薄層色譜法基礎(chǔ)-課件

薄層色譜法

（Thin-layerChromatography，TLC）

1薄層色譜法

（Thin-layerChromato目錄

一前言二基本參數(shù)三薄層層析的操作四特殊的薄層五應(yīng)用舉例2目錄薄層色譜法通常指以吸附劑為固定相的一種液相色譜法。即將固定相在玻璃、金屬或塑料等光潔的表面上均勻地鋪成薄層，試樣點(diǎn)在薄層的一端，流動(dòng)相借毛細(xì)作用流經(jīng)固定相,使被分離的物質(zhì)展開(kāi)。一.前言定義:常用的薄層色譜法以吸附劑為固定相,屬于吸附色譜的范疇繼柱色譜和紙色譜之后發(fā)展起來(lái)的方法3薄層色譜法通常指以吸附劑為固定相的一種液相色譜法。即將固定相薄層色譜與液相色譜法比較

HPLCTLC每次只能分析一個(gè)樣品在一塊板上點(diǎn)上多個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)行分離對(duì)樣品制備要求高，必須不含可吸留在柱上的雜質(zhì)，否則柱性能受損用畢一次棄去，可直接用樣品的粗提物點(diǎn)樣可用檢測(cè)器種類(lèi)較少展開(kāi)后可用多種手段檢測(cè)特點(diǎn)4薄層色譜與液相色譜法比較HPLCTLC每次只能分析一個(gè)樣品薄層色譜與柱層析和紙層析比較

(1)快速(數(shù)十秒~數(shù)十分鐘)(2)分離效率高(多柱路)(3)靈敏度高

(斑點(diǎn)擴(kuò)散小,比紙色譜高10-100倍)(4)顯色方法多樣(腐蝕性顯色劑)(5)圖象易保存5薄層色譜與柱層析和紙層析比較(1)快速(數(shù)十秒~數(shù)十分鐘)比移值（Rf）Rf=原點(diǎn)至組分點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)至流動(dòng)前沿的距離組分A的Rf=a/c組分B的Rf=b/c相對(duì)比移值，即相對(duì)于某一物質(zhì)x的Rf值，用Rx表示。其定義為：Rx＝組分的Rf值／物質(zhì)x的Rf值組分A相對(duì)于物質(zhì)B的“相對(duì)比移值”RB=a/b二.基本參數(shù)6比移值（Rf）相對(duì)比移值，即相對(duì)于某一物質(zhì)x的Rf值，用Rx三.薄層色譜的操作

吸附劑的選擇薄層板的制作展開(kāi)劑的選擇點(diǎn)樣展開(kāi)定位與顯色

薄層層析的定量測(cè)定7三.薄層色譜的操作吸附劑的選擇7(一)薄層層析用的吸附劑常用的薄層層析吸附劑有硅膠、氧化鋁、纖維素、聚酰胺等。吸附劑的選擇：首先決定于樣品成分的性質(zhì)，即它們的溶解性、酸堿性、極性以及是否與吸附劑起化學(xué)反應(yīng)等；其次要考慮吸附劑、載體是否容易得到及其價(jià)格等。8(一)薄層層析用的吸附劑常用的薄層層析吸附劑有硅膠、氧化鋁99層析板是用專(zhuān)門(mén)的涂布器把漿狀的吸附劑（紙漿、纖維素、硅膠、中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化鍵合硅膠等）均勻地涂在在薄層板（玻璃板、金屬板或彈性塑料板）上，干燥（110℃活化）后即可使用。(二)薄層板的制作10層析板是用專(zhuān)門(mén)的涂布器把漿狀的吸附劑（紙漿、纖維素、硅膠、中(三)薄層層析中展開(kāi)劑的選擇

主要根據(jù)極性的不同來(lái)選擇流動(dòng)相展開(kāi)劑。各種展開(kāi)劑按其極性不同排序?yàn)椋和闊N<烯烴<醚類(lèi)<硝基化合物<二甲胺<酯類(lèi)<酮類(lèi)<醛類(lèi)<硫醇<胺類(lèi)<酰胺<醇類(lèi)<酚類(lèi)<羧酸11(三)薄層層析中展開(kāi)劑的選擇主要根據(jù)極性的不同來(lái)選擇流動(dòng)相選擇薄層條件的簡(jiǎn)圖

圖2化合物的極性、吸附劑的活度及展開(kāi)劑極性間的關(guān)系

Stahl設(shè)計(jì)的用以選擇薄層條件的簡(jiǎn)圖（1）為被分離化合物的極性（2）為吸附劑的活度（3）為展開(kāi)劑的極性。若將這三個(gè)因素各自固定在圓周的三分之一，轉(zhuǎn)動(dòng)圓盤(pán)正中的三角形，如果角A指向極性物質(zhì)，則角B指向活度小的吸附劑，角C就指向選用極性展開(kāi)劑；如轉(zhuǎn)到A’，B’，C’處則又要作另外的選擇組合。12選擇薄層條件的簡(jiǎn)圖圖2化合物的極性、吸附劑的

極性較大的溶劑可以使化合物在薄層上移動(dòng)。極性較小的溶劑降低極性大的溶劑的洗脫能力，使Rf值降低。中等極性的溶劑往往起著使極性相差較大溶劑混合均勻的作用。在展開(kāi)劑中加入少量酸、堿可以使某些極性物質(zhì)斑點(diǎn)集中，提高分離度。用粘度太大的溶劑時(shí)需要加入一種溶劑以降低展開(kāi)劑的粘度，加快展開(kāi)速度。例如環(huán)己烷-丙酮-二乙胺-水（10:5:2:5）這個(gè)系統(tǒng)中，水是極性大的溶劑，環(huán)己烷是極性小的溶劑，后者的加入可以降低分離物質(zhì)的Rf值，丙酮起著混勻整個(gè)系統(tǒng)及降低展開(kāi)劑粘度的作用，少量二乙胺的加入控制了展開(kāi)劑的pH值以使分離后的斑點(diǎn)不致拖尾，分離清晰。多元展開(kāi)劑中各種溶劑的作用13極性較大的溶劑可以使化合物在薄層上移動(dòng)。多元展開(kāi)

在具體工作中，展開(kāi)劑的選擇還必須進(jìn)一步通過(guò)實(shí)踐，一般可用下列三種方法：(1)查閱文獻(xiàn)(2)微型薄層：用小玻片鋪上薄層，用各種經(jīng)初步選擇認(rèn)為可能應(yīng)用的展開(kāi)劑展開(kāi)，從而選擇適當(dāng)?shù)恼归_(kāi)劑，再用于一般的薄層層析。用微型薄層，節(jié)省材料和時(shí)間。(3)微量圓環(huán)技術(shù)14在具體工作中，展開(kāi)劑的選擇還必須進(jìn)一步通過(guò)

將試樣溶液點(diǎn)于已準(zhǔn)備好的薄層上，點(diǎn)成同樣大小的圓點(diǎn)，用毛細(xì)管吸取各種經(jīng)初步選擇認(rèn)為可能應(yīng)用的展開(kāi)劑，加到試樣點(diǎn)中心，讓展開(kāi)劑自毛細(xì)管中慢慢流出進(jìn)行展開(kāi)。微量圓環(huán)技術(shù)

1用環(huán)己烷展開(kāi)2用苯展開(kāi)3用氯仿展開(kāi)微量圓環(huán)技術(shù)

15將試樣溶液點(diǎn)于已準(zhǔn)備好的薄層上，點(diǎn)成同樣(四)點(diǎn)樣1.樣品溶液一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等揮發(fā)性有機(jī)溶劑，最好用與展開(kāi)劑極性相似的溶劑溶解試樣，配成0.5%~1%的試液。2.點(diǎn)樣量點(diǎn)樣量的多少與薄層的性能、厚薄及顯色劑的靈敏度有關(guān)。一般來(lái)說(shuō)，樣品量最小為幾ng，常用量為幾至幾十μg，制備型的分離可以點(diǎn)樣到mg量。總之點(diǎn)樣量隨分離目的而定。3.點(diǎn)樣方式最好是直徑3—5mm的圓點(diǎn)。16(四)點(diǎn)樣1.樣品溶液16常用的點(diǎn)樣方式

a一般點(diǎn)樣b徑向點(diǎn)樣c條狀點(diǎn)樣d線形小孔點(diǎn)樣e樣品填入溝槽17常用的點(diǎn)樣方式

a一般點(diǎn)樣b徑向點(diǎn)樣c條狀點(diǎn)樣d徑向展開(kāi)與普通展開(kāi)的區(qū)別18徑向展開(kāi)與普通展開(kāi)的區(qū)別184.點(diǎn)樣容器

定容毛細(xì)管微量注射器點(diǎn)樣器194.點(diǎn)樣容器定容毛細(xì)管19(五)展開(kāi)1.水蒸氣的影響2.溶劑蒸氣的影響3.展開(kāi)槽4.展開(kāi)方式5.幾種新型的展開(kāi)技術(shù)6.展開(kāi)操作20(五)展開(kāi)1.水蒸氣的影響201.水蒸氣的影響

在吸附薄層色譜的展開(kāi)過(guò)程中，空氣的相對(duì)濕度以及展開(kāi)槽中的水蒸氣必須嚴(yán)格控制，微量的水也能對(duì)色譜分離結(jié)果產(chǎn)生較大的影響。硅膠薄層板吸附水蒸氣的速度很快，0.25mm厚、20×20cm的薄層板在50%相對(duì)濕度中約3分鐘就失去活性的一半，而15分鐘時(shí)吸附的水分已達(dá)到最大值，因此，點(diǎn)樣速度的快慢，空氣相對(duì)濕度的大小，都可以影響分離以及重現(xiàn)性。適宜的相對(duì)濕度范圍也決定于溶質(zhì)和溶劑的極性。211.水蒸氣的影響212.溶劑蒸氣的影響

“邊緣效應(yīng)”：Stahl在用氯仿-甲醇（95：5）為展開(kāi)劑展開(kāi)麥角生物堿時(shí)發(fā)現(xiàn)，對(duì)同一種生物堿，在薄層板中部的Rf值比在邊緣的Rf值小，稱(chēng)此現(xiàn)象為“邊緣效應(yīng)”（edgeeffect）。展開(kāi)槽中被展開(kāi)劑蒸氣飽和后再進(jìn)行展開(kāi)就可以消除。圖5在未飽和展開(kāi)槽中薄層板上出現(xiàn)的“邊緣效應(yīng)”222.溶劑蒸氣的影響“邊緣效應(yīng)”：Sta3.展開(kāi)槽

普通展開(kāi)槽雙底展開(kāi)槽水平展開(kāi)槽233.展開(kāi)槽普通展開(kāi)槽234.展開(kāi)方式(1)近水平展開(kāi)：將點(diǎn)樣后的薄層板下端浸入展開(kāi)劑0.5cm，薄層上端墊高使薄層與水平成5-10o的角。(2)上行展開(kāi)：將點(diǎn)樣后的薄層放在盛有展開(kāi)劑的直立型的展開(kāi)槽中，展開(kāi)劑由薄層下端借毛細(xì)管作用上升至前沿。(3)下行展開(kāi)(4)雙向展開(kāi)244.展開(kāi)方式(1)近水平展開(kāi)：將點(diǎn)樣后的薄層板下端浸入展開(kāi)劑薄層板玻璃板上涂吸附劑層SiO2Al2O3上行法薄層板層析缸展開(kāi)劑層析缸展開(kāi)劑濾紙條下行法薄層板25薄層板玻璃板SiO2上行法薄層板層析缸展開(kāi)劑層析缸展開(kāi)劑濾紙幾種新型的展開(kāi)技術(shù)(1)程序蒸氣展開(kāi)（Vapor-programmed，VP）(2)圓形色譜（RadialChromatography）(3)熱板色譜(HotplatesChromatography)(4)多次展開(kāi)（MultipleDevelopment）(5)程序多次展開(kāi)（programmedMultipleDevelopment，PMD）(6)階式展開(kāi)（stepwisedevelopment）(7)梯度展開(kāi)（gradientdevelopment）26幾種新型的展開(kāi)技術(shù)(1)程序蒸氣展開(kāi)（Vapor-prog6展開(kāi)操作1.展開(kāi)槽的密閉目的是使展開(kāi)槽被展開(kāi)劑蒸氣飽和并使展開(kāi)劑組成不變。2.展開(kāi)槽的飽和為避免“邊緣效應(yīng)”，在薄層板用展開(kāi)劑蒸氣飽和有時(shí)是必要的。3.展開(kāi)距離常規(guī)薄層最長(zhǎng)展距為20cm;高效薄層展距最長(zhǎng)為10cm。4.展開(kāi)溫度276展開(kāi)操作1.展開(kāi)槽的密閉27展距對(duì)結(jié)果的影響，硅膠HPTLC分離洋甘菊油，

a）3cm、b）5cm、c）7cm、d）9cm。展距對(duì)結(jié)果的影響28展距對(duì)結(jié)果的影響，硅膠HPTLC分離洋甘菊油，

a）3c(六)薄層層析的定性檢測(cè)

展開(kāi)完畢后，把薄層從層析缸中取出，用鉛筆劃出或小針刺出展開(kāi)劑前緣的位置，隨即進(jìn)行顯色，以確定各個(gè)斑點(diǎn)的位置、Rf值和顯色情況，從而判斷試樣中含有哪些組分。有色物質(zhì)經(jīng)展開(kāi)后呈現(xiàn)明顯的色斑，很易判斷。對(duì)于無(wú)色物質(zhì)，可根據(jù)化合物的性質(zhì)，用物理檢出法、化學(xué)檢出法、酶與生物檢出法和放射性檢出法進(jìn)行顯色。

29(六)薄層層析的定性檢測(cè)展開(kāi)完畢后，把薄層1物理檢出法

1.紫外光一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于未知化合物，展開(kāi)后在用顯色劑以前，都應(yīng)先在紫外燈下進(jìn)行察看。紫外光常用兩種波254nm與365nm。如果化合物能吸收紫外光同時(shí)放出熒光，可用此熒光定位。2.碘元素碘的最大特點(diǎn)是與物質(zhì)的反應(yīng)往往是可逆的，當(dāng)化合物定位以后在空氣中放置時(shí)，碘即升華揮去，可以回到組分的原來(lái)狀態(tài)，有利于薄層的進(jìn)一步處理。3.水水可作為一種非破壞性顯色劑，用于硅膠薄層，當(dāng)許多憎水性化合物展開(kāi)后，用水噴薄層板，對(duì)光觀察，在半透明的薄層板上，顯出白色不透明的斑點(diǎn)。301物理檢出法1.紫外光302.化學(xué)檢出法

化學(xué)檢出法是在薄層上使用一種或數(shù)種化學(xué)試劑與被檢出物質(zhì)反應(yīng)，生成有顏色的化合物而定位。這種試劑叫顯色劑。顯色劑一般分為兩類(lèi)，即通用顯色劑和專(zhuān)屬性顯色劑。312.化學(xué)檢出法化學(xué)檢出法是在薄層上使用一種1通用顯色劑

(1)濃硫酸或50%的硫酸溶液：極大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)，噴此種顯色劑后立刻或在加熱到110—120℃并經(jīng)數(shù)分鐘后出現(xiàn)棕色到黑色斑點(diǎn)。(2)酸堿指示劑溶液：例如0.3%溴甲酚綠甲醇溶液，在綠色背景上顯現(xiàn)黃色斑，表示是脂肪族羧酸。常用的通用顯色劑還有：5%磷鉬酸乙醇、堿性高錳酸鉀溶液、硝酸銀-氫氧化銨試劑、熒光顯色劑等。

2專(zhuān)屬性顯色劑

指能使某一類(lèi)或少數(shù)幾類(lèi)官能團(tuán)或化合物顯色的試劑。例如2%2，4-二硝基苯肼乙醇溶液噴后在120℃加熱10分鐘，醛酮在黃橙色背景上顯紅色或橙色斑。321通用顯色劑(1)濃硫酸或50%的硫3原位化學(xué)衍生化

在色譜分析的綜合技術(shù)中，尤其對(duì)痕量組分的檢測(cè)，衍生化反應(yīng)已成為重要手段之一。在薄層色譜中，有些化合物本身無(wú)色，又無(wú)紫外吸收與熒光，同時(shí)也找不到合適的顯色劑，或者有性質(zhì)近似的化合物共存很難分離，這時(shí)可考慮在原位進(jìn)行適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)反應(yīng)，使之產(chǎn)生紫外吸收、熒光、顯色，或使性質(zhì)發(fā)生較大差異以利于分離。333原位化學(xué)衍生化在色譜分析的綜合

4生物與酶檢出法(bioautography)

生物檢出法又稱(chēng)生物自顯影法是用生物檢定法檢出薄層上具有生物效應(yīng)的物質(zhì)如抗生素的方法?；跈z出物質(zhì)的生物活性，將薄層板與已培養(yǎng)有適當(dāng)微生物的瓊脂表面接觸，并置適宜溫度的培育箱內(nèi)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后觀察抑菌點(diǎn)，有抗生素斑點(diǎn)處的培養(yǎng)基微生物生長(zhǎng)受到抑制，整個(gè)瓊脂板出現(xiàn)了抑菌點(diǎn)，由此抑菌點(diǎn)可對(duì)該抗生素組分定位。酶檢出法實(shí)際上是一種酶抑制技術(shù)，用于薄層色譜檢出某些有機(jī)磷農(nóng)藥。34

4生物與酶檢出法(bioautography)

5放射顯影法（Autoradiography）

就是用含放射性同位素的化合物在薄層上顯示位置的方法。具體方法是使薄層上同位素的輻射線透過(guò)照相底片，顯影以后由于銀粒而顯出潛影，在一定劑量范圍內(nèi)，放射性物質(zhì)斑點(diǎn)使底片所呈暗度與斑點(diǎn)中放射性物質(zhì)的濃度成正比，因此不僅可定位，還可定量。355放射顯影法（Autoradiography）35(七)薄層層析的定量測(cè)定

展開(kāi)后，薄層分離所得斑點(diǎn)中化合物可進(jìn)一步定量，其測(cè)定方法可分為兩大類(lèi)：一類(lèi)為洗脫測(cè)定法，將所需測(cè)定的斑點(diǎn)中的組分用適當(dāng)溶劑洗脫，再選用適當(dāng)方法定量；另一類(lèi)為直接測(cè)定法，色譜分離后，直接用肉眼觀察比較或用儀器掃描斑點(diǎn)而測(cè)定其含量。36(七)薄層層析的定量測(cè)定展開(kāi)后，薄層分離所得斑點(diǎn)中化合物1洗脫測(cè)定法1斑點(diǎn)的定位2斑點(diǎn)的洗脫:用吸集器將斑點(diǎn)位置的吸附吸下，然后用洗脫溶劑洗脫。3測(cè)定(1)紫外分光光度法：洗脫液調(diào)整至一定體積，在此化合物最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定。同時(shí)把樣品斑點(diǎn)相應(yīng)位置薄層吸附劑同樣取下做空白對(duì)照。(2)比色法：選擇靈敏度高、專(zhuān)屬性好的比色反應(yīng)測(cè)定化合物含量，是比較常用的方法。(3)其它方法：極譜、庫(kù)侖滴定、熒光測(cè)定等。371洗脫測(cè)定法1斑點(diǎn)的定位37吸集器及減壓洗脫裝置

吸集器減壓洗脫38吸集器及減壓洗脫裝置吸集器減壓洗脫382直接測(cè)定法1目測(cè)法樣品經(jīng)色譜分離后，直接觀察所得斑點(diǎn)的大小和顏色的深淺，并與標(biāo)準(zhǔn)品在相同條件下展開(kāi)所得到的一系列已知不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)相比較，而近似地判斷樣品中所測(cè)成分的含量。2測(cè)面積法展開(kāi)后色譜上的斑點(diǎn)面積與化合物含量間，符合一定的線性關(guān)系。3儀器測(cè)定法392直接測(cè)定法1目測(cè)法393儀器測(cè)定法

用光密度計(jì)或稱(chēng)薄層掃描儀（TLCScanner）掃描定量，該方法已成為薄層定量的主要方法。1.吸收測(cè)定法展開(kāi)后的薄層，用一定波長(zhǎng)單色光束進(jìn)行掃描，記錄其吸光度的變化，得到掃描曲線。利用樣品掃描曲線上峰高或面積與標(biāo)準(zhǔn)品相比較，可得出樣品含量。2.熒光測(cè)定法化合物本身有熒光或經(jīng)過(guò)適當(dāng)處理后生成熒光化合物者可測(cè)量其熒光強(qiáng)度而進(jìn)行定量。3.熒光淬滅法由熒光減弱的程度測(cè)出斑點(diǎn)中化合物的含量

403儀器測(cè)定法用光密度計(jì)或稱(chēng)薄層掃描儀（T吸收測(cè)定法的分類(lèi)根據(jù)對(duì)光測(cè)定方式的不同，可分為三種：透射法反射法透射—反射法透射法掃描反射法掃描

L光源；MC單色器；P薄層板；S斑點(diǎn)；PD光電檢測(cè)器41吸收測(cè)定法的分類(lèi)根據(jù)對(duì)光測(cè)定方式的不同，可分為儀器測(cè)定法的兩個(gè)重要參數(shù)掃描波長(zhǎng)：(1)單波長(zhǎng)掃描：使用一種波長(zhǎng)的光線對(duì)薄層進(jìn)行掃描。(2)雙波長(zhǎng)掃描：是采用兩種不同波長(zhǎng)的光束先后掃描所要測(cè)定的斑點(diǎn)，并記錄下此兩波長(zhǎng)吸光度之差。掃描軌跡：直線掃描、鋸齒狀掃描、圓形掃描42儀器測(cè)定法的兩個(gè)重要參數(shù)掃描波長(zhǎng)：42化合物斑點(diǎn)的吸收光譜

單波長(zhǎng)與雙波長(zhǎng)掃描曲線的比較43化合物斑點(diǎn)的吸收光譜單波長(zhǎng)與雙波長(zhǎng)掃描曲線的比較43四特殊的薄層1.高效薄層色譜（HPTLC）2.棒狀薄層色譜（Rod-TLC）3.超薄層色譜（UltraThin-layerChromatography）44四特殊的薄層1.高效薄層色譜（HPTLC）441.高效薄層色譜（HPTLC）

HPTLC是在普通薄層基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種更為靈敏、精細(xì)的薄層技術(shù)。高效薄層是采用小顆粒吸附劑制備的均勻薄層，分離效率比普通薄層提高三倍，檢出靈敏度增加，分析時(shí)間縮短。高效薄層色譜由于吸附劑顆粒小，流動(dòng)相展開(kāi)速度慢，平衡易于達(dá)到，質(zhì)量傳遞的阻滯作用往往可以忽略不計(jì)，展開(kāi)后斑點(diǎn)的大小主要由化合物分子擴(kuò)散系數(shù)決定?；衔镎归_(kāi)后只要不走在溶劑前沿，均呈小而圓整的斑點(diǎn)。451.高效薄層色譜（HPTLC）452.棒狀薄層色譜（Rod-TLC）

將樣品點(diǎn)在薄層棒上，經(jīng)點(diǎn)樣、展開(kāi)后將被分離后的色譜棒通過(guò)適當(dāng)?shù)臋C(jī)械傳動(dòng)裝置，水平地穿過(guò)檢測(cè)氫火焰的中心，使化合物燃燒裂解，形成離子碎片和自由電子，再由電極收集它們并產(chǎn)生與化合物量成正比的電流信號(hào)而測(cè)出各物質(zhì)的含量。462.棒狀薄層色譜（Rod-TLC）將樣品3.超薄層色譜（UltraThin-layerChromatography）

2002年德國(guó)24屆國(guó)際色譜研討會(huì)上首次提出。經(jīng)四氯烷基硅（鍵合鉛）制成整塊硅膠板，而不用顆粒狀吸附劑。厚度10μm，有孔徑為1~2μm的大孔，孔徑為3~4nm的中孔。UTLC取代了玻璃板，不需要載體；展程1~3cm，縮短分析時(shí)間，節(jié)約展開(kāi)劑；具有高分離效率和選擇性?？捎糜诜蛛x藥物、酚類(lèi)、增塑劑、甾族化合物等。473.超薄層色譜（UltraThin-layerChrom五應(yīng)用舉例

棒狀薄層色譜/氫火焰離子化檢測(cè)器復(fù)雜混峰譜圖特征提取方法的研究及應(yīng)用新型薄層色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定葛根素含量薄層色譜（TLC）與基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）聯(lián)用分析大腦中磷脂48五應(yīng)用舉例

棒狀薄層色譜/氫火焰離子化檢測(cè)器復(fù)雜混峰譜圖棒狀薄層色譜/氫火焰離子化檢測(cè)器復(fù)雜混峰譜圖特征提取方法的研究及應(yīng)用

利用該方法分析了各種工藝的重油樣品近300種，實(shí)現(xiàn)了重油樣品的烴族組成的快速分析。儀器：LATROSCANNEWMK-5薄層色譜/氫火焰檢測(cè)器分析儀薄層操作：稱(chēng)0.1g重油樣品，用3mL甲苯溶解制成分析液。移取此試液0.8μL分4次點(diǎn)在色譜棒上。色譜樣移至盛正庚烷的展開(kāi)槽中展開(kāi)到110mm處，取出晾干。再將色譜移到盛有甲苯的展開(kāi)槽中展到50mm處，晾干。將色譜棒在氫火焰上掃描通過(guò)工作站繪圖，并采集數(shù)據(jù)。49棒狀薄層色譜/氫火焰離子化檢測(cè)器復(fù)雜混峰譜圖特征提取方法的研新型薄層色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定葛根素含量

以大豆甙元為內(nèi)標(biāo)物在高效硅膠薄層板上測(cè)定葛根素注射液，中藥葛根及中成藥玉泉丸中葛根素的含量，建立了新型TLC內(nèi)標(biāo)法測(cè)定葛根素的新方法。儀器材料：CS-9000型雙波長(zhǎng)掃描儀（日本島津），定量點(diǎn)樣毛細(xì)管（DrummondscientificCop.USA）,高效硅膠G薄層板（青島海洋化工廠，200mm×100mm，50mm×100mm，30mm×100mm）薄層掃描條件：在高效硅膠G薄層板上以甲醇－乙酸乙酯－石油醚－水（1.8:6:4:0.35）為展開(kāi)劑，展距為8cm,在365nm紫外光下觀察斑點(diǎn)位置。葛根素Rf＝0.35,大豆甙元Rf＝0.71。定量：鋸齒反射掃描。

50新型薄層色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定葛根素含量以大豆甙元為內(nèi)標(biāo)物在高效硅薄層色譜（TLC）與基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）聯(lián)用分析大腦中磷脂

薄層色譜條件：高效硅膠60薄層板（10×10cm）（Terck，Germany）展開(kāi)劑氯仿：甲醇：水：三乙胺（30:35:7:35v/v/v/v）層析槽CAMAG，Switerland樣品量5μL顯色條件PRIMULINE（DirectYellow59）溶于丙酮/水（80:20v/v）中，UV254nm觀察紫色斑點(diǎn)檢測(cè)取下斑點(diǎn)，用75μL氯仿+75μL甲醇+75μL0.9%Nacl水溶液洗脫，渦旋攪拌，離心分離，蒸干有機(jī)相，剩余物溶于20μL基質(zhì)溶液，直接用MALDI-TOF-MS檢測(cè)51薄層色譜（TLC）與基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜（MA謝謝大家！

52謝謝大家！52薄層色譜法

（Thin-layerChromatography，TLC）

53薄層色譜法

（Thin-layerChromato目錄

一前言二基本參數(shù)三薄層層析的操作四特殊的薄層五應(yīng)用舉例54目錄薄層色譜法通常指以吸附劑為固定相的一種液相色譜法。即將固定相在玻璃、金屬或塑料等光潔的表面上均勻地鋪成薄層，試樣點(diǎn)在薄層的一端，流動(dòng)相借毛細(xì)作用流經(jīng)固定相,使被分離的物質(zhì)展開(kāi)。一.前言定義:常用的薄層色譜法以吸附劑為固定相,屬于吸附色譜的范疇繼柱色譜和紙色譜之后發(fā)展起來(lái)的方法55薄層色譜法通常指以吸附劑為固定相的一種液相色譜法。即將固定相薄層色譜與液相色譜法比較

HPLCTLC每次只能分析一個(gè)樣品在一塊板上點(diǎn)上多個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)行分離對(duì)樣品制備要求高，必須不含可吸留在柱上的雜質(zhì)，否則柱性能受損用畢一次棄去，可直接用樣品的粗提物點(diǎn)樣可用檢測(cè)器種類(lèi)較少展開(kāi)后可用多種手段檢測(cè)特點(diǎn)56薄層色譜與液相色譜法比較HPLCTLC每次只能分析一個(gè)樣品薄層色譜與柱層析和紙層析比較

(1)快速(數(shù)十秒~數(shù)十分鐘)(2)分離效率高(多柱路)(3)靈敏度高

(斑點(diǎn)擴(kuò)散小,比紙色譜高10-100倍)(4)顯色方法多樣(腐蝕性顯色劑)(5)圖象易保存57薄層色譜與柱層析和紙層析比較(1)快速(數(shù)十秒~數(shù)十分鐘)比移值（Rf）Rf=原點(diǎn)至組分點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)至流動(dòng)前沿的距離組分A的Rf=a/c組分B的Rf=b/c相對(duì)比移值，即相對(duì)于某一物質(zhì)x的Rf值，用Rx表示。其定義為：Rx＝組分的Rf值／物質(zhì)x的Rf值組分A相對(duì)于物質(zhì)B的“相對(duì)比移值”RB=a/b二.基本參數(shù)58比移值（Rf）相對(duì)比移值，即相對(duì)于某一物質(zhì)x的Rf值，用Rx三.薄層色譜的操作

吸附劑的選擇薄層板的制作展開(kāi)劑的選擇點(diǎn)樣展開(kāi)定位與顯色

薄層層析的定量測(cè)定59三.薄層色譜的操作吸附劑的選擇7(一)薄層層析用的吸附劑常用的薄層層析吸附劑有硅膠、氧化鋁、纖維素、聚酰胺等。吸附劑的選擇：首先決定于樣品成分的性質(zhì)，即它們的溶解性、酸堿性、極性以及是否與吸附劑起化學(xué)反應(yīng)等；其次要考慮吸附劑、載體是否容易得到及其價(jià)格等。60(一)薄層層析用的吸附劑常用的薄層層析吸附劑有硅膠、氧化鋁619層析板是用專(zhuān)門(mén)的涂布器把漿狀的吸附劑（紙漿、纖維素、硅膠、中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化鍵合硅膠等）均勻地涂在在薄層板（玻璃板、金屬板或彈性塑料板）上，干燥（110℃活化）后即可使用。(二)薄層板的制作62層析板是用專(zhuān)門(mén)的涂布器把漿狀的吸附劑（紙漿、纖維素、硅膠、中(三)薄層層析中展開(kāi)劑的選擇

主要根據(jù)極性的不同來(lái)選擇流動(dòng)相展開(kāi)劑。各種展開(kāi)劑按其極性不同排序?yàn)椋和闊N<烯烴<醚類(lèi)<硝基化合物<二甲胺<酯類(lèi)<酮類(lèi)<醛類(lèi)<硫醇<胺類(lèi)<酰胺<醇類(lèi)<酚類(lèi)<羧酸63(三)薄層層析中展開(kāi)劑的選擇主要根據(jù)極性的不同來(lái)選擇流動(dòng)相選擇薄層條件的簡(jiǎn)圖

圖2化合物的極性、吸附劑的活度及展開(kāi)劑極性間的關(guān)系

Stahl設(shè)計(jì)的用以選擇薄層條件的簡(jiǎn)圖（1）為被分離化合物的極性（2）為吸附劑的活度（3）為展開(kāi)劑的極性。若將這三個(gè)因素各自固定在圓周的三分之一，轉(zhuǎn)動(dòng)圓盤(pán)正中的三角形，如果角A指向極性物質(zhì)，則角B指向活度小的吸附劑，角C就指向選用極性展開(kāi)劑；如轉(zhuǎn)到A’，B’，C’處則又要作另外的選擇組合。64選擇薄層條件的簡(jiǎn)圖圖2化合物的極性、吸附劑的

極性較大的溶劑可以使化合物在薄層上移動(dòng)。極性較小的溶劑降低極性大的溶劑的洗脫能力，使Rf值降低。中等極性的溶劑往往起著使極性相差較大溶劑混合均勻的作用。在展開(kāi)劑中加入少量酸、堿可以使某些極性物質(zhì)斑點(diǎn)集中，提高分離度。用粘度太大的溶劑時(shí)需要加入一種溶劑以降低展開(kāi)劑的粘度，加快展開(kāi)速度。例如環(huán)己烷-丙酮-二乙胺-水（10:5:2:5）這個(gè)系統(tǒng)中，水是極性大的溶劑，環(huán)己烷是極性小的溶劑，后者的加入可以降低分離物質(zhì)的Rf值，丙酮起著混勻整個(gè)系統(tǒng)及降低展開(kāi)劑粘度的作用，少量二乙胺的加入控制了展開(kāi)劑的pH值以使分離后的斑點(diǎn)不致拖尾，分離清晰。多元展開(kāi)劑中各種溶劑的作用65極性較大的溶劑可以使化合物在薄層上移動(dòng)。多元展開(kāi)

在具體工作中，展開(kāi)劑的選擇還必須進(jìn)一步通過(guò)實(shí)踐，一般可用下列三種方法：(1)查閱文獻(xiàn)(2)微型薄層：用小玻片鋪上薄層，用各種經(jīng)初步選擇認(rèn)為可能應(yīng)用的展開(kāi)劑展開(kāi)，從而選擇適當(dāng)?shù)恼归_(kāi)劑，再用于一般的薄層層析。用微型薄層，節(jié)省材料和時(shí)間。(3)微量圓環(huán)技術(shù)66在具體工作中，展開(kāi)劑的選擇還必須進(jìn)一步通過(guò)

將試樣溶液點(diǎn)于已準(zhǔn)備好的薄層上，點(diǎn)成同樣大小的圓點(diǎn)，用毛細(xì)管吸取各種經(jīng)初步選擇認(rèn)為可能應(yīng)用的展開(kāi)劑，加到試樣點(diǎn)中心，讓展開(kāi)劑自毛細(xì)管中慢慢流出進(jìn)行展開(kāi)。微量圓環(huán)技術(shù)

1用環(huán)己烷展開(kāi)2用苯展開(kāi)3用氯仿展開(kāi)微量圓環(huán)技術(shù)

67將試樣溶液點(diǎn)于已準(zhǔn)備好的薄層上，點(diǎn)成同樣(四)點(diǎn)樣1.樣品溶液一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等揮發(fā)性有機(jī)溶劑，最好用與展開(kāi)劑極性相似的溶劑溶解試樣，配成0.5%~1%的試液。2.點(diǎn)樣量點(diǎn)樣量的多少與薄層的性能、厚薄及顯色劑的靈敏度有關(guān)。一般來(lái)說(shuō)，樣品量最小為幾ng，常用量為幾至幾十μg，制備型的分離可以點(diǎn)樣到mg量?？傊c(diǎn)樣量隨分離目的而定。3.點(diǎn)樣方式最好是直徑3—5mm的圓點(diǎn)。68(四)點(diǎn)樣1.樣品溶液16常用的點(diǎn)樣方式

a一般點(diǎn)樣b徑向點(diǎn)樣c條狀點(diǎn)樣d線形小孔點(diǎn)樣e樣品填入溝槽69常用的點(diǎn)樣方式

a一般點(diǎn)樣b徑向點(diǎn)樣c條狀點(diǎn)樣d徑向展開(kāi)與普通展開(kāi)的區(qū)別70徑向展開(kāi)與普通展開(kāi)的區(qū)別184.點(diǎn)樣容器

定容毛細(xì)管微量注射器點(diǎn)樣器714.點(diǎn)樣容器定容毛細(xì)管19(五)展開(kāi)1.水蒸氣的影響2.溶劑蒸氣的影響3.展開(kāi)槽4.展開(kāi)方式5.幾種新型的展開(kāi)技術(shù)6.展開(kāi)操作72(五)展開(kāi)1.水蒸氣的影響201.水蒸氣的影響

在吸附薄層色譜的展開(kāi)過(guò)程中，空氣的相對(duì)濕度以及展開(kāi)槽中的水蒸氣必須嚴(yán)格控制，微量的水也能對(duì)色譜分離結(jié)果產(chǎn)生較大的影響。硅膠薄層板吸附水蒸氣的速度很快，0.25mm厚、20×20cm的薄層板在50%相對(duì)濕度中約3分鐘就失去活性的一半，而15分鐘時(shí)吸附的水分已達(dá)到最大值，因此，點(diǎn)樣速度的快慢，空氣相對(duì)濕度的大小，都可以影響分離以及重現(xiàn)性。適宜的相對(duì)濕度范圍也決定于溶質(zhì)和溶劑的極性。731.水蒸氣的影響212.溶劑蒸氣的影響

“邊緣效應(yīng)”：Stahl在用氯仿-甲醇（95：5）為展開(kāi)劑展開(kāi)麥角生物堿時(shí)發(fā)現(xiàn)，對(duì)同一種生物堿，在薄層板中部的Rf值比在邊緣的Rf值小，稱(chēng)此現(xiàn)象為“邊緣效應(yīng)”（edgeeffect）。展開(kāi)槽中被展開(kāi)劑蒸氣飽和后再進(jìn)行展開(kāi)就可以消除。圖5在未飽和展開(kāi)槽中薄層板上出現(xiàn)的“邊緣效應(yīng)”742.溶劑蒸氣的影響“邊緣效應(yīng)”：Sta3.展開(kāi)槽

普通展開(kāi)槽雙底展開(kāi)槽水平展開(kāi)槽753.展開(kāi)槽普通展開(kāi)槽234.展開(kāi)方式(1)近水平展開(kāi)：將點(diǎn)樣后的薄層板下端浸入展開(kāi)劑0.5cm，薄層上端墊高使薄層與水平成5-10o的角。(2)上行展開(kāi)：將點(diǎn)樣后的薄層放在盛有展開(kāi)劑的直立型的展開(kāi)槽中，展開(kāi)劑由薄層下端借毛細(xì)管作用上升至前沿。(3)下行展開(kāi)(4)雙向展開(kāi)764.展開(kāi)方式(1)近水平展開(kāi)：將點(diǎn)樣后的薄層板下端浸入展開(kāi)劑薄層板玻璃板上涂吸附劑層SiO2Al2O3上行法薄層板層析缸展開(kāi)劑層析缸展開(kāi)劑濾紙條下行法薄層板77薄層板玻璃板SiO2上行法薄層板層析缸展開(kāi)劑層析缸展開(kāi)劑濾紙幾種新型的展開(kāi)技術(shù)(1)程序蒸氣展開(kāi)（Vapor-programmed，VP）(2)圓形色譜（RadialChromatography）(3)熱板色譜(HotplatesChromatography)(4)多次展開(kāi)（MultipleDevelopment）(5)程序多次展開(kāi)（programmedMultipleDevelopment，PMD）(6)階式展開(kāi)（stepwisedevelopment）(7)梯度展開(kāi)（gradientdevelopment）78幾種新型的展開(kāi)技術(shù)(1)程序蒸氣展開(kāi)（Vapor-prog6展開(kāi)操作1.展開(kāi)槽的密閉目的是使展開(kāi)槽被展開(kāi)劑蒸氣飽和并使展開(kāi)劑組成不變。2.展開(kāi)槽的飽和為避免“邊緣效應(yīng)”，在薄層板用展開(kāi)劑蒸氣飽和有時(shí)是必要的。3.展開(kāi)距離常規(guī)薄層最長(zhǎng)展距為20cm;高效薄層展距最長(zhǎng)為10cm。4.展開(kāi)溫度796展開(kāi)操作1.展開(kāi)槽的密閉27展距對(duì)結(jié)果的影響，硅膠HPTLC分離洋甘菊油，

a）3cm、b）5cm、c）7cm、d）9cm。展距對(duì)結(jié)果的影響80展距對(duì)結(jié)果的影響，硅膠HPTLC分離洋甘菊油，

a）3c(六)薄層層析的定性檢測(cè)

展開(kāi)完畢后，把薄層從層析缸中取出，用鉛筆劃出或小針刺出展開(kāi)劑前緣的位置，隨即進(jìn)行顯色，以確定各個(gè)斑點(diǎn)的位置、Rf值和顯色情況，從而判斷試樣中含有哪些組分。有色物質(zhì)經(jīng)展開(kāi)后呈現(xiàn)明顯的色斑，很易判斷。對(duì)于無(wú)色物質(zhì)，可根據(jù)化合物的性質(zhì)，用物理檢出法、化學(xué)檢出法、酶與生物檢出法和放射性檢出法進(jìn)行顯色。

81(六)薄層層析的定性檢測(cè)展開(kāi)完畢后，把薄層1物理檢出法

1.紫外光一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于未知化合物，展開(kāi)后在用顯色劑以前，都應(yīng)先在紫外燈下進(jìn)行察看。紫外光常用兩種波254nm與365nm。如果化合物能吸收紫外光同時(shí)放出熒光，可用此熒光定位。2.碘元素碘的最大特點(diǎn)是與物質(zhì)的反應(yīng)往往是可逆的，當(dāng)化合物定位以后在空氣中放置時(shí)，碘即升華揮去，可以回到組分的原來(lái)狀態(tài)，有利于薄層的進(jìn)一步處理。3.水水可作為一種非破壞性顯色劑，用于硅膠薄層，當(dāng)許多憎水性化合物展開(kāi)后，用水噴薄層板，對(duì)光觀察，在半透明的薄層板上，顯出白色不透明的斑點(diǎn)。821物理檢出法1.紫外光302.化學(xué)檢出法

化學(xué)檢出法是在薄層上使用一種或數(shù)種化學(xué)試劑與被檢出物質(zhì)反應(yīng)，生成有顏色的化合物而定位。這種試劑叫顯色劑。顯色劑一般分為兩類(lèi)，即通用顯色劑和專(zhuān)屬性顯色劑。832.化學(xué)檢出法化學(xué)檢出法是在薄層上使用一種1通用顯色劑

(1)濃硫酸或50%的硫酸溶液：極大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)，噴此種顯色劑后立刻或在加熱到110—120℃并經(jīng)數(shù)分鐘后出現(xiàn)棕色到黑色斑點(diǎn)。(2)酸堿指示劑溶液：例如0.3%溴甲酚綠甲醇溶液，在綠色背景上顯現(xiàn)黃色斑，表示是脂肪族羧酸。常用的通用顯色劑還有：5%磷鉬酸乙醇、堿性高錳酸鉀溶液、硝酸銀-氫氧化銨試劑、熒光顯色劑等。

2專(zhuān)屬性顯色劑

指能使某一類(lèi)或少數(shù)幾類(lèi)官能團(tuán)或化合物顯色的試劑。例如2%2，4-二硝基苯肼乙醇溶液噴后在120℃加熱10分鐘，醛酮在黃橙色背景上顯紅色或橙色斑。841通用顯色劑(1)濃硫酸或50%的硫3原位化學(xué)衍生化

在色譜分析的綜合技術(shù)中，尤其對(duì)痕量組分的檢測(cè)，衍生化反應(yīng)已成為重要手段之一。在薄層色譜中，有些化合物本身無(wú)色，又無(wú)紫外吸收與熒光，同時(shí)也找不到合適的顯色劑，或者有性質(zhì)近似的化合物共存很難分離，這時(shí)可考慮在原位進(jìn)行適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)反應(yīng)，使之產(chǎn)生紫外吸收、熒光、顯色，或使性質(zhì)發(fā)生較大差異以利于分離。853原位化學(xué)衍生化在色譜分析的綜合

4生物與酶檢出法(bioautography)

生物檢出法又稱(chēng)生物自顯影法是用生物檢定法檢出薄層上具有生物效應(yīng)的物質(zhì)如抗生素的方法?；跈z出物質(zhì)的生物活性，將薄層板與已培養(yǎng)有適當(dāng)微生物的瓊脂表面接觸，并置適宜溫度的培育箱內(nèi)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后觀察抑菌點(diǎn)，有抗生素斑點(diǎn)處的培養(yǎng)基微生物生長(zhǎng)受到抑制，整個(gè)瓊脂板出現(xiàn)了抑菌點(diǎn)，由此抑菌點(diǎn)可對(duì)該抗生素組分定位。酶檢出法實(shí)際上是一種酶抑制技術(shù)，用于薄層色譜檢出某些有機(jī)磷農(nóng)藥。86

4生物與酶檢出法(bioautography)

5放射顯影法（Autoradiography）

就是用含放射性同位素的化合物在薄層上顯示位置的方法。具體方法是使薄層上同位素的輻射線透過(guò)照相底片，顯影以后由于銀粒而顯出潛影，在一定劑量范圍內(nèi)，放射性物質(zhì)斑點(diǎn)使底片所呈暗度與斑點(diǎn)中放射性物質(zhì)的濃度成正比，因此不僅可定位，還可定量。875放射顯影法（Autoradiography）35(七)薄層層析的定量測(cè)定

展開(kāi)后，薄層分離所得斑點(diǎn)中化合物可進(jìn)一步定量，其測(cè)定方法可分為兩大類(lèi)：一類(lèi)為洗脫測(cè)定法，將所需測(cè)定的斑點(diǎn)中的組分用適當(dāng)溶劑洗脫，再選用適當(dāng)方法定量；另一類(lèi)為直接測(cè)定法，色譜分離后，直接用肉眼觀察比較或用儀器掃描斑點(diǎn)而測(cè)定其含量。88(七)薄層層析的定量測(cè)定展開(kāi)后，薄層分離所得斑點(diǎn)中化合物1洗脫測(cè)定法1斑點(diǎn)的定位2斑點(diǎn)的洗脫:用吸集器將斑點(diǎn)位置的吸附吸下，然后用洗脫溶劑洗脫。3測(cè)定(1)紫外分光光度法：洗脫液調(diào)整至一定體積，在此化合物最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定。同時(shí)把樣品斑點(diǎn)相應(yīng)位置薄層吸附劑同樣取下做空白對(duì)照。(2)比色法：選擇靈敏度高、專(zhuān)屬性好的比色反應(yīng)測(cè)定化合物含量，是比較常用的方法。(3)其它方法：極譜、庫(kù)侖滴定、熒光測(cè)定等。891洗脫測(cè)定法1斑點(diǎn)的定位37吸集器及減壓洗脫裝置

吸集器減壓洗脫90吸集器及減壓洗脫裝置吸集器減壓洗脫382直接測(cè)定法1目測(cè)法樣品經(jīng)色譜分離后，直接觀察所得斑點(diǎn)的大小和顏色的深淺，并與標(biāo)準(zhǔn)品在相同條件下展開(kāi)所得到的一系列已知不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)相比較，而近似地判斷樣品中所測(cè)成分的含量。2測(cè)面積法展開(kāi)后色譜上的斑點(diǎn)面積與化合物含量間，符合一定的線性關(guān)系。3儀器測(cè)定法912直接測(cè)定法1目測(cè)法393儀器測(cè)定法

用光密度計(jì)或稱(chēng)薄層掃描儀（TLCScanner）掃描定量，該方法已成為薄層定量的主要方法。1.吸收測(cè)定法展開(kāi)后的薄層，用一定波長(zhǎng)單色光束進(jìn)行掃描，記錄其吸光度的變化，得到掃描曲線。利用樣品掃描曲線上峰高或面積與標(biāo)準(zhǔn)品相比較，可得出樣品含量。2.熒光測(cè)定法化合物本身有熒光或經(jīng)過(guò)適當(dāng)處理后生成熒光化合物者可測(cè)量其熒光強(qiáng)度而進(jìn)行定量。3.熒光淬滅法由熒光減弱的程度測(cè)出斑點(diǎn)中化合物的含量

923儀器測(cè)定法用光密度計(jì)或稱(chēng)薄層掃描儀（T吸收測(cè)定法的分類(lèi)根據(jù)對(duì)光測(cè)定方式的不同，可分為三種：透射法反射法透射—反射法透射法掃描反射法掃描

L光源；MC單色器；P薄層板；S斑點(diǎn)；PD光電檢測(cè)器93吸收測(cè)定法的分類(lèi)根據(jù)對(duì)光測(cè)定方式的不同，可分為儀器測(cè)定法的兩個(gè)重要參數(shù)掃描波長(zhǎng)：(1)單波長(zhǎng)掃描：使用一種波長(zhǎng)的光線對(duì)薄層進(jìn)行掃描。(2)雙波長(zhǎng)掃描：是采用兩種不同波長(zhǎng)的光束先后掃描所要測(cè)定的斑點(diǎn)，并記錄下此兩波長(zhǎng)吸光度之差。掃描軌跡：直線掃描、鋸齒狀掃描、圓形掃描94儀器測(cè)定法的兩個(gè)重要參數(shù)掃描波長(zhǎng)：42化合物斑點(diǎn)的吸收光譜

單波長(zhǎng)與雙波長(zhǎng)掃描曲線的比較95化合物斑點(diǎn)的吸收光譜單波長(zhǎng)與雙波長(zhǎng)掃描曲線的比較43四特殊的薄層1.高效薄層色譜（HPTLC）2.棒狀薄層色譜（Rod-TLC）3.超薄層色譜（UltraThin-layerChromatography）96四特殊的薄層1.高效薄層色譜（HPTLC）441.高效薄層色譜（HPTLC）