心肌梗死動物模型具體方法及步驟

心肌梗死動物模型具體方法及步驟原型物種人來源結(jié)扎冠狀動脈左前降支(LAD)導致心梗模式動物品系SPF級SD大鼠，健康，3-4W,雌雄各半，體重為180g-200go實驗分組實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組。實驗周期72h建模方法心肌梗死是指心肌的缺血性壞死,是一種急性及嚴重的心臟狀態(tài)。心臟作為血液循環(huán)動力中心這一功能的實現(xiàn),需要冠狀動脈不斷提供的血流供應,當冠狀動脈發(fā)生病變而狹窄或堵塞,使得冠狀動脈的血流急劇減少或中斷,便會使相應的心肌出現(xiàn)嚴重而持久地急性缺血Z心肌無法得到足夠氧氣Z最終導致心肌不可逆的缺血性壞死，心臟的收縮和舒張功能降低，機體供血不足Z嚴重者最終導致機體死亡。大鼠用3%戊巴比妥鈉(30mg∕kg),腹腔注射麻醉,用小動物剃毛器剃除大鼠胸部及腋下毛發(fā)(充分暴露手術(shù)區(qū))，用碘酒和75%乙醇術(shù)區(qū)消毒。氣管插管:麻醉后,夾趾檢測無反應即可進行MI手術(shù)。打開外置光源、顯微鏡開關(guān)，打開呼吸機，設(shè)置好各參數(shù)(呼吸比2:1,潮氣量6-8mL,頻率70次∕min),將氣管插管沿聲門插入氣管，取下大鼠接上呼吸機，觀察大鼠呼吸狀況，胸廓起伏與呼吸機頻率一致表示插管成功,即可進行Ml手術(shù)。3.大鼠采用右側(cè)臥位,用眼科剪在左前肢腋下，用顯微剪于三、四肋間打開胸腔充分暴露心臟，顯微直銀輕輕夾起少量心包并于左心耳下撕開少許心包Z充分暴露左冠狀動脈前降支(LAD)或所在區(qū)域。4.結(jié)扎冠狀動脈：于顯微鏡下找到LAD走向或可能所在位置,持針器持取5-0帶針縫合線,于左心耳根部下方肺動脈圓錐旁以5-0無創(chuàng)縫合線穿過左冠狀動脈前降支(LAD),以完全阻斷LAD血流。5?關(guān)胸：結(jié)扎完成后,5-0縫線完全縫合胸腔開口(保證無縫隙、無錯位)關(guān)閉胸腔,由內(nèi)向外逐層縫合各層肌肉和皮膚。6?術(shù)后管理:術(shù)后密切關(guān)注大鼠狀態(tài)，有無呼吸異常等。待大鼠自然蘇醒后將大鼠從呼吸機上取下并取下氣管插管,正常飼養(yǎng)。應用用于心血管疾病研究模型評價L心臟功能評價由LaPlaCe定理可知：S=Pr∕2h,P為心室內(nèi)壓，ι?為心腔內(nèi)徑，h為心壁厚度。在心臟壓力負荷過重的情況下，為適應心臟做功增加，室壁厚度增加，左室室壁應力增加Z提高心臟收縮功能起到早期代償?shù)臋C制；但持續(xù)的壓力超負荷，可促進心肌≡厚，導致心肌細胞的壞死及凋亡Z心臟的收縮和/或舒張功能受到損害，最終發(fā)展為慢性心力衰竭甚或匕、源性猝死?？赏ㄟ^超聲或血流動力學檢測來評價心功能。超聲圖像,測量左室舒張末期及收縮末期內(nèi)徑(LVIDd、LVIDS),同時系統(tǒng)將會自動計算出相應的射血分數(shù)(EF%)及左室短軸縮短率(FS%)o2.TTC染色測量梗死面積迅速取下心臟,清潔并擠壓心臟蘸干血漬,4oC生理鹽水沖洗干凈后蘸干,于-20°C冰箱冷凍15min至心臟變硬，取出并用刀片自心尖向心底沿房室溝方向切成Imm厚切片，共切5片，迅速將切片置于5ml,37oC,1%PH為7.4的KC磷酸緩沖液中，水浴ISmin,TTC染色后梗死區(qū)為白色,梗死邊緣區(qū)為磚紅色,正常區(qū)為紅色。組織病理學取出心臟,剔除血管、脂肪等雜質(zhì),心臟放紗布上蘸干殘留的血漬和溶液并稱重后放入4%多聚甲醛溶液中保存，24h后行脫水、包埋、石蠟切片，各個標本選擇固定位置（乳頭肌水平）切片，做HE染色。HE染色結(jié)果可見，對照組心肌排列整齊、細胞質(zhì)豐富均勻、間質(zhì)正常；模型組部分心肌細胞核丟失、心肌細胞呈空泡樣變、梗死區(qū)可見心肌組織紊亂、梗死區(qū)心肌細胞消失，代之以纖維瘢痕組織。4.ELlSA法檢測大鼠血清中細胞因子含量大鼠于術(shù)后Ih,2h