幾丁質(zhì)酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書-微量法UPLC-MS-4231

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁(yè)幾丁質(zhì)酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。貨號(hào)：UPLC-MS-4231規(guī)格：100T/48S

微量法產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體15mL×1瓶2-8℃保存試劑二液體5mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、試劑一：用前搖勻。2N-2.27mL10μmol/mL產(chǎn)品說(shuō)明：幾丁質(zhì)酶要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官（例如烏賊的軟骨），以及真菌類的細(xì)胞壁中。而幾丁質(zhì)酶（EC4）可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸產(chǎn)生棕紅色化合物，在540nm處有特征吸收峰，吸收值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。Chitin

Chitinase

N-AcetylglucosamineN-Acetylglucosamine+3,5-DinitrosalicylicAcid BrownishRedCompound（540nm）2-3//96//操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1（L為1~10（0.g1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心20min，取上清，置于冰上待測(cè)。2104個(gè)（為50~10：1建議001L功率20373100020min3、培養(yǎng)液等液體樣本的處理：直接測(cè)定。二、測(cè)定步驟1、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min。波長(zhǎng)調(diào)至540nm，分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。2、將標(biāo)準(zhǔn)溶液用蒸餾水稀釋為5、4、3、2、1μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用，具體稀釋可參考下表：序號(hào)）標(biāo)準(zhǔn)液體積（μL）蒸餾水體積（μL））11050050052104006004310300700341020080025101009001備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液。1、在EP管中分別加入：試劑名稱測(cè)定管對(duì)照管標(biāo)準(zhǔn)管空白管樣本（μL）100100--標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL）--100-蒸餾水（μL）100試劑一（μL）100-100100渦旋混勻，置于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確水浴1h，然后置于沸水浴中煮沸5min試劑一（μL）-100--8000rpm10min160μLEP試劑二（μL）4040404010min（）96540nmAAAAΔA=A-A=A-A和空白管只需測(cè)1-2次。三、幾丁質(zhì)酶活的計(jì)算1、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測(cè)定（y，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，μmol/mL）。2、樣本重量計(jì)算37℃1μmolN-（U/g樣樣3、蛋白質(zhì)濃度計(jì)算37℃mg1μmolN-（U/mg樣樣4、細(xì)胞數(shù)量計(jì)算1041μmolN-（U/104樣樣x5、培養(yǎng)液體積計(jì)算mL1μmolN-樣樣=xV樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1h；細(xì)胞數(shù)量：以萬(wàn)計(jì)。注意事項(xiàng)：1、反應(yīng)結(jié)束后盡快進(jìn)行比色。