腸胃舒膠囊等6種中成藥微生物課件

腸胃舒膠囊等6種中成藥微生物限度檢查法驗證實驗總結一．目的香港仁奇診所：受你診所的委托，我所抗生素室對腸胃舒膠囊等6種中成藥微生物限度檢測，并對其進行方法學驗證，歸納總結如下：二．樣品骨絡通酒011362北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司、化瘤膠囊302107北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司、腎寧丸21006北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司、消渴丸0201060北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司、腸胃舒膠囊030610北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司、防癌膠囊100210北京北衛(wèi)藥業(yè)有限公司．四．方法中國藥典2000版與2005版微生物限度檢查法方法驗證的比較實驗。五．方法驗證：（一）．菌液制備1．取經(jīng)37℃培養(yǎng)18-24小時，金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌肉湯培養(yǎng)物1ml+9ml鹽水10倍稀釋至10-5~10-7為50~100個/ml，做活菌計數(shù)備用。2．取經(jīng)25℃培養(yǎng)18~24小時的白色念珠菌霉菌液體培養(yǎng)物1ml+9ml鹽水10倍稀釋至10-5~10-7為50~100個/ml，做活菌計數(shù)備用。3．取經(jīng)25℃培養(yǎng)1周的黑曲霉斜面培養(yǎng)物，加3~5ml鹽水洗下霉菌孢子，吸取出菌液，用標準比濁管比濁，與濁度相當后，取1ml+9ml鹽水=10-1，逐管10倍稀釋為10-4約50~100個/ml，做活菌計數(shù)備用。（二）．供試液制備稱取各品種樣品10g，加0.1%胨水氯化鈉稀釋液100ml濃度均為1：10供試液，分別人工污染上述5種試驗菌株。（四）．離心集菌薄膜過濾法分別取不同品種的1：10供試液10ml，移至滅菌的離心管中，以500轉(zhuǎn)/分5分種后，取上清液1ml，加入薄膜過濾器中，采用0.1%蛋白胨氯化鈉沖洗液300ml/膜，再加規(guī)定菌株沖洗后，取膜貼于瓊脂平板，置規(guī)定溫度培養(yǎng)24~72小時觀察結果1)

試驗組分別取不同品種的1：10供試液1ml、50~100個/ml試驗菌株，同時加入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)24~72小時觀察結果。薄膜過濾法以最后一次的沖洗液加入試驗菌。3)

供試液對照測定供試品本底菌數(shù)4)稀釋劑對照組四．結果見表1.2.3.藥物名稱人工染菌回收率%控制菌大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草桿菌白色念珠菌黑曲霉大腸菌群

1g0.1g

化瘤膠囊96.0100.0100.0100.0100.0⊕⊕

腎寧丸100.0100.075.6100.095.5⊕⊕

防癌膠囊35.4100.066.6100.081.2⊕⊕

腸胃舒膠囊100.021.746.6100.0100.0⊕⊕

骨絡通酒100.06.861.1100.091.6⊕⊕

消渴丸93.41.166.6100.087.5⊕⊕

表1結果可見1.采用常規(guī)方法檢驗６個品種，人工污染5株代表菌株，其中化瘤膠囊、腎寧丸，２個品種供試品的回收率均高于70%，經(jīng)方法學驗證，無抗菌活性，可采用常規(guī)方法檢驗。2．有3個品種對金黃色葡萄球菌、枯草桿菌有不同程度的抗菌活性，腸胃舒膠囊、骨絡通酒、消渴丸3個品種供試品回收率為1~66.6%，有明顯的抗菌活性。此外防癌膠囊對大腸桿菌的回收率為35.4%低于70%，有抗菌作用，不可采用常規(guī)方法，可采用適宜方法進行檢驗3．采用培養(yǎng)基稀釋法測定上述含抑菌成份的中成藥微生物限度驗證試驗，結果見表2.3。藥品名稱人工染菌回收率%大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草桿菌骨絡通酒*75.8100.0消渴丸*79.076.0腸胃舒膠囊*21.2

防癌膠囊65.9*86.4表2結果證明采用培養(yǎng)基稀釋法，人工污染金黃色葡萄球菌、枯草桿菌可消除抗菌作用。回收率達到70%以上的骨絡通酒、消渴丸可采用培養(yǎng)基稀釋法（0.5ml/皿）檢驗。其中腸胃舒膠囊對金黃色葡萄球菌回收率低于70%，防癌膠囊對大腸埃希菌回收率低于70%，故應降低稀釋度（0.1、0.2ml/皿），進行檢驗。培養(yǎng)基稀釋法和薄膜過濾法回收率結果表3五、結論通過方法學驗證實驗證明，上述6個品種中