ATP 含量檢測(cè)試劑盒說明書-紫外分光光度法UPLC-MS-4576

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁ATP含量檢測(cè)試劑盒說明書注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。貨號(hào)：UPLC-MS-4576規(guī)格：50T/48S

紫外分光光度法產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體50mL×1瓶2-8℃保存試劑二粉劑×1瓶2-8℃保存試劑三液體8mL×1瓶2-8℃保存試劑四粉劑×3支-20℃保存試劑五粉劑×1瓶2-8℃保存試劑六粉劑×3支-20℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支-20℃保存溶液的配制：60℃水浴加熱溶解即可，不影響使用。7mL蒸餾水充分溶解，可加熱促進(jìn)溶解；10.2mL蒸餾水溶解，用不完的試劑-20℃2周，避免反復(fù)凍融；3.2mL蒸餾水充分溶解，用不完的試劑-20℃4周，避免反復(fù)凍融；10.25mL蒸餾水備用，用不完的試劑-20℃2周，避免反復(fù)凍融；mgATP0.826mL10μmol/mLATP標(biāo)準(zhǔn)溶液，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；0.1的比例配制（2.6mL，約10T的量），現(xiàn)配現(xiàn)用。產(chǎn)品說明：ATPATP含量并且計(jì)算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài)。HKATP6-6-NADPH，NADPH340nm有特征吸收峰，NADPHATPATP含量。Glucose6-PhosphateGlucose

HK Glucose6-Phosphate

Dehydrogenase(G-6-P-DH)

Gluconate-6-PhosphateATP ADP NADP+ NADPH技術(shù)指標(biāo)：最低檢出限：0.0023μmol/mL線性范圍：0.0390625-2.5μmol/mL注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：/1mL/冰和氯仿。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1（漿ATP（漿（0.1mL血清（漿），加入1mL提取液），充分震蕩，10000g，4℃離心10min；取上清液至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震蕩混勻，10000g4℃離心3min，取上清，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）。2ATP的提取：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)1：5~10的比例（0.1g組織，加1mL提取液8000g4℃10minEP500μL的氯仿蕩混勻，10000g4℃3min，取上清，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）。3ATP（104個(gè)液體積（mL）500~1000：1的比例（5001mL提取液），超聲波破碎（冰浴，功20%200W2s1s1mn）10000g410minEP的氯仿充分震蕩混勻，10000g4℃離心3min，取上清，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）。注：以上提取過程嚴(yán)格控制在冰浴條件下進(jìn)行。二、測(cè)定步驟1、紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到340nm，蒸餾水調(diào)零。2100μL10μmol/mLATP1.5mL0.625μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要100μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）3、樣本測(cè)定：試劑名稱(μL)測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管樣本100-0.625μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液-100試劑一640640工作液26026010sA1A137℃（哺乳動(dòng)物25℃（其他物種水浴鍋/3min3min10sA2A2ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A2標(biāo)準(zhǔn)-A1標(biāo)準(zhǔn)。三、ATP含量計(jì)算1（漿）ATP含量計(jì)算ATP含量(μmol/mL)=ΔA測(cè)定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×（V提取+V血清（漿））÷V血清（漿）=6.875×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)2ATP含量計(jì)算按樣本質(zhì)量計(jì)算ATP含量（μmol/g質(zhì)量）=ΔA測(cè)定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷W=0.625×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算ATP含量(μmol/106cell）=ΔA測(cè)定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷5=0.125×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)C0.625μol/mLV1m