脂肪酸合成酶（FAS）活性檢測試劑盒說明書- 微量法UPLC-MS-4433

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質檢測技術有限公司第第頁脂肪酸合成酶（FAS）活性檢測試劑盒說明書貨號：UPLC-MS-4433規(guī)格：100T/96S

微量法產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體110mL×1瓶4℃保存試劑一粉劑×2支-20℃保存試劑二粉劑×2支-20℃保存試劑三液體20mL×1瓶4℃保存試劑四粉劑×2支-20℃保存溶液的配制：11mL試劑三，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃2禁止反復凍融。21mL試劑三，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃2禁止反復凍融。30.5mL試劑三，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃2禁止反復凍融。產品說明：（Fattyacidsynthetase，F(xiàn)AS）ANADPH340nm340nmFAS活性。注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：紫外分光光度計//UV板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1、細菌、細胞樣本的制備：按照細胞數(shù)量（104個）:提取液體積（mL）500~1000:1的比例（5001mL提取液）（300W395ming20min，取上清液，置于冰上待測。2（g）:提取液一體積(mL)1:5~10（0.1g1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心20min，取上清液，置于冰上待測。3、血清（漿）等液體樣本：直接測定二、測定步驟1、紫外分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。2、試劑三臨用前置于37℃（哺乳動物）或者25℃（其他物種）保溫15min。3、加樣表（在96孔UV板或者微量石英比色皿中加入下列試劑）試劑名稱測定管空白管上清液20-蒸餾水-20試劑一1616試劑二1616試劑三140140試劑四8815s1（1空白）1min15s2（2空白），ΔA（A1測定-A2測定）-（A1空白-A2空白）?？瞻坠苤恍铚y定1-2次，如果樣本數(shù)量過多也可以將試劑一到試劑四按上述比例混勻配制成工作液進行測定。三、FAS活性計算使用微量石英比色皿測定的計算公式按照蛋白濃度計算37℃（哺乳動物）25℃（其他物種）1nmolNADPH1酶活單位。FAS(U/mgprot)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(Cpr×V樣)÷T=1607.7×ΔA÷Cpr按照樣本質量計算37℃（哺乳動物）25℃（其他物種）1nmolNADPH1活單位。FAS(U/g質量)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1607.7×ΔA÷W按細胞數(shù)量計算37℃（哺乳動物）25℃（其他物種）1041nmolNADPH1個酶活單位。FAS(U/104cell)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T=1607.7×ΔA÷細胞數(shù)量按液體體積計算單位定義：在37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）條件下，每毫升樣本每分鐘氧化1nmolNADPH為1個酶活單位。FAS(U/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷V樣÷T=1607.7×ΔAμL=2×10-20μL=0.02樣總：提取液體積，1mL；T：反應時間，1min；細胞數(shù)量：以萬計。使用96孔UV板測定的計算公式將上述計算公式中比色皿光徑d-1cm變?yōu)閐-0.6cm進行計算即可。注意事項：1、提取液中含有BSA（約2mg/mL），測定上清液蛋白濃