檢測限和定量限的確定方法專家講座

體外診斷產(chǎn)品性能評估-2023年10月3日楊宗兵檢測限和定量限旳擬定辦法第1頁術(shù)語和定義第2頁α錯誤//β錯誤Alpha(α)error//Beta(β)errorα錯誤//第I類錯誤//假陽性

Alpha(α)error//TypeIerror//Falsepositive

錯誤地回絕無效假設(shè)（物質(zhì)不存在）旳概率，事實(shí)上物質(zhì)真不存在β錯誤//第II類錯誤//假陰性Beta(β)error//TypeIIerror//Falsenegative錯誤地接受無效假設(shè)（物質(zhì)不存在）旳概率，事實(shí)上物質(zhì)在指定旳水平存在第3頁空白Blank//空白限Limitofblank(LoB）

空白Blank不具有感愛好分析物，或至少濃度遠(yuǎn)低于感愛好最低水平旳樣本空白限

Limitofblank(LoB）也許觀測到空白樣本旳最高測量成果（聲稱概率下）注：a）LoB不是通過測量獲得旳實(shí)際濃度。事實(shí)上，陽性信號旳實(shí)際濃度確認(rèn)被稱為LoD。同樣地，LoB是具有在聲稱概率下分析物水平等于LoD旳樣本預(yù)期旳最低值b）這同“檢測下限”；即聲稱旳給出測量不擬定度聲稱值旳測量程序得到旳最低成果。也稱為“臨界值”（ISO11843）第4頁檢測限Limitofdetection(LoD)在（聲稱）概率下，樣本中能檢測到旳分析物旳最低量，盡管或許不能量化為一種精確值。注：也稱為“檢測下限”，“最小可檢測濃度”（或量或值），以及有時用于表征“敏捷度”第5頁定量限//定量下限

Limitofquantitation（LoQ）//Lowerlimitofquantitation在聲稱旳可接受精密度和對旳度以及經(jīng)驗(yàn)條件下樣本中能定量測定旳分析物旳最低量注：也稱為“檢測下限”和“測量范疇下限”第6頁測量范疇//工作范疇

Measuringrange//Workingrange測量儀器旳誤差處在規(guī)定極限內(nèi)旳一組被測量旳值（VIM93）注：此前，NCCLS文獻(xiàn)中使用術(shù)語“可報(bào)告范疇”第7頁敏捷度

“敏捷度”旳非原則使用不同應(yīng)用中，“敏捷度”也許單獨(dú)或修改使用常見為：“IUPAC”定義旳“分析敏捷度”一致，即“校準(zhǔn)曲線旳斜率”描述非常低分析濃度旳分析內(nèi)精密度旳“功能敏捷度”在低濃度有高精密度規(guī)定旳診斷分析，術(shù)語“診斷”或“臨床”敏捷度用與描述或比較預(yù)定旳與診斷測試性能有關(guān)旳臨床信息（如與疾病有關(guān)分析物靶點(diǎn)旳有無）第8頁分析敏捷度

測量儀器響應(yīng)旳變化除以相應(yīng)旳量“敏捷度”在醫(yī)學(xué)檢查上以兩種不同但有關(guān)旳含義使用：（1）以足夠置信度可測量旳最小濃度差別

和（2）以合適置信度可檢測旳最小被測量旳量（1）按照IUPAC定義分析敏捷度可以用校準(zhǔn)曲線旳斜率來表達(dá)（2）已被檢出限和定量限取代第9頁診斷敏捷度、功能敏捷度診斷敏捷度體外診斷檢查程序可以辨認(rèn)特定疾病或狀態(tài)存在旳能力注：診斷敏捷度是一種數(shù)值分?jǐn)?shù)。以真陽性值除以真陽性值加上假陰性值旳和來計(jì)算功能敏捷度測量程序測量很低濃度旳能力，它比定量限也無任何優(yōu)勢。因此不鼓勵使用功能敏捷度第10頁類型低限值最低檢出限定量限線性下限測量范圍下限空白限第11頁不同類型之間旳關(guān)系LOBLODLOQLLRLMRLOB：最高LOD：高于LOB，也許被聲稱LOQ：最低，U<目旳值（U）LLR：最低與被測量旳值直接成比例旳能力響應(yīng)值與真實(shí)濃度有線性關(guān)系LMR：規(guī)定條件下旳最低涉及辦法旳所有特性，偏倚、不精密度、U等第12頁LODdetectionlimit，limitofdetection?由給定測量程序得到的測得量值，對于此值，在給定錯誤地聲稱物質(zhì)中存在某成分的概率為α?xí)r，錯誤地聲稱不存在該成分的概率為βIUPAC建議α和β默認(rèn)值等于0.05術(shù)語“分析靈敏度”有時被用于代表檢出限，但這樣的用法現(xiàn)在不鼓勵第13頁LODdetectionlimit，limitofdetection?被用于描述一個檢驗(yàn)程序以特定置信水平能報(bào)告為存在的被測量最低值。它也被用來指最小可檢測濃度測量區(qū)間的下限不應(yīng)和檢出限混淆分析靈敏度不能被用于表示檢出限第14頁LOQquantitationlimitlimitofquantitation?被用于描述一個檢驗(yàn)程序以指定的測量不確定度能測量的被測量最低值。它也被用來指測定下限、定量下限、測量下限和功能靈敏度功能靈敏度比定量限無任何優(yōu)勢。由于該術(shù)語延續(xù)靈敏度的不贊成用法，因此不鼓勵它在體外診斷標(biāo)示中的使用第15頁定性分析中限值旳使用“檢測限”?一個定性測試的檢出限有可能根據(jù)經(jīng)驗(yàn)觀測不到其增加，例如，試劑引起的變化。因?yàn)闃颖局蟹治鑫锟蓹z測的水平可能低于cutoff值，這可能增加假陰性結(jié)果的比例同時，高濃度樣本同樣也可以給出正確的陽性信號。因此，檢出限的測定試驗(yàn)對許多定性測試的質(zhì)量控制是重要的第16頁定性分析中限值旳使用“檢測限”?陽性和陰性結(jié)果之間的交叉點(diǎn)（也稱為cutoff值，50%的陽性和50%的陰性）過渡區(qū)稱為“95%的區(qū)間”，非CI（LOB與臨界點(diǎn)相同）樣本濃度與區(qū)間關(guān)系，重復(fù)結(jié)果95%陽性結(jié)果、95%陰性結(jié)果95%區(qū)間上限如同LoD±20%基礎(chǔ)上進(jìn)行陰陽性結(jié)果的重復(fù)測量確認(rèn)第17頁定性分析中限值旳使用“臨界值”的非標(biāo)準(zhǔn)使用?術(shù)語“臨界值”在ISO11843中作為空白樣本預(yù)期合理的最高結(jié)果使用（零濃度或接近零濃度樣本）。超過儀器（方法）響應(yīng)，認(rèn)為樣本有一個陽性測量值。但是，在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室該術(shù)語普遍用于指征一個重要的醫(yī)學(xué)條件的測試結(jié)果。響應(yīng)的閾值被稱為“空白限”第18頁目前旳某些常用辦法LOD/LOQ?當(dāng)前，許多設(shè)備通過單一模式報(bào)告LoD和LoQ，僅使用空白樣本測量。在該單一模式下，假設(shè)盡可能高的空白值是測定分析物存在的閾值此為檢測下限最常見的是，進(jìn)行一個空白樣本的重復(fù)測量，計(jì)算這些測量值的均值和SD，用SD乘以某一因數(shù)，加上重復(fù)測試的均值，該值被稱為LoD以及可能為LoQ（例如，分析化學(xué)）第19頁目前旳某些常用辦法旳缺陷假設(shè)空白低值對稱分布SD無法區(qū)分真實(shí)虛假忽略事實(shí)(LOD)導(dǎo)致低LOD/Q第20頁LOB第21頁第22頁LOB空白樣本結(jié)果接近零時的分布儀器內(nèi)部產(chǎn)生該類型的信號時，許多儀器自動轉(zhuǎn)換陰性值信號為零或一個低值陽性值。因此只提供非陰性濃度值輸出假設(shè)該值超過空白測量中實(shí)際空白樣本顯著變異分布的第95百分位數(shù)如果樣本產(chǎn)生一個超過該限值的觀測值，它可以宣稱分析物含量大于零第23頁LOB空白樣本結(jié)果接近零時的分布使用該限值，我們有真實(shí)空白樣本給出值的5%表明分析物存在（通常稱為第I類錯誤）同時，我們觀測到低濃度分析樣本的測量值落在該限值內(nèi)。當(dāng)我們斷定在該情況下無可測量分析物存在時，我們承諾錯誤通常稱為第II類錯誤第24頁LOBISO推薦?ISO推薦了第I類和第II類錯誤聲稱水平相關(guān)的最小檢出限定義α=β=5%。一個α值為5%對應(yīng)使用空白值分布第95百分位數(shù)，宣稱測量值顯著高于空白限值一個空白值呈Gaussian分布：LoB=μB+1.645σB第25頁LOB計(jì)算方法?濃度低于零的情況下不被報(bào)告或空白值不呈Gaussian分布時（空白值呈不對稱分布），第95百分位數(shù)通過其他方法估計(jì)直截了當(dāng)?shù)某绦蚴褂没诿钪档姆菂?shù)原理。通過大量的Nb值排序，第95百分位數(shù)作為陽性第Nb(95/100+0.5)位觀測值來估計(jì)第26頁LOB計(jì)算方法?因存在小數(shù)值，在臨近排序值之間使用內(nèi)插法。分布上限截?cái)唳涟俜治唬瞻追植及俜治粩?shù)限值（PctB），稱為空白限（LoB）即LoB=PctB100-α第27頁LOBLOB估計(jì)?通過一個或多個空白樣本重復(fù)（NB次）測量估計(jì)LoB。使用多個樣本有助于確?？煽啃?，具有明顯分析物量的樣本不被當(dāng)做空白使用當(dāng)數(shù)據(jù)呈Gaussian分布時，那么使用參數(shù)程序估計(jì)LoB：LoB=μS-1.645σS第28頁LOB例子?當(dāng)數(shù)據(jù)不呈Gaussian分布時（如零點(diǎn)被截?cái)啵?，使用非參?shù)方法計(jì)算P(1-α)=(0.95*NB+0.5)當(dāng)該值為非整數(shù)時，應(yīng)使用線性內(nèi)插法，例如，當(dāng)p=95和NB=60，那么NB（p/100）+0.5=57+0.5=57.5，第95百分位應(yīng)為觀測值排序第57和58位數(shù)的均值。當(dāng)NB=65時，那么NB（p/100）+0.5=62.25，第95百分位應(yīng)為觀測值排序第62和63位數(shù)的組合，=X62+0.25（X63-X62）第29頁LOBLOB驗(yàn)證舉例?用戶進(jìn)行25次空白測量（5個樣本5天測量5次）目測檢查顯示空白值呈不對稱分布，因此，非參數(shù)估計(jì)LoB，在觀測區(qū)的第24位和第25位之間線性內(nèi)插法得LoB=19.17U/L（=18.01+0.25*（22.65-18.01））第30頁LOD第31頁第32頁LOD第II類錯誤為了表述第II類錯誤，一方面不得不考慮最小樣本濃度等于LoD,即提供規(guī)定概率下超過LoB的結(jié)果當(dāng)?shù)贗I類錯誤β水平設(shè)為5%時，那么95%的測量結(jié)果超過LoB第33頁LOD第II類錯誤因而，僅有5%的測量結(jié)果被錯誤的宣稱同空白沒有顯著差異,以及β=5%，即第II類錯誤風(fēng)險（β風(fēng)險）LoD為該樣本的實(shí)際濃度；是能可靠檢測到的最低實(shí)際濃度，通常，低水平樣本呈Gaussian分布以及分布的第5百分位數(shù)對應(yīng)LoBLoB=μS-1.645σS第34頁LOD計(jì)算公式?可以導(dǎo)出：μS=LoD=LoB+1.645σSLoD=μB+1.645σB+1.645σS第35頁LOD圖示第36頁LOD樣本分布?如果樣本中分析物的實(shí)際濃度等于LoB，50%的測量值超過LoB（a）。樣本實(shí)際濃度等于LoD，（100%-β）（95%）的樣本測量值超過LoB(b)?樣本不呈Gaussian分布（且不能轉(zhuǎn)換為Gaussian分布），有可能使用非參數(shù)估計(jì)LoD，另外，有必要生產(chǎn)濃度接近暫定LoD的樣本。用于檢查5%或更低的測量觀測值低于LoB的最低水平第37頁設(shè)計(jì)考慮操作條件穩(wěn)定?假設(shè)在單一系統(tǒng)或一組實(shí)驗(yàn)設(shè)備條件下設(shè)計(jì)。穩(wěn)定的條件下操作（無試劑批號變化或主校準(zhǔn)的重大變化）。推薦考慮包括時間（運(yùn)行）引起的變異和受試對象之間的差異第38頁設(shè)計(jì)考慮系統(tǒng)的考慮?制造商應(yīng)考慮在兩臺或更多臺儀器用兩批或更多批的試劑嘗試獲得不同儀器/試劑預(yù)期的變異。如果不同系統(tǒng)結(jié)果完全不同，應(yīng)查明原因。如果同系統(tǒng)結(jié)果基本相同時，最大的LoD將作為估計(jì)值使用。該建議必須由價值和實(shí)際考慮來恒量。任何設(shè)計(jì)結(jié)果應(yīng)附有一個全面的研究描述和參數(shù)第39頁樣本量參數(shù)與非參?LoB非參數(shù)估計(jì)的有效性大約為一個參數(shù)估計(jì)程序的一半。那就是，參數(shù)和非參數(shù)程序的預(yù)期結(jié)果相同，但是使用相同的測量數(shù)量時，參數(shù)估計(jì)有較小的不確定度，（如果數(shù)據(jù)呈Gaussian分布）。百分位數(shù)或SD估計(jì)值的不確定度同樣應(yīng)與分布的分散性成正比。?因而，LoB非參數(shù)估計(jì)和LoD參數(shù)估計(jì)，空白測量數(shù)量應(yīng)大于低濃度樣本測量。但最常見的是，低水平樣本測量的分散性大于空白測量。總之，大多數(shù)情況下，空白和低水平樣本具有相同測量數(shù)量為最佳選擇第40頁樣本量評估與驗(yàn)證?在精密度和成本之間合理取舍，建議估計(jì)LoD時用60次測量的最小數(shù)量（空白和低水平樣本）。應(yīng)由方法開發(fā)者執(zhí)行?為驗(yàn)證LoD聲稱值，在聲稱水平使用20次結(jié)果。以及必要時，在LoB水平。這通常由實(shí)驗(yàn)室或用戶執(zhí)行第41頁樣本性狀樣本代表性?盡可能地，用自然樣本取代空白和陽性低值樣本，即對于藥物分析應(yīng)有游離藥物的血清或血漿樣本，不只是緩沖液。因人工添加樣本可能與受試者樣本的表現(xiàn)不同使用非自然樣本時，應(yīng)考慮干擾和基質(zhì)效應(yīng)為了確保測量具有代表性，希望收集一定數(shù)量樣本的測量值，而不是單個樣本第42頁樣本性狀樣本代表性?樣本之間存在不同基質(zhì)時，重復(fù)測量一特定樣本來代替，最好用5個或更多的樣本為一組。這些測量應(yīng)在不同日期內(nèi)分開進(jìn)行評價，因此評估反應(yīng)超出典型實(shí)驗(yàn)室條件范圍的分析方法性能，包括（適當(dāng)時）不同分析和設(shè)備?驗(yàn)證聲稱值時，時間段不需包括試劑批號或主要設(shè)備維護(hù)的變化，估計(jì)聲稱值時，時間段應(yīng)包括試劑批號的變化第43頁樣本性狀內(nèi)源性物質(zhì)?內(nèi)源性化合物，空白可能是組分剝離樣本，即抗體脫水，酶的降解，或活性炭吸附等對于激素，空白樣本可以由患者受試者提供或發(fā)育不全水平接受藥物治療受試者提供對于腫瘤標(biāo)志物，正常受試者樣本或許適用。當(dāng)分析物殘留水平不可避免時，應(yīng)低于分析物分析范圍限值一個數(shù)量級第44頁樣本性狀內(nèi)源性物質(zhì)?低水平的內(nèi)源性化合物，指用一組低濃度范圍內(nèi)受試者樣本如有必要，在樣本中添加分析物（例如，藥物）時，最好添加源于不同受試者的一組樣本，而不是正好一個樣本或一個混合樣本。通過一組樣本的重復(fù)測量估計(jì)合并SDS，例如，5個樣本中每一樣本測量12次。測量應(yīng)在不同日期進(jìn)行。因此SDs反應(yīng)總體分析變異第45頁樣本性狀內(nèi)源性物質(zhì)?為使LoB和LoD估計(jì)值有意義，盡可能地，測量值應(yīng)追溯至SI單位，或一些已知水平。當(dāng)分析存在參考方法時，它應(yīng)用于在低范圍內(nèi)的比對測量。溯源性也可以由添加樣本的測量證明，考慮添加物質(zhì)的溯源性第46頁成果LOD?測量值具有許多特征或?qū)傩?，如濃度或活性，只要明確地定義被測量。當(dāng)測量的量不同于感興趣的分析物（例如，酶活性不同于酶的質(zhì)量濃度）時，必須明確地定義量。理解不同方法或在不同的測量條件下LoD不同是重要的?正好在同樣低濃度樣本獲得所有測量是沒有必要或不可取的。這是因?yàn)閮H有必要估計(jì)SDS（低濃度測量的SD）。使用多個樣本將助于解釋典型的受試者變異第47頁LOD測定程序?測定LoD，樣本測量的SDS通過有意義的低濃度樣本重復(fù)測量（NS）獲得，即大約從LoB到4倍LoB的濃度范圍內(nèi)。推薦從低濃度樣本至少獲得60個結(jié)果。指定程序采用多個低水平樣本（4～6個）以及計(jì)算這些水平精密度的合并估計(jì)值第48頁LOD測量程序?在合并精密度的獨(dú)立估計(jì)之前，他們應(yīng)用傳統(tǒng)的F檢驗(yàn)（2個樣本）或當(dāng)多于兩個樣本時用Cochran檢驗(yàn)進(jìn)行一致性測試，測試失敗時，應(yīng)由制造商或開發(fā)者查明原因。它可以顯示反應(yīng)或樣本的不穩(wěn)定影響變異，通過下式估計(jì)暫定的LoDt：LoDtent=LoB+cβSD第49頁LOD測量程序?SDS為一個低水平樣本分布的SDS估計(jì)值和因SDS基于總體標(biāo)準(zhǔn)偏差σS估計(jì)值應(yīng)用，cβ源于標(biāo)準(zhǔn)Gaussian分布（和修正因子）的第95百分位。當(dāng)測量的數(shù)量不是太小時，cβ=1.645/（1-1/（4*f）），f是SDS估計(jì)的自由度例如，通過5個（K=5）低濃度樣本獲得60個結(jié)果（NS=60），那么，合并估計(jì)SDS時自由度f為55（f=NS-K）和cβ=1.645/（1-1/220）=1.653第50頁LODSD的考慮?考慮測量水平的SDS是否接近LODt水平是重要的。估計(jì)LoD時普遍問題是樣本的SD不恒定，因它常常隨樣本濃度而增加。但是，超過低濃度的一個限值范圍時，它將接近恒定以及概述的程序是適當(dāng)?shù)?，?dāng)假設(shè)一個恒定的SDS時，那么LoD=LoDtent第51頁LODSD的考慮?同樣，如果相關(guān)的SD（或CV）恒定，它可能用于估計(jì)試驗(yàn)LOD的SDS，以及因此使用上述公式測定LoD。否則，如果假設(shè)樣本SD為濃度水平的一個函數(shù)，應(yīng)開展一個更為復(fù)雜的方法第52頁LOD分布形態(tài)的考慮?如果低濃度樣本數(shù)據(jù)不呈Gaussian分布，那么，有可能轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)使其呈Gaussian分布。例如，對數(shù)轉(zhuǎn)換。轉(zhuǎn)換結(jié)束后，LoD用轉(zhuǎn)換后單位計(jì)算，以及然后用可逆轉(zhuǎn)換程序轉(zhuǎn)換為原單位（即指數(shù)）第53頁LOD分布形態(tài)的考慮?如果不可能產(chǎn)生Gaussian分布數(shù)據(jù)，但SDS合理恒定，那么可以使用一個非參數(shù)進(jìn)行。這種非參數(shù)估計(jì)可能作為低濃度樣本賦值（或可接受參考值）測量分布的β百分位的差距來計(jì)算。稱該差距為DS,β；DS,β類似于cβ*SDS，因此：LoD=LoB+DS,β第54頁LOD分布形態(tài)的考慮?如果SDS不恒定，以及不可能產(chǎn)生符合Gaussian分布數(shù)據(jù)，那么，必須使用一個非參數(shù)的“試錯法”程序。該程序嘗試假設(shè)在LoD水平準(zhǔn)備樣本，和一系列的測量值（不同時間和操作者）?計(jì)算β百分位，作為低于LoB觀測值的百分位數(shù)。當(dāng)β百分位是5%或更低時，LoD為最低水平物質(zhì)的結(jié)果第55頁LOD例子?激素（空白）：估計(jì)LoD，使用α=β=5%的默認(rèn)值有10個源于激素缺乏或藥物抑制受試者的樣本。為確?？偡治鲎儺惒皇苡绊?，在10天中分別對每一空白樣本測量10次。因被截?cái)?，分析僅提供非陰性值非參數(shù)估計(jì)LoB作為測量結(jié)果的第95百分位數(shù)第56頁LOD例子?激素（空白）：第57頁LOD例子第95百分位對應(yīng)觀測值排序的95.5（=100*（95/100）+0.5）。觀測范圍內(nèi)第95和96位之間使用線性內(nèi)插法得LoB估計(jì)值:為0.0544U/L(0.0539+0.5*(0.0548-0.0539))排序空白值1000.0653990.0603980.0560970.0554960.0548950.0539940.0538第58頁LOD例子?激素（低濃度水平）：低濃度樣本（在0.05～0.20U/L范圍內(nèi)）假設(shè)從10個受試者每人獲得一個樣本，以及每一樣本分析10次建議目視檢查分布對稱和接近鐘形，因此可能使用參數(shù)統(tǒng)計(jì)目視復(fù)測SDS估計(jì)值與該樣本水平無關(guān)第59頁LOD例子?激素（低濃度水平）：按照加權(quán)方式SDS2=(n1SDS12+n2SDS22+n3SDS32+……+nnSDSn2)/(n1+n2+n3+……+nn)計(jì)算SDS（0.0299）合并估計(jì)值（該情況下，為變異均值的平方根）。自由度為10*（10-1）=90和α=0.05，因此cβ=1.6449/（1-1/360）=1.6494那么可以獲得一個LoD估計(jì)值：LoD=LoB+cβ*SDS=0.0544+1.6494*0.0299=0.104U/L第60頁LOD例子（驗(yàn)證）?實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確保分析滿足制造商聲稱給定的LoD聲稱值，而不是估計(jì)自己的LoD?？捎脮r，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用制造商提供的LoB當(dāng)制造商的LoB不可用時，那么按照LOB估計(jì)方法進(jìn)行第61頁LOD例子（驗(yàn)證）?運(yùn)行濃度等于聲稱LoD樣本的重復(fù)測量以及估計(jì)大于LoB結(jié)果的比例。推薦至少使用20次樣本測量，可能時這些測量包括來自樣本和不同時間段的變異。記錄比例符合預(yù)期值（1-β；默認(rèn)為95%），也就是在記錄比例在95%的置信區(qū)間內(nèi)包含95%時，那么數(shù)據(jù)支持LoD聲稱值第62頁LOD例子（驗(yàn)證）?判定：20次測量中有可能多于1次結(jié)果低于LoB，但仍然符合該標(biāo)準(zhǔn)次數(shù)觀測比例低限2085308740885088608870898089909010090150912009225092300924009350093100094第63頁LOD例子（驗(yàn)證）?分析程序在α=β=5%時LoD聲稱值為45U/L用戶進(jìn)行25次空白測量（5個樣本5天測量5次）和25次分析物濃度為45U/L的添加樣本測量目測檢查顯示空白值呈不對稱分布，因此，非參數(shù)估計(jì)LoB，在觀測區(qū)的第24位和第25位之間線性內(nèi)插法得LoB=19.17U/L（=18.01+0.25*（22.65-18.01））第64頁LOD例子（驗(yàn)證）?25個空白測量值和25個添加分析物樣本測量值的分布，因此，實(shí)際濃度等于LoD聲稱值45U/L。LoB估計(jì)值為19.17（空白分布的第95百分位數(shù)）。92%的樣本測量值（23/25）大于LoB?觀測比例符合依據(jù)聲稱95%的一個預(yù)期值，以及當(dāng)前的評價不否定聲稱值第65頁LOQ第66頁LOQ估計(jì)程序?LoQ為能可靠檢測到的（LoD）分析物實(shí)際的最低量，以及總誤差符合實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確度要求（臨床使用的可接受值）實(shí)驗(yàn)室希望估計(jì)自己的LoQ，或驗(yàn)證制造商的聲稱值，如果低水平得測量不確定度（或總誤差）可被確定，測定每一個方法學(xué)的LoQ可能是沒有必要的在這種情況下，報(bào)告每一個低水平結(jié)果已估計(jì)的不確定度是可接受的第67頁LOQ估計(jì)程序?LoD研究的測試結(jié)果應(yīng)用于估計(jì)分析物該水平的偏倚和不精密度推薦測定3到5個不同樣本至少40次重復(fù)以及至少5次運(yùn)行測量均值（當(dāng)使用一個樣本時）和可接受的參考值之間的偏差為偏倚估計(jì)值當(dāng)該水平使用不止1個樣本時，那么偏差的均值為正確度估計(jì)值。40個結(jié)果總的SD（一個樣本）或精密度合并估計(jì)值SDS為精密度估計(jì)值第68頁LOQ估計(jì)程序?綜上所述得到該水平總誤差估計(jì)值，使用偏倚+2*SDS=總誤差（如果偏倚為負(fù)值，使用總誤差，=-（偏倚-2SDS））。如果該估計(jì)值低于給定的總誤差目標(biāo)，那么：LoQ=LoD該程序確保，真實(shí)值等于LoQ的樣本，測試結(jié)果約有95%概率應(yīng)非常正確第69頁LOQ估計(jì)程序?如果需要更大概率，SDS應(yīng)乘以較大的因子；例如，如果偏倚+4SDS和偏倚-4SDS在目標(biāo)范圍內(nèi)（和誤差呈Gussian分布），那么大于99.5%的結(jié)果將適用第70頁LOQ估計(jì)程序?如果不符合該水平目標(biāo)值，那么必須進(jìn)行略高水平的測試。必須得到適合的參考物質(zhì)，使用類似的物質(zhì)來測定LoD。此前，必須通過獨(dú)立測試結(jié)果的均值，同時用參考方法測試，添加，或，適當(dāng)時進(jìn)行稀釋得到實(shí)際濃度。如果生產(chǎn)該物質(zhì)，那么源于測試物質(zhì)的不確定度和總誤差估計(jì)應(yīng)包括稀釋因子和/或添加程序的不確定度第71頁LOQ驗(yàn)證程序?如果實(shí)驗(yàn)室測定高于假設(shè)測量范圍（或可報(bào)告范圍）的最低水平LoQ，那么測量范圍不適用于實(shí)驗(yàn)室預(yù)期用途。在較低的95%置信限，如果該試驗(yàn)得到的偏倚和不精密度估計(jì)值大于方法聲稱值，那么應(yīng)聯(lián)系制造商第72頁LOQ驗(yàn)證程序?如果實(shí)驗(yàn)室希望確認(rèn)LoQ或假設(shè)誤差不呈Gaussian分布，那么使用其他程序檢查LoQ聲稱值。使用最少25次重復(fù)是可接受的該情況下，每一樣本重復(fù)值與該樣本參考值差值和誤差目標(biāo)值比較。超出誤差目標(biāo)結(jié)果的數(shù)量應(yīng)按照區(qū)間估計(jì)值計(jì)算。如果使用95%的標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)按照95%低限確定不可接受觀測結(jié)果的數(shù)量第73頁LOQ驗(yàn)證程序?例如，總共有30次重復(fù)時，（超過某一樣本數(shù)量），那么我們至少有87%的結(jié)果（26.1，四舍五入至27）必須在