高效液相色譜法的建立課件

北京中醫(yī)藥大學(xué)馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人間良可辭。22、步步尋往跡，有處特依依。23、望云慚高鳥，臨木愧游魚。24、結(jié)廬在人境，而無車馬喧；問君何能爾？心遠(yuǎn)地自偏。25、人生歸有道，衣食固其端。北京中醫(yī)藥大學(xué)馬長華高效液相色譜法的建立北京中醫(yī)藥大學(xué)馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人間良可辭。22、步步尋往跡，有處特依依。23、望云慚高鳥，臨木愧游魚。24、結(jié)廬在人境，而無車馬喧；問君何能爾？心遠(yuǎn)地自偏。25、人生歸有道，衣食固其端。實(shí)用高效液相色譜法的建立L.R.Snyder,J.J.Kirkland,J.L.GlajchPracticalHPLCmethoddevelopment2nd1997(第一版1988年出版)HPLC技術(shù)問世已有30余年,已步入發(fā)展與應(yīng)用的成熟時期,關(guān)于方法建立的研究目前已開始逐步趨向穩(wěn)定。我們相信本書在未來十年或二十年中，理應(yīng)不會過時并仍有參考價值。實(shí)用高效液相色譜法的建立1緒論*9常規(guī)樣品分離2分離的基礎(chǔ)*10計(jì)算機(jī)輔助方法3檢測靈敏度與選擇性11生化樣品4樣品的制備12手性分離5色譜柱*13制備分離6中性樣品*14定量7離子樣品*15完善方法8梯度洗脫*北京中醫(yī)藥大學(xué)馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人1高效液相色譜法的建立課件2高效液相色譜法的建立課件3高效液相色譜法的建立課件4高效液相色譜法的建立課件51-2建立分離方法1-2-1選擇HPLC分離模式與起始條件假設(shè)為一般樣品（分子量〈2000）選擇HPLC分離模式(圖1--3)1-2-2開始方法建立1-2-3改善分離1-2-4可重現(xiàn)的分離1-2-5完善方法1-2建立分離方法1-2-1選擇HPLC分離模式與起始條6高效液相色譜法的建立課件7主要HPLC方法的特性

反相HPLC流動相：水-有機(jī)溶劑(A%--B%)色譜柱：C18、C8、苯基、三甲基硅烷、氰基適合的樣品能溶于水-有機(jī)混合液的大多數(shù)樣品，尤其是中性或非離子性化合物的首選。主要HPLC方法的特性

反相HPLC8主要HPLC方法的特性

離子對HPLC流動相：水-有機(jī)溶劑，控制PH的緩沖溶液和離子對試劑色譜柱：C18、C8、氰基適合的樣品離子或可電離的化合物，尤其是堿或陽離子樣品的良好選擇。主要HPLC方法的特性

離子對HPLC9主要HPLC方法的特性

正相HPLC流動相：有機(jī)溶劑混合液色譜柱：氰基、氨基、二醇基、硅膠適合的樣品當(dāng)反相或離子對HPLC無效是的第二個良好選擇；不溶于水-有機(jī)混合液的親脂樣品的首選；異構(gòu)體混合物。主要HPLC方法的特性

正相HPLC101-2-2開始方法建立首次HPLC分離較好的實(shí)驗(yàn)條件色譜柱C18、C85μm15×0.46cm流動相水或緩沖溶液-乙氰(80-100%)緩沖溶液25mmol磷酸鉀2.0<PH>3.0添加劑胺改性劑、離子對試劑（開始不用）流速1.5—2.0ml/min溫度35—45℃樣品量體積<25μL重量<100μg1-2-2開始方法建立首次HPLC分離較好的實(shí)驗(yàn)條件11為了避免漏檢樣品中可能存在的化合物,建議用洗脫能力非常強(qiáng)的流動相,做第一次預(yù)實(shí)驗(yàn),然后按照一定速度(20%)降低強(qiáng)溶劑的比例,如例（圖1--4）所示.當(dāng)樣品中存在對純乙氰或純甲醇強(qiáng)保留的組分時可以考慮用非水反相色譜NARP或者是正相色譜HPLC方法建立的目標(biāo)（表1--5）為了避免漏檢樣品中可能存在的化合物,建議用洗脫能力非常強(qiáng)的流12高效液相色譜法的建立課件13高效液相色譜法的建立課件14高效液相色譜法的建立課件15END16、業(yè)余生活要有意義，不要越軌?！A盛頓

17、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息?！_素·貝克

18、最大的挑戰(zhàn)和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人?！R云

19、自己活著，就是為了使別人過得更美好?！卒h

20、要掌握書，莫被書掌握；要為生而讀，莫為讀而生。——布爾沃END16、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。——華盛頓16北京中醫(yī)藥大學(xué)馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人間良可辭。22、步步尋往跡，有處特依依。23、望云慚高鳥，臨木愧游魚。24、結(jié)廬在人境，而無車馬喧；問君何能爾？心遠(yuǎn)地自偏。25、人生歸有道，衣食固其端。北京中醫(yī)藥大學(xué)馬長華高效液相色譜法的建立北京中醫(yī)藥大學(xué)馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人間良可辭。22、步步尋往跡，有處特依依。23、望云慚高鳥，臨木愧游魚。24、結(jié)廬在人境，而無車馬喧；問君何能爾？心遠(yuǎn)地自偏。25、人生歸有道，衣食固其端。實(shí)用高效液相色譜法的建立L.R.Snyder,J.J.Kirkland,J.L.GlajchPracticalHPLCmethoddevelopment2nd1997(第一版1988年出版)HPLC技術(shù)問世已有30余年,已步入發(fā)展與應(yīng)用的成熟時期,關(guān)于方法建立的研究目前已開始逐步趨向穩(wěn)定。我們相信本書在未來十年或二十年中，理應(yīng)不會過時并仍有參考價值。實(shí)用高效液相色譜法的建立1緒論*9常規(guī)樣品分離2分離的基礎(chǔ)*10計(jì)算機(jī)輔助方法3檢測靈敏度與選擇性11生化樣品4樣品的制備12手性分離5色譜柱*13制備分離6中性樣品*14定量7離子樣品*15完善方法8梯度洗脫*北京中醫(yī)藥大學(xué)馬長華高效液相色譜法的建立21、靜念園林好，人17高效液相色譜法的建立課件18高效液相色譜法的建立課件19高效液相色譜法的建立課件20高效液相色譜法的建立課件211-2建立分離方法1-2-1選擇HPLC分離模式與起始條件假設(shè)為一般樣品（分子量〈2000）選擇HPLC分離模式(圖1--3)1-2-2開始方法建立1-2-3改善分離1-2-4可重現(xiàn)的分離1-2-5完善方法1-2建立分離方法1-2-1選擇HPLC分離模式與起始條22高效液相色譜法的建立課件23主要HPLC方法的特性

反相HPLC流動相：水-有機(jī)溶劑(A%--B%)色譜柱：C18、C8、苯基、三甲基硅烷、氰基適合的樣品能溶于水-有機(jī)混合液的大多數(shù)樣品，尤其是中性或非離子性化合物的首選。主要HPLC方法的特性

反相HPLC24主要HPLC方法的特性

離子對HPLC流動相：水-有機(jī)溶劑，控制PH的緩沖溶液和離子對試劑色譜柱：C18、C8、氰基適合的樣品離子或可電離的化合物，尤其是堿或陽離子樣品的良好選擇。主要HPLC方法的特性

離子對HPLC25主要HPLC方法的特性

正相HPLC流動相：有機(jī)溶劑混合液色譜柱：氰基、氨基、二醇基、硅膠適合的樣品當(dāng)反相或離子對HPLC無效是的第二個良好選擇；不溶于水-有機(jī)混合液的親脂樣品的首選；異構(gòu)體混合物。主要HPLC方法的特性

正相HPLC261-2-2開始方法建立首次HPLC分離較好的實(shí)驗(yàn)條件色譜柱C18、C85μm15×0.46cm流動相水或緩沖溶液-乙氰(80-100%)緩沖溶液25mmol磷酸鉀2.0<PH>3.0添加劑胺改性劑、離子對試劑（開始不用）流速1.5—2.0ml/min溫度35—45℃樣品量體積<25μL重量<100μg1-2-2開始方法建立首次HPLC分離較好的實(shí)驗(yàn)條件27為了避免漏檢樣品中可能存在的化合物,建議用洗脫能力非常強(qiáng)的流動相,做第一次預(yù)實(shí)驗(yàn),然后按照一定速度(20%)降低強(qiáng)溶劑的比例,如例（圖1--4）所示.當(dāng)樣品中存在對純乙氰或純甲醇強(qiáng)保留的組分時可以考慮用非水反相色譜NARP或者是正相色譜HPLC方法建立的目標(biāo)（表1--5）為了避免漏檢樣品中可能存在的化合物,建議用洗脫能力非常強(qiáng)的流28高效液相色譜法的建立課件29高效液相色譜法