谷物淀粉含量的測(cè)定(旋光法)

谷物淀粉含量的測(cè)定（旋光法）淀粉（starch）是植物的主要貯藏物質(zhì)，大部分貯存于種子、塊根和塊莖中。淀粉不僅是重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并且在工業(yè)上的應(yīng)用也很廣泛。測(cè)定谷物中淀粉的含量對(duì)于鑒定農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)和改進(jìn)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)有很大的意義。方法I一、原理酸性氯化鈣溶液與磨細(xì)的含淀粉樣品共煮，可使淀粉輕度水解。同時(shí)鈣離子與淀粉分子上的羥基絡(luò)合，這就使得淀粉分子充分地分散到溶液中，成為淀粉溶液。淀粉分子具有不對(duì)稱碳原子，因而具有旋光性，可以利用旋光儀測(cè)定淀粉溶膠的旋光度（a），旋光度的大小與淀粉的濃度成正比，據(jù)此可以求出淀粉含量。溶提淀粉溶膠所用的酸性氯化鈣溶液的pH值必須保持2.30，密度須為1.30，加熱時(shí)間的長(zhǎng)短也要控制在一定范圍。因?yàn)橹挥性谶@些條件下，各種不同來源的淀粉溶液的比旋度【a】才都是203°，恒定不變。樣品中其他旋光性物質(zhì)（如糖分）須預(yù)先除去。二、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料面粉或其他風(fēng)干樣品。（二）儀器設(shè)備植物樣品粉碎機(jī)，離心機(jī)，分析天平、粗天平，旋光儀及附件，三角瓶，分樣篩（100目），布氏漏斗、抽濾瓶及真空泵，離心管，小電爐。（三）試劑（1）氯化汞乙醇溶液：將1gHgCl2，溶解于100mL水和900mL95%乙醇中。（2）80%乙醇。（3）95%乙醇。（4）醋酸氯化鈣溶液：溶CaCl2·2H20550g于760mL蒸餾水中，溶解后，調(diào)節(jié)成在20℃時(shí)的密度為1.30，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH為2.30，再調(diào)密度至1.30，必要時(shí)，可用布氏漏斗或玻璃濾器抽濾，以使溶液清徹透明。（5）30%硫酸鋅溶液：稱取ZnSO4·7H2030g溶于蒸餾水中，稀釋到100mL，混勻。（6）15%亞鐵氰化鉀溶液：稱取K4Fe（CN）6·3H2015g溶于蒸餾水中，稀釋到100mL，混勻。三、實(shí)驗(yàn)步驟1.樣品準(zhǔn)備（1）稱取樣品。將樣品風(fēng)干，研磨，通過100目篩，精確稱取約2.5g樣品細(xì)粉（要求含淀粉約2g，請(qǐng)參考表2-33-1），置于離心管內(nèi)。（2）脫脂。加乙醚數(shù)毫升到離心管內(nèi)，用細(xì)玻棒充分?jǐn)嚢?，然后離心。傾出上清液并收集以備回收乙醚。重復(fù)脫脂數(shù)次，以去除大部分油脂、色素等（因油脂的存在會(huì)使以后淀粉溶液的過濾困難）。大多數(shù)谷物樣品含脂肪較少，可免去這個(gè)脫脂手續(xù)。（3）抑制酶活性。加含有氯化高汞的乙醇溶液10mL到離心管內(nèi)，充分?jǐn)嚢?，然后離心，傾去上清液，得到殘余物。（4）脫糖。加80%乙醇10mL到離心管中，充分?jǐn)嚢枰韵礈鞖堄辔铮看味加猛徊０簦?，離心，傾去上清液。重復(fù)洗滌數(shù)次以去除可溶性糖分。2.溶提淀粉（1）加醋酸-氯化鈣。先用醋酸氯化鈣溶液約10mL加到離心管中，攪拌后全部?jī)A入250mL三角瓶?jī)?nèi)，再用醋酸氯化鈣溶液50mL分?jǐn)?shù)次洗滌離心管，洗滌液并入三角瓶?jī)?nèi)，攪拌玻棒也轉(zhuǎn)移到三角瓶?jī)?nèi)。（2）煮沸溶解。先用蠟筆標(biāo)記液面高度，直接置于加有石棉網(wǎng)的小電爐上，在4~5min內(nèi)迅速煮沸，保持沸騰15~17min，立即將三角瓶取下，置流水中冷卻。煮沸過程中要不時(shí)攪拌，勿令其燒焦；要調(diào)節(jié)溫度，勿使泡沫涌出瓶外；常用玻棒將瓶側(cè)的細(xì)粒擦下，并加水保持液面高度。3.沉淀雜質(zhì)和定容（1）加沉淀劑。將三角瓶?jī)?nèi)的水解液轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，用醋酸氯化鈣溶液充分洗滌三角瓶，并入容量瓶?jī)?nèi)，加30%ZnSO41mL混合后，再加15%K4Fe（CN）61mL.用水稀釋至接近刻度時(shí)，加95%乙醇一滴以破壞泡沫，然后稀釋到刻度，充分混合，靜置，以使蛋白質(zhì)充分沉淀。（2）濾清。用布氏漏斗（加一層濾紙）吸氣過濾。先傾清溶液約10mL于此濾紙上，使其完全濕潤(rùn)，讓溶液流干，棄去濾液，再傾清溶液進(jìn)行過濾，用干燥的容器接受此濾液，收集約50mL，即可供測(cè)定之用。4.測(cè)定旋光度用旋光測(cè)定管裝滿濾液，小心地按照旋光儀使用說明，進(jìn)行旋光度的測(cè)定。四、結(jié)果計(jì)算方法Ⅱ一、原理淀粉在鹽酸的作用下可轉(zhuǎn)化成葡萄糖，具有旋光性，根據(jù)旋光性的大小可計(jì)算出淀粉含量。二、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料小麥種子或面粉。（二）儀器設(shè)備旋光儀，分析天平，水浴鍋，容量瓶，試管，三角瓶，燒杯等。（三）試劑（1）1.12%HCl。（2）30%硫酸鋅。（3）15%亞鐵氰化鉀。三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）樣品處理（1）稱取60℃下烘干粉碎（過80目篩）的樣品2.50g于大試管中，分2~3次加入1.12%的HCl40mL，先加入少量將樣品潤(rùn)濕，再用剩余的HC2將管壁上的樣品顆粒洗下。（2）將大試管置于沸水浴中，保持沸騰15min后取出，迅速冷卻至室溫（用碘液檢查淀粉是否完全水解）。再將樣品仔細(xì)地轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用蒸餾水反復(fù)沖洗大試管，并將洗液合并至容量瓶中。（3）加入1mL30%硫酸鋅，用力混合后再加入1mL亞鐵氰化鉀，再搖勻，以沉淀蛋白質(zhì)，并使溶液澄清。如有泡沫可滴入1~2滴95%乙醇予以消除。用蒸餾水定容至刻度，搖勻，靜置片刻后，用干濾紙過濾，濾液收集在干燥的三角瓶中待測(cè)（濾液必須是無色透明的）。（二）測(cè)定接通旋光儀電源，預(yù)熱10min，待鈉光燈穩(wěn)定后，測(cè)零點(diǎn)。用2dm的樣品管盛滿蒸餾水，蓋上玻璃蓋，旋緊管帽，揩凈兩端透鏡及樣品管外部，放入旋光儀的樣品槽中，再蓋好金屬蓋，從目鏡觀察視野，同