DB34T4335-2022芽菜類蔬菜中喹諾酮類藥物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法-（高清正版）

ICS67.05034CCSX0434安 徽 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB34/T4335—2022芽菜類蔬菜中喹諾酮類藥物殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法DeterminationofquinolonesresiduesinsproutvegetablesbyHPLC-MS/MSmethodDeterminationofquinolonesresiduesinsproutvegetablesbyHPLC-MS/MSmethod2022102620221126安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB34/T4335DB34/T4335—2022DB34/T4335DB34/T4335—2022前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由安徽省食品質(zhì)量安全檢驗方法標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出。本文件由安徽省市場監(jiān)督管理局歸口。（國家農(nóng)副加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心微生物發(fā)酵與功能應(yīng)用工程實驗室、食品營養(yǎng)與安全研究中心。楊志才。II芽菜類蔬菜中喹諾酮類藥物殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了芽菜類蔬菜中喹諾酮類藥物殘留量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜的測定方法。本文件適用于黃豆芽、綠豆芽、黑豆芽、紅豆芽、豌豆芽等芽菜中吡哌酸、麻保沙星、依諾沙星、氟羅沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、環(huán)丙沙星、洛美沙星、達氟沙星、恩諾沙星、奧比沙星、加替沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、司帕沙星、莫西沙星、吉米沙星、巴洛沙星、妥蘇沙星、西諾沙星、噁喹酸、萘啶酸、氟甲喹殘留量的測定。芽菜類蔬菜中甲硝唑和羥基甲硝唑殘留量的測定可按照本文件執(zhí)行。規(guī)范性引用文件文件。GB2763食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理樣品均質(zhì)后經(jīng)0.3％甲酸-乙腈溶液提取，提取液經(jīng)固相萃取柱凈化后，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定，外標(biāo)法定量。文件。GB2763食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理樣品均質(zhì)后經(jīng)0.3％甲酸-乙腈溶液提取，提取液經(jīng)固相萃取柱凈化后，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定，外標(biāo)法定量。5試劑和材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。試劑乙腈（CH3CN）：色譜純。甲酸（HCOOH）：色譜純。甲醇（CH3OH）：色譜純。氯化鈉（NaCl）。2溶液配制5.2.10.3％3mL（5.1.1）10005.2.20.1％甲酸水溶液（V/V）1mL（5.1.2），1000mL，混勻。標(biāo)準(zhǔn)品喹諾酮類、甲硝唑和羥基甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)品，純度均≥95％，見附錄A?；蚪?jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品。標(biāo)準(zhǔn)溶液制備（100（5.1.3）定容至100mL，配制成含量為100μg/mL的各單標(biāo)儲備液，―18℃避光保存，有效期1年?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液（1μg/mL）：1mL（5.4.1）100mL1μg/mL，―18℃6基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線8.1～8.2質(zhì)溶液。——精確吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（5.4.2），用空白基質(zhì)溶液逐級稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.5μg/L、1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L的基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線溶液。材料通過式反相混合型親水親脂固相萃取柱：60mg/3mL，或性能相當(dāng)者。微孔尼龍濾膜：0.22μm。儀器和設(shè)備/質(zhì)譜儀（液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀）：配電噴霧離子源（ESI）。0.1mg0.01g。渦旋混勻器。8000r/min組織搗碎機。試樣制備樣品測定部位按照GB2763的規(guī)定執(zhí)行。隨機取芽菜類樣品，用組織搗碎機充分粉碎，并使均質(zhì)，裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記以下保存。分析步驟3提取稱取10g（精確至0.01g）試樣置于50mL塑料離心管中，準(zhǔn)確加入10mL0.3％甲酸-乙腈溶液（5.2.1），渦旋振蕩1min，加入1gNaCl（5.1.4），再渦旋振蕩1min后，以8000r/min離心5min，取上清液，待凈化。凈化吸取3mL上清液（8.1），以約1mL/min的流速全部通過固相萃取柱（5.5.1），收集流出液，精確量取1.0mL流出液，45℃水浴氮吹至干，再加入1.0mL初始流動相復(fù)溶，過0.22μm微孔尼龍濾膜（5.5.2），待測定。測定液相色譜參考條件如下：色譜柱：C18柱，2.1×50mm1.8μm，或性能相當(dāng)者；流動相：A0.1％甲酸水溶液（5.2.2），B（5.1.1），1；流速：0.3mL/min；進樣體積：2μL；表1梯度洗脫程序質(zhì)譜參考條件如下：離子源類型：電噴霧離子源（ESI）；表1梯度洗脫程序質(zhì)譜參考條件如下：離子源類型：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；監(jiān)測模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；B。定性測定4時間/min0.1％甲酸水溶液/％乙腈/％09551.09552.090103.087135.085157.035658.010909.010909.195510.0955按照8.3.1和8.3.2±2.5％3，且定性離2品中存在相應(yīng)的待測物。表2定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/％＞5020～50（含）10～20（含）≤10允許相對偏差/％±20±25±30±50定量測定用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5.4.3）分別進樣，以待測化合物的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特征離子質(zhì)量色譜圖見附錄C。試樣溶液的測定將基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液依次注入液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀中，保留時間和定性離過線性范圍時應(yīng)根據(jù)測定濃度進行適當(dāng)稀釋后再進行分析?？瞻自囼灣患釉嚇油猓捎猛耆嗤臏y定步驟進行操作。除不加試樣外，采用完全相同的測定步驟進行操作。9分析結(jié)果的表述樣品中待測物的含量按式（1）計算：ωiVf1000 (1)m1000式中：ωi——試樣中待測物殘留量的數(shù)值，單位為微克每千克（μg/kg）；ci——由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得試樣溶液中待測物質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為微克每升（μg/L）；V——提取液體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；m——試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）；f——稀釋倍數(shù)；1000——換算系數(shù)；計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。10精密度在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20％。11靈敏度5本文件對各化合物的方法定量限為0.5～2.0μg/kg（見附錄A）。66附錄A（資料性）26種化合物的名稱、英文通用名、CAS號和方法定量限26種化合物的名稱、英文通用名、CAS號和方法定量限見表A.1。表A.126種各化合物的名稱、英文名、CAS號和方法定量限序號化合物名稱英文通用名稱CAS號化學(xué)分子式定量限（μg/kg）1吡哌酸Pipemidicacid51940-44-4C14H17N5O31.02麻保沙星Marbofloxacin115550-35-1C17H19FN4O41.03依諾沙星Enoxacin74011-58-8C15H17FN4O31.04氟羅沙星Fleroxacin79660-72-3C17H18F3N3O31.05諾氟沙星Norfloxacin70458-96-7C16H18FN3O31.06氧氟沙星Ofloxacin82419-36-1C18H20FN3O41.07培氟沙星Pefloxacin70458-92-3C17H20FN3O31.08環(huán)丙沙星Ciprofloxacin85721-33-1C17H18FN3O31.09洛美沙星Lomefloxacin98079-51-7C17H19F2N3O31.010達氟沙星Danofloxacin112398-08-0C19H20FN3O31.011恩諾沙星Enrofloxacin93106-60-6C19H22FN3O31.012奧比沙星Orbifloxacin113617-63-3C19H20F3N3O31.013加替沙星Gatifloxacin112811-59-3C19H22FN3O41.014沙拉沙星Sarafloxacin98105-99-8C20H17F2N3O31.015雙氟沙星Difloxacin98106-17-3C21H19F2N3O31.016司帕沙星Sparfloxacin111542-93-9C19H22F2N4O31.017莫西沙星Moxifloxacin151096-09-2C21H24FN3O42.018吉米沙星Gemifioxacin175463-14-6C18H20FN5O41.019巴洛沙星Balofloxacin127294-70-6C20H24FN3O41.020妥蘇沙星Tosufloxacin108138-46-1C19H15F3N4O32.021西諾沙星Cinoxacin28657-80-9C12H10N2O51.022噁喹酸Oxolinicacid14698-29-4C13H11NO50.523萘啶酸Nalidixicacid389-08-2C12H12N2O30.524氟甲喹Flumequine42835-25-6C14H12FNO30.525甲硝唑Metronidazole443-48-1C6H9N3O31.026羥基甲硝唑Hydroxymetronidazole4812-40-2C6H9N3O41.0778附錄B（資料性）質(zhì)譜參考條件如下：毛細管電壓：3000V；離子源溫度：230℃；干燥氣流速：18L/min；霧化氣壓力：35psi；鞘氣溫度：335℃；鞘氣流速：11L/min；B.1。表B.1保留時間、離子對和碰撞能序號化合物母離子(m/z)子離子(m/z)碰撞能/eV保留時間/min保留時間窗口/min1吡派酸304.1217.1*；286.122；173.321.312麻保沙星363.1319.9*；344.913；203.871.143依諾沙星321.1303.1*；232.022；433.990.714氟羅沙星370.1326.1*；269.120；274.121.375諾氟沙星320.3302.0*；233.120；204.191.176氧氟沙星362.1318.1*；261.120；254.221.177培氟沙星334.2316.2*；290.220；174.331.128環(huán)丙沙星332.2314.0*；230.920；254.401.139洛美沙星352.2265.1*；308.325；154.731.2110達氟沙星358.2340.1*；283.020；204.931.4011恩諾沙星360.0316.1*；342.120；205.161.4012奧比沙星396.1352.2*；295.118；255.321.2413加替沙星376.2332.2*；261.118；335.810.9914沙拉沙星386.0342.0*；299.020；206.041.1715雙氟沙星400.2382.1*；356.120；156.121.1416司帕沙星393.1349.1*；292.120；256.200.8817莫西沙星402.3384.5；357.923；326.350.8818吉米沙星390.0372.2*；359.020；136.370.9819巴洛沙星391.1360.0*；314.025；156.390.8620妥蘇沙星405.0387.0*；344.023；236.390.7421西諾沙星263.0245.0*；217.015；256.440.7622噁喹酸262.0244.0*；216.018；336.690.9823萘啶酸233.0215.0*；187.013；257.110.9724氟甲喹262.1244.0*；202.018；387.180.9825甲硝唑172.1128.1*；82.015；301.790.9626羥基甲硝唑188.1123.1*；126.010；151.301.04注：*為定量離子。附錄C（資料性）26種化合物特征離子質(zhì)量色譜圖26種化合物特征離子質(zhì)量色譜圖見圖C.1。1.吡派酸1.吡派酸3I/10I/104102.42.73.03.33.63.9t/min

1.61.2I/10I/1040.40.0

2.2.麻保沙星363.1/319.9363.1/344.93.03.33.63.94.24.54.8t/min

43.依諾沙星3.依諾沙星321.1/303.1321.1/232.0I/10I/104103.33.63.94.24.54.8t/min

54.氟羅沙星4.氟羅沙星370.1/326.1I/10I/1042103.33.63.94.24.54.8t/min54I/10I/1042109.洛美沙星9.洛美沙星352.2/265.154I/10I/1042102.52.0I/10I/1041.00.50.0

5.5.諾氟沙星3.63.94.24.54.85.1t/min4.24.54.85.15.4t/min13.13.加替沙星376.2/332.2376.2/261.15.15.45.76.06.36.6t/min

76.氧氟沙星6.氧氟沙星362.1/318.15I/104I/104I/10432103.33.63.94.24.54.85.1t/min10.達氟沙星10.達氟沙星358.2/340.1358.2/283.03I/104I/104I/104104.24.54.85.15.45.7t/min14.沙拉沙星14.沙拉沙星386.0/342.0386.0/299.02.0I/104I/104I/1041.00.50.05.45.76.06.36.6t/min

67.培氟沙星7.培氟沙星334.2/316.2334.2/290.24321011.恩諾沙星11.恩諾沙星360.0/316.1432106.04.53.01.50.0

3.63.94.24.54.85.1t/min4.44.85.25.66.0t/min15.15.雙氟沙星400.2/382.1400.2/356.15.45.76.06.36.66.9t/min

68.環(huán)丙沙星8.環(huán)丙沙星332.2/314.04I/10I/1042103.64.04.44.85.2t/min12.奧比沙星12.奧比沙星396.1/352.24I/10I/1042104.44.85.25.66.0t/min16.司帕沙星16.司帕沙星393.1/349.16I/10I/104205.7 6.0 6.3 6.6t/min圖C.126種化合物的特征離子