第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件

第三章

環(huán)境中微生物的主要類群授課教員：曾惠講師軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)教研室2010年6月30日2008級預(yù)防醫(yī)學(xué)5年制本科第三章

環(huán)境中微生物的主要類群授課教員：曾惠講師軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)1微生物的類群龐雜目前已經(jīng)知道的微生物約有10萬種，分布在自然環(huán)境中。農(nóng)田上層15cm處微生物的數(shù)量微生物每克土壤中的數(shù)量細(xì)菌9.8×107放線菌2.0×106真菌1.2×105藻菌2.5×104原生動物3.0×104微生物的類群龐雜目前已經(jīng)知道的微生物約有10萬種，分布在自2菌落數(shù)與空氣清潔度的關(guān)系空氣清潔度菌落數(shù)最清潔的空氣1-2潔凈空氣30個以下普通空氣30-150輕度污染空氣300以下嚴(yán)重污染空氣301以上菌落數(shù)與空氣清潔度的關(guān)系空氣清潔度菌落數(shù)最清潔的空氣1-2潔3人體微生態(tài)中微生物的含量部位含量部位含量眼睛1g肺20g鼻腔10g腸道1000g口腔20g生殖道20g皮膚200g總量1271g人體微生態(tài)中微生物的含量部位含量部位含量眼睛1g肺20g鼻腔4人體消化系統(tǒng)中微生物群體(個/g)回腸結(jié)腸直腸或糞便雙歧桿菌1041071010擬桿菌1031081010腸桿菌103106106腸球菌－107－乳桿菌－－104人體消化系統(tǒng)中微生物群體(個/g)回腸結(jié)腸直腸或糞便雙歧5按細(xì)胞結(jié)構(gòu)分類：原核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物非細(xì)胞型微生物按致病性分類：致病性微生物條件致病性微生物非致病性微生物按細(xì)胞結(jié)構(gòu)分類：6本章主要內(nèi)容概述原核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物非細(xì)胞型微生物（重點(diǎn)）本章主要內(nèi)容概述（重點(diǎn)）7原核微生物與真核微生物在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的根本區(qū)別生物性狀原核微生物真核微生物核擬核，無核膜、核仁真正的核，有核膜、核仁DNA1條1至數(shù)條,與RNA、組蛋白合核糖體70S80S(細(xì)胞質(zhì)中),70S(細(xì)胞器中)細(xì)胞分裂二分裂有絲分裂,減數(shù)分裂有性生殖無有細(xì)胞器無線粒體、高基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等呼吸鏈細(xì)胞膜上線粒體上細(xì)胞壁成分肽聚糖、磷壁質(zhì)多聚糖,幾丁質(zhì)大小1～10μm10～100μm原核微生物與真核微生物在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的根本區(qū)別生物性狀原核微生8一、原核細(xì)胞型微生物細(xì)菌放線菌鞘細(xì)菌滑動細(xì)菌藍(lán)細(xì)菌一、原核細(xì)胞型微生物細(xì)菌9原核型微生物基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)、質(zhì)粒質(zhì)粒控制細(xì)菌的某些遺傳性狀（有性生殖、細(xì)菌毒力、耐藥性、代謝酶等）可能具有特殊結(jié)構(gòu)，如鞭毛、莢膜、芽孢和菌毛等。以簡單二分裂法無性繁殖，僅需20—30分鐘（一）細(xì)菌（Bacteria）原核型微生物（一）細(xì)菌（Bacteria）10（2）環(huán)境中常見致病菌與條件致病菌

P23-24表3-1（3）環(huán)境中其他常見細(xì)菌假單胞菌屬黃桿菌屬產(chǎn)堿桿菌屬無色桿菌屬微球菌屬乳桿菌屬其它細(xì)菌（2）環(huán)境中常見致病菌與條件致病菌11

假單胞菌屬（Pseudomonas）

革蘭陰性桿菌，有鞭毛能運(yùn)動在自然界分布廣泛在低溫下能很好生長，可引起冷藏食品的腐敗變質(zhì)。能利用多種有機(jī)物（是迄今為止發(fā)現(xiàn)的自然界雜食性最強(qiáng)的微生物，能以80多種有毒有機(jī)物為碳源），故在自然界物質(zhì)轉(zhuǎn)化中起重要作用，常被作為污染物生物降解的篩選菌種。假單胞菌屬（Pseudomonas）革蘭陰性桿菌，有鞭12（二）放線菌(Actinomycetes)介于細(xì)菌和真菌之間。分布廣泛，尤其土壤中（土壤特有的泥腥味）。能產(chǎn)生大量多種抗生素（已經(jīng)超過4000種）可分解多種有機(jī)物質(zhì)（烴類、氰類、吡啶、纖維素等），在環(huán)境治理中具有潛在應(yīng)用價值。少數(shù)菌種對人類有致病作用，如星形偌卡菌引起肺部化膿性感染。鏈霉菌屬、諾卡菌屬、小單孢菌屬（二）放線菌(Actinomycetes)介于細(xì)菌和真菌之間13鏈霉菌屬最高等的放線菌，具有各種形態(tài)的孢子絲。近千種，大多生活在土壤中。鏈霉菌能分解多種有機(jī)質(zhì)。產(chǎn)生抗生素菌株的主要來源。鏈霉菌屬最高等的放線菌，具有各種形態(tài)的孢子絲。14諾卡菌屬部分可對人致病，我國主要是星形諾卡菌，經(jīng)外環(huán)境侵入傷口或吸人肺部，引起有特殊癥狀的化膿性感染。在自然環(huán)境中將有機(jī)質(zhì)轉(zhuǎn)化，如烴類的降解、氰類的轉(zhuǎn)化，在污水處理中起重要作用。諾卡菌屬部分可對人致病，我國主要是星形諾卡菌，經(jīng)外環(huán)境侵入傷15小單孢菌屬多分布于土壤及污泥中。分解有機(jī)質(zhì)及產(chǎn)生抗生素。棘孢小單孢菌可產(chǎn)生慶大霉素。小單孢菌屬多分布于土壤及污泥中。16（三）鞘細(xì)菌單細(xì)胞連成的絲狀體細(xì)菌，絲狀體外包圍一層由有機(jī)物或無機(jī)物組成的鞘套。絲狀體不分枝或形成假分枝，靠游動孢子或不能游動的分生孢子行無性繁殖，常生存于淡水或海水中。主要有球衣菌和鐵細(xì)菌屬。（三）鞘細(xì)菌單細(xì)胞連成的絲狀體細(xì)菌，絲狀體外包圍一層由有機(jī)物17球衣菌較強(qiáng)的分解有機(jī)物的能力，常生存于流動的、有機(jī)物污染的淡水中；活性污泥曝氣池中常見菌種，數(shù)量過多時會引起污泥膨脹。球衣菌較強(qiáng)的分解有機(jī)物的能力，常生存于流動的、有機(jī)物污染的淡18鐵細(xì)菌屬能將低鐵氧化為高鐵。廣泛存在于自然界，在鐵素循環(huán)中占有重要位置。鐵質(zhì)水管腐蝕與堵塞常因環(huán)境中鐵細(xì)菌活動引起。鐵細(xì)菌屬能將低鐵氧化為高鐵。19（四）滑動細(xì)菌不借鞭毛而靠菌體蠕動進(jìn)行滑動的一類細(xì)菌。多為絲狀體，也有桿狀或球狀。貝氏硫菌屬，為絲狀體，分布于淡水或海水中，能氧化H2S為硫，對自然界硫素循環(huán)起重要作用。噬纖維菌屬呈桿狀，兩端略尖，細(xì)胞柔軟，可滑行。具有很強(qiáng)的分解纖維素的能力。（四）滑動細(xì)菌不借鞭毛而靠菌體蠕動進(jìn)行滑動的一類細(xì)菌。20為單細(xì)胞生物，呈球形或桿狀。過去稱為藍(lán)藻或藍(lán)綠藻（Blue-greenalgae）,近年根據(jù)其僅有原始核而將其列入原核微生物。光合型微生物，是生態(tài)系統(tǒng)的首要環(huán)節(jié)（第一個產(chǎn)氧的光合生物）。自然界分布廣泛。營養(yǎng)要求簡單。水質(zhì)污染時，可過量繁殖，形成“水華”。常見屬：微囊藻屬、魚腥藻屬、顫藻屬。（五）藍(lán)細(xì)菌(Bluebacteria,Cyanobacteria)為單細(xì)胞生物，呈球形或桿狀。（五）藍(lán)細(xì)菌(Bluebac21藍(lán)藻門微囊藻界、門、綱、目、科、屬、種藍(lán)藻門微囊藻界、門、綱、目、科、屬、種22顫藻藍(lán)藻門顫藻藍(lán)藻門23魚腥藻藍(lán)藻門魚腥藻藍(lán)藻門24二、真核細(xì)胞型微生物具有分化程度較高的真正的核，有核膜、核仁和染色體，胞漿內(nèi)有完整的細(xì)胞器。真菌藻類（低等植物）原生動物（低等動物）二、真核細(xì)胞型微生物具有分化程度較高的真正的核，有核膜、核仁25（一）真菌（Fungus）與原生生物的主要區(qū)別在于有較硬的細(xì)胞壁真菌按形態(tài)分為單細(xì)胞和多細(xì)胞兩類。單細(xì)胞真菌為酵母菌和類酵母菌（yeast）。多細(xì)胞真菌又稱霉菌(mold)。分布廣泛，存在于各種環(huán)境和生物體內(nèi)。衛(wèi)生學(xué)效應(yīng)：引起物質(zhì)變質(zhì)腐爛的主要原因發(fā)酵、制藥、食品工業(yè)等中具有重要作用少數(shù)致?。ㄒ唬┱婢‵ungus）與原生生物的主要區(qū)別在于有較硬的細(xì)26第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件27霉菌常見代表屬曲霉屬：廣泛分布于谷物、土壤等上，分解有機(jī)質(zhì)能力極強(qiáng)，可造成霉變。為釀造、食品、制藥行業(yè)的重要菌屬。青霉屬：典型結(jié)構(gòu)為帚狀枝，產(chǎn)生單輪或多輪對稱或不對稱的掃帚狀小梗，多呈藍(lán)綠色。霉菌常見代表屬28（二）藻類（algae）藻類是一大群低等植物，細(xì)胞分化比較低級(無跟莖葉花等)。廣泛浮游于淡水及海水的上層，也稱浮游生物或浮游植物（phytoplankton）。是水生生態(tài)系統(tǒng)的初級生產(chǎn)者，是水生食物鏈的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。含葉綠體，行光合作用，同時呈現(xiàn)不同的顏色。利用二氧化碳，對N、P需求多。（二）藻類（algae）藻類是一大群低等植物，細(xì)胞分化比較低29常見藻類：綠藻：因藻體中含葉綠素及少量葉黃素，細(xì)胞呈草綠色。小球藻富含蛋白質(zhì)和脂肪，可大量培養(yǎng)作為飼料和食品。硅藻：含有大量硅質(zhì)和果膠質(zhì)，硅藻死亡后，形成硅藻土，可作為過濾劑、絕緣劑等。甲藻：淡水中的甲藻喜酸性環(huán)境，當(dāng)水中富含腐殖酸時，常有甲藻存在；海洋“赤潮”常由甲藻大量增殖引起；甲藻產(chǎn)毒可積于貝體而使人體中毒。常見藻類：30

夜光藻藻體呈球形，透明，肉眼可見，腹面有一條凹溝，口位于溝中央，近口處長出一根極小的鞭毛和一條粗大的鞭毛，海生。細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)淡紅色，大量密集時呈紅色，受波濤振蕩刺激以后放出熒光，是我國赤潮的主要藻類。夜光藻31第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件32本種可產(chǎn)生麻痹性貝毒。膝溝藻日本水域該種赤潮引起魚類大量死亡。是南海北部沿海主要的赤潮生物。

本種可產(chǎn)生麻痹性貝毒。膝溝藻日本水域該種赤潮引起魚類大量死亡33本種可產(chǎn)生腹瀉性貝毒。渤海、東海、香港和南沙群島等水域有分布，形成赤潮的主要種類之一。原甲藻本種可產(chǎn)生腹瀉性貝毒。渤海、東海、香港和南沙群島34（三）原生動物形態(tài)與構(gòu)造：單細(xì)胞低等動物。衛(wèi)生學(xué)意義：水中重要浮游生物。可吞食細(xì)菌，在污水處理中起一定作用。是活性污泥的主要成分。某些種類是病原體。環(huán)境中常見原生動物主要有鞭毛綱、肉足綱和纖毛綱。（三）原生動物形態(tài)與構(gòu)造：35鞭毛綱：具有一至多根鞭毛。多生活于有機(jī)質(zhì)較多的污水。綠眼蟲、波豆蟲、滴蟲等常見。鞭毛綱：具有一至多根鞭毛。多生活于有機(jī)質(zhì)較多的污水。綠眼蟲、36肉足綱：運(yùn)動細(xì)胞器是鞭毛，運(yùn)動器官是偽足，也是攝食細(xì)胞器變形蟲，生活在富有藻類、含氧量較高的水塘或溝渠中或潮濕土壤的表層。肉足綱：運(yùn)動細(xì)胞器是鞭毛，運(yùn)動器官是偽足，也是攝食細(xì)胞器變形37纖毛綱：運(yùn)動細(xì)胞器是纖毛，也是攝食細(xì)胞器。結(jié)構(gòu)較復(fù)雜。包括游泳型和固著型。纖毛綱：運(yùn)動細(xì)胞器是纖毛，也是攝食細(xì)胞器。結(jié)構(gòu)較復(fù)雜。包括游38第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件39第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件40環(huán)境中常見原生動物目前已知有15000種：鞭毛綱：運(yùn)動細(xì)胞器是鞭毛，具有一至多根鞭毛。如綠眼蟲、波豆蟲、滴蟲等。多生活在污水中。纖毛綱：運(yùn)動細(xì)胞器是纖毛。在活性污泥污水處理池中，常以原生動物的類群與比例作為污水凈化的指標(biāo)。一般情況下，普通單體鐘蟲與群體鐘蟲較多時，說明污泥爆氣池運(yùn)轉(zhuǎn)正常。環(huán)境中常見原生動物目前已知有15000種：41三、非細(xì)胞型微生物特征：不具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，具有體積極小、結(jié)構(gòu)簡單、專性寄生、抵抗力特殊的特點(diǎn)。環(huán)境中的病毒：空氣中：如流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、天花病毒、水痘病毒、風(fēng)疹病毒、腺病毒等。水中：多為腸道病毒。土壤中：可吸附于顆粒內(nèi)而延長存活時間。食品中：主要是甲型傳染性感染和胃腸炎。許多疾病與食用貝類有關(guān)。如1988年上海甲肝大流行。三、非細(xì)胞型微生物特征：42第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件43四、環(huán)境中微生物的應(yīng)用及研究前景環(huán)境中的微生物種類繁多，人們發(fā)現(xiàn)并已利用的微生物屈指可數(shù)。發(fā)現(xiàn)、認(rèn)識并利用有益微生物、控制有害的微生物成為未來微生物學(xué)發(fā)展的主要方向。空間技術(shù)等新技術(shù)發(fā)展，太空微生物學(xué)和極端微生物學(xué)成為新的研究熱點(diǎn)。四、環(huán)境中微生物的應(yīng)用及研究前景環(huán)境中的微生物種類繁多，人們44極端微生物是依賴于一種或多種極端理化因子的極端生命形式，主要類群包括嗜熱菌、嗜冷菌、嗜鹽菌、嗜堿菌、嗜酸菌及抗輻射菌。極端微生物是依賴于一種或多種極端理化因子的極端生命形式，主要45第四章衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法第四章衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法46授課內(nèi)容衛(wèi)生微生物學(xué)檢測的特點(diǎn)及基本原則衛(wèi)生指示微生物衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法衛(wèi)生微生物研究和檢測方法的前景（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）授課內(nèi)容衛(wèi)生微生物學(xué)檢測的特點(diǎn)及基本原則（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）47一、衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)與基本原則特點(diǎn)：檢測對象：致病、非致病、條件致病微生物標(biāo)本來源：人體、環(huán)境環(huán)境中致病微生物數(shù)量少，需要特異的檢測方法，并且多依靠指示微生物一、衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)與基本原則特點(diǎn)：48一、衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)與基本原則特點(diǎn)原則樣品的采集原則樣品的運(yùn)送原則實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則一、衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)與基本原則特點(diǎn)491.樣品必須要有代表性:采樣量：滿足檢測要求（P37）采樣部位：均勻采樣或者有代表性的部位2.避免對樣品的污染器材滅菌、無菌操作3.避免對樣品中微生物的殺滅和抑制避免有毒物質(zhì)的殘留和高溫影響4.對樣品進(jìn)行詳細(xì)的標(biāo)記（一）樣品的采集原則1.樣品必須要有代表性:（一）樣品的采集原則50盡快送檢：一般3-4h內(nèi)送檢，減少細(xì)菌死亡和進(jìn)一步繁殖帶來的影響。注意保護(hù)待檢的微生物：一定的溫度加保護(hù)劑特殊微生物需要特殊培養(yǎng)基進(jìn)行完善的樣品交接必須有樣品送檢單，與實(shí)驗(yàn)室人員逐項(xiàng)核對后交接（二）樣品的運(yùn)送原則盡快送檢：（二）樣品的運(yùn)送原則51根據(jù)生物安全規(guī)定，妥善包裝待運(yùn)輸標(biāo)本高致病力禽流感標(biāo)本，須放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里，擰緊；然后放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；再放入專用運(yùn)輸箱內(nèi)，放人冰塊，以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的材料；所有容器必須印有生物危險標(biāo)識。SARS病毒感染的樣品，須進(jìn)行三層以上的包裝，采集后加無菌外包裝，置于專用密閉盒內(nèi)(金屬或硬塑料材質(zhì))，用具有吸水性和柔軟的物質(zhì)填充固定，置于專用運(yùn)輸箱內(nèi)，由2人以上專人專車運(yùn)送。（二）樣品的運(yùn)送原則根據(jù)生物安全規(guī)定，妥善包裝待運(yùn)輸標(biāo)本（二）樣品的運(yùn)送原則52（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施微生物危害程度分級：“實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求”（GB19489-2004）將微生物危害程度分為4級。危害等級I：低個體危害，低群體危害。危害等級II：中等個體危害，有限群體危害。危害等級III：高個體危害，低群體危害。危害等級IV：高個體危害，高群體危害。（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施53具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施生物安全防護(hù)水平分級及要求：BSL-1：對應(yīng)危害等級I：P1實(shí)驗(yàn)室BSL-2：對應(yīng)危害等級II：P2實(shí)驗(yàn)室BSL-3：對應(yīng)危害等級III：P3實(shí)驗(yàn)室BSL-4：對應(yīng)危害等級IV：P4實(shí)驗(yàn)室BSL:biosafetylevelP:protection（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施BSL:biosafetylev54具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：1級（P4實(shí)驗(yàn)室）：可檢驗(yàn)危害性最嚴(yán)重的病原體（指實(shí)驗(yàn)室感染機(jī)會多，感染后病情嚴(yán)重，無特效治療，可致死的微生物；或可能引起嚴(yán)重的流行、需動員大量的人力物力進(jìn)行防疫的微生物），如天花病毒、HIV、SARS病毒等。2級（P3實(shí)驗(yàn)室）：可檢驗(yàn)特殊危險致病菌（如果感染能引起重癥并可能有致死后果的微生物，或本國原本沒有的致病微生物），如霍亂菌。（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則55具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：3級（P2實(shí)驗(yàn)室）：檢驗(yàn)一般致病菌（基本不引起實(shí)驗(yàn)室感染；或感染了發(fā)病率非常小的微生物）。4級（P1實(shí)驗(yàn)室）：檢驗(yàn)非致病菌（不致病或有致病性的無毒株）。（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則56第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件57具有合格的人員和標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法人員要有資質(zhì)，并經(jīng)常接受培訓(xùn)細(xì)菌計數(shù)生化實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性模擬樣品檢出考核采用國家標(biāo)準(zhǔn)方法或公認(rèn)方法（WHO、EPA等）加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制儀器、設(shè)備、試劑：定期檢定和校準(zhǔn)注意記錄和核查：如GLP實(shí)驗(yàn)室報告規(guī)范：數(shù)據(jù)規(guī)范，完整簽名蓋章具有合格的人員和標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法58實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有應(yīng)急措施應(yīng)對突發(fā)事件能力需做多種檢驗(yàn)時，微生物優(yōu)先恰當(dāng)?shù)臉悠诽幚砼c檢驗(yàn)均質(zhì)化后再稀釋去除抑菌劑等實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有應(yīng)急措施59衛(wèi)生微生物檢測的基本原則衛(wèi)生微生物檢測的基本原則60二、衛(wèi)生檢驗(yàn)中的指示微生物指示微生物（indicatormicroorganism）：在衛(wèi)生監(jiān)測中，用以反映檢品衛(wèi)生狀況及安全性的指示性微生物。設(shè)定指示微生物的原因微生物（包括致病和非致病的）種類繁多，不可能一一檢測環(huán)境中致病微生物往往數(shù)量少，檢測困難，需要用相對易于檢測的微生物來間接反映二、衛(wèi)生檢驗(yàn)中的指示微生物指示微生物（indicatorm61（一）指示微生物的選擇選擇原則：數(shù)量大易于檢出，方法簡單具有一定代表性，其數(shù)量變化能反映樣品衛(wèi)生狀況及安全性（一）指示微生物的選擇選擇原則：62（一）指示微生物的選擇指示微生物的種類：反映微生物綜合污染：菌落總數(shù)反映微生物污染來源：糞便污染指示菌（大腸菌群）;空氣污染指示菌（溶血性鏈球菌等）不得檢出的致病微生物間接反映致病微生物：如反映腸道病毒的噬菌體等可以指示消毒效果：嗜熱脂肪芽孢桿菌（壓力蒸汽滅菌）；短小芽孢桿菌（電離輻射滅菌）；枯草桿菌黑色變種芽孢（環(huán)氧乙烷滅菌）（一）指示微生物的選擇指示微生物的種類：63糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)是人及溫血動物腸道的正常菌群，且數(shù)量大。排出體外后，在外環(huán)境中的存活時間與腸道致病菌大致相似或稍長。排出體外以后，在外環(huán)境中不繁殖。糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)64糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)在被人或動物糞便污染的樣品中易檢出，而未被糞便污染的樣品中無此種菌存在。用作飲用水指示菌，對常用飲用水消毒劑(如氯、臭氧)的抵抗力應(yīng)該不低于或略強(qiáng)于腸道致病菌。檢驗(yàn)方法簡便，易于定量計數(shù)。糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)65檢測指示微生物反映樣品安全性的原因致病微生物種類繁多，檢測方法亦多種多樣，對樣品的衛(wèi)生安全性作出評價時，不可能分別檢測各種微生物。分離、鑒定致病微生物需時長，不能滿足實(shí)際工作的需要。（一）指示微生物的選擇檢測指示微生物反映樣品安全性的原因致病微生物種類繁多，檢測方66分離、鑒定致病微生物費(fèi)用高，且對人員的技術(shù)要求也相對較高。由于致病微生物數(shù)量少，而檢測方法的靈敏度不高或者受到檢測量的限制，可能導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。檢測指示微生物反映樣品安全性的原因（一）指示微生物的選擇分離、鑒定致病微生物費(fèi)用高，且對人員的技術(shù)要求也相對較高。檢67（二）常用的指示微生物菌落總數(shù)——反映綜合污染定義：單位量的被檢樣品(g、ml、cm2、m3)內(nèi)，所含有的能在某種培養(yǎng)基上經(jīng)一定條件培養(yǎng)后生成的全部菌落數(shù)量。表述：菌落總數(shù)（“細(xì)菌總數(shù)”不妥），cfu/g、cfu/ml。意義：綜合判定檢樣被微生物污染程度。方法：標(biāo)準(zhǔn)平板計數(shù)法、表面涂布法（二）常用的指示微生物菌落總數(shù)——反映綜合污染68（二）常用的指示微生物糞便污染指示菌大腸菌群大腸桿菌糞鏈球菌產(chǎn)氣夾膜梭菌間接反映致病微生物存在的指示菌（二）常用的指示微生物糞便污染指示菌間接反映致病微生物存在的69大腸菌群一群能在37℃、24h內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧或兼性厭氧的革蘭陰性無芽胞桿菌。主要有埃希菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌及枸櫞酸桿菌屬。在37℃能生長的大腸菌群稱為總大腸菌群；在44.5℃仍能生長的大腸菌群稱為耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）。大腸菌群一群能在37℃、24h內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧或兼性70大腸菌群來源于人、畜糞便，土壤、水體等外環(huán)境。檢測方法簡單，計數(shù)容易，菌群中包括的菌種類多，檢出幾率高，長期以來被廣泛用作常規(guī)檢測的衛(wèi)生指示菌。如大腸菌群有檢出，仍需要繼續(xù)檢測耐熱大腸菌群。檢測方法：多管發(fā)酵法、濾膜法和紙片法。大腸菌群來源于人、畜糞便，土壤、水體等外環(huán)境。71大腸桿菌埃希大腸桿菌，是總大腸菌群以及耐熱大腸菌群的主要細(xì)菌，作為糞便污染的指示菌最有意義。大腸桿菌的測定方法較為復(fù)雜。大腸桿菌數(shù)量與耐熱大腸菌群具有很好的相關(guān)性。如大腸菌群有檢出，仍需要繼續(xù)檢測耐熱大腸菌群，如條件允許，最好進(jìn)一步檢測大腸桿菌。大腸桿菌埃希大腸桿菌，是總大腸菌群以及耐熱大腸菌群的主要細(xì)菌72糞鏈球菌現(xiàn)歸為腸球菌屬，是人及動物腸道中的正常菌群，主要棲居于動物腸道內(nèi)，數(shù)量較高；人糞中所占數(shù)量遠(yuǎn)少于大腸桿菌，每克糞便約含108個。大腸菌群與糞鏈球菌比值可區(qū)分人畜糞便來源：>4.0，主要為人糞污染<0.7，主要為畜糞污染0.7～4.0，混合污染糞鏈球菌現(xiàn)歸為腸球菌屬，是人及動物腸道中的正常菌群，主要棲居73產(chǎn)氣莢膜梭菌人和動物特別是食草動物腸道內(nèi)的常住菌，數(shù)量遠(yuǎn)少于大腸桿菌，每克糞便為105～106個。該菌能形成芽胞，對含氯消毒劑及外界不良環(huán)境有較強(qiáng)抵抗力，在外環(huán)境中存活時間較長。若產(chǎn)氣莢膜梭菌被大量檢出而大腸菌群數(shù)量很少時，則表示樣品過去曾受過糞便污染，即陳舊性污染。產(chǎn)氣莢膜梭菌人和動物特別是食草動物腸道內(nèi)的常住菌，數(shù)量遠(yuǎn)少于74人類及溫血動物腸道中寄居三類正常微生物大腸菌群：量最多，生存時間與腸道致病菌接近，抵抗力比致病菌強(qiáng),，檢出方法較易腸球菌：量中等，生存時間比腸道致病菌短，抵抗力比致病菌弱產(chǎn)氣夾膜梭菌：量最少，生存時間比腸道致病菌長，抵抗力比致病菌強(qiáng)人類及溫血動物腸道中寄居三類正常微生物75不得檢出的致病菌微生物主要危害主要指示作用沙門菌腸道致病菌口服藥、食品不得檢出志賀菌菌痢食品不得檢出金葡菌局部化膿、食物中毒食品、化妝品、外用藥不得檢出；游泳池水指標(biāo)菌乙型溶血性鏈球菌食物中毒食品污染銅綠假單胞菌條件致病菌外傷、眼科用藥、化妝品不得檢出，游泳池水指標(biāo)菌破傷風(fēng)梭菌外傷皮膚感染外用藥不得檢出（二）常用的指示微生物不得檢出的致病菌微生物主要危害主要指示作用沙門菌腸道致病菌口76腸道病毒的指示微生物大腸菌群不是水中病毒適宜的指示菌。理想的病毒指示微生物條件：檢驗(yàn)方法簡單操作安全抵抗力與腸道病毒相當(dāng)或稍強(qiáng)在被人糞腸道病毒污染的環(huán)境中一定存在，其存在數(shù)量應(yīng)等于或大于腸道病毒的數(shù)目。（二）常用的指示微生物大腸桿菌噬菌體f2；脊髓灰質(zhì)炎病毒減毒疫苗株I。腸道病毒的指示微生物（二）常用的指示微生物大腸桿菌噬菌體f277三、衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法樣品的處理損傷菌的復(fù)蘇選擇性增菌與分離定量計數(shù)方法分型鑒定的方法三、衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法樣品的處理78混勻樣品（非常重要）方法液體：電動混勻、手搖混勻、敲打混勻固體：攪碎混勻、研磨混勻、勻漿混勻目的保證檢驗(yàn)結(jié)果的客觀性和準(zhǔn)確性。將樣品充分破碎、混勻，有利于取樣的代表性，而且可將樣品內(nèi)部的待測微生物釋放，有利于培養(yǎng)鑒定。（一）樣品的處理混勻樣品（非常重要）（一）樣品的處理79混勻樣品（非常重要）樣品濃縮方法沉淀法：借助離心力完成。過濾法：細(xì)菌被阻留在膜上。吸附沉淀法：細(xì)菌被共沉淀或被吸附。免疫磁珠法：用磁分離技術(shù)分離和濃縮微生物。（一）樣品的處理混勻樣品（非常重要）（一）樣品的處理80環(huán)境樣品微生物，在采樣送檢等過程中，受各種不利因素作用，可發(fā)生亞致死性損傷。用普通培養(yǎng)方法不容易培養(yǎng)。需預(yù)先進(jìn)行復(fù)蘇（resuscitation）或修復(fù)(repair)才能培養(yǎng)。無選擇壓力的培養(yǎng)環(huán)境較低的培養(yǎng)溫度（二）損傷菌的復(fù)蘇環(huán)境樣品微生物，在采樣送檢等過程中，受各種不利因素作用，可發(fā)81目的菌檢測的困難：少、與其他菌混合。選擇方法：抑制其它微生物生長、促進(jìn)目標(biāo)微生物生長物理方法：厭氧條件培養(yǎng)厭氧菌、光照條件培養(yǎng)藻類等化學(xué)方法：根據(jù)微生物的營養(yǎng)需求，加入特制的促進(jìn)或抑制生長的物質(zhì)ObligateAerobes（三）對目的菌的選擇性增菌與分離目的菌檢測的困難：少、與其他菌混合。ObligateAer82EMB(EosinMethyleneBlue，伊紅亞甲基藍(lán))dyesinhibitGram(+)bacteriaselectsforGram(-)bacteriaG.I.TractinfectionscausedbyGram(-)bacteriaEMB(EosinMethyleneBlue，伊紅83計數(shù)直接（顯微鏡下計數(shù)、比濁法）

間接（使菌繁殖）傾注平板法表面涂布法MPN法（統(tǒng)計學(xué)方法）“單個菌”生長成“菌落”而計數(shù)衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法（四）微生物定量計數(shù)法計數(shù)直接（顯微鏡下計數(shù)、比濁法）間接傾注平板法“84傾注平板法準(zhǔn)確稀釋待測樣品（一般10倍梯度），準(zhǔn)確將稀釋物定量（一般1ml）均勻地傾注到瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后計數(shù)菌落。表面涂布法將樣品定量（一般0.1ml）涂布在瓊脂培養(yǎng)基的表面，培養(yǎng)后，計數(shù)表面生長的菌落數(shù)。一個平板上生長的菌落數(shù)在30-300之間時最利于計數(shù)。傾注平板法一個平板上生長的菌落數(shù)在30-300之間時最利于計85第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件86表面涂布計數(shù)法優(yōu)點(diǎn)可使用不透明培養(yǎng)基對細(xì)菌計數(shù)，如對營養(yǎng)要求高細(xì)菌，培養(yǎng)基中須加入血液而導(dǎo)致培養(yǎng)基不透明等。計數(shù)的菌落需再進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)時，應(yīng)使用表面涂布法，便于挑取菌落?？杀苊庖騼A注融化的熱瓊脂對待檢菌的損傷。表面涂布計數(shù)法優(yōu)點(diǎn)可使用不透明培養(yǎng)基對細(xì)菌計數(shù)，如對營養(yǎng)要求87最可能數(shù)法MPN法（最常用于大腸菌群計數(shù)）多次稀釋直至最后的稀釋度可能無菌，每個梯度均接種3個培養(yǎng)管，根據(jù)各梯度培養(yǎng)管中細(xì)菌生長情況，查表計算微生物MPN數(shù)（mostprobablenumber）最可能數(shù)法MPN法（最常用于大腸菌群計數(shù)）8810ml陽性管數(shù)1ml陽性管數(shù)0.1ml陽性管數(shù)100ml最可能數(shù)0000……550001……550120……450242……16001800+10ml陽性管數(shù)1ml陽性管數(shù)0.1ml陽性管數(shù)100ml最可能數(shù)0000……330001……331230……233693……11001100+10ml陽性管數(shù)1ml陽性管數(shù)0.1ml陽性管數(shù)100ml最89第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件90MPN/100ml=陰性管總毫升數(shù)X所有管總毫升數(shù)√

陽性管數(shù)X100陽性管：產(chǎn)酸、產(chǎn)氣MPN/100ml=陰性管總毫升數(shù)X所有管總毫升數(shù)√陽性管91第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件92其它方法顯微鏡直接記數(shù)法、比濁記數(shù)法、計算機(jī)輔助自動記數(shù)、濾膜法等第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件93（五）分型鑒定的方法（確定微生物的同源性）血清學(xué)分型噬菌體分型細(xì)菌素分型耐藥譜分型質(zhì)粒圖譜法16srRNA（PCR）法核酸雜交法G+C含量法基因芯片法蛋白質(zhì)芯片法（五）分型鑒定的方法（確定微生物的同源性）血清學(xué)分型16s94第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件95基因組DNA的提取并進(jìn)行純度及濃度的測定PCR擴(kuò)增16SrRNA、純化、產(chǎn)物的電泳檢查及測序登陸GeneBank登記并檢索比較獲得該菌株的種屬基因組DNA的提取并進(jìn)行純度及濃度的測定96CGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGATGAAGCCCAGCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGTGATCTGCCCTGCACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATATGACCTCGGGATGCATGTTCTGGGGTGGAAAGTTTTTCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCACCCATGACGAAGCGCAAGTGACGGTAGTGGGAGAAGAAGCACCGGCCAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTGCGGAATTACTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCGTCTGTGAAATCCCGCAGCTCAACTGCGGGCTTGCGGCGATACGGGCAGACTCGAGTACTGCAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGGTCTCTGGGCAGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCGCTAGGTGTGGGTTTCCTTCCACGGGATCCGTGCCGTAGCCAACGCATTAAGCGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGATAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGGTTTGACATGTACCGGACGACTGCAGAGATGTGGTTTCCCTTGTGGCCGGTAGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTGTGTTGCCAGCACGTGATGGTGGGGACTCGCAGGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCCAGGGCTTCACACATGCTACAATGGTCGGTACAGAGGGCTGCGATACCGTGAGGTGGAGCGAATCTTAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATCGGGGTCTGCAACTCGACCCCGTGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCATGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCCCTTGTGGGAGGGAGCCGTCGAAGGTGGGATCGG

CGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGATGA97第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件98第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件99第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件100第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件101第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件102第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件103第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件104紅球菌屬紅球菌屬紅球菌屬紅球菌屬紅球菌屬紅球菌屬105四、衛(wèi)生微生物研究和檢測方法的前景研究檢測不同微生物的方法，特別是針對檢測微量目的微生物的方法，包括新的采樣方式，良好的濃縮效果，特異、快速、簡便的檢測手段，仍然是今后研究的重點(diǎn)。病毒檢測是衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)中的弱點(diǎn)，應(yīng)該加強(qiáng)。包括樣品的采集、運(yùn)送的程序，分離、鑒定的方法等。衛(wèi)生指示微生物研究不僅包括對存在的潛在致病微生物的指示，還將包括環(huán)境污染物的生物指示。四、衛(wèi)生微生物研究和檢測方法的前景研究檢測不同微生物的方法，106原核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物非細(xì)胞型微生物環(huán)境中微生物的應(yīng)用及研究前景衛(wèi)生微生物學(xué)檢測的特點(diǎn)及基本原則衛(wèi)生指示微生物衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法衛(wèi)生微生物研究和檢測方法的前景小結(jié)（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）原核細(xì)胞型微生物小結(jié)（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）107復(fù)習(xí)思考題指示菌：為何要用？分哪幾類？各類的衛(wèi)生意義？為何要進(jìn)行樣品處理？怎樣處理？復(fù)習(xí)思考題指示菌：為何要用？分哪幾類？各類的衛(wèi)生意義？108

Thankyou!

109第三章

環(huán)境中微生物的主要類群授課教員：曾惠講師軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)教研室2010年6月30日2008級預(yù)防醫(yī)學(xué)5年制本科第三章

環(huán)境中微生物的主要類群授課教員：曾惠講師軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)110微生物的類群龐雜目前已經(jīng)知道的微生物約有10萬種，分布在自然環(huán)境中。農(nóng)田上層15cm處微生物的數(shù)量微生物每克土壤中的數(shù)量細(xì)菌9.8×107放線菌2.0×106真菌1.2×105藻菌2.5×104原生動物3.0×104微生物的類群龐雜目前已經(jīng)知道的微生物約有10萬種，分布在自111菌落數(shù)與空氣清潔度的關(guān)系空氣清潔度菌落數(shù)最清潔的空氣1-2潔凈空氣30個以下普通空氣30-150輕度污染空氣300以下嚴(yán)重污染空氣301以上菌落數(shù)與空氣清潔度的關(guān)系空氣清潔度菌落數(shù)最清潔的空氣1-2潔112人體微生態(tài)中微生物的含量部位含量部位含量眼睛1g肺20g鼻腔10g腸道1000g口腔20g生殖道20g皮膚200g總量1271g人體微生態(tài)中微生物的含量部位含量部位含量眼睛1g肺20g鼻腔113人體消化系統(tǒng)中微生物群體(個/g)回腸結(jié)腸直腸或糞便雙歧桿菌1041071010擬桿菌1031081010腸桿菌103106106腸球菌－107－乳桿菌－－104人體消化系統(tǒng)中微生物群體(個/g)回腸結(jié)腸直腸或糞便雙歧114按細(xì)胞結(jié)構(gòu)分類：原核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物非細(xì)胞型微生物按致病性分類：致病性微生物條件致病性微生物非致病性微生物按細(xì)胞結(jié)構(gòu)分類：115本章主要內(nèi)容概述原核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物非細(xì)胞型微生物（重點(diǎn)）本章主要內(nèi)容概述（重點(diǎn)）116原核微生物與真核微生物在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的根本區(qū)別生物性狀原核微生物真核微生物核擬核，無核膜、核仁真正的核，有核膜、核仁DNA1條1至數(shù)條,與RNA、組蛋白合核糖體70S80S(細(xì)胞質(zhì)中),70S(細(xì)胞器中)細(xì)胞分裂二分裂有絲分裂,減數(shù)分裂有性生殖無有細(xì)胞器無線粒體、高基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等呼吸鏈細(xì)胞膜上線粒體上細(xì)胞壁成分肽聚糖、磷壁質(zhì)多聚糖,幾丁質(zhì)大小1～10μm10～100μm原核微生物與真核微生物在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的根本區(qū)別生物性狀原核微生117一、原核細(xì)胞型微生物細(xì)菌放線菌鞘細(xì)菌滑動細(xì)菌藍(lán)細(xì)菌一、原核細(xì)胞型微生物細(xì)菌118原核型微生物基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)、質(zhì)粒質(zhì)粒控制細(xì)菌的某些遺傳性狀（有性生殖、細(xì)菌毒力、耐藥性、代謝酶等）可能具有特殊結(jié)構(gòu)，如鞭毛、莢膜、芽孢和菌毛等。以簡單二分裂法無性繁殖，僅需20—30分鐘（一）細(xì)菌（Bacteria）原核型微生物（一）細(xì)菌（Bacteria）119（2）環(huán)境中常見致病菌與條件致病菌

P23-24表3-1（3）環(huán)境中其他常見細(xì)菌假單胞菌屬黃桿菌屬產(chǎn)堿桿菌屬無色桿菌屬微球菌屬乳桿菌屬其它細(xì)菌（2）環(huán)境中常見致病菌與條件致病菌120

假單胞菌屬（Pseudomonas）

革蘭陰性桿菌，有鞭毛能運(yùn)動在自然界分布廣泛在低溫下能很好生長，可引起冷藏食品的腐敗變質(zhì)。能利用多種有機(jī)物（是迄今為止發(fā)現(xiàn)的自然界雜食性最強(qiáng)的微生物，能以80多種有毒有機(jī)物為碳源），故在自然界物質(zhì)轉(zhuǎn)化中起重要作用，常被作為污染物生物降解的篩選菌種。假單胞菌屬（Pseudomonas）革蘭陰性桿菌，有鞭121（二）放線菌(Actinomycetes)介于細(xì)菌和真菌之間。分布廣泛，尤其土壤中（土壤特有的泥腥味）。能產(chǎn)生大量多種抗生素（已經(jīng)超過4000種）可分解多種有機(jī)物質(zhì)（烴類、氰類、吡啶、纖維素等），在環(huán)境治理中具有潛在應(yīng)用價值。少數(shù)菌種對人類有致病作用，如星形偌卡菌引起肺部化膿性感染。鏈霉菌屬、諾卡菌屬、小單孢菌屬（二）放線菌(Actinomycetes)介于細(xì)菌和真菌之間122鏈霉菌屬最高等的放線菌，具有各種形態(tài)的孢子絲。近千種，大多生活在土壤中。鏈霉菌能分解多種有機(jī)質(zhì)。產(chǎn)生抗生素菌株的主要來源。鏈霉菌屬最高等的放線菌，具有各種形態(tài)的孢子絲。123諾卡菌屬部分可對人致病，我國主要是星形諾卡菌，經(jīng)外環(huán)境侵入傷口或吸人肺部，引起有特殊癥狀的化膿性感染。在自然環(huán)境中將有機(jī)質(zhì)轉(zhuǎn)化，如烴類的降解、氰類的轉(zhuǎn)化，在污水處理中起重要作用。諾卡菌屬部分可對人致病，我國主要是星形諾卡菌，經(jīng)外環(huán)境侵入傷124小單孢菌屬多分布于土壤及污泥中。分解有機(jī)質(zhì)及產(chǎn)生抗生素。棘孢小單孢菌可產(chǎn)生慶大霉素。小單孢菌屬多分布于土壤及污泥中。125（三）鞘細(xì)菌單細(xì)胞連成的絲狀體細(xì)菌，絲狀體外包圍一層由有機(jī)物或無機(jī)物組成的鞘套。絲狀體不分枝或形成假分枝，靠游動孢子或不能游動的分生孢子行無性繁殖，常生存于淡水或海水中。主要有球衣菌和鐵細(xì)菌屬。（三）鞘細(xì)菌單細(xì)胞連成的絲狀體細(xì)菌，絲狀體外包圍一層由有機(jī)物126球衣菌較強(qiáng)的分解有機(jī)物的能力，常生存于流動的、有機(jī)物污染的淡水中；活性污泥曝氣池中常見菌種，數(shù)量過多時會引起污泥膨脹。球衣菌較強(qiáng)的分解有機(jī)物的能力，常生存于流動的、有機(jī)物污染的淡127鐵細(xì)菌屬能將低鐵氧化為高鐵。廣泛存在于自然界，在鐵素循環(huán)中占有重要位置。鐵質(zhì)水管腐蝕與堵塞常因環(huán)境中鐵細(xì)菌活動引起。鐵細(xì)菌屬能將低鐵氧化為高鐵。128（四）滑動細(xì)菌不借鞭毛而靠菌體蠕動進(jìn)行滑動的一類細(xì)菌。多為絲狀體，也有桿狀或球狀。貝氏硫菌屬，為絲狀體，分布于淡水或海水中，能氧化H2S為硫，對自然界硫素循環(huán)起重要作用。噬纖維菌屬呈桿狀，兩端略尖，細(xì)胞柔軟，可滑行。具有很強(qiáng)的分解纖維素的能力。（四）滑動細(xì)菌不借鞭毛而靠菌體蠕動進(jìn)行滑動的一類細(xì)菌。129為單細(xì)胞生物，呈球形或桿狀。過去稱為藍(lán)藻或藍(lán)綠藻（Blue-greenalgae）,近年根據(jù)其僅有原始核而將其列入原核微生物。光合型微生物，是生態(tài)系統(tǒng)的首要環(huán)節(jié)（第一個產(chǎn)氧的光合生物）。自然界分布廣泛。營養(yǎng)要求簡單。水質(zhì)污染時，可過量繁殖，形成“水華”。常見屬：微囊藻屬、魚腥藻屬、顫藻屬。（五）藍(lán)細(xì)菌(Bluebacteria,Cyanobacteria)為單細(xì)胞生物，呈球形或桿狀。（五）藍(lán)細(xì)菌(Bluebac130藍(lán)藻門微囊藻界、門、綱、目、科、屬、種藍(lán)藻門微囊藻界、門、綱、目、科、屬、種131顫藻藍(lán)藻門顫藻藍(lán)藻門132魚腥藻藍(lán)藻門魚腥藻藍(lán)藻門133二、真核細(xì)胞型微生物具有分化程度較高的真正的核，有核膜、核仁和染色體，胞漿內(nèi)有完整的細(xì)胞器。真菌藻類（低等植物）原生動物（低等動物）二、真核細(xì)胞型微生物具有分化程度較高的真正的核，有核膜、核仁134（一）真菌（Fungus）與原生生物的主要區(qū)別在于有較硬的細(xì)胞壁真菌按形態(tài)分為單細(xì)胞和多細(xì)胞兩類。單細(xì)胞真菌為酵母菌和類酵母菌（yeast）。多細(xì)胞真菌又稱霉菌(mold)。分布廣泛，存在于各種環(huán)境和生物體內(nèi)。衛(wèi)生學(xué)效應(yīng)：引起物質(zhì)變質(zhì)腐爛的主要原因發(fā)酵、制藥、食品工業(yè)等中具有重要作用少數(shù)致?。ㄒ唬┱婢‵ungus）與原生生物的主要區(qū)別在于有較硬的細(xì)135第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件136霉菌常見代表屬曲霉屬：廣泛分布于谷物、土壤等上，分解有機(jī)質(zhì)能力極強(qiáng)，可造成霉變。為釀造、食品、制藥行業(yè)的重要菌屬。青霉屬：典型結(jié)構(gòu)為帚狀枝，產(chǎn)生單輪或多輪對稱或不對稱的掃帚狀小梗，多呈藍(lán)綠色。霉菌常見代表屬137（二）藻類（algae）藻類是一大群低等植物，細(xì)胞分化比較低級(無跟莖葉花等)。廣泛浮游于淡水及海水的上層，也稱浮游生物或浮游植物（phytoplankton）。是水生生態(tài)系統(tǒng)的初級生產(chǎn)者，是水生食物鏈的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。含葉綠體，行光合作用，同時呈現(xiàn)不同的顏色。利用二氧化碳，對N、P需求多。（二）藻類（algae）藻類是一大群低等植物，細(xì)胞分化比較低138常見藻類：綠藻：因藻體中含葉綠素及少量葉黃素，細(xì)胞呈草綠色。小球藻富含蛋白質(zhì)和脂肪，可大量培養(yǎng)作為飼料和食品。硅藻：含有大量硅質(zhì)和果膠質(zhì)，硅藻死亡后，形成硅藻土，可作為過濾劑、絕緣劑等。甲藻：淡水中的甲藻喜酸性環(huán)境，當(dāng)水中富含腐殖酸時，常有甲藻存在；海洋“赤潮”常由甲藻大量增殖引起；甲藻產(chǎn)毒可積于貝體而使人體中毒。常見藻類：139

夜光藻藻體呈球形，透明，肉眼可見，腹面有一條凹溝，口位于溝中央，近口處長出一根極小的鞭毛和一條粗大的鞭毛，海生。細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)淡紅色，大量密集時呈紅色，受波濤振蕩刺激以后放出熒光，是我國赤潮的主要藻類。夜光藻140第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件141本種可產(chǎn)生麻痹性貝毒。膝溝藻日本水域該種赤潮引起魚類大量死亡。是南海北部沿海主要的赤潮生物。

本種可產(chǎn)生麻痹性貝毒。膝溝藻日本水域該種赤潮引起魚類大量死亡142本種可產(chǎn)生腹瀉性貝毒。渤海、東海、香港和南沙群島等水域有分布，形成赤潮的主要種類之一。原甲藻本種可產(chǎn)生腹瀉性貝毒。渤海、東海、香港和南沙群島143（三）原生動物形態(tài)與構(gòu)造：單細(xì)胞低等動物。衛(wèi)生學(xué)意義：水中重要浮游生物?？赏淌臣?xì)菌，在污水處理中起一定作用。是活性污泥的主要成分。某些種類是病原體。環(huán)境中常見原生動物主要有鞭毛綱、肉足綱和纖毛綱。（三）原生動物形態(tài)與構(gòu)造：144鞭毛綱：具有一至多根鞭毛。多生活于有機(jī)質(zhì)較多的污水。綠眼蟲、波豆蟲、滴蟲等常見。鞭毛綱：具有一至多根鞭毛。多生活于有機(jī)質(zhì)較多的污水。綠眼蟲、145肉足綱：運(yùn)動細(xì)胞器是鞭毛，運(yùn)動器官是偽足，也是攝食細(xì)胞器變形蟲，生活在富有藻類、含氧量較高的水塘或溝渠中或潮濕土壤的表層。肉足綱：運(yùn)動細(xì)胞器是鞭毛，運(yùn)動器官是偽足，也是攝食細(xì)胞器變形146纖毛綱：運(yùn)動細(xì)胞器是纖毛，也是攝食細(xì)胞器。結(jié)構(gòu)較復(fù)雜。包括游泳型和固著型。纖毛綱：運(yùn)動細(xì)胞器是纖毛，也是攝食細(xì)胞器。結(jié)構(gòu)較復(fù)雜。包括游147第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件148第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件149環(huán)境中常見原生動物目前已知有15000種：鞭毛綱：運(yùn)動細(xì)胞器是鞭毛，具有一至多根鞭毛。如綠眼蟲、波豆蟲、滴蟲等。多生活在污水中。纖毛綱：運(yùn)動細(xì)胞器是纖毛。在活性污泥污水處理池中，常以原生動物的類群與比例作為污水凈化的指標(biāo)。一般情況下，普通單體鐘蟲與群體鐘蟲較多時，說明污泥爆氣池運(yùn)轉(zhuǎn)正常。環(huán)境中常見原生動物目前已知有15000種：150三、非細(xì)胞型微生物特征：不具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，具有體積極小、結(jié)構(gòu)簡單、專性寄生、抵抗力特殊的特點(diǎn)。環(huán)境中的病毒：空氣中：如流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、天花病毒、水痘病毒、風(fēng)疹病毒、腺病毒等。水中：多為腸道病毒。土壤中：可吸附于顆粒內(nèi)而延長存活時間。食品中：主要是甲型傳染性感染和胃腸炎。許多疾病與食用貝類有關(guān)。如1988年上海甲肝大流行。三、非細(xì)胞型微生物特征：151第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件152四、環(huán)境中微生物的應(yīng)用及研究前景環(huán)境中的微生物種類繁多，人們發(fā)現(xiàn)并已利用的微生物屈指可數(shù)。發(fā)現(xiàn)、認(rèn)識并利用有益微生物、控制有害的微生物成為未來微生物學(xué)發(fā)展的主要方向。空間技術(shù)等新技術(shù)發(fā)展，太空微生物學(xué)和極端微生物學(xué)成為新的研究熱點(diǎn)。四、環(huán)境中微生物的應(yīng)用及研究前景環(huán)境中的微生物種類繁多，人們153極端微生物是依賴于一種或多種極端理化因子的極端生命形式，主要類群包括嗜熱菌、嗜冷菌、嗜鹽菌、嗜堿菌、嗜酸菌及抗輻射菌。極端微生物是依賴于一種或多種極端理化因子的極端生命形式，主要154第四章衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法第四章衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法155授課內(nèi)容衛(wèi)生微生物學(xué)檢測的特點(diǎn)及基本原則衛(wèi)生指示微生物衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法衛(wèi)生微生物研究和檢測方法的前景（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）授課內(nèi)容衛(wèi)生微生物學(xué)檢測的特點(diǎn)及基本原則（重點(diǎn)）（重點(diǎn)）156一、衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)與基本原則特點(diǎn)：檢測對象：致病、非致病、條件致病微生物標(biāo)本來源：人體、環(huán)境環(huán)境中致病微生物數(shù)量少，需要特異的檢測方法，并且多依靠指示微生物一、衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)與基本原則特點(diǎn)：157一、衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)與基本原則特點(diǎn)原則樣品的采集原則樣品的運(yùn)送原則實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則一、衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)與基本原則特點(diǎn)1581.樣品必須要有代表性:采樣量：滿足檢測要求（P37）采樣部位：均勻采樣或者有代表性的部位2.避免對樣品的污染器材滅菌、無菌操作3.避免對樣品中微生物的殺滅和抑制避免有毒物質(zhì)的殘留和高溫影響4.對樣品進(jìn)行詳細(xì)的標(biāo)記（一）樣品的采集原則1.樣品必須要有代表性:（一）樣品的采集原則159盡快送檢：一般3-4h內(nèi)送檢，減少細(xì)菌死亡和進(jìn)一步繁殖帶來的影響。注意保護(hù)待檢的微生物：一定的溫度加保護(hù)劑特殊微生物需要特殊培養(yǎng)基進(jìn)行完善的樣品交接必須有樣品送檢單，與實(shí)驗(yàn)室人員逐項(xiàng)核對后交接（二）樣品的運(yùn)送原則盡快送檢：（二）樣品的運(yùn)送原則160根據(jù)生物安全規(guī)定，妥善包裝待運(yùn)輸標(biāo)本高致病力禽流感標(biāo)本，須放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里，擰緊；然后放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；再放入專用運(yùn)輸箱內(nèi)，放人冰塊，以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的材料；所有容器必須印有生物危險標(biāo)識。SARS病毒感染的樣品，須進(jìn)行三層以上的包裝，采集后加無菌外包裝，置于專用密閉盒內(nèi)(金屬或硬塑料材質(zhì))，用具有吸水性和柔軟的物質(zhì)填充固定，置于專用運(yùn)輸箱內(nèi)，由2人以上專人專車運(yùn)送。（二）樣品的運(yùn)送原則根據(jù)生物安全規(guī)定，妥善包裝待運(yùn)輸標(biāo)本（二）樣品的運(yùn)送原則161（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施微生物危害程度分級：“實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求”（GB19489-2004）將微生物危害程度分為4級。危害等級I：低個體危害，低群體危害。危害等級II：中等個體危害，有限群體危害。危害等級III：高個體危害，低群體危害。危害等級IV：高個體危害，高群體危害。（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施162具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施生物安全防護(hù)水平分級及要求：BSL-1：對應(yīng)危害等級I：P1實(shí)驗(yàn)室BSL-2：對應(yīng)危害等級II：P2實(shí)驗(yàn)室BSL-3：對應(yīng)危害等級III：P3實(shí)驗(yàn)室BSL-4：對應(yīng)危害等級IV：P4實(shí)驗(yàn)室BSL:biosafetylevelP:protection（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施BSL:biosafetylev163具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：1級（P4實(shí)驗(yàn)室）：可檢驗(yàn)危害性最嚴(yán)重的病原體（指實(shí)驗(yàn)室感染機(jī)會多，感染后病情嚴(yán)重，無特效治療，可致死的微生物；或可能引起嚴(yán)重的流行、需動員大量的人力物力進(jìn)行防疫的微生物），如天花病毒、HIV、SARS病毒等。2級（P3實(shí)驗(yàn)室）：可檢驗(yàn)特殊危險致病菌（如果感染能引起重癥并可能有致死后果的微生物，或本國原本沒有的致病微生物），如霍亂菌。（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則164具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：3級（P2實(shí)驗(yàn)室）：檢驗(yàn)一般致病菌（基本不引起實(shí)驗(yàn)室感染；或感染了發(fā)病率非常小的微生物）。4級（P1實(shí)驗(yàn)室）：檢驗(yàn)非致病菌（不致病或有致病性的無毒株）。（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施：（三）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則165第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件166具有合格的人員和標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法人員要有資質(zhì)，并經(jīng)常接受培訓(xùn)細(xì)菌計數(shù)生化實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性模擬樣品檢出考核采用國家標(biāo)準(zhǔn)方法或公認(rèn)方法（WHO、EPA等）加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制儀器、設(shè)備、試劑：定期檢定和校準(zhǔn)注意記錄和核查：如GLP實(shí)驗(yàn)室報告規(guī)范：數(shù)據(jù)規(guī)范，完整簽名蓋章具有合格的人員和標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法167實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有應(yīng)急措施應(yīng)對突發(fā)事件能力需做多種檢驗(yàn)時，微生物優(yōu)先恰當(dāng)?shù)臉悠诽幚砼c檢驗(yàn)均質(zhì)化后再稀釋去除抑菌劑等實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有應(yīng)急措施168衛(wèi)生微生物檢測的基本原則衛(wèi)生微生物檢測的基本原則169二、衛(wèi)生檢驗(yàn)中的指示微生物指示微生物（indicatormicroorganism）：在衛(wèi)生監(jiān)測中，用以反映檢品衛(wèi)生狀況及安全性的指示性微生物。設(shè)定指示微生物的原因微生物（包括致病和非致病的）種類繁多，不可能一一檢測環(huán)境中致病微生物往往數(shù)量少，檢測困難，需要用相對易于檢測的微生物來間接反映二、衛(wèi)生檢驗(yàn)中的指示微生物指示微生物（indicatorm170（一）指示微生物的選擇選擇原則：數(shù)量大易于檢出，方法簡單具有一定代表性，其數(shù)量變化能反映樣品衛(wèi)生狀況及安全性（一）指示微生物的選擇選擇原則：171（一）指示微生物的選擇指示微生物的種類：反映微生物綜合污染：菌落總數(shù)反映微生物污染來源：糞便污染指示菌（大腸菌群）;空氣污染指示菌（溶血性鏈球菌等）不得檢出的致病微生物間接反映致病微生物：如反映腸道病毒的噬菌體等可以指示消毒效果：嗜熱脂肪芽孢桿菌（壓力蒸汽滅菌）；短小芽孢桿菌（電離輻射滅菌）；枯草桿菌黑色變種芽孢（環(huán)氧乙烷滅菌）（一）指示微生物的選擇指示微生物的種類：172糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)是人及溫血動物腸道的正常菌群，且數(shù)量大。排出體外后，在外環(huán)境中的存活時間與腸道致病菌大致相似或稍長。排出體外以后，在外環(huán)境中不繁殖。糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)173糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)在被人或動物糞便污染的樣品中易檢出，而未被糞便污染的樣品中無此種菌存在。用作飲用水指示菌，對常用飲用水消毒劑(如氯、臭氧)的抵抗力應(yīng)該不低于或略強(qiáng)于腸道致病菌。檢驗(yàn)方法簡便，易于定量計數(shù)。糞便污染指示菌的選擇標(biāo)準(zhǔn)174檢測指示微生物反映樣品安全性的原因致病微生物種類繁多，檢測方法亦多種多樣，對樣品的衛(wèi)生安全性作出評價時，不可能分別檢測各種微生物。分離、鑒定致病微生物需時長，不能滿足實(shí)際工作的需要。（一）指示微生物的選擇檢測指示微生物反映樣品安全性的原因致病微生物種類繁多，檢測方175分離、鑒定致病微生物費(fèi)用高，且對人員的技術(shù)要求也相對較高。由于致病微生物數(shù)量少，而檢測方法的靈敏度不高或者受到檢測量的限制，可能導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。檢測指示微生物反映樣品安全性的原因（一）指示微生物的選擇分離、鑒定致病微生物費(fèi)用高，且對人員的技術(shù)要求也相對較高。檢176（二）常用的指示微生物菌落總數(shù)——反映綜合污染定義：單位量的被檢樣品(g、ml、cm2、m3)內(nèi)，所含有的能在某種培養(yǎng)基上經(jīng)一定條件培養(yǎng)后生成的全部菌落數(shù)量。表述：菌落總數(shù)（“細(xì)菌總數(shù)”不妥），cfu/g、cfu/ml。意義：綜合判定檢樣被微生物污染程度。方法：標(biāo)準(zhǔn)平板計數(shù)法、表面涂布法（二）常用的指示微生物菌落總數(shù)——反映綜合污染177（二）常用的指示微生物糞便污染指示菌大腸菌群大腸桿菌糞鏈球菌產(chǎn)氣夾膜梭菌間接反映致病微生物存在的指示菌（二）常用的指示微生物糞便污染指示菌間接反映致病微生物存在的178大腸菌群一群能在37℃、24h內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧或兼性厭氧的革蘭陰性無芽胞桿菌。主要有埃希菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌及枸櫞酸桿菌屬。在37℃能生長的大腸菌群稱為總大腸菌群；在44.5℃仍能生長的大腸菌群稱為耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）。大腸菌群一群能在37℃、24h內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧或兼性179大腸菌群來源于人、畜糞便，土壤、水體等外環(huán)境。檢測方法簡單，計數(shù)容易，菌群中包括的菌種類多，檢出幾率高，長期以來被廣泛用作常規(guī)檢測的衛(wèi)生指示菌。如大腸菌群有檢出，仍需要繼續(xù)檢測耐熱大腸菌群。檢測方法：多管發(fā)酵法、濾膜法和紙片法。大腸菌群來源于人、畜糞便，土壤、水體等外環(huán)境。180大腸桿菌埃希大腸桿菌，是總大腸菌群以及耐熱大腸菌群的主要細(xì)菌，作為糞便污染的指示菌最有意義。大腸桿菌的測定方法較為復(fù)雜。大腸桿菌數(shù)量與耐熱大腸菌群具有很好的相關(guān)性。如大腸菌群有檢出，仍需要繼續(xù)檢測耐熱大腸菌群，如條件允許，最好進(jìn)一步檢測大腸桿菌。大腸桿菌埃希大腸桿菌，是總大腸菌群以及耐熱大腸菌群的主要細(xì)菌181糞鏈球菌現(xiàn)歸為腸球菌屬，是人及動物腸道中的正常菌群，主要棲居于動物腸道內(nèi)，數(shù)量較高；人糞中所占數(shù)量遠(yuǎn)少于大腸桿菌，每克糞便約含108個。大腸菌群與糞鏈球菌比值可區(qū)分人畜糞便來源：>4.0，主要為人糞污染<0.7，主要為畜糞污染0.7～4.0，混合污染糞鏈球菌現(xiàn)歸為腸球菌屬，是人及動物腸道中的正常菌群，主要棲居182產(chǎn)氣莢膜梭菌人和動物特別是食草動物腸道內(nèi)的常住菌，數(shù)量遠(yuǎn)少于大腸桿菌，每克糞便為105～106個。該菌能形成芽胞，對含氯消毒劑及外界不良環(huán)境有較強(qiáng)抵抗力，在外環(huán)境中存活時間較長。若產(chǎn)氣莢膜梭菌被大量檢出而大腸菌群數(shù)量很少時，則表示樣品過去曾受過糞便污染，即陳舊性污染。產(chǎn)氣莢膜梭菌人和動物特別是食草動物腸道內(nèi)的常住菌，數(shù)量遠(yuǎn)少于183人類及溫血動物腸道中寄居三類正常微生物大腸菌群：量最多，生存時間與腸道致病菌接近，抵抗力比致病菌強(qiáng),，檢出方法較易腸球菌：量中等，生存時間比腸道致病菌短，抵抗力比致病菌弱產(chǎn)氣夾膜梭菌：量最少，生存時間比腸道致病菌長，抵抗力比致病菌強(qiáng)人類及溫血動物腸道中寄居三類正常微生物184不得檢出的致病菌微生物主要危害主要指示作用沙門菌腸道致病菌口服藥、食品不得檢出志賀菌菌痢食品不得檢出金葡菌局部化膿、食物中毒食品、化妝品、外用藥不得檢出；游泳池水指標(biāo)菌乙型溶血性鏈球菌食物中毒食品污染銅綠假單胞菌條件致病菌外傷、眼科用藥、化妝品不得檢出，游泳池水指標(biāo)菌破傷風(fēng)梭菌外傷皮膚感染外用藥不得檢出（二）常用的指示微生物不得檢出的致病菌微生物主要危害主要指示作用沙門菌腸道致病菌口185腸道病毒的指示微生物大腸菌群不是水中病毒適宜的指示菌。理想的病毒指示微生物條件：檢驗(yàn)方法簡單操作安全抵抗力與腸道病毒相當(dāng)或稍強(qiáng)在被人糞腸道病毒污染的環(huán)境中一定存在，其存在數(shù)量應(yīng)等于或大于腸道病毒的數(shù)目。（二）常用的指示微生物大腸桿菌噬菌體f2；脊髓灰質(zhì)炎病毒減毒疫苗株I。腸道病毒的指示微生物（二）常用的指示微生物大腸桿菌噬菌體f2186三、衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法樣品的處理損傷菌的復(fù)蘇選擇性增菌與分離定量計數(shù)方法分型鑒定的方法三、衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法樣品的處理187混勻樣品（非常重要）方法液體：電動混勻、手搖混勻、敲打混勻固體：攪碎混勻、研磨混勻、勻漿混勻目的保證檢驗(yàn)結(jié)果的客觀性和準(zhǔn)確性。將樣品充分破碎、混勻，有利于取樣的代表性，而且可將樣品內(nèi)部的待測微生物釋放，有利于培養(yǎng)鑒定。（一）樣品的處理混勻樣品（非常重要）（一）樣品的處理188混勻樣品（非常重要）樣品濃縮方法沉淀法：借助離心力完成。過濾法：細(xì)菌被阻留在膜上。吸附沉淀法：細(xì)菌被共沉淀或被吸附。免疫磁珠法：用磁分離技術(shù)分離和濃縮微生物。（一）樣品的處理混勻樣品（非常重要）（一）樣品的處理189環(huán)境樣品微生物，在采樣送檢等過程中，受各種不利因素作用，可發(fā)生亞致死性損傷。用普通培養(yǎng)方法不容易培養(yǎng)。需預(yù)先進(jìn)行復(fù)蘇（resuscitation）或修復(fù)(repair)才能培養(yǎng)。無選擇壓力的培養(yǎng)環(huán)境較低的培養(yǎng)溫度（二）損傷菌的復(fù)蘇環(huán)境樣品微生物，在采樣送檢等過程中，受各種不利因素作用，可發(fā)190目的菌檢測的困難：少、與其他菌混合。選擇方法：抑制其它微生物生長、促進(jìn)目標(biāo)微生物生長物理方法：厭氧條件培養(yǎng)厭氧菌、光照條件培養(yǎng)藻類等化學(xué)方法：根據(jù)微生物的營養(yǎng)需求，加入特制的促進(jìn)或抑制生長的物質(zhì)ObligateAerobes（三）對目的菌的選擇性增菌與分離目的菌檢測的困難：少、與其他菌混合。ObligateAer191EMB(EosinMethyleneBlue，伊紅亞甲基藍(lán))dyesinhibitGram(+)bacteriaselectsforGram(-)bacteriaG.I.TractinfectionscausedbyGram(-)bacteriaEMB(EosinMethyleneBlue，伊紅192計數(shù)直接（顯微鏡下計數(shù)、比濁法）

間接（使菌繁殖）傾注平板法表面涂布法MPN法（統(tǒng)計學(xué)方法）“單個菌”生長成“菌落”而計數(shù)衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法（四）微生物定量計數(shù)法計數(shù)直接（顯微鏡下計數(shù)、比濁法）間接傾注平板法“193傾注平板法準(zhǔn)確稀釋待測樣品（一般10倍梯度），準(zhǔn)確將稀釋物定量（一般1ml）均勻地傾注到瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后計數(shù)菌落。表面涂布法將樣品定量（一般0.1ml）涂布在瓊脂培養(yǎng)基的表面，培養(yǎng)后，計數(shù)表面生長的菌落數(shù)。一個平板上生長的菌落數(shù)在30-300之間時最利于計數(shù)。傾注平板法一個平板上生長的菌落數(shù)在30-300之間時最利于計194第三章環(huán)境中微生物的主要類群課件195表面涂布計數(shù)法優(yōu)點(diǎn)可使用不透明培養(yǎng)基對細(xì)菌計數(shù)，如對營養(yǎng)要求高細(xì)菌，培養(yǎng)基中須加入血液而導(dǎo)致培養(yǎng)基不透明等。計數(shù)的菌落需再進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)時，應(yīng)使用表面涂布法，便于挑取菌落?？杀苊庖騼A注融化的熱瓊脂對待檢菌的損傷。表面涂布計數(shù)法優(yōu)點(diǎn)可使用不透明培養(yǎng)基對細(xì)菌計數(shù)，如對營養(yǎng)要求196最可能數(shù)法MPN法（最常用于大腸菌群計數(shù)）多次稀釋直至最后的稀釋度可能無菌，每個梯度均接種3個培養(yǎng)管，根據(jù)各梯度培養(yǎng)管中細(xì)菌生長情況，查表計算微生物MPN數(shù)（mostprobablenumber）最可能數(shù)法MPN法（最常用于大腸菌群計數(shù)）19710ml陽性管數(shù)1ml陽性管數(shù)0.