(zé)任心。從指定單位購到的菌毒種，應(yīng)有登記。一一核對菌種、菌號、數(shù)量，無誤后方可轉(zhuǎn)種。3、用適宜培養(yǎng)基將凍干菌種稀釋、轉(zhuǎn)種、培養(yǎng)。該菌種經(jīng)鑒定無誤后可作為對照菌用。如發(fā)現(xiàn)菌株特性不符，不得使用。菌種的管理1、實(shí)驗(yàn)用菌、毒種的申購，應(yīng)有科室負(fù)責(zé)人簽字。申購144菌種的管理4、試驗(yàn)用菌種在使用過程中，應(yīng)檢查其生物學(xué)特性。如有變異或污染雜菌，均不得使用。發(fā)現(xiàn)染菌或變異、衰退等現(xiàn)象時，應(yīng)及時恢復(fù)或廢棄。5、試驗(yàn)菌種不得任意帶出實(shí)驗(yàn)室。外單位索取菌種時，應(yīng)經(jīng)領(lǐng)導(dǎo)同意，包裝嚴(yán)密，妥善攜帶。菌種的管理4、試驗(yàn)用菌種在使用過程中，應(yīng)檢查其生物學(xué)特性。145菌種保藏菌種的保藏是微生物檢驗(yàn)工作中的一項(xiàng)常規(guī)技術(shù)，科學(xué)的保藏和管理直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的正確與否。不同微生物根據(jù)其特征選擇最適宜的保藏方法，菌種保藏方法一般分四個階段（1）挑選特征典型的純菌菌落。（2）能產(chǎn)生孢子或芽孢的微生物應(yīng)用孢子和芽孢進(jìn)行保存。（3）選擇最適宜的方法保藏。（4）定期對保藏菌種進(jìn)行檢查。菌種保藏菌種的保藏是微生物檢驗(yàn)工作中的一項(xiàng)常規(guī)技術(shù)，科學(xué)的保146標(biāo)準(zhǔn)菌株的儲備標(biāo)準(zhǔn)菌株在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過一次傳代獲得的一組完全相同的菌株。傳代菌株應(yīng)當(dāng)完全具備標(biāo)準(zhǔn)菌株的所有性狀。傳代時要保證一定的量，以減少傳代的次數(shù)每株菌株盡量避免多次使用。采用不同的保存方法保存期限不同（如斜面保存法、穿刺法，液體石蠟法等保存期限的長短都不一樣）。標(biāo)準(zhǔn)菌株的儲備標(biāo)準(zhǔn)菌株在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過一次傳代獲得的一組完全相同147常用菌種的保藏方法菌種保藏方法有多種，如瓊脂斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、干燥（沙土）保藏法、玻璃珠保藏法、冷凍真空保藏法、超低溫保藏法、液氮保藏法等。但對不同的微生物應(yīng)通過保藏試驗(yàn)來選擇最適宜的保藏方法。注意事項(xiàng):保藏的菌種均應(yīng)是新鮮純菌培養(yǎng)物,至少應(yīng)是第三代的培養(yǎng)物。不同細(xì)菌用不同培養(yǎng)基，定期檢查菌種保存環(huán)境做好記錄。1、瓊脂斜面低溫保藏方法

常用菌種的保藏方法菌種保藏方法有多種，如瓊脂斜面低溫保藏法、148常用菌種的保藏方法2、半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)3、液體石蠟覆蓋保藏法：本法是用石蠟將培養(yǎng)物與空氣隔絕，以降低菌種的生理、升化水平，延長菌種保藏時間。

方法：選擇優(yōu)質(zhì)液體石蠟，121℃高壓滅菌30min后在160℃烘箱1～2h除去掉水分冷卻后備用。取經(jīng)培養(yǎng)的高層半固體菌管加入液體石蠟，高出培養(yǎng)基面1cm為宜，放入4℃保藏?？杀４姘肽昊蛞荒辍?/p>

常用菌種的保藏方法2、半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)149常用菌種的保藏方法4、冷凍真空保藏法保護(hù)劑：有多種，多用脫脂牛奶。將牛奶煮沸、靜止、冷卻除去上面一層脂肪，重復(fù)3次后用脫脂棉過濾，滅菌。菌懸液制備：直接刮取用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)菌，懸浮于分散劑中。用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)菌，哀告離心沉淀傾出上清液，加入分散劑。菌懸液濃度：109～1012cfu/ml。低溫、冷凍、真空干燥置-35℃保存。常用菌種的保藏方法4、冷凍真空保藏法150常用菌種的保藏方法5、液氮保藏法保存：制備菌懸液，用甘油或二甲亞砜作保護(hù)劑，分裝安瓿，每管0.5ml，預(yù)凍至-40℃（控制溫度下降速率為1℃/min)，放入液氮生物貯存罐中保存?；謴?fù)：直接浸入38℃水浴中解凍5～10min，轉(zhuǎn)種于適宜培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。注意：大多數(shù)屬種適于慢速凍結(jié)和快速凍結(jié)。常用菌種的保藏方法5、液氮保藏法151蒸餾水保藏法6、蒸餾水保藏法在斜面培養(yǎng)基上加無菌蒸餾水5～6ml，用吸管輕輕吹散表面菌苔，移入滅菌螺旋口小試管中，蓋嚴(yán)蓋子在室溫保存。霉菌、酵母和放線菌、植物病原菌可在室溫保存數(shù)年。蒸餾水保藏法6、蒸餾水保藏法152玻璃珠保藏法7、玻璃珠保藏法無菌操作將菌懸液加入玻璃瓶中，充分?jǐn)噭影徊Ａе?，移去多余懸液。?biāo)記后保存-60～85℃冰柜。不同顏色有助菌株辨別。使用使取出1粒用相應(yīng)培養(yǎng)基培養(yǎng)需氧菌—營養(yǎng)肉湯，厭氧菌——強(qiáng)化梭狀芽孢桿菌培養(yǎng)基。嗜鹽菌—鹽營養(yǎng)肉湯加15%甘油。玻璃珠保藏法7、玻璃珠保藏法153甘油低溫保藏法8、甘油低溫保藏法菌種懸浮在10%～15%甘油蒸餾水，超低溫冰箱保藏（-70～80℃

）。菌種最好培養(yǎng)至對數(shù)生長期。使用液體培養(yǎng)基時，可直接加到已滅菌的甘油中，使甘油終濃度10%～30%。分裝于凍存管中，避免反復(fù)凍融?；蚬こ叹半y以冷凍干燥的絲狀真菌。甘油低溫保藏法8、甘油低溫保藏法154適用菌種的保藏方法液氮保藏法適用菌種：病毒、支原體、各類細(xì)菌、放線菌、酵母菌、絲狀真菌、動物細(xì)胞等。甘油低溫保藏法適用菌種：細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌、基放線菌和基因工程等。液體石蠟覆蓋保藏法適用菌種：真菌、酵母菌、多種細(xì)菌。不適用菌種：乳酸桿菌、分枝桿菌等。適用菌種的保藏方法液氮保藏法適用菌種：病毒、支原體、各類細(xì)菌155菌種的傳代

將在適宜的培養(yǎng)基上生長良好的培養(yǎng)物（庖肉培養(yǎng)基、半固體、高層瓊脂）放置在低溫處保存，使細(xì)菌停止生長或緩慢生長。當(dāng)培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分被利用完以前或尚未陳舊以前，將它重新移植于新鮮培養(yǎng)基，再于適宜條件培養(yǎng)，生長良好后，再置低溫保存。菌種的傳代將在適宜的培養(yǎng)基上生長良好的培養(yǎng)物（庖肉培養(yǎng)基、156菌種的傳代

最好每株接種兩管以上，需定期移種。培養(yǎng)基表面需加滅菌液體石蠟，用橡皮塞代替棉塞，以防止干燥脫水。傳代菌株采用斜面、穿刺方法、液體。多數(shù)菌株要求保藏溫度為4～5℃。

反復(fù)傳代后，在使用前需進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。一般1個月～6個月傳代一次。適用菌種：大腸、沙門、銅綠、金葡、生孢、枯草、短小、藤黃、白念、黑曲等。菌種的傳代最好每株接種兩管以上，需定期移種。157菌種檢查和復(fù)壯經(jīng)過長期保藏和傳代的菌種，由于種種原因易發(fā)生衰退、變異或死亡，因此各類菌種在保藏期間必須定期檢查，發(fā)現(xiàn)變異或衰退，