pcr實驗室程序管理文件及標(biāo)準(zhǔn)化操作程序

PAGE程序文件的管理和維護制度1.目的：基因診斷程序文件是指導(dǎo)臨床基因擴增檢驗活動的法規(guī)性文件，屬內(nèi)部受控文件，不得擅自修改、涂改，不得遺失、外借翻印。為保持其現(xiàn)行有效和持續(xù)適應(yīng)性，并確立因條件變化進行修改的程序。2．編寫依據(jù)：2.1ISO/IEC170250－1999《檢測和校準(zhǔn)實驗室能力的通用要求》因衛(wèi)生部《臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)驗收表（checklist）》是根據(jù)ISO/IEC17025而設(shè)計2.2衛(wèi)生部《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》及《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范》3．適應(yīng)范圍：臨床檢驗標(biāo)本4．內(nèi)容：程序文件應(yīng)包含下列內(nèi)容：文件名稱、編號、頁號、總頁數(shù)例：頁眉文件名稱程序文件的管理和維護編號日期年月日版本責(zé)任部門第頁共頁頁底應(yīng)有：編寫人：×××批準(zhǔn)人：×××生效日期：××年××月××日。5．編制及職責(zé)：程序文件由PCR實驗室負(fù)責(zé)人主持編寫、修訂、審核并保持它的現(xiàn)行有效性。由科主任批準(zhǔn)和頒布實施，并負(fù)責(zé)解釋。6．發(fā)放與持有者責(zé)任：程序文件由科主任批準(zhǔn)發(fā)放，發(fā)放與回收要登記簽字，由PCR實驗室負(fù)責(zé)人保管，并組織全室工作人員認(rèn)真學(xué)習(xí)，了解內(nèi)容，熟悉其中各項規(guī)定，程序文件執(zhí)行情況納入實驗室目標(biāo)管理，與獎懲掛鉤。持有者調(diào)任時，要收回該程序文件。7．修訂：科室任何工作人員均可提出對程序文件的修改建議，文件修改須經(jīng)有關(guān)人員討論，PCR實驗室負(fù)責(zé)人根據(jù)條件變化提出是否修改的決定，如作小的修改則可在修改頁上進行，修改文件經(jīng)科主任審核批準(zhǔn)后，并填寫入程序文件修改頁。如果文件須作重大修改，PCR實驗室負(fù)責(zé)人可進行改版。新版程序文件經(jīng)科主任批準(zhǔn)后生效，收回舊版，并予以銷毀，登記簽字后發(fā)出新版，保證工作現(xiàn)場只有唯一的，最新的使用版本。實驗室內(nèi)務(wù)管理及清潔制度1目的：保證實驗室日常內(nèi)務(wù)管理及清潔工作順利進行。2范圍：實驗室相關(guān)人員及醫(yī)院清潔工人。3內(nèi)務(wù)管理及清潔制度3.1 內(nèi)務(wù)管理制度a.實驗人員要有強烈的時間觀念，按時上下班，不遲到、早退。b.進入實驗室的工作人員必須遵守實驗室的單一流向的規(guī)定，禁止逆向走動。c.非本室工作人員未經(jīng)允許不得進入實驗室。d..實驗室工作人員應(yīng)嚴(yán)格遵守各項規(guī)章制度和操作規(guī)程。f..實驗結(jié)束后，做好實驗室的清潔衛(wèi)生和消毒工作。g..確保實驗室的安全。工作人員每天下班前應(yīng)認(rèn)真檢查實驗室的門窗、水電，節(jié)假日應(yīng)指定人員負(fù)責(zé)檢查實驗室的儀器、設(shè)備，確保安全。h.實驗室為工作學(xué)習(xí)場所，非實驗相關(guān)物品不得放置在實驗室內(nèi)，落實實驗區(qū)和生活區(qū)分離的原則，嚴(yán)禁在室內(nèi)抽煙，吃零食.i.在實驗室內(nèi)不得從事讀報、看小說等非實驗性工作。j.實驗室人員應(yīng)自覺遵守以上規(guī)定，如有違反按科有關(guān)規(guī)定處罰。3.2 內(nèi)務(wù)清潔制度實驗室人員：a．實驗室地面必須平整、干凈，通道要利于通行，沒有無用的物品阻礙。b.．合理規(guī)劃實驗室內(nèi)物品，做到擺放整齊、有序，無用的或使用效率低的物品放置到儲存處，常用的物品要容易尋找到。c.．抽屜、柜子、文件類物品要作好標(biāo)記，以方便識別。d.實驗結(jié)束后用4%“84”消毒液對臺面進行清潔，并經(jīng)紫外燈進行消毒。e.每天對使用過的移液器用75%的酒精進行擦拭，并經(jīng)紫外燈進行消毒30分鐘。f.實驗過程中如發(fā)生標(biāo)本或試劑外濺，應(yīng)立即用4%“84”消毒液滴上，衛(wèi)生紙蓋上半小時，然后用酒精擦洗，并經(jīng)紫外燈消毒。g.每天實驗前通過緩沖區(qū)上的開關(guān)，開啟各區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)，各區(qū)實驗結(jié)束后打開該區(qū)移動紫外燈消毒實驗臺面，紫外燈每天開啟30～60分鐘。h.每天下班前要關(guān)門、關(guān)窗、檢查空調(diào)和儀器的電源是否關(guān)閉。醫(yī)院清潔人員：a.每天實驗結(jié)束，待紫外燈消毒時間足夠后，依次關(guān)閉各區(qū)紫外燈并記錄。b.依次用4%“84”消毒液清潔三個區(qū)的實驗臺面和地面。各區(qū)清潔消毒工具均專用，不可混用，注意按照單一方向流程的原則來進行清潔。c.收集好各區(qū)廢棄物，交醫(yī)院集中處理。d.每周一，四將工作服交院洗衣房洗滌消毒，不同實驗區(qū)的工作服隔開洗滌。引用表格：附表18:PCR實驗室出入人員登記表實驗室的設(shè)置及管理目的：建立實驗室的合理設(shè)置和科學(xué)管理，防止實驗污染,保證檢測結(jié)果的可靠性。適用范圍：有關(guān)實驗室的管理、設(shè)置、設(shè)備、工作流程及維護等應(yīng)遵守規(guī)程。核心是防止分析前、分析中和分析后的實驗污染、實際工作中主要是擴增片段（擴增產(chǎn)物）、天然核酸、標(biāo)本間、試劑和耗材及不當(dāng)?shù)牟僮鞣椒ㄋ斐傻奈廴荆绕涫且苊鈱嶒炇乙褦U增的PCR產(chǎn)物污染新檢測標(biāo)本中PCR體系。職責(zé)：臨床PCR檢驗實驗室工作人員共同遵守、相互督促。程序：4.1 實驗室分區(qū)設(shè)置a.本實驗室布局見附圖01。實驗室采用實時熒光定量PCR技術(shù)作為臨床基因診斷的主要手段，實驗室分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)和擴增及產(chǎn)物分析區(qū)三個獨立實驗室，連接部位設(shè)置一個緩沖區(qū)，用于更換工作服、鞋套等；每一工作區(qū)各配備專用的設(shè)備、儀器、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦公用品、專用工作服，并有明顯的區(qū)分標(biāo)識。進入各個工作區(qū)域進行基因工作擴增時,必須嚴(yán)格遵守單一方向順序,即從第一區(qū)試劑貯存及準(zhǔn)備區(qū)→第二區(qū)的標(biāo)本制備區(qū)→第三區(qū)的擴增區(qū)。b.各工作區(qū)有專用的儀器設(shè)備、辦公用品、工作服、實驗耗材和清潔用具等，不可混用。c.各區(qū)配有不同顏色工作服，一區(qū)為藍(lán)色，二區(qū)為粉紅色，三區(qū)為白色。進入實驗室，必須更換本室有顏色標(biāo)識的工作服，穿上一次性鞋套。4.2 標(biāo)本接收區(qū)工作制度a.因我室每周一，三，五才開展項目，為避免頻繁進入標(biāo)本制備間，標(biāo)本的接收在標(biāo)本收集間進行，收集后暫放于儲存標(biāo)本的專用冰箱。b.每天下班前收齊標(biāo)本，驗收登記后，將標(biāo)本送入標(biāo)本制備區(qū)。出去后當(dāng)天不得再進入實驗室。c.每天的標(biāo)本登記記錄，應(yīng)書寫工整詳細(xì)，使用本室專用的、帶有本室標(biāo)識的記錄本、紙和筆。4.3 試劑準(zhǔn)備區(qū)工作制度a．實驗人員進入該區(qū)須穿本區(qū)專用藍(lán)色工作服。實驗中須戴手套、一次性鞋套。b.在緩沖區(qū)開啟該區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)c．記錄溫、濕度計讀數(shù)。d.記錄冰箱的溫度計讀數(shù)，繪制冰箱的質(zhì)控圖（附圖02）。e.根據(jù)當(dāng)天的標(biāo)本驗收登記表，取出當(dāng)天實驗須配制和使用的試劑，其余試劑要立即收好放回冰箱內(nèi)。f.每周一清點庫存試劑，看有無過期或?qū)⒔狡诘脑噭?，或作報廢處理或排列優(yōu)先使用，避免浪費，然后記錄試劑的詳細(xì)保存情況。g.將準(zhǔn)備好的試劑放入傳遞盒中。h.每次實驗記錄，書寫工整詳細(xì)，應(yīng)使用本室專用的、帶有本室標(biāo)識的記錄本、紙和筆。i.實驗完畢關(guān)閉該區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)并打開紫外燈消毒30～60分鐘，記錄紫外燈使用情況。4.4 標(biāo)本制備區(qū)工作制度a.實驗人員進入該區(qū)須穿本室專用粉紅色工作服。實驗中須使用一次性鞋套，戴手套，手套需常更換。b.在緩沖區(qū)開啟該區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)。c．從傳遞盒中取出試劑放入冰箱冷凍室試劑存放專區(qū)暫存。d.室驗前打開生物安全柜的送風(fēng)和排風(fēng)按鍵，打開紫外燈消毒15～30分鐘。e.記錄溫、濕度計讀數(shù)。f.記錄冰箱的溫度計讀數(shù)，繪制冰箱的質(zhì)控圖。g.核對標(biāo)本的編號、類型和標(biāo)本數(shù)量。h.按試劑盒要求在生物安全柜里進行標(biāo)本的裂解和提取處理，在工作臺面上進行加樣，加樣后高速15000rpm離心數(shù)秒后，將其放入傳遞盒。i.使用本室專用的經(jīng)過滅活無菌處理的加樣器和帶濾芯的吸頭。j.使用過的離心管、吸頭須置于盛有4％“84”消毒液的廢液缸中。k.使用本室專用的帶有本室標(biāo)識的記錄本、紙和筆。l.患者樣品應(yīng)按有生物傳染性危險品對待。m.標(biāo)本處理完成后，收拾臺面，用4%的84消毒液全面擦試生物安全柜內(nèi)的工作臺面，開紫外燈消毒30分鐘。n.關(guān)閉所有儀器，記錄儀器使用時間和運行狀態(tài)。o.實驗完畢關(guān)閉該區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)并打開紫外燈消毒30～60分鐘，記錄紫外燈使用情況。4.4 擴增區(qū)工作制度a.實驗人員進入該區(qū)須穿本區(qū)專用白色工作服。實驗中須使用一次性鞋套，戴手套，手套需常更換。b.在緩沖區(qū)開啟該區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)。c.將從傳遞盒接收來的離心后加好樣的反應(yīng)管上機擴增。d.擴增分析完后，記錄結(jié)果，打印報告。e.得到當(dāng)天室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果后，在室內(nèi)質(zhì)控圖（附圖03）上描點。f.關(guān)掉擴增儀，將擴增過的反應(yīng)管小心地取出放入密封的塑料袋里丟入醫(yī)療垃圾袋中，記錄儀器使用時間和運行狀態(tài)。g.實驗完畢關(guān)閉該區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)并打開紫外燈消毒30～60分鐘，記錄紫外燈使用情況。本文涉及以下圖表，見SOP文件末的附圖表：實驗室平面布局示意圖附圖01冰箱質(zhì)控圖附圖02室內(nèi)質(zhì)控圖附圖03實驗室人員配置及培訓(xùn)程序目的：保證實驗室有足夠數(shù)量的合格的工作人員，并能完成相應(yīng)的工作任務(wù)。適用范圍：本程序適用于實驗室人員配置、管理、培訓(xùn)及考核。程序：3．1人員要求：3.1.1本實驗室工作員應(yīng)為醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，具有大專以上學(xué)歷。3.1.2實驗室工作人員應(yīng)參加衛(wèi)生部或省臨檢中心舉辦的PCR技術(shù)培訓(xùn)，并取得合格證。3.1.3對于新進入本室的人員，如尚未取得PCR技術(shù)培訓(xùn)合格證，應(yīng)在實驗室有培訓(xùn)合格證的上級技術(shù)人員的指導(dǎo)下進行實驗工作，實驗報告由有資格人員出具，并應(yīng)在最短的時間內(nèi)取得上崗培訓(xùn)合格證。3.2人員配置：3.2.1實驗室應(yīng)根據(jù)工作需要配備足夠的工作人員，目前實驗室有副主任技師1人、主管技師1人，初級技師2人，獲得培訓(xùn)合格證者2人，視工作量的增加和業(yè)務(wù)發(fā)展需要，應(yīng)適當(dāng)增加工作人員。3.2.2科室主任負(fù)責(zé)PCR實驗室人員配置、監(jiān)督質(zhì)量、實驗室所有工作人員在條件許可時，應(yīng)在最短時間內(nèi)獲得上崗培訓(xùn)合格證書。工作人員上崗前必須學(xué)習(xí)掌握PCR實驗室管理文件及要求，并由實驗室主任核查。實驗室主任具體負(fù)責(zé)實施技術(shù)培訓(xùn)、考核及管理。3.2．3實驗室主任負(fù)責(zé)實驗室管理、技術(shù)指導(dǎo)、解決與臨床溝通及技術(shù)疑難問題。實驗室主任不在崗時，應(yīng)指定臨時負(fù)責(zé)人。3.3人員培訓(xùn)及考核：3.3.1實驗室負(fù)責(zé)人（或委托人）參加每年衛(wèi)生部PCR室間質(zhì)評總結(jié)會。3.3.2實驗室工作人員每1~2年至少參加1次PCR技術(shù)的省級或國家級繼續(xù)教育項目，參加相關(guān)學(xué)術(shù)交流會議。3.3.3安排未取得上崗培訓(xùn)合格證的工作人員在合適的時間內(nèi)參加技術(shù)培訓(xùn)。3.3.4實驗室工作人員每年應(yīng)提交至少1篇本專業(yè)相關(guān)學(xué)術(shù)論文或綜述作為年度業(yè)務(wù)考核的依據(jù)之一。3.4人員管理實驗室建立所有工作人員的技術(shù)檔案，包括：學(xué)歷、任職資格、發(fā)表論文、研究成果、培訓(xùn)等相關(guān)材料復(fù)印件（檢驗科統(tǒng)一管理）。引用表格：1實驗室工作人員一覽表(附表02)；2人員培訓(xùn)計劃及培訓(xùn)記錄表(附表05)。儀器申請、采購、安裝和管理程序1 目的：保證儀器正常的購買、安裝、使用，確保實驗室儀器設(shè)備得到妥善的管理。2 適用范圍：基因擴增檢驗實驗室所有的儀器設(shè)備。3 申請、采購及安裝程序3.1儀器申請購買需根據(jù)實驗室需要由實驗室工作人員提出并向?qū)嶒炇邑?fù)責(zé)人進行書面匯報。3.2由實驗室負(fù)責(zé)人填寫儀器設(shè)備申購表，通過科室領(lǐng)導(dǎo)小組會議批準(zhǔn)后，上報醫(yī)院設(shè)備科統(tǒng)一進行購買。3.3儀器采購到貨后，在醫(yī)院設(shè)備科人員和實驗室人員共同陪同下由廠家到實驗室進行安裝。3.4儀器安裝后由廠家工程師進行培訓(xùn)并通過設(shè)備科人員確認(rèn)后，填報儀器安裝表后，設(shè)備科和實驗室各備份一份儀器維護使用檔案后，由實驗室負(fù)責(zé)人簽字后方可使用。4管理程序：4.1基因擴增檢驗實驗室的主要儀器設(shè)備均需建立檔案，主要的儀器包括：XXXXX擴增儀、高速離心機、普通低溫冰箱、移液器、超凈工作臺、生物安全柜等。4.2設(shè)備的檔案包括：設(shè)備名稱、制造商名稱、型號、序號、接收日期和啟用日期、目前放置地點、接收時的狀態(tài)、校準(zhǔn)和鑒定的日期和結(jié)果以及下次校準(zhǔn)的日期、進行的維護和維護計劃、故障記錄等，并應(yīng)有儀器使用說明書或其它技術(shù)資料復(fù)印件。4.3儀器出現(xiàn)故障應(yīng)作記錄和處理意見，如不能正常使用，應(yīng)填寫維修申請單，交醫(yī)院設(shè)備維修人員或相關(guān)專門維修單位進行處理。4.4儀器應(yīng)有工作狀態(tài)標(biāo)識，正常使用者貼綠色標(biāo)簽。有故障待修暫停使用者用黃色標(biāo)簽，不能使用者應(yīng)貼紅色標(biāo)簽。需定期作校準(zhǔn)或檢定的儀器應(yīng)有校準(zhǔn)或檢定日期及下次校準(zhǔn)或檢定日期的記錄。4.5儀器設(shè)備的報廢經(jīng)提出申請后，由科有關(guān)人員統(tǒng)一處理。4.6基因擴增檢驗實驗室儀器設(shè)備實行分區(qū)使用，不得混用。4.7本實驗室所有儀器、設(shè)備均為專用不外借。本文涉及以下表格，見SOP文件末的附圖表：主要儀器設(shè)備一覽表（附表03）。設(shè)備校正記錄表（附表08）。實驗室試劑、耗材購買管理程序目的：規(guī)定試劑購買原則、驗收的程序和試劑的正確貯存。范圍：適用于本實驗室所購的診斷試劑盒、實驗耗材。職責(zé)：本程序由科主任落實，室負(fù)責(zé)人主管協(xié)助。工作程序：4.1試劑的購買和管理4.1.1試劑購買原則：試劑的購買須根據(jù)科內(nèi)的有關(guān)規(guī)定本著“質(zhì)優(yōu)價廉”進行，所購基因診斷試劑必須三證齊全（生產(chǎn)許可證、產(chǎn)品注冊證、經(jīng)營許可證），并與熒光定量擴增儀相配套。4.1.2試劑購買程序：①試劑廠家的確定：先由具體項目操作人員提出初步意見，提供2家或2家以上（特殊情況1家亦可）試劑廠家的有關(guān)試劑信息（包括試劑廠家的信息廣告、同行對有關(guān)試劑盒的使用評價和有關(guān)機構(gòu)的綜合評價），提交科試劑審核小組討論決定第一試劑商和第二試劑供貨商，并與供貨商商談試劑價格；②試劑的購買：具體項目操作人員每月底提出所購試劑的品種和數(shù)量，由實驗室負(fù)責(zé)人或委托人與供貨商聯(lián)系供貨；③試劑廠商的變更：為保證試劑使用的穩(wěn)定性，原則內(nèi)一年內(nèi)不變更試劑廠商，如在使用過程中發(fā)現(xiàn)質(zhì)量問題，由室負(fù)責(zé)人向科主任提出申請，交試劑審核小組討論決定。4.1.3試劑的驗收：供貨商送來試劑后由科專門人員和項目操作人員共同驗收，在廠家的供貨清單上簽字，項目操作人員負(fù)責(zé)試劑質(zhì)量驗收（內(nèi)外包裝），科專門人員核對試劑的數(shù)量和價格，供貨清單交室負(fù)責(zé)人保管；試劑驗收后登記。4.1.4試劑貯存：試劑登記后，及時放入試劑貯備區(qū)的冰箱，保存條件按說明書規(guī)定進行。4.1.5試劑的質(zhì)檢：按試劑質(zhì)檢SOP進行。4.2實驗耗材的購買和管理4.2.1購買：由實驗室負(fù)責(zé)人填寫申請，按需提出所購耗材的品名、規(guī)格、數(shù)量，由科主任簽字同意后交科室指定人員送交院設(shè)備科購買。4.2.2驗收：消耗品購進后由科專門人員驗收、領(lǐng)進檢驗科，交實驗室人員，實驗室人員核對數(shù)量、規(guī)格，查驗外包裝是否破損，如發(fā)生破損，給予退回。4.2.3貯存：消耗品按要求存入各區(qū)指定位置。4.3項目具體負(fù)責(zé)人發(fā)現(xiàn)試劑或耗材少于一定的數(shù)量時（不足2周使用時），應(yīng)向室負(fù)責(zé)人提出，以便及時購買；使用過程中發(fā)現(xiàn)試劑有質(zhì)量問題時向室負(fù)責(zé)人提出，由室負(fù)責(zé)人核實后采取措施。引用的文件及表格試劑的質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序試劑驗收記錄表（附表11）試劑的質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序1 目的：保證每批用于臨床實驗的試劑的質(zhì)量良好，符合。2 適用范圍：各種用于臨床實驗的核酸擴增熒光檢測試劑（現(xiàn)包括HBV、HCV、TB、CT、UU）3 質(zhì)檢步驟3.1 收到試劑后，目測試劑是否處在凍存狀態(tài)。3.2核對試劑品種和數(shù)量并檢查包裝：外包裝（廠名廠址、檢測項目、批準(zhǔn)文號批號和有效期等）；內(nèi)包裝（試劑瓶完整性、真空包裝完整性、試劑品種完整性、使用說明書有否等）。3.3 及時將試劑轉(zhuǎn)入冷凍冰箱保存。將上述檢測核對情況在記錄本上登記。3.4 最遲在前批次試劑存量尚可維持常規(guī)實驗一周時，按如下要求對新批號試劑進行效驗實驗。3.5 效驗實驗要求設(shè)置：空白對照、陰性對照，陽性標(biāo)準(zhǔn)品梯度（104、103、106、107）。3.6 出現(xiàn)如下情況中任何一種的，判斷為試劑不合格，不能用于臨床檢測：a）空白對照出現(xiàn)擴增（出現(xiàn)陽性結(jié)果）。需重復(fù)實驗確證試劑污染。b）陽性對照和陽性標(biāo)準(zhǔn)品均未檢出（陰性），或陽性對照未檢出而陽性標(biāo)準(zhǔn)品檢出率大幅下降，表示試劑失效或檢測靈敏度大幅下降。3.7陽性對照未檢出，陽性標(biāo)準(zhǔn)品檢測正常，提示樣品提取液可能存在問題。重復(fù)新舊提取液陽性對照實驗，確定提取液失效問題。更換提取液后該批試劑方可使用。3.8空白對照無擴增，陰性對照有擴增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。單獨用提取液點樣上機，出現(xiàn)擴增，需更換提取液后方可使用該批試劑。3.9陽性對照檢出，陽性標(biāo)準(zhǔn)品未檢出，提示陽性標(biāo)準(zhǔn)品存在問題。更換陽性標(biāo)準(zhǔn)品后該批試劑方可投入使用。3.10空白對照、陰性對照無擴增，陽性對照正常檢出，陽性標(biāo)準(zhǔn)品導(dǎo)出的標(biāo)準(zhǔn)曲線均在使用范圍內(nèi)，表明該批試劑良好，可以投入臨床使用。3.11將實驗結(jié)果歸入記錄。實驗耗材質(zhì)檢的標(biāo)準(zhǔn)操作程序1．目的：保證耗材的使用質(zhì)量不會影響檢測工作的正常進行。2. 適用范圍：核酸擴增熒光檢測實驗室常用耗材：1.5ml離心管、0.5ml離心管、帶濾芯的吸頭。3、 操作步驟3.1 檢測1.5ml離心管3.1.1目測:檢查離心管有無畸形、破損、不能閉蓋的情況。3.1.2實驗檢測(每批隨機抽樣離心管50個用于實驗檢測)。a.將抽取的50個目測合格的離心管插在浮板上,置于沸水浴鍋中20分鐘后取出，如發(fā)現(xiàn)有爆開情況發(fā)生，即認(rèn)為該批離心管不符合本實驗室實驗要求，作退貨處理。b.再將這50個離心管加半量生理鹽水后，1萬轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，如發(fā)現(xiàn)有管蓋爆開或漏液情況發(fā)生，即認(rèn)為該批離心管不符合本實驗室實驗要求，作退貨處理。c.經(jīng)上述檢測未發(fā)現(xiàn)不合格情況后，即啟用該批耗材。3.2 檢測0.5ml離心管方法、步驟同上。3.3 檢測帶濾芯的吸頭3．3．1檢查吸頭有無畸形、破損的情況，如無以上情況則做以下質(zhì)檢。3．3．2濾心漏氣檢驗：配制1%-2%甲基橙的水溶液，如果吸頭的最大體積為100ul，則將加樣器吸取體積調(diào)至110~120ul（如果吸頭的最大體積為200ul，則將加樣器吸取體積調(diào)至210~220ul；如果吸頭的最大體積為10ul，則將加樣器吸取體積調(diào)至11~12ul），再套緊吸頭，吸取甲基橙溶液，如濾心中有甲基橙溶液透過，表示濾心漏氣，不能用于PCR檢測，作退貨處理。如果濾心中無甲基橙透過，則再檢測10個吸頭，假若都未發(fā)現(xiàn)濾心漏氣現(xiàn)象即可啟用該批吸頭。3．3．3吸頭是否含抑制物、是否能有效防止氣溶膠污染的檢驗：先純化制備3份強陽性和10份陰性核酸標(biāo)本，然后使用待評價帶濾心吸頭對強陽性樣本來回吸取10次（模擬10份陽性樣本的吸?。?，將最后一次的吸取液加至一含擴增反應(yīng)液的管中，之后，換一個新吸頭，連續(xù)吸取10份陰性樣本分別至10個擴增反應(yīng)管中，此過程重復(fù)3~5次，最后對每一管按所用試劑方法進行擴增檢測。強陽性樣本如為強陽性，則可啟用該批吸頭；如出現(xiàn)陽性弱或出現(xiàn)陰性則說明吸頭可能含有擴增抑制物，不能用于PCR檢測，作退貨處理。所有陰性樣本如為陰性，則可啟用該批吸頭；如出現(xiàn)陽性則表明吸頭不能有效地防止氣溶膠對加樣器的污染，不能用于PCR檢測，作退貨處理。備注：實驗耗材在目測合格后基本上都可以初步通過驗收。如果在目測不合格或目測合格后出現(xiàn)甚至頻繁出現(xiàn)爆管、堵塞、漏液、漏氣等情況下，再由實驗人員進行實驗檢測。本文涉及以下表格，見SOP文件末的附圖表：消耗性材料驗收記錄表附表12實驗室化學(xué)試劑的管理和配制標(biāo)準(zhǔn)操作程序1 目的：保證實驗中用到的各種溶液符合實驗要求。2.適用范圍：核酸擴增熒光檢測實驗室常用溶液：4％NaOH溶液、75％的酒精（由醫(yī)院藥劑科提供）、4%84消毒液。3.管理程序：3.1化學(xué)試劑的購買或領(lǐng)用：每月清點一次試劑，發(fā)現(xiàn)試劑存量不足時，及時領(lǐng)用或提交請購申請。發(fā)現(xiàn)有試劑過期或明顯變質(zhì)時要立即報廢，并將報廢試劑妥善處理。3.2化學(xué)試劑貯存：臨床基因擴增實驗室常用化學(xué)試劑均置于避光、陰涼、干燥處保存。實驗中常用到的一些化學(xué)試劑則根據(jù)要求保存于不同環(huán)境（如預(yù)冷乙醇保存于4℃）。PCR試劑一律貯存于-20℃。3.3化學(xué)試劑使用：臨床基因擴增實驗室常用化學(xué)試劑均無毒性或僅有低腐蝕性，故使用時主要應(yīng)注意分類、分區(qū)保存、關(guān)注失效日期和使用后的及時清潔等。4 配制4.1 用具干燥潔凈的1000ml量筒一只，200ml量筒一只，50ml量筒一只，三角燒瓶兩只，天平一架，250ml、1000ml廣口瓶各一只。4.2 配制步驟4.2.1 配制4%NaOH溶液a.用天平稱取4克分析純的NaOH固體，置于一只三角燒瓶中。b.用200ml量筒準(zhǔn)確取100ml蒸餾水，緩緩注入盛放NaOH固體的三角燒瓶中。c.搖蕩三角燒瓶使NaOH固體充分溶解。d.然后緩緩傾倒入250ml廣口瓶中密封保存?zhèn)溆谩?.2.2 配制4%84消毒液a.用50ml量筒準(zhǔn)確取40ml84消毒液原液，緩緩注入一只三角燒瓶中。b.用1000ml量筒準(zhǔn)確取960ml水，緩緩注入盛84消毒液的三角燒瓶中。c.搖蕩混勻溶液,將混勻的溶液轉(zhuǎn)移入廣口瓶中。3．2．3配制1%-2%甲基橙溶液a.用天平稱取2克分析純的甲基橙固體，置于一只三角燒瓶中。b.用200ml量筒準(zhǔn)確取100ml蒸餾水，緩緩注入盛放甲基橙固體的三角燒瓶中。c.搖蕩三角燒瓶使甲基橙固體充分溶解。d.然后緩緩傾倒入250ml廣口瓶中密封保存?zhèn)溆谩?.2.4 配制75％酒精溶液a．一般常規(guī)消毒的75％酒精由醫(yī)院藥劑科提供。b.RNA提取的75％酒精的配制，試劑盒提供DEPC水，酒精用分析純的無水酒精。c.根據(jù)當(dāng)天的標(biāo)本數(shù)量配制。注意事項：每份配制好的溶液保質(zhì)期為14天。本文涉及以下表格，見SOP文件末的附圖表：附表16:PCR實驗室試劑配制登記表廢棄物的處理及生物防護措施目的：確保廢棄物得到恰當(dāng)?shù)奶幚?，防止污染環(huán)境。預(yù)防工作人員在實驗過程中被感染或污染。范圍：實驗室所有廢棄標(biāo)本、使用過的耗材等。實驗人員和外部環(huán)境的生物防護。廢棄物處理3.1實驗室所有垃圾，送醫(yī)院垃圾處理站。4.5污染的標(biāo)本容器、吸管及注射器等投入盛有消毒液（4%的“84”液）的容器內(nèi)浸泡一晝夜后再進行洗滌。4.6污水和標(biāo)本不能直接流入下水道，必須經(jīng)過污水處理后再流入下水道。4.7無需保存的檢驗標(biāo)本，不論檢驗結(jié)果如何，均需高壓滅菌或煮沸滅菌，或用強力消毒液處理，污染的紙集中收集焚毀，污染的布可進行高壓滅菌。4.8對各種有毒化學(xué)試劑應(yīng)用后，要做相應(yīng)的無害化處理，防止污染環(huán)境。程序：3.1工作人員在實驗過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守相應(yīng)的操作規(guī)程。3.2感染途徑：3.2.1空氣傳播：如氣溶膠3.2.2直接接種：工作中偶然的針刺、碎玻璃劃傷直接引起傳染。3.2.3皮膚、粘膜接觸：臨床標(biāo)本中的感染源通過破損皮膚，粘膜接觸造成感染。3.3預(yù)防措施：3.3.1所有來自病人的血液或體液標(biāo)本均應(yīng)視作傳染源，因此在標(biāo)本的采集、運輸過程中，標(biāo)本容器應(yīng)完好無泄漏。3.3.2處理標(biāo)本時應(yīng)穿工作服、戴手套，以免沾上皮膚。如手或其它部位的皮膚沾上血液或體液標(biāo)本以及試劑，應(yīng)立即沖洗干凈。3.3.3在實驗過程中，病人標(biāo)本（血液、體液）或試劑不慎濺入眼內(nèi)應(yīng)立即用清水洗。3.3.4實驗過程中在使用針具等銳器時，盡量小心防止受傷。若被銳器刺破時，應(yīng)立即脫下手套，盡量擠壓傷處，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要時進行預(yù)防補救措施（如HBVDNA陽性時可及時注射高效價的HBV特異性免疫球蛋白）。3.3.5在實驗過程中病人標(biāo)本（血液、體液）外漏工作桌面或地面時，應(yīng)及時用4%84消毒劑清潔桌面及地面，然后用清水擦凈。3.3.6實驗完畢離開時，應(yīng)脫下所有該實驗區(qū)個人防護裝備。3.3.7實驗完畢后應(yīng)對實驗室進行紫外消毒。4．本文涉及以下表格，見SOP文件末的附圖表：附表17:醫(yī)療垃圾處理登記表臨床標(biāo)本的采集及處理操作程序目的：規(guī)范臨床待檢標(biāo)本的正確采集、送檢和處理。適用范圍：基因擴增檢驗實驗室的所有臨床檢測標(biāo)本。職責(zé)：所有采集標(biāo)本的人員均需按本SOP操作，實驗室工作人員有責(zé)任向臨床醫(yī)生、護士或病人宣教。操作程序4.1本實驗室檢測標(biāo)本為：血清或血漿、痰、生殖道拭子標(biāo)本、尿液及腦脊液和胸腹水。4.2血液標(biāo)本：用真空采集管采集血液標(biāo)本，病區(qū)標(biāo)本由護士采集，門診標(biāo)本由門診抽血處專人采集，血標(biāo)本采集后在2小時內(nèi)送達(dá)實驗室。實驗室工作人員對標(biāo)本進行查驗，如標(biāo)本采血量不足、嚴(yán)重溶血、采樣時間過長（特別是進行RNA檢測時）或出現(xiàn)其它不合要求的情況，應(yīng)拒收標(biāo)本，登記并告知相關(guān)科室。4.3痰標(biāo)本：用帶蓋的無菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰標(biāo)本送檢。（對于無痰或少痰的患者，可用45℃加溫的100g/LNaCl水溶液霧化吸入或改變體位以使痰液易于咳出；對于小兒可以輕壓胸骨柄上方以誘導(dǎo)咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集標(biāo)本。）標(biāo)本在室溫下保存不能超過24小時。樣本處理時，在樣本中加入2倍體積的4%NaOH溶液，吹打均勻后于室溫放置30分鐘使之液化。取液化后的痰標(biāo)本1ml于1.5ml無菌離心管中，15000r/min離心10min，棄上清，在沉淀中加TE溶液1ml（自備）混勻，15000r/min離心10min 棄上清，重復(fù)上述洗滌步驟一次。沉淀中加入50ulTBDNA提取液，震蕩混勻后100攝氏度沸水浴15分鐘，15000r/min離心10分鐘備用。 4.4生殖道拭子：尿道或陰道分泌物由醫(yī)生用專用取樣拭子（滅菌，一次性）采集樣本，及時送檢。采集生殖道拭子標(biāo)本，要求病人在采樣有2小時內(nèi)不能排尿，采樣時，將棉拭子伸入男性尿道及女性宮頸口2—3cm，轉(zhuǎn)動一周以獲得上皮細(xì)胞。將取樣后的棉拭子放入含1ml無菌生理鹽水離心管中洗滌片刻，在管壁上擠干后丟棄拭子，13000rpm離心10min，棄上清，保留沉淀。4.5尿液：由病人自留尿液于無菌封閉的試管中送檢。取1ml于無菌離心管中，13000rpm離心10min，棄上清，保留沉淀。4.6腦脊液和胸腹水：由臨床醫(yī)生采集后放入消毒的試管中及時送檢。取1ml于無菌離心管中，13000rpm離心10min，棄上清，保留沉淀，置-20℃保存。標(biāo)本接收、拒收及保存程序目的：本程序是對分析前標(biāo)本的質(zhì)量管理，是與確保檢驗質(zhì)量為臨床提供準(zhǔn)確有效結(jié)果密切相關(guān)，實驗室工作人員必須重視標(biāo)本的采集、處理、貯存、安全處置等全過程。范圍：PCR擴增的臨床各類檢測標(biāo)本；職責(zé)：PCR檢測實驗室現(xiàn)有工作人員須熟知標(biāo)本的采集、處理、貯存、安全處置等全過程。并有責(zé)任向臨床醫(yī)護人員進行宣傳培訓(xùn)如PCR項目選擇、標(biāo)本采集、運用、處理等技術(shù)要求和注意事項。標(biāo)本的唯一性標(biāo)識：標(biāo)識由三部分構(gòu)成：檢測項目、標(biāo)本采集日期、該檢測批次的標(biāo)本序號，三部分間無間隔符號，例如：B111210001分別表示實驗項目、年、月、日、序號，序號（001-999），整個標(biāo)識為10-11位；4．1由于標(biāo)本容器太小，對應(yīng)標(biāo)本唯一性標(biāo)識，產(chǎn)生工作標(biāo)本序號，其組成有檢驗項目加序號（1-99）。HBV用B表示、HCV用C、TB用TB、CT用CT、UU用UU表示等。4．2標(biāo)本種類用中文表示：全血、血清、血漿、痰、尿、分泌物、各種穿刺物、組織等。4．3標(biāo)本的唯一性標(biāo)識須字跡清晰明了，不得隨意作任何涂改；必須時，在舊標(biāo)識上劃雙線更改，更改后應(yīng)保持舊標(biāo)識可辨識。5.標(biāo)本的接收:5.1所有標(biāo)本均可能具有傳染性，須嚴(yán)格遵守醫(yī)院有關(guān)院內(nèi)感染及醫(yī)用垃圾的管理和處理規(guī)定，工作人員須注意保持并隨時檢查容器的完整和無標(biāo)本外泄發(fā)生。5.2接收標(biāo)本時應(yīng)核對標(biāo)本與檢驗申請單的一致性。工作人員有權(quán)拒收與檢驗申請單不一致的標(biāo)本、標(biāo)識不清的標(biāo)本。檢驗申請有不清晰情況時，應(yīng)即時與臨床科室或相關(guān)人員聯(lián)系核實。5.3標(biāo)本接收人須檢查標(biāo)本狀態(tài).5.4標(biāo)本合乎要求，須在可接收標(biāo)本記錄本上按內(nèi)容記錄，作進一步處理，標(biāo)本不合乎要求，須在記錄本上記錄拒收原因。6.標(biāo)本的拒收:標(biāo)本在下列情況下，視為不合格，工作人員有權(quán)拒收標(biāo)本；無被檢標(biāo)本基本信息或與申請單不符合（姓名、年齡、性別、住院號、檢驗項目等）使用不適當(dāng)?shù)娜萜?；容器有破損；標(biāo)本外泄污染；標(biāo)本溶血；標(biāo)本量不足其它如后續(xù)處理過程中發(fā)現(xiàn)的不合格，應(yīng)記錄其狀態(tài)并通知臨床重新送檢。對拒檢的不合格標(biāo)本應(yīng)登記在拒收標(biāo)本記錄本上。填寫不合格標(biāo)本處置單，并隨同申請單送返送檢科室。必要時電話告之相關(guān)科室醫(yī)生或護士。7.標(biāo)本的保存:7.1處理前的標(biāo)本保存：a）HBV：全血樣本可4℃下短期（1～2周）保存，或分離出血清（血漿），保存于-20℃下。b）HCV：在室溫下1小時內(nèi)分離血清，吸取200μl，保存于-20℃。盡可能快的提取RNA。c）TB：液化的痰標(biāo)本如果不立即用于核酸提取，可保存于-20℃下。處理后的痰或胸腹水、腦脊液、膿液用于TB檢測的標(biāo)本可置于4℃下短期保存。長期保存于-20℃下。d）CT和UU：處理后的沉淀標(biāo)本可置于－20℃下短期保存。7.2報告發(fā)出后的標(biāo)本保存：a）提取的核酸標(biāo)本當(dāng)天檢測可置4℃保存，如當(dāng)天不檢測應(yīng)置-20℃保存。報告發(fā)出后丟棄。b）原始血清/血漿樣本在報告發(fā)出后放入低溫冰箱-20℃保存3個月，以備查。超過3個月保存期的標(biāo)本由室負(fù)責(zé)人酌情處理，一般按生物傳染性物品交醫(yī)院統(tǒng)一處理。c）血清/血漿標(biāo)本放置低溫冰箱保存時須有記錄，按檢測項目分類存放，并由專人負(fù)責(zé)管理。10．引用的表格：10.1標(biāo)本接收記錄表（附表13）。10.2拒收標(biāo)本記錄表（附表14）標(biāo)本前處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序1 目的：保證標(biāo)本處理標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化，使不規(guī)范操作因素對實驗結(jié)果造成的影響減至最小。2 適用待處理標(biāo)本范圍：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、沙眼衣原體、解脲支原體、結(jié)核桿菌。3 標(biāo)準(zhǔn)操作程序3.1 乙型肝炎病毒（DNA血清）a）雙手戴上手套，從冰箱取出標(biāo)本，將化驗單和試管依次編號后，棄去手套。b）雙手換上新手套，用鑷子(夾取滅菌物品專用)取出0.5ml離心管，對應(yīng)標(biāo)本編號，置于離心管架上。c）將移液器調(diào)到100μl，先混勻樣品處理液A，再吸取100μl加入到已編號的0.5ml離心管中。蓋上管蓋，振蕩混勻，13000r/min離心10分鐘。吸棄上清液，再加入25μl樣品處理液B.振蕩混勻，低速（2000rpm）離心數(shù)秒后100度干浴或沸水浴10分鐘.d）13000rpm離心10分鐘取上清液為PCR反應(yīng)模板。（上清液不立即使用，須置-20度保存，重新使用時需13000rpm離心10分鐘。）e）收拾臺面至準(zhǔn)備狀態(tài)。3.2 丙型肝炎病毒（RNA血清）a）雙手戴上手套，從冰箱取出標(biāo)本，將化驗單和試管依次編號后，棄去手套。b）雙手換上新手套，用鑷子(夾取滅菌物品專用)取出0.5ml滅菌離心管，對應(yīng)標(biāo)本編號，置于離心管架上。）1.1）f）收拾臺面至準(zhǔn)備狀態(tài)。3.3結(jié)核桿菌（痰液）a）取晨痰加入2倍體積4％氫氧化鈉待其充分液化(30分鐘)，液化過程中，振蕩2～3次，如痰液粘稠，可延長液化時間。b）取1ml液化痰加入1.5ml離心管，15000轉(zhuǎn)離心10分鐘。c）棄上清留沉淀，加入1mlTE液混勻，15000轉(zhuǎn)10分鐘離心，棄上清液。d）重復(fù)c操作，留沉淀，加入50μlTBDNA提取液，振蕩混勻。e）100度沸水浴15分鐘，15000轉(zhuǎn)離心10分鐘備用f）取上清7μl點樣上機。3.4沙眼衣原體和解脲支原體（分泌物）a）將取樣后的拭子放入1.0ml的無菌生理鹽水漂洗片刻，在試管壁上擠干后丟棄。b）吸取液體轉(zhuǎn)至1.5ml離心管中，用于檢測。c）用帶濾芯吸液頭吸取100μl樣品處理液A于0.5ml離心管中，再加入100μl被測樣本。d）蓋上管蓋，振蕩混勻，13000rpm離心10分鐘。e）吸棄上清，向沉淀中加入50μl樣品處理液B，振蕩混勻低速（2000rpm）離心數(shù)秒后，100度干浴或沸水浴10分鐘。f）13000rpm離心10分鐘，取2μl上清為PCR反應(yīng)模板。（上清液不立即使用，須置-20度保存，重新使用時需13000rpm離心10分鐘。）檢測結(jié)果分析的標(biāo)準(zhǔn)操作程序1.目的保證擴增及結(jié)果分析的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化；保證實驗結(jié)果的有效性，準(zhǔn)確判斷實驗失控的原因，加強實驗的可靠程度。2.適用范圍本規(guī)則適用于實驗結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)3.制定依據(jù)《臨床基因擴增檢驗技術(shù)》申子瑜李金明主編人民衛(wèi)生出版社出版2002年第一版；試劑使用說明書4.職責(zé)由經(jīng)培訓(xùn)合格的臨床基因擴增實驗室技術(shù)人員負(fù)責(zé)操作。5.結(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)程序5.1對于結(jié)果曲線的分析，應(yīng)按以下步驟進行：全部曲線——陰性對照——陽性室內(nèi)質(zhì)控品——陽性標(biāo)準(zhǔn)品——逐個分析（標(biāo)出陽性標(biāo)本和可疑標(biāo)本）——調(diào)整參數(shù)，獲得較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，顯示定量結(jié)果——登記，發(fā)報告。5.2整體曲線的觀察將所有曲線選中進行整體觀察①觀察是否存在污染情況（包括標(biāo)本污染和試劑污染），特別應(yīng)注意大量曲線在同一Ct值出現(xiàn)上漲的情況。②觀察是否有光路傳導(dǎo)阻滯或電壓波動等機器原因形成的異常曲線。5.3空白對照的分析空白對照：僅含擴增反應(yīng)混合液的管作用：監(jiān)測擴增試劑是否發(fā)生污染5.4陰性對照的分析陰性對照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進行同樣處理的已知陰性標(biāo)本。作用：用以監(jiān)測實驗室和前處理過程中是否存在污染。5.5陽性對照的分析陽性對照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進行同樣處理的已知陽性標(biāo)本。作用：用以監(jiān)測實驗?zāi)芊裾z出陽性標(biāo)本，避免假陰性的出現(xiàn)。5.6陽性室內(nèi)質(zhì)控品的分析陽性室內(nèi)質(zhì)控品：試劑中加入與待檢標(biāo)本進行同樣處理的已知濃度的陽性室內(nèi)質(zhì)控血清。作用：用以監(jiān)控日常實驗的精密度。5.7陽性標(biāo)準(zhǔn)品的分析5.7.1各梯度曲線的分布是否均勻，若各梯度曲線均未分開，則表明陽模稀釋可能存在問題，提示實驗中存在較大人為誤差。5.7.2觀察各曲線的Ct值是否在平常的正常位置。有兩種情況：①若出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而各曲線Ct值均后移，則判斷是否為試劑擴增效率下降（如試劑過期或保存條件不合格）。②出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而高拷貝曲線Ct值均正常，則提示可能存在低拷貝陽性標(biāo)準(zhǔn)品的降解情況。5.7.3每日必做103標(biāo)準(zhǔn)品，用作以下三方面監(jiān)控：1)是否存在操作誤差，如加樣量過少等原因?qū)е?03標(biāo)準(zhǔn)品未能檢出；2)是否存在稀釋后的梯度放置過久，低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品降解的情況；3)是若高拷貝標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)Ct值后移，且能排除情況①、②則判斷是否為試劑靈敏度下降。5.8單個曲線的判斷逐個分析每條曲線，判斷曲線的陰陽性或?qū)倏梢汕€。（可疑標(biāo)本是指曲線在27個循環(huán)后Ct值出現(xiàn)上漲且平臺趨勢不明顯或上漲幅度比較低的標(biāo)本?？梢蓸?biāo)本要第二天重做，兩次結(jié)果一致則報陽性，否則結(jié)果報陰性。）5.9得出定量結(jié)果調(diào)節(jié)基線和閾值以得到較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。電腦據(jù)此曲線給出陽性結(jié)果值。此時應(yīng)排除某些陰性標(biāo)本因熒光曲線假性上揚而得出的假陽性結(jié)果和某些弱陽性標(biāo)本因終末熒光值過低而顯示的假陰性。5.10發(fā)放報告：及時登記檢測結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報告。6.同批同次實驗結(jié)果的判斷程序6.1判斷項目：每次實驗要設(shè)置一個陰性對照、一個陽性對照、一個室內(nèi)質(zhì)控血清、一組陽性標(biāo)準(zhǔn)品（4個梯度107、106、105、104）。6.2實驗結(jié)果無效的判斷標(biāo)準(zhǔn)6.2.1陰性對照擴增增長。6.2.2陽性對照沒有擴增增長。6.2.3大批甚至所有的標(biāo)本都擴增增長了。6.2.4室內(nèi)質(zhì)控血清檢測結(jié)果出現(xiàn)失控情況，實驗失控的具體標(biāo)準(zhǔn)詳見《室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序》。出現(xiàn)上述四種情況中的任何一種或多種，當(dāng)日實驗結(jié)果不可發(fā)報告，查找原因，重做實驗，并做好記錄。6.3實驗結(jié)果有效的判斷標(biāo)準(zhǔn)6.3.1陰性對照沒有擴增增長，陽性對照擴增增長。6.3.2陽性標(biāo)準(zhǔn)品梯度曲線平滑均勻，斜率、截距和相關(guān)系數(shù)三個參數(shù)的數(shù)值均在范圍內(nèi)。6.3.3室內(nèi)質(zhì)控血清檢測結(jié)果處于在控狀態(tài)，具體標(biāo)準(zhǔn)詳見《室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序》。以上幾項標(biāo)準(zhǔn)均達(dá)到要求后，當(dāng)日實驗有效，可以發(fā)放檢驗報告。7.結(jié)果失控情況處理及原因分析7.1.失控情況處理如發(fā)現(xiàn)質(zhì)控數(shù)據(jù)違背了控制規(guī)則，操作員應(yīng)填寫失控記錄或失控報告單，上交專業(yè)室主管，由專業(yè)主管做出是否發(fā)出與失控質(zhì)控品相關(guān)的那批患者標(biāo)本檢測報告的決定。7.2.失控原因分析失控信號的出現(xiàn)受多種原因的影響，這些原因包括：操作上的失誤、儀器維護不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則、控制限范圍、一次測定的質(zhì)控標(biāo)本數(shù)不當(dāng)?shù)鹊?。失控信號一旦出現(xiàn)就意味著與失控質(zhì)控品相關(guān)的那批患者標(biāo)本報告可能作廢。此時，首先要盡量查明引起失控的原因，如假失控，可由權(quán)威人士決定、簽字后發(fā)出報告。如是真失控，最好是糾正原因后，全部標(biāo)本重做，質(zhì)控品測定合格后再簽發(fā)字發(fā)出。當(dāng)?shù)玫绞Э匦盘枙r，考慮采用如下步驟去尋找原因：1)立即重測定同一質(zhì)控品此步驟是用以查明是否為人誤差或偶然誤差，如是偶然誤差，則重測的結(jié)果應(yīng)在允許范圍內(nèi)(在控)。如果重測結(jié)果仍不在允許范圍，應(yīng)進行下一步操作。2)打開一瓶新質(zhì)控品，重測失控項目如果新開的質(zhì)控血清結(jié)果正常，那麼原因的質(zhì)控血清可能過期或在室溫放置時間過長而變質(zhì)，或被污染。如果結(jié)果仍不在允許范圍，則進行下一步驟。3)檢查儀器狀態(tài)、清潔擴增槽。如不行，進行下一步。4)檢查試劑此時可更換試劑以查明原因，如不是試劑問題，進行下一步。5)請專家或公司工程師幫助如前面四步都未能得到在控結(jié)果，可能是儀器出現(xiàn)了較大故障，應(yīng)同儀器廠家聯(lián)系請求他們的技術(shù)支援。檢測結(jié)果報告程序目的：為使報告的生成、發(fā)放、管理受控，特制訂本程序，確保檢測報告的準(zhǔn)確、清晰。適用范圍：本程序適用于本基因擴增檢驗實驗室所有臨床檢測項目的結(jié)果報告。職責(zé)：只有經(jīng)PCR培訓(xùn)并獲得上崗證的工作人員才有權(quán)審核和簽發(fā)報告單。工作程序：4.1檢測結(jié)果的報告應(yīng)準(zhǔn)確、清晰、明確、客觀和及時，杜絕虛假報告。4.2實時熒光PCR測定的數(shù)據(jù)要經(jīng)分析，避免因非特異性熒光而造成假陽性結(jié)果。根據(jù)質(zhì)控品判斷PCR擴增的有效性，只有當(dāng)質(zhì)控品的擴增結(jié)果符合項目SOP有關(guān)條件時，才可發(fā)出報告，否則應(yīng)重新測定。4.3定性測定的檢測項目其結(jié)果以“陰性”或“陽性”報告；定量測定的，結(jié)果報告以每毫升拷貝數(shù)（拷貝/ml），如結(jié)果高于測定方法線性范圍上限，則對樣本稀釋后再測，結(jié)果乘上稀釋倍數(shù)；如結(jié)果低于方法的測定范圍下限，則報告多少即可，不能報告為“0”或“陰性”。4.4病人檔案及測定結(jié)果一并錄入“檢驗管理系統(tǒng)”，由電腦管理病人資料。報告內(nèi)容至少應(yīng)包括：病人姓名、性別、年齡、及測定項目、結(jié)果、參考范圍以及樣本號、標(biāo)本類型、檢測日期、實驗操作者和審核者的簽名、報告日期等。否則視為無效或虛假報告單。4.5報告單應(yīng)及時發(fā)出。門診病人報告單送至服務(wù)臺門診報告發(fā)放處，病區(qū)報告單由專人送至各病區(qū)。4.6當(dāng)臨床科室要求電話報告結(jié)果時，應(yīng)先確認(rèn)對方身份，核對其所查詢的病人姓名、病區(qū)床號等情況，方可報告，并明確告知對方，實驗的最終結(jié)果以檢測報告單為準(zhǔn)。4.7當(dāng)患者要求電話報告結(jié)果時，應(yīng)讓患者提供病人ID后方告知檢測結(jié)果，并明確告知對方，實驗的最終結(jié)果以檢測報告單為準(zhǔn)；當(dāng)需郵寄報告時，應(yīng)由患者填寫地址及郵政編碼等，并作記錄。4.8實驗室工作人員應(yīng)為患者的檢測結(jié)果保密，不得提供給非相關(guān)人員（查詢或復(fù)?。?。引用的表格：檢測報告單格式：附圖04附表19：PCR實驗室遲發(fā)報告通知單室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序1.目的控制實驗的重復(fù)性、精密度，并檢測其準(zhǔn)確度的改變，提高本室常規(guī)工作中的批間、批內(nèi)標(biāo)本檢測的一致性。2.適用范圍本程序適用臨床基因擴增檢驗質(zhì)量負(fù)責(zé)人和檢驗人員對DNA和RNA分析的室內(nèi)質(zhì)量控制。3．制定依據(jù)《臨床基因擴增檢驗技術(shù)》申子瑜李金明主編人民衛(wèi)生出版社2002年第一版4.職責(zé)實驗室質(zhì)量負(fù)責(zé)人和檢驗人員負(fù)責(zé)本規(guī)程的執(zhí)行。評估檢測結(jié)果正確與否，判定當(dāng)日結(jié)果是否可以被采用。5、操作步驟5.1血清質(zhì)量控制品a)質(zhì)控品的來源：衛(wèi)生部臨檢中心或試劑盒內(nèi)質(zhì)控品。b)質(zhì)控品與樣本同時處理，排列順序為：標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品，陰性質(zhì)控品，陽性質(zhì)控品，臨床樣本。c)質(zhì)控品的處理及分析判斷。d)實驗結(jié)果的判斷：實驗結(jié)果合格，即發(fā)報告；實驗結(jié)果不合格，報告室主任，會同有關(guān)人員，查找原因，妥善解決。e)記錄每次檢測質(zhì)控結(jié)果。f)記錄失控原因及糾正措施。5.2室內(nèi)質(zhì)控圖的使用方法：①描點：a）圖中X線為靶線，X±2s為警告線，X±3s為失控線。對于同一批號的質(zhì)控血清不論使用幾個月，其空圖均不變化。只要將圖紙上方“起止日期”項填入每個月的實際起止日期即可。b）每天將該批號質(zhì)控血清按有關(guān)規(guī)定程序復(fù)融隨同病人的標(biāo)本同時檢測。將日期、檢測結(jié)果和操作者如實記錄在圖下方的相應(yīng)位置，并按前面的方法畫出圖上的對應(yīng)點，用直線將該點與前一天的點連接。c）月底計算當(dāng)月全部質(zhì)控血清檢測結(jié)果的X、s和CV，并進行圖形分析和小結(jié)，將質(zhì)量控制圖存入質(zhì)控資料檔案。②圖形分析a）如果在X±3s線以外，則為失控，應(yīng)立即報告有關(guān)負(fù)責(zé)人，迅速查找原因。必要時復(fù)測標(biāo)本，然后方可發(fā)出報告，并將失控情況、查找過程及處理結(jié)果等詳細(xì)記錄。b）如果在X±2s線以外，或出現(xiàn)連續(xù)6點以上在一側(cè)等規(guī)律變化，均應(yīng)立即向有關(guān)負(fù)責(zé)人反映，并積極查找原因。但當(dāng)天的檢驗結(jié)果一般可以發(fā)出。③通過觀察圖形的規(guī)律性變化進行誤差分析，消除誤差來源a）曲線漂移：提示有系統(tǒng)誤差，準(zhǔn)確度發(fā)生了一次性的向上或向下改變。這種變化往往是由于一個新的情況引起的。如更換不同批號試劑，啟用新批號的質(zhì)控血清、操作人員的變換等。在找原因時，應(yīng)重點注意“漂移”前后發(fā)生了那些變動的因素。b）趨勢性變化：向下或向上的趨勢性變化表明檢測的準(zhǔn)確度發(fā)生了漸漸地變化。這種變化往往是由于一個逐漸改變的因素造成的。如質(zhì)控血清的降解，試劑效價的降低等。c)連續(xù)多點分布在靶值一側(cè)：目前，一般認(rèn)為質(zhì)控血清的檢測結(jié)果連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一側(cè)，則應(yīng)迅速查找原因，爭取盡快使之回復(fù)圍繞在靶值隨機分布的狀態(tài)。因為按照統(tǒng)計學(xué)原理，由純隨機誤差造成的這種情況的可能性很小。連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一側(cè)可能性小于1.5％。因此凡出現(xiàn)連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一側(cè)者均有可能存在非隨機誤差因素。如結(jié)果與靶值偏離并不太大，不會給臨床使用帶來太大影響時，一般化驗報告可以照常填發(fā)。d)其他規(guī)律變化：（周期性等）5.3通過圖形的資料對比進行誤差分析，消除誤差來源a)每個月的月底將該月的全部質(zhì)控血清檢測結(jié)果的X和s與該批測定的X和s進行比較。如果X發(fā)生了變化，說明準(zhǔn)確度發(fā)生了變化提示有非隨機誤差存在。如果當(dāng)月s不同側(cè)表明檢測的精密度發(fā)生了變化。b)將使用同一批號質(zhì)控血清的CT值的X和s按月份列出。如果X逐在月上升，應(yīng)考慮保存不當(dāng)造成的試劑效價降低或質(zhì)控血清本身出現(xiàn)降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，則主要提示常規(guī)工作的精密度下降，應(yīng)重點從操作、管理上找原因。5.4失控限的判定：當(dāng)陽性對照呈假陰性或陰性質(zhì)控呈假陽性時為失控；當(dāng)陽性標(biāo)本呈假陰性或陰性標(biāo)本呈假陽性時為失控。此次實驗結(jié)果不合格，報告室主任，會同有關(guān)人員，查找原因，妥善解決，并將失控情況、查找過程及處理結(jié)果等詳細(xì)記錄。5.5陰性對照品失控的處理程序：5.5.1陰性對照A、B為假陽性時，則應(yīng)考慮為：a.試劑污染；b.擴增產(chǎn)物的“污染”?？勺饕韵聦嶒炶b定：取4個空管打開靜置于標(biāo)本制備區(qū)60分鐘，然后加入擴增反應(yīng)混合液同時以水替代核酸樣本進行擴增，如為陽性，而上述僅含擴增反應(yīng)混合物的管為陰性，即可排除試劑污染的可能，表示實驗室有擴增產(chǎn)物“污染”。此時，應(yīng)立即報告實驗室負(fù)責(zé)人，然后先暫時停止PCR實驗，采取各種有效的消毒清潔工作直至產(chǎn)物污染徹底消失后才可進行PCR實驗。如果有試劑污染時，應(yīng)更換另一批號的試劑進行重復(fù)實驗，待重復(fù)實驗陰性質(zhì)控品無失控后，方可報告結(jié)果。5.5.2如果以上實驗鑒定沒有實驗室的產(chǎn)物污染時，則應(yīng)判斷為實驗操作過程中所致的標(biāo)本間的交叉“污染”，出現(xiàn)這種情況很大程度上屬于偶然誤差，具體地說，如強陽性的標(biāo)本氣溶膠經(jīng)加樣器所致的污染，強陽性標(biāo)本經(jīng)操作者的手所致的污染、使用的離心管核酸提取時在較高溫度溫育時蓋子崩開。因此在PCR實驗前離心管、濾心吸頭的質(zhì)檢以及在實驗中一發(fā)現(xiàn)手套可能有污染就立即更換手套顯得尤為重要，并且PCR實驗人員的嚴(yán)格按照操作程序進行實驗的工作態(tài)度是實驗成敗的關(guān)鍵。5.6陽性對照品失控的處理程序：5.6.1臨界陽性對照品失控的原因有：a.臨界對照品是否還好：可更換新的臨界對照品，進行重復(fù)實驗，如果對照品無失控則表示上次實驗的臨界對照品已失效，不能再用于實驗。如果還有失控現(xiàn)象，則應(yīng)考慮：b.核酸提取過程中的隨機誤差：如核酸性對照失控。如核酸提取中的丟失、裂解溫度不夠、裂解不充分、有機溶劑的去除不徹底、標(biāo)本中擴增抑制物的殘留等。應(yīng)重新嚴(yán)格核查該過程中的各步驟是否出錯，然后重新操作一遍，臨界對照品無失控現(xiàn)象后才報告結(jié)果。如果仍失控，則考慮：儀器問題b.儀器問題。如擴增儀孔間溫度的不均一性、孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。此時應(yīng)請廠家及時校正儀器。儀器校正好之后再重復(fù)操作如無失控則可報告結(jié)果。如果仍有失控現(xiàn)象則應(yīng)考慮：試劑問題c.試劑的問題：如Taq酶的失活、探針的純度及標(biāo)記效率和核酸提取試劑的效率、試劑的靈敏度等?？筛鼡Q另一批號的試劑重復(fù)實驗，無失控結(jié)果后才可發(fā)出報告。5.6.2強陽性對照品失控的原因和臨界陽性對照品失控的原因基本相同，但最首要的原因應(yīng)考慮試劑的問題。由此可見，在PCR實驗前對試劑的質(zhì)檢是必不可少的環(huán)節(jié)之一。5.7陽性標(biāo)本失控的處理程序：5.7.1失控的主要原因有：a.標(biāo)本的收集是否符合要求（包括標(biāo)本采集的時間是否合適、標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備工作是否適度、標(biāo)本的類型和采集量是否合適、采集的標(biāo)本所含的細(xì)胞數(shù)量和核酸總量是否足夠、采樣容器是否合格。）；b.標(biāo)本保存是否正確；c.標(biāo)本的運送是否延誤；d.標(biāo)本在核酸制備、擴增檢測中所存在的隨機誤差（與上述陽性質(zhì)控品的失控原因相同）。5.7.2處理程序：a.如果是標(biāo)本收集、標(biāo)本保存、標(biāo)本運送等環(huán)節(jié)所導(dǎo)致陽性標(biāo)本失控，則應(yīng)嚴(yán)格按要求重取標(biāo)本后復(fù)查才可報告結(jié)果。另外還應(yīng)對臨床標(biāo)本采集人員、標(biāo)本運送相關(guān)人員進行必要的培訓(xùn)。b.如果是標(biāo)本的核酸制備、擴增檢測中所存在的隨機誤差問題，則可參照以上所述陽性質(zhì)控品失控的處理方法，另外對PCR實驗人員的培訓(xùn)非常重要。5.8陰性標(biāo)本失控的處理程序：5.8.1主要原因有：a.標(biāo)本采集容器是否合格（是否使用一次性采樣材料、使用的玻璃器皿是否經(jīng)過高壓滅菌）；b.標(biāo)本運送過程是否存在污染因素（如沒有密閉、管漏等）；c.標(biāo)本在核酸制備、擴增檢測中所存在的隨機誤（與上述陰性質(zhì)控品的失控原因相同）5.8.2處理程序：a.如果是標(biāo)本采集容器、標(biāo)本運送等環(huán)節(jié)所導(dǎo)致陰性標(biāo)本失控，則應(yīng)嚴(yán)格按要求重取標(biāo)本后復(fù)查才可報告結(jié)果。另外應(yīng)加強對臨床標(biāo)本采集人員、標(biāo)本運送相關(guān)人員的防污染意識。b.如果是標(biāo)本的核酸制備、擴增檢測中所存在的隨機誤差問題，則可參照以上所述陰性質(zhì)控品失控的處理方法。本文涉及以下圖表，見SOP文件末的附圖表：室內(nèi)質(zhì)控記錄圖附圖03室間質(zhì)評管理程序目的：室間質(zhì)評（EQA）是實驗室質(zhì)量控制體系中重要部分，是保證患者檢驗結(jié)果和其報告的準(zhǔn)確性和可靠性，以及各實驗室間結(jié)果的可比性的重要手段。適用范圍：衛(wèi)生部或省臨檢中心下發(fā)的PCR室間質(zhì)控血清檢測。職責(zé)：實驗室工作人員均須熟知并遵守本程序，具體項目負(fù)責(zé)人執(zhí)行。室負(fù)責(zé)人監(jiān)督落實。工作程序4.1質(zhì)控標(biāo)本的接收和驗收：收到質(zhì)控血清后由相關(guān)人員登記、簽字，根據(jù)質(zhì)控標(biāo)本的有關(guān)說明對血清的數(shù)量、批號、包裝進行驗收并將質(zhì)控標(biāo)本按要求置-20℃保存于標(biāo)本制備區(qū)。4.2質(zhì)控標(biāo)本的檢測按常規(guī)臨床標(biāo)本對待，若需要復(fù)溶的檢測前先根據(jù)說明對質(zhì)控物進行復(fù)溶。4.3室間質(zhì)評樣本必須按實驗室常規(guī)工作進行，由進行常規(guī)工作的人員測試，工作人員必須使用實驗室的常規(guī)檢測方法和試劑，不得特殊對待。檢測結(jié)果須在截止日期前上報。4.4實驗室檢測室間質(zhì)評（EQA）樣本的次數(shù)必須與常規(guī)檢測病人樣本的次數(shù)一樣（即1次）。室間質(zhì)評（EQA）樣本的檢測在衛(wèi)生部臨檢中心規(guī)定的時間內(nèi)進行，檢測結(jié)果的上報也必須在截止日期前，通過掛號信寄出或網(wǎng)上填報。4.6室間質(zhì)評的檢測結(jié)果和反饋結(jié)果均記錄于室間質(zhì)評記錄表，根據(jù)反饋結(jié)果分析室間質(zhì)評的狀態(tài)，如有出控應(yīng)查找原因，并采取相應(yīng)的措施。4.7嚴(yán)禁與其它實驗室交流室間質(zhì)評的檢測結(jié)果。儀器設(shè)備發(fā)生故障時的應(yīng)急處理目的：在實際工作中，儀器設(shè)備發(fā)生故障時。為保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，及時、正確采取應(yīng)急措施。最大程度上避免或減輕由于儀器故障所帶來的不利影響。范圍：與PCR檢測、試劑存儲、污染預(yù)防等有關(guān)的設(shè)備。職責(zé)：3.1實驗室工作人員在職責(zé)范圍內(nèi)均有責(zé)任熟悉各種儀器和相關(guān)設(shè)備的性能、要求、維護和保養(yǎng)、常見故障的排除、尤其要嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作。3.2.1實驗室實習(xí)或非本實驗室專職人員必須在指導(dǎo)下才能操作儀器。室主任有責(zé)任組織并直接監(jiān)督本程序的實施。3.2.2作為應(yīng)急處理，潛在著一定的可能影響檢測質(zhì)量的不確定因素。室主任負(fù)責(zé)在第一時間檢查核實應(yīng)急措施的有效性。工作程序：4.1室負(fù)責(zé)人接到儀器設(shè)備故障的報警后，立即現(xiàn)場確認(rèn)異常情況的性質(zhì)：觀察是否操作有誤、偶發(fā)現(xiàn)象或確屬不能立即排除的故障。4.2儀器設(shè)備故障本室不能解決的，應(yīng)及時通知有關(guān)設(shè)備維修人員或供應(yīng)商，具體程序見儀器設(shè)備管理程序。對于發(fā)生故障的儀器設(shè)備，及時維修的同時，采取以下處理辦法。4．2．1找到出現(xiàn)故障的儀器。4．2．2用紅牌故障標(biāo)志標(biāo)示故障儀器。4．2．3小型儀器送儀器部門維修。4．2．4大型貴重儀器關(guān)閉電源開關(guān)，取下電源插頭。用相應(yīng)防塵罩遮蔽儀器。4．2．5維修完成后取下紅色故障標(biāo)示，換上未校準(zhǔn)標(biāo)示牌。4．2．6調(diào)試實驗通過，去掉未校準(zhǔn)標(biāo)示牌。4．2．7儀器重新正常使用。4.3試劑盒質(zhì)量發(fā)生問題，經(jīng)核實后，及時通知供貨商迅速更換另一批次試劑，使用前需先作質(zhì)量檢測，合格后方可使用。4.4儀器設(shè)備故障或試劑質(zhì)量問題不能得到解決，預(yù)期將會影響到檢測報告的及時發(fā)出，可將標(biāo)本送至其它實驗室檢查（該實驗室同樣應(yīng)為獲同類認(rèn)準(zhǔn)進行PCR檢測的實驗室）；如已影響到報告的及時發(fā)出，應(yīng)在門診取報告處向病人公告或向相關(guān)病區(qū)公告，取得病人的諒解。4.5影響到檢測報告發(fā)出的情況，應(yīng)在附表07：基因擴增熒光定量檢測記錄表中應(yīng)急處理部分作記錄。實驗記錄管理程序目的：檢驗資料是實驗室質(zhì)量證明資料及質(zhì)量體系運作依據(jù)的重要組成部分。為使資料的記錄、保存狀態(tài)在控，特制訂本文件。適用范圍：本程序適用于實驗過程中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)、文本資料的記錄和保存，主要有：病人和標(biāo)本信息、實驗操作記錄、實驗檢測結(jié)果、原始檢測申請單和檢測報告單、儀器使用記錄等，實驗記錄包括電子記錄和文本記錄。職責(zé)：檢測人員對實驗記錄負(fù)責(zé)，室負(fù)責(zé)人監(jiān)督落實4.工作程序：4.1病人和標(biāo)本信息：接收標(biāo)本后，在“標(biāo)本接收記錄本表”中記錄病人和標(biāo)本信息，包括：送檢日期、病人姓名、性別、年齡、病人ID、病區(qū)床號、檢測項目、標(biāo)本類型、標(biāo)本狀態(tài)、標(biāo)本接收人姓名等，對不符合檢測要求的標(biāo)本在“標(biāo)本拒收登記本”上記錄，并及時通知病人。4.2檢測過程中的實驗記錄在《基因擴增熒光定量檢測記錄表》，保存于擴增區(qū)的專用文件柜內(nèi)，以備查找。4.3擴增過程中由熒光擴增儀產(chǎn)生的數(shù)據(jù)文件必須保存在非系統(tǒng)分區(qū)的專門文件夾中（如D:\DATE），保存路徑要清晰、便捷、易查找。一整年的實驗結(jié)果均保存在一個年度文件夾里，如“2005”文件夾；每個年度文件夾又包含12個月文件夾，如“9”、“10”，每天的實驗結(jié)果就保存在當(dāng)月文件夾里。4為了防止儲存實驗結(jié)果的電腦發(fā)生系統(tǒng)崩潰、硬件故障等問題導(dǎo)致實驗結(jié)果丟失、無法查詢等情況，每個月的實驗結(jié)果記錄文件都要用移動存儲設(shè)備（如軟盤、USB硬盤等）拷貝到另一部PC機上做備份；一年的數(shù)據(jù)要用刻錄機刻制一張CD光盤備份儲存，貼上標(biāo)簽，如“2005年實驗結(jié)果備份”。放入檔案柜妥善存放。4.5標(biāo)本原始檢測申請單最后保存于擴增區(qū)，至少1年以上；其它實驗記錄保存于各自實驗操作區(qū)內(nèi)，至少保存1年以上。4.6實驗記錄要真實，不得隨意涂改，如確需更改，應(yīng)在原更改內(nèi)容上劃雙線，填上新內(nèi)容。4.7實驗記錄須妥善保存，不得給他人借閱或復(fù)?。ㄉ婕搬t(yī)療糾紛處理除外）。4.8超過保存期限的實驗記錄，由室負(fù)責(zé)人交科里統(tǒng)一保存。5．引用文件和表格5．1標(biāo)本接收記錄本表（附表13）。5．2標(biāo)本拒收記錄表（附表14）。5.3基因擴增熒光定量檢測記錄表（附表07）。抱怨的處理程序目的：以病人為“中心”，以質(zhì)量為“核心”，優(yōu)質(zhì)服務(wù)。“抱怨”基于對臨床和病人（包括家屬等）的返饋意見的重視，往往從中能發(fā)現(xiàn)實驗室存在的問題或漏洞。有利于提高檢驗和服務(wù)質(zhì)量，減少醫(yī)療差錯和事故，鞏固和有效改進實驗室質(zhì)量體系，范圍：來自于患者或家屬，臨床醫(yī)護人員或?qū)嶒炇夜ぷ魅藛T針對檢測結(jié)果質(zhì)量、服務(wù)質(zhì)量和實驗室管理等問題的投訴或抱怨。職責(zé)：3.1通常由實驗室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)抱怨的處理，必要時應(yīng)會同科主任一起處理。3.2對外部抱怨，實驗室工作人員不得推卸，應(yīng)負(fù)責(zé)將抱怨人領(lǐng)到實驗室主任處，對電話抱怨須作記錄并及時報告負(fù)責(zé)人。工作流程：4.1抱怨的接受：執(zhí)行者在接受抱怨時應(yīng)熱情、友好、禮貌、嚴(yán)肅和認(rèn)真，應(yīng)記錄抱怨者姓名、地址、聯(lián)系方式、抱怨內(nèi)容（首先注意穩(wěn)定抱怨者情緒）。4.2抱怨的處理：4.2.1能及時處理的抱怨應(yīng)給予及時解決，記錄處理結(jié)果。4.2.2不能及時處理的報怨應(yīng)爭取與抱怨者約定反饋時間，盡可能將問題向?qū)嶒炇抑魅螀R報，尋求妥善的處理方法，盡快答復(fù)抱怨者。4.2.3抱怨的處理一般步驟：接受、安撫、傾聽、回應(yīng)、致歉、解釋、處理、回復(fù)4.2.4抱怨的處理以抱怨者的滿意為目的，但必須以遵重科學(xué)，遵重事實為原則，在不違背科學(xué)原則，醫(yī)療行為規(guī)范的基礎(chǔ)上，爭取抱怨者最大程度的理解。4.3抱怨處理的善后4.3.1執(zhí)行人對報怨作兩份記錄：保留一份，上交檢驗科一份。4.3.2對抱怨的審核遵照科內(nèi)部審核安排執(zhí)行。4.3.3對抱怨中反映出的影響到試驗室質(zhì)量及質(zhì)量體系有效性的問題，室驗室負(fù)責(zé)人應(yīng)會同相關(guān)人員及時分析存在的問題，提出有效的糾正措施，并由試驗室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)組織執(zhí)行。4.4．4實驗室工作人員在向?qū)嶒炇邑?fù)責(zé)人報怨得不到滿意解決時，有權(quán)向科主任提出報怨。5．引用的文件及表格：5.1抱怨記錄及處理反饋意見登記表附表09BCD上菱冰箱使用，維護和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序目的：確保冰箱的正常使用，保障儀器的使用壽命。適用范圍：本SOP適用于本室各類用途使用的普通冰箱。職責(zé)：實驗室工作人員均應(yīng)熟知并嚴(yán)格遵守本SOP，室負(fù)責(zé)人監(jiān)督落實。操作程序：4.1開機：試劑冰箱按說明書要求放好后，插上電源線，冷藏室溫度開關(guān)置于4℃，冷凍室溫度開關(guān)置于-20℃，2小時后用溫度計確認(rèn)。系統(tǒng)進入正常運行狀態(tài)后即可正常使用。4.2關(guān)機：若冰箱較長時間不用或需要送修時需按以下步驟操作：4．2．1關(guān)閉冰箱電源，并拔下電源插頭。4．2．2清空冰箱內(nèi)的所有貯存物，并妥善放置到其它冰箱內(nèi)。打開冰箱門，等待冰箱內(nèi)的霜化完。4．2．3用肥皂水擦洗干凈冰箱內(nèi)膽，后用4%“84”消毒液擦洗一次。4．2．4保持冰箱門打開待其自然干燥。5.維護和保養(yǎng)：4.1冰箱應(yīng)放置于水平地面并留有一定的散熱空間。4.2外接電源電壓必須匹配，并要求有良好的接地線。4.3冰箱內(nèi)禁止存放與本實驗室無關(guān)的物品。4.4放入冰箱內(nèi)的所有試劑、樣品、質(zhì)控品等必須密封保存。4.5保持冰箱出水口通暢；非自動除霜冰箱應(yīng)定期除霜；定期清潔冰箱，清潔時切斷電源，用軟布蘸水擦拭冰箱內(nèi)外，必要時可用中性洗滌劑。4.6每日由專人負(fù)責(zé)觀察冰箱內(nèi)溫度并記錄于表中。4.7若溫度超出規(guī)定范圍，調(diào)節(jié)溫控使其回到正常范圍，并進行記錄。4.8若溫控調(diào)節(jié)無效，報請設(shè)備科維修，修理后須驗收合格并簽字后方能正常使用。干式恒溫器操作、維護和校準(zhǔn)程序1．目的：保證干式恒溫器工作溫度恒定,延長使用壽命。2．適用范圍：干式恒溫器3．職責(zé)：實驗室工作人員必須嚴(yán)格按照本SOP進行操作。4．標(biāo)準(zhǔn)操作操作：4.1溫度設(shè)置a)打開電源開關(guān)，顯示屏將逐個顯示“8”，儀器進入初始化。b)約2秒鐘后，溫度顯示窗的數(shù)值為模塊的即時溫度（例如為28.5℃）。c)若將溫度設(shè)置為98℃，操作如下：先按SET鍵，閃爍的數(shù)值表示可以修改，此時按▲或減少鍵使小數(shù)位改為“0”接著按SET鍵一次，閃爍位移到百位，再按一次，閃爍位移到十位，同時按▲鍵，使十?dāng)?shù)值變?yōu)椤?”。接著按SET鍵一次，閃爍位移到個位，同上操作將個位數(shù)值由改為“8”，此時溫度設(shè)置即為98℃，幾秒中后系統(tǒng)自動確認(rèn)為系統(tǒng)自動確認(rèn)新的溫度設(shè)置值。b)運行結(jié)束后,關(guān)閉電源開關(guān)，儀器將自動記憶此次設(shè)定溫度。如下次實驗需重新設(shè)置溫度，按上述步驟進行。5.維護程序5.1定期用干凈軟布沾少量無水乙醇清洗模塊上的錐孔,以保證試管與錐孔壁接觸充分,導(dǎo)熱良好,避免污染.6.溫度誤差校準(zhǔn)程序:注意:為了保證溫度的準(zhǔn)確性,本儀器采用兩點溫度校準(zhǔn)法,即40°C與100°C兩點溫度同步線性校準(zhǔn)法.經(jīng)兩點溫度線性校準(zhǔn)后,系統(tǒng)保證其他溫度點的溫度準(zhǔn)確度小于等于正負(fù)0.5°C校準(zhǔn)溫度時環(huán)境溫度和模塊的溫度必須低于35°C儀器開機后，進入等待界面，此時觀察溫度顯示窗溫度，確認(rèn)其溫度應(yīng)小于35°C，若溫度高于35°C，等溫度降至35°C后，再按以下方法操作。將石蠟油注入模塊中心位置的一錐形孔內(nèi)，并于錐形孔中放入溫度計（要求溫度計精度為0.1°C，溫度計感溫包必須能完全浸入于錐形孔內(nèi)），模塊上部用隔熱材料于環(huán)境隔離。同時按下▲和下鍵，進入溫度校準(zhǔn)界面。表示已經(jīng)進入溫度校準(zhǔn)程序，溫度顯示窗顯示為即時溫度，并自動開始升溫至40°C。當(dāng)溫度升溫至40.0°C恒溫后,小數(shù)位開始閃爍,等待40°C的溫度校準(zhǔn)值,要求恒溫20分鐘后,讀取溫度計的實測溫度.注意:為保證溫度校準(zhǔn)精度,建議于恒溫20分鐘后讀取實測溫度!d）d）接著儀器自動升溫至100°C，于100°C恒溫后等待輸入溫度校準(zhǔn)值，同樣要求恒溫20分鐘后，讀取溫度計的實測溫度。注意：為保證溫度校準(zhǔn)精度，建議于恒溫20分鐘后讀取實測溫度！e）這樣兩點校溫已經(jīng)完成，同時按下▲和下鍵，退出溫度校準(zhǔn)界面，返回至等待界面。注意：兩點溫度校準(zhǔn)過程中，同時按下▲和下鍵，則退出校準(zhǔn)程序，已修正的溫度值無效！測量儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序1 目的：確保設(shè)備儀器的精確性，保證實驗的準(zhǔn)確性。2 適用范圍：實驗室所有測量設(shè)備（包括移液器、溫度計、濕度計、天平等）。3. 操作方法a)根據(jù)具體儀器的要求在規(guī)定時間內(nèi)上報設(shè)備科，要求儀器校準(zhǔn)。如移液器校準(zhǔn)時間半年；溫度計、濕度計1年；天平1年。b）由醫(yī)院設(shè)備科聯(lián)系廣西計量檢測局統(tǒng)一校準(zhǔn)。c）詳細(xì)記錄校準(zhǔn)儀器的名稱型號、以及校準(zhǔn)時間。d）一些測量設(shè)備（如溫濕度計）可只校準(zhǔn)一套，校準(zhǔn)過的測量設(shè)備可作為實驗室其它該種測量設(shè)備的參照。e）一些儀器設(shè)備（包括冰箱、水浴箱等）每天都要用校準(zhǔn)過的溫度計進行測定、記錄，以確保其精確性，保證實驗質(zhì)量。本文涉及以下表格，見SOP文件末的附圖表：設(shè)備校正記錄表附表08移液器使用和維護標(biāo)準(zhǔn)操作程序目的：正確使用和維護移液器，確保移液的精確性。適用范圍：本實驗室使用的可調(diào)式移液器。職責(zé)：實驗室工作人員必須嚴(yán)格按照本SOP進行操作。操作程序：4.1轉(zhuǎn)動旋鈕設(shè)定移液量，設(shè)定的移液量不可超出該移液器規(guī)定的范圍。4.2裝上配套的吸頭。4.3前進移液法。4.3.1將按鈕壓至第一停點位置。4.3.2將移液管管嘴浸入液面下2-3mm深處，然后慢慢松開按鈕吸入液體。待移入管嘴吸滿液體后，將管嘴撤出液面，擦掉管嘴外側(cè)的所有液滴。4.3.3輕輕壓下操作按鈕至第一停點位置，放出液體。約1秒鐘后，繼續(xù)將操作按鈕向下壓至第二停點位置。待管嘴液體放干凈后，將管嘴貼在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中，撤出管嘴。4.3.4松開按鈕使之回到起點位置。需要時，可更換管嘴繼續(xù)移液操作。4.4倒退移液法：適用于高粘度液體及/或易起泡沫液體的移液。4.4.1將操作按鈕向下壓至第二停點位置。4.4.2將移液管管嘴浸入試劑瓶液面下2-3mm深處，然后慢慢松開鈕吸入液體。待移入管嘴吸滿液體后，將管嘴撤出液面，擦掉管嘴外側(cè)的所有液滴。4.4.3輕輕壓下操作按鈕至第一停點位置，放出液體。4.4.4遺留在管嘴時的液體或者隨管嘴一起扔掉，或者放回原來的容器中。4.5重復(fù)操作法：重復(fù)操作移液法可以快速、簡便地重復(fù)轉(zhuǎn)移同體積的同種液體。4.5.1將操作按鈕向下壓至第二停點位置。4.5.2將移液管管嘴浸入液面下2~3mm深處，然后慢慢松開按鈕吸入液體。待移入管嘴吸滿液體后，將管嘴貼在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中。4.5.3輕輕壓下操作按鈕至第一停點位置，放出液體。待放完所需體積液體后，把按鈕停在第一停點位置，不包括在移液量之內(nèi)的少量液體仍留在管嘴內(nèi)，管嘴外的液滴則需包括在移液量之內(nèi)。4.5.4將管嘴浸入試劑液面下不遠(yuǎn)處，然后慢慢松開按鈕使管嘴重新吸入液體。4.5.5重復(fù)步序4.5.3和4.5.4繼續(xù)移液操作，就可重復(fù)轉(zhuǎn)移相同體積液體。5.維護程序：加樣器應(yīng)根據(jù)使用頻率進行維護，但至少應(yīng)每三個月進行一次，具體方法如下：5.1一般維護可用干凈的紗布蘸75%的酒精清潔。5.2如果有液體進入加樣器內(nèi)造成嚴(yán)重污染，可以將加樣器拆開后進行清潔，具體拆開步驟參照加樣器說明書。5.3各區(qū)（試劑準(zhǔn)備，樣本提取，擴增）的加樣器應(yīng)有各自的標(biāo)識，清潔和消毒時，應(yīng)分別處理移液器校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序目的：保證加樣器加樣的準(zhǔn)確性。適用范圍：各種品牌、型號的可調(diào)和多通道加樣器。職責(zé)：本SOP由室負(fù)責(zé)人執(zhí)行落實。校準(zhǔn)程序4.1校準(zhǔn)環(huán)境和用具要求：4.1.1室溫：20～25℃，測定中波動范圍不大于±0.5℃。4.1.2電子天平：放置于無塵和震動影響的臺面上，房間盡可能有空調(diào)。稱量時為保證天平內(nèi)的濕度（相對濕度60～90％），天平內(nèi)應(yīng)放置一裝有10ml蒸餾水的小燒杯。4.1.3小燒杯：5～10ml體積。4.1.4測定液體：溫度為20～25℃的去氣雙蒸水。4.1.5選擇校準(zhǔn)體積：⑴擬校準(zhǔn)體積；⑵加樣器標(biāo)定體積的中間體積；⑶最小可調(diào)體積（不小于擬校準(zhǔn)體積的1％）。(4)如為固定體積加樣器，則只有一種校準(zhǔn)體積。4.2校準(zhǔn)步驟：4.2.1將加樣器調(diào)至擬校準(zhǔn)體積，選擇合適的吸頭；4.2.2調(diào)節(jié)好天平；4.2.3來回吸吹蒸餾水3次，以使吸頭濕潤，用紗布拭干吸頭；4.2.4垂直握住加樣器，將吸頭浸入液面2～3mm處，緩慢（1～3秒）一致的吸取蒸餾水；4.2.5將吸頭離開液面，靠在管壁，去掉吸頭外部的液體；4.2.6將加樣器以30℃角放入稱量燒杯中，緩慢一致地將加樣器壓至第一檔，等待1～3秒，再壓致第二檔，使吸頭里的液體完全排出；4.2.7記錄稱量值；4.2.8擦干吸頭外面；4.2.9按上述步驟稱量10次；4.2.10取10次稱量值的均值作為最后加樣器吸取的蒸餾水重量，按附表Ⅰ所列蒸餾水Z因子計算體積：體積=重量/Z因子4.2.11按校準(zhǔn)結(jié)果調(diào)節(jié)加樣器4.3新購的合格的移液器出廠前經(jīng)過廠家校準(zhǔn)，使用前無需校準(zhǔn)。4.4每年移液器進行校準(zhǔn)一次，由廣西計量檢測局校準(zhǔn)。4.5做好校準(zhǔn)記錄。5.引用的表格：設(shè)備校正記錄表附表08注意：移液器校準(zhǔn)由計量部門校準(zhǔn)，每年一次。此程序僅供參考。普通離心機使用和維護操作程序1．目的：使每個工作人員能正確地使用和維護本儀器。2．適用范圍：本SOP僅適用于LDZ5-2、PQ-1600A離心機。3．職責(zé)：實驗室工作人員均應(yīng)熟知并嚴(yán)格遵守本SOP，室負(fù)責(zé)人監(jiān)督落實。4．操作程序：4．1使用前應(yīng)認(rèn)真閱讀使用說明書，嚴(yán)格按說明書進行操作。4．2打開電源開關(guān)，將預(yù)先平衡好的樣本放置于樣本架上（離心筒與樣本同時平衡），關(guān)閉機蓋。4．3按功能選擇鍵，設(shè)置各項要求：速度、時間等。按啟動鍵，使離心機運行，到時關(guān)機。4．4等離心機完全停止運行后打開機蓋，取出樣本后，用軟布擦凈轉(zhuǎn)頭及機腔內(nèi)壁蓋上機蓋。注：如遇離心機異常，立刻關(guān)閉電源并報請設(shè)備維修科人員，同時作好記錄。5.維護程序：5.1離心室的清潔：為了避免樣本等殘留物的污染，應(yīng)經(jīng)常對離心機外殼和離心室進行清潔處理。對離心室清潔，應(yīng)先打開離心機蓋，撥掉電源線，用專用設(shè)備將離心機轉(zhuǎn)子旋下，再用中性去污劑（70%的異丙醇/水混合物或乙醇去污染）清潔離心室；離心室內(nèi)的橡膠密封圈經(jīng)去污劑處理后，用水沖洗，再用甘油潤滑。4.2轉(zhuǎn)子的清潔：轉(zhuǎn)子會被樣本殘留物污染，也可能會被某些化學(xué)試劑腐蝕，因此應(yīng)對轉(zhuǎn)子每月進行清潔維護。每月用中性的清潔劑清潔轉(zhuǎn)子一次，并在儀器使用記錄本上作好記錄，以延長轉(zhuǎn)子的壽命。TGL-16B高速離心機使用和維護程序1.目的：正確使用和維護高速冷凍離心機，以確保其工作性能。2.適用范圍TGL-16B高速離心機。3.制定依據(jù)高速冷凍離心機使用說明書4.職責(zé)由經(jīng)培訓(xùn)合格的人員負(fù)責(zé)使用和保養(yǎng)。5.操作程序5．1將樣品等量放置在試管內(nèi)，并將其對稱放入轉(zhuǎn)頭。5．2蓋好蓋門，將儀器接上電源后，實測速度指示燈亮，數(shù)碼管顯示“00000”，表示儀器已接通電源。5．3按運轉(zhuǎn)鍵啟動儀器，儀器按出廠所設(shè)定的參數(shù)工作，數(shù)碼管顯示實際轉(zhuǎn)速。5．4如需調(diào)整儀器的運行參數(shù)，按以下操作：5.4.1設(shè)定運轉(zhuǎn)時間和運轉(zhuǎn)速度：可按功能鍵，使相應(yīng)的指示燈點亮，數(shù)碼管即顯示該參數(shù)值，數(shù)碼管中有一位數(shù)字在閃爍，此時可用“⊿”和“▲”及“▼”鍵相結(jié)合調(diào)整該參數(shù)至需要的值，并按記憶貯存。5．5儀器運行過程中數(shù)碼管顯示轉(zhuǎn)速，當(dāng)需要查看其他參數(shù)時，可按功能鍵，使該參數(shù)對應(yīng)的指示燈點亮，數(shù)碼管即顯示該參數(shù)值。當(dāng)儀器到達(dá)設(shè)定的時間或中途停機，停機過程中數(shù)碼管閃爍顯示轉(zhuǎn)速，屬正?，F(xiàn)象。5.6待離心機完全停止轉(zhuǎn)動時打開