腫瘤基因治療的基本策略和常用方法課件

腫瘤基因治療的基本策略和常用方法一.腫瘤和基因治療的基本概念二.采用基因治療腫瘤的基本策略三.常采用的基因治療方法四.對未來腫瘤基因治療的展望

Themaker:

精品腫瘤基因治療的基本策略和常用方法一.腫瘤和基因治療的基本概念1一.腫瘤和基因治療的基本概念1.腫瘤（Tumor）

機體在各種致癌因素作用下，局部組織的某一個細胞在基因水平上失去對其生長的正常調控，導致其克隆性異常增生而形成的異常病變。學界一般將腫瘤分為良性和惡性兩大類。精品一.腫瘤和基因治療的基本概念1.腫瘤（Tumor）精品2精品精品32.基因治療指將外源正?；驅氚屑毎?，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療目的。也就是將外源基因通過基因轉移技術將其插入病人的適當的受體細胞中，使外源基因制造的產物能治療某種疾病。從廣義說，基因治療還可包括從DNA水平采取的治療某些疾病的措施和新技術。精品2.基因治療精品4精品精品53.什么是腫瘤基因治療基因治療的經典概念指通過外源基因導人人體以糾正內在的基因缺陷的療法。腫瘤基因治療不再局限于“糾正基因缺陷”，系指將外源的正常基因導人人體，達到直接或間接抑制或殺傷腫瘤細胞的目的?；蚴巧?，是生物得以保持其連續(xù)性和穩(wěn)定性的物質基礎。隨著對惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展分子機制研究的不斷深人，出于對腫瘤是一種基因病的認識，加之惡性腫瘤的發(fā)病率和病死率較高，這使得惡性腫瘤的基因治療成為近年來基因治療研究的主要內容和熱點。精品3.什么是腫瘤基因治療精品64.與基因治療有關幾個概念a.基因毒癌發(fā)生發(fā)展的第一步是活化致癌物，改變細胞內的DNA，導致原癌基因的移位及擴增，這些特殊基因的翻譯，使帶有這些異?；蚣毎哪承┨匦缘靡詫Ｒ槐磉_，一個特殊的化學物對一系列細胞有誘變及DNA修復作用者，稱為基因毒。目前人類已知的致癌物均為基因毒。b.原癌基因(前癌基因)細胞癌基因存在于細胞基因組內，激活前的細胞癌基因稱為原癌基因(前癌基因)，一旦原癌基因激活成癌基因便會引起細胞癌變，癌基因激活后，通過其表達產物改變細胞生長和分化規(guī)律，誘發(fā)細胞癌變。細胞癌基因被激活的途徑很多，如啟動子插人，基因重排和擴增，基因點突變和DNA分子中去甲基化等。精品4.與基因治療有關幾個概念精品7c.抑癌基因正常細胞中存在抑制腫瘤發(fā)生的基因，稱為抑癌基因。抑癌基因的存在從最初的一個發(fā)現中得到證實，即一個腫瘤細胞和一個正常細胞融合成的雜交細胞，往往不具有細胞表型，即使兩種不同的腫瘤細胞雜交，也可能是非腫瘤性的，只有正常的親代失去某些基因之后，其子代才會發(fā)生腫瘤。后來，通過限制性內切酶片段長度多態(tài)分析及分子克隆技術的研究證實，正常細胞中有一類對細胞增殖起負性調節(jié)作用的基因，如大腸癌中的p53基因，視網膜母細胞瘤和骨肉瘤中的Rb基因。這兩種基因也是目前被確認并研究最為深人的抑癌基因。如將正常的Rb基因轉人骨肉瘤細胞，Rb基因表達增高，細胞分裂幾乎完全抑制，將Rb基因轉人前列腺細胞，對正常細胞的生長無影響，但抑制了細胞的癌變，所以當這一類的抑癌基因發(fā)生丟失，失活或變異時，就會促進細胞惡變。精品c.抑癌基因正常細胞中存在抑制腫瘤發(fā)生8二.采用基因治療腫瘤的基本策略

目前國內外惡性腫瘤基因治療基本策略包括：1.免疫性基因治療2.病因性基因治療3.溶瘤腺病毒基因治療4.自殺基因治療等精品二.采用基因治療腫瘤的基本策略

目前國內外惡性腫瘤基因治療基91.免疫性基因治療

a.免疫性基因治療的對象:在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，免疫系統(tǒng)發(fā)育未完善（3-4歲）和免疫機能衰退（老年人的細胞免疫和體液免疫功能均衰退）而出現兩個腫瘤發(fā)生的年齡高峰期。胸腺發(fā)育不良（Digeoge’s）綜合癥或咽囊綜合癥是因胸腺發(fā)育不良而導致細胞免疫系統(tǒng)停留在未分化階段，這類患兒兼有細胞免疫缺陷和體液免疫缺陷的共濟失調，惡性腫瘤的發(fā)生率高達10%。由此說明細胞免疫和體液免疫功能的正?；蚧钚栽鰪娫诳箰盒阅[瘤的發(fā)生中是不可缺少的。精品1.免疫性基因治療

a.免疫性基因治療的對象:精品10選擇性IgA缺乏：患者血漿中IgA極低，而IgG、IgM與細胞免疫正常，組織中缺乏分泌IgA的漿細胞，約10%發(fā)生胃癌。當IgM缺乏時，約有8%患者發(fā)生惡性腫瘤以及淋巴網狀惡性疾病。研究發(fā)現當患者免疫球蛋白很低，抗體產生受到嚴重影響時，臨床上病人除了反復發(fā)生化膿性感染外，其患者發(fā)生惡性腫瘤率為8-10%，常見類型為淋巴網狀系統(tǒng)腫瘤（56%）和胃腸道上皮癌（26%）。Wiskott-Aldrich綜合癥：（嚴重混合型免疫缺陷綜合癥）以血小板減少出血，反復感染為臨床特征，早期細胞免疫完善，隨之淋巴細胞減少，體外淋轉反應缺乏，病兒很少活過青春期，約8-10%發(fā)生淋巴網狀系統(tǒng)腫瘤。精品選擇性IgA缺乏：患者血漿中IgA極11精品精品12

1.2免疫性基因治療的方法

研究發(fā)現在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中存在著機體免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞的免疫耐受狀態(tài)，而這種狀態(tài)可能源于腫瘤細胞本身的免疫性不強（如MHC表達不足），也可源于抗原遞全細胞（APC）不能提供足夠的共刺激信號（如B7）或者機體免疫因子分泌不足，在免疫性基因治療中通過以下三種方法糾正機體免疫的耐受狀態(tài)。精品

1.2免疫性基因治療的方法精品13

a.將某些細胞因子（如IL-2、TNF-a等）的基因轉染到機體免疫細胞（如TIL、LAK細胞及細胞毒淋巴細胞）中，大幅度提高機體免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞的識別和反應能力。使用細胞因子的基因治療在一定程度上克服了細胞因子注射療法需反復多次應用，副作用嚴重等缺點，療效有較大幅度提高?？梢赃@樣認為：腫瘤免疫細胞因子基因治療的開展，為惡性腫瘤患者帶來生的希望，其療效的穩(wěn)定，治療的簡單、安全，已成為腫瘤免疫基因治療研究的最常用方法而獨樹一幟，前景是令業(yè)內人士振奮的。精品a.將某些細胞因子（如IL-2、TNF-a等14

b.腫瘤細胞存在功能性MHCI類抗原和共刺激信號表達不足，將一些與免疫識別有關的基因（如HLA、B7等）轉染到體外培養(yǎng)的腫瘤細胞，經照射后再植入腫瘤患者體內;或者表達HLA-B7的病毒載體或質粒DNA與脂質復合物直接注射到瘤體內，以大幅度增強腫瘤細胞對機體免疫系統(tǒng)的免疫原性，誘導宿主的免疫反應而提高宿主的免疫監(jiān)視功能和對腫瘤細胞的攻擊能力，達到治愈率的提高具有積極作用。精品b.腫瘤細胞存在功能性MHCI類抗原和共刺15c.制備腫瘤KNA疫苗采用編碼特異抗原的基因直接注入人體，通過其在機體內的表達從而激發(fā)機體對編碼抗原的免疫反應。應用癌胚抗原（CEA）制備的DNA疫苗在實驗中顯示出一定效果，研究的前景可觀，進入臨床藥理實驗只是時間問題而毋庸置疑。精品c.制備腫瘤KNA疫苗精品162惡性腫瘤的病因性基因治療腫瘤病因性基因治療主要針對癌基因和抑癌基因，其治療策略是抑制、阻斷癌基因的表達或替代，恢復抑癌基因的功能。從而達到治療腫瘤的目的。精品2惡性腫瘤的病因性基因治療腫瘤病因性17

a.針對癌基因治療

采用反義寡核苷酸、核酸、三鏈結構寡核苷酸（Triplex-forming

oligonucleotides，TFO）抑制腫瘤細胞的基因轉錄，抑制癌基因的表達將有可能使腫瘤的基因表達調控回復到正常并使細胞重新分化或者誘發(fā)其凋亡（Apoptosis）。由于轉條是遺傳信息放大的過程，因此對癌基因的表達抑制來說更為有效，其治療前景是極為樂觀的。精品

a.針對癌基因治療

采用反義寡核苷酸、核18

b.針對抑癌基因治療

替代或恢復由于缺失或突變而丟失的抑癌基因（Tumorsuppressorgene）的正常功能是腫瘤病因性治療的手段而被世人所公認。利用抑癌基因治療腫瘤，在體外的實驗和實驗治療學中取得較好的療效；但在體內由于腫瘤體積較大；內環(huán)境又十分復雜，基因轉移率限制等因素的干擾，抑癌基因治療的確切療效不盡人意值得進一步研究。精品

b.針對抑癌基因治療

替代或恢復由于缺失193溶瘤腺病毒基因治療

a.溶瘤腺病毒的特點：①具有復制性，因此所需病毒顆粒較小；②能擴展至鄰邁腫瘤細胞，作用范圍廣泛；③溶瘤腺病毒可產生溶瘤和抗腫瘤免疫反應；④溶瘤腺病毒由于能夠復制故存在著不安全因素（轉移、擴散、活化）對腫瘤患者造成損害而失去可控性應引起注意和警惕。精品3溶瘤腺病毒基因治療

a.溶瘤腺病毒的特點：①具有復制20

b.溶瘤腺病毒的主要分類：①利用腫瘤特異表達的調控序例的表達：黑色素瘤表達酪氨酸酶，肝細胞癌表達甲胎蛋白（AFP），結直腸癌表達癌胚抗原（CEF）從而控制病毒復制。②利用腫瘤細胞生物學特性，如腺病毒復制時抵抗宿主細胞凋亡可能相關的EIB55K蛋白發(fā)生變異或缺失時，病毒復制的宿主細胞就會發(fā)生凋亡，從而使復制不能完成。代表為E1B55K剔除的d11520（onyx-015）腺病毒，它能夠在抑癌基因P53缺陷的腫瘤細胞中復制，從而達到裂鮮腫瘤細胞，同時又不損傷正常細胞的目的其特異的選擇性十分明顯。值得期待的是D11520和TH101病毒已進入III期臨床試驗。這時于癌癥的預防的作用將產生深遠的影響。精品

b.溶瘤腺病毒的主要分類：①利用腫瘤特異表達的調控序例的214自殺基因治療一些來自病毒或細菌的基因具有一些特殊的功能，其表達產物可將原先對哺乳動物細胞無毒的或毒性極低的前藥（Prodrug）轉換成毒性產物，導致這些細胞的凋亡。這類基因即稱為“自殺基因”（Suicidegene）由于自殺基因表達的產物多是能夠將前藥代謝為毒性產物的酶，故又稱為“前藥轉換酶基因”或“藥物敏感基因”。根據細胞自殺機制，將自殺基因作為治療性目的基因應用于腫瘤治療的研究稱為腫瘤的自殺基因方式。在臨床實踐中設計腫瘤細胞特異性自殺機制的基因治療方案對腫瘤治療具有重大的實際應用價值。精品4自殺基因治療一些來自病毒或細菌的基因具有一些特殊的功能22

a.自殺基因療法中酶和前藥

精品

a.自殺基因療法中酶和前藥精品23

b.自殺基因的特異性控制

要高效及特異性表達腫瘤自殺基因對腫瘤細胞的作用，自殺基因必須局現于腫瘤細胞以選擇性殺傷腫瘤細胞。一是利用免疫脂質體，受體介導法進行定向基因轉移或直接瘤內注射。二是利用腫瘤細胞生物學特性，通過逆轉錄病毒介導HSV-TK基因（I型單純皰疹病毒胸腺激酶）選擇性治療腦腫瘤。三是利用腫瘤特異表達的調控序例，如酪氨酸酶、甲胳蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA），在自殺基因的上游安插特異的轉條調節(jié)序例，可以實現自殺基因的特異表達，從而克服傳統(tǒng)化學治療藥物作選擇性問題和較為嚴重的細胞毒問題，使腫瘤治療有較大幅度的進展。精品

b.自殺基因的特異性控制精品24c.旁觀者效應（Bystandereffect）

用外源性自殺基因轉染腫瘤細胞后，未能轉染的腫瘤細胞可因鄰近的少數腫瘤細胞攜帶有自殺基因而被前體藥物殺傷。研究發(fā)現，旁觀者效應產生與自殺基因的種類、腫瘤細胞的類型及數量有關。TK/GCV系統(tǒng)的旁觀者效應是比較明顯和突出的。

精品c.旁觀者效應（Bystandereffect）精品25三.常采用的基因治療方法a.基因修飾腫瘤細胞“疫苗”療法

將某些細胞因子基因如IL-2、IL-4、TNF-α、INF-γ、GM-CSF等轉染腫瘤細胞，可使腫瘤細胞表達活性細胞因子。轉染細胞因子基因的腫瘤細胞基體內致瘤性喪失，耐動物預接腫這種轉基因腫瘤細胞后，該動物對再接種的同種腫瘤有抵抗作用。能分泌細胞因子的轉基因腫瘤細胞具有腫瘤疫苗作用，成為新型的腫瘤“疫苗”。這種腫瘤疫苗的作用機制是由于細胞因子表達后，一方面促進腫瘤表達特異抗原并誘發(fā)宿主抗腫瘤細胞毒性淋巴細胞(CTL)反應;另一方面分泌的細胞因子增強CTL和其他抗癌效應細胞的作用。精品三.常采用的基因治療方法a.基因修飾腫瘤細胞“疫苗”療法精26b.基因修飾TIL的過繼免疫療法將細胞因子導入TIL細胞中，活化后的TIL具有顯著抗自身腫瘤的作用，回輸體仙后有聚集于腫瘤部位的傾向，攜帶的抗癌免疫增強性細胞因子基因在腫瘤局部表達量增加，同時還避免全身大劑量投用IL-2、TNF-α等細胞因子所引起的嚴重毒副反應。目前已將TNF-α基因導入TIL，并在癌癥患者中進行臨床試驗。精品b.基因修飾TIL的過繼免疫療法精品27c.免疫增強基因療法

是將MHC1類抗原基因經體內導入腫瘤細胞內，增加其免疫原性，有效地激活機體抗癌免疫反應，降低腫瘤細胞的致瘤性。

d.原位修飾腫瘤免疫原性的基因療法直接在體內原位修飾腫瘤免疫原性，誘導腫瘤特異性細胞毒反應，同時腫瘤組織的CTL可產生一種“旁觀者效應”(bystandereffect),即CTL不僅可以殺傷轉導基因陽性腫瘤細胞，還可以殺傷轉導基因陰性腫瘤細胞，使受基因治療的瘤灶消退時，其他未治療的瘤灶也會消退。精品c.免疫增強基因療法精品28e.癌基因拮抗療法

腫瘤的發(fā)生與癌基因的激活和抑癌基因的失活有關，可以通地阻斷癌基因的表達或恢復抑癌基因的功能來抑制腫瘤的發(fā)展或恢復其正常表型。精品e.癌基因拮抗療法

腫瘤的發(fā)生與癌基因的29四.對未來腫瘤基因治療的展望目前，在基因導入載體方面出現了兩大主流：一是非病毒載體系統(tǒng)；二是病毒載體系統(tǒng)。a.非病毒載體主要包括改性的天然高分子和合成高分子兩大類。由于非病毒系統(tǒng)導入基因的效率相對較差，故在基因治療臨床試驗中的使用率不到20%；但非病毒載體的生物安全性較好，特別是靶向性的脂質體、靶向性的多聚物，以及脂質體/多聚物/DNA復合物等新產品的出現，結合電脈沖、超聲等新技術，明顯提高了導入效率和靶向性，是今后非病毒載體發(fā)展的重要方向。精品四.對未來腫瘤基因治療的展望目前，在基因導30病毒載體在基因治療領域的應用最為廣泛，大約70%的治療方案采用了病毒載體，包括各種逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒、痘病毒等。這些病毒載體有各自的特點，同時也存在各自的局限性。此外，還必須深入研究逆轉錄病毒誘發(fā)癌癥的機理，構建更為安全的載體。基于同源重組和基因定點糾錯原理，在DNA水平的原位修復(靶向性)是遺傳性疾病基因治療的理想措施。與基因治療載體系統(tǒng)相比，治療基因表達調控的研究和進展相對滯后，主要受制于載體的包裝容量。隨著人類基因組計劃的進展與完成，新的基因座控制區(qū)、隔離子、內含子、特異的啟動子、增強子等的發(fā)現與分離，必定帶動基因治療向前發(fā)展。精品病毒載體在基因治療領域的應用最為廣泛，大約731腫瘤基因治療的基本策略和常用方法一.腫瘤和基因治療的基本概念二.采用基因治療腫瘤的基本策略三.常采用的基因治療方法四.對未來腫瘤基因治療的展望

Themaker:

精品腫瘤基因治療的基本策略和常用方法一.腫瘤和基因治療的基本概念32一.腫瘤和基因治療的基本概念1.腫瘤（Tumor）

機體在各種致癌因素作用下，局部組織的某一個細胞在基因水平上失去對其生長的正常調控，導致其克隆性異常增生而形成的異常病變。學界一般將腫瘤分為良性和惡性兩大類。精品一.腫瘤和基因治療的基本概念1.腫瘤（Tumor）精品33精品精品342.基因治療指將外源正常基因導入靶細胞，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療目的。也就是將外源基因通過基因轉移技術將其插入病人的適當的受體細胞中，使外源基因制造的產物能治療某種疾病。從廣義說，基因治療還可包括從DNA水平采取的治療某些疾病的措施和新技術。精品2.基因治療精品35精品精品363.什么是腫瘤基因治療基因治療的經典概念指通過外源基因導人人體以糾正內在的基因缺陷的療法。腫瘤基因治療不再局限于“糾正基因缺陷”，系指將外源的正?；驅巳梭w，達到直接或間接抑制或殺傷腫瘤細胞的目的。基因是生命之本，是生物得以保持其連續(xù)性和穩(wěn)定性的物質基礎。隨著對惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展分子機制研究的不斷深人，出于對腫瘤是一種基因病的認識，加之惡性腫瘤的發(fā)病率和病死率較高，這使得惡性腫瘤的基因治療成為近年來基因治療研究的主要內容和熱點。精品3.什么是腫瘤基因治療精品374.與基因治療有關幾個概念a.基因毒癌發(fā)生發(fā)展的第一步是活化致癌物，改變細胞內的DNA，導致原癌基因的移位及擴增，這些特殊基因的翻譯，使帶有這些異常基因細胞的某些特性得以專一表達，一個特殊的化學物對一系列細胞有誘變及DNA修復作用者，稱為基因毒。目前人類已知的致癌物均為基因毒。b.原癌基因(前癌基因)細胞癌基因存在于細胞基因組內，激活前的細胞癌基因稱為原癌基因(前癌基因)，一旦原癌基因激活成癌基因便會引起細胞癌變，癌基因激活后，通過其表達產物改變細胞生長和分化規(guī)律，誘發(fā)細胞癌變。細胞癌基因被激活的途徑很多，如啟動子插人，基因重排和擴增，基因點突變和DNA分子中去甲基化等。精品4.與基因治療有關幾個概念精品38c.抑癌基因正常細胞中存在抑制腫瘤發(fā)生的基因，稱為抑癌基因。抑癌基因的存在從最初的一個發(fā)現中得到證實，即一個腫瘤細胞和一個正常細胞融合成的雜交細胞，往往不具有細胞表型，即使兩種不同的腫瘤細胞雜交，也可能是非腫瘤性的，只有正常的親代失去某些基因之后，其子代才會發(fā)生腫瘤。后來，通過限制性內切酶片段長度多態(tài)分析及分子克隆技術的研究證實，正常細胞中有一類對細胞增殖起負性調節(jié)作用的基因，如大腸癌中的p53基因，視網膜母細胞瘤和骨肉瘤中的Rb基因。這兩種基因也是目前被確認并研究最為深人的抑癌基因。如將正常的Rb基因轉人骨肉瘤細胞，Rb基因表達增高，細胞分裂幾乎完全抑制，將Rb基因轉人前列腺細胞，對正常細胞的生長無影響，但抑制了細胞的癌變，所以當這一類的抑癌基因發(fā)生丟失，失活或變異時，就會促進細胞惡變。精品c.抑癌基因正常細胞中存在抑制腫瘤發(fā)生39二.采用基因治療腫瘤的基本策略

目前國內外惡性腫瘤基因治療基本策略包括：1.免疫性基因治療2.病因性基因治療3.溶瘤腺病毒基因治療4.自殺基因治療等精品二.采用基因治療腫瘤的基本策略

目前國內外惡性腫瘤基因治療基401.免疫性基因治療

a.免疫性基因治療的對象:在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，免疫系統(tǒng)發(fā)育未完善（3-4歲）和免疫機能衰退（老年人的細胞免疫和體液免疫功能均衰退）而出現兩個腫瘤發(fā)生的年齡高峰期。胸腺發(fā)育不良（Digeoge’s）綜合癥或咽囊綜合癥是因胸腺發(fā)育不良而導致細胞免疫系統(tǒng)停留在未分化階段，這類患兒兼有細胞免疫缺陷和體液免疫缺陷的共濟失調，惡性腫瘤的發(fā)生率高達10%。由此說明細胞免疫和體液免疫功能的正常或活性增強在抗惡性腫瘤的發(fā)生中是不可缺少的。精品1.免疫性基因治療

a.免疫性基因治療的對象:精品41選擇性IgA缺乏：患者血漿中IgA極低，而IgG、IgM與細胞免疫正常，組織中缺乏分泌IgA的漿細胞，約10%發(fā)生胃癌。當IgM缺乏時，約有8%患者發(fā)生惡性腫瘤以及淋巴網狀惡性疾病。研究發(fā)現當患者免疫球蛋白很低，抗體產生受到嚴重影響時，臨床上病人除了反復發(fā)生化膿性感染外，其患者發(fā)生惡性腫瘤率為8-10%，常見類型為淋巴網狀系統(tǒng)腫瘤（56%）和胃腸道上皮癌（26%）。Wiskott-Aldrich綜合癥：（嚴重混合型免疫缺陷綜合癥）以血小板減少出血，反復感染為臨床特征，早期細胞免疫完善，隨之淋巴細胞減少，體外淋轉反應缺乏，病兒很少活過青春期，約8-10%發(fā)生淋巴網狀系統(tǒng)腫瘤。精品選擇性IgA缺乏：患者血漿中IgA極42精品精品43

1.2免疫性基因治療的方法

研究發(fā)現在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中存在著機體免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞的免疫耐受狀態(tài)，而這種狀態(tài)可能源于腫瘤細胞本身的免疫性不強（如MHC表達不足），也可源于抗原遞全細胞（APC）不能提供足夠的共刺激信號（如B7）或者機體免疫因子分泌不足，在免疫性基因治療中通過以下三種方法糾正機體免疫的耐受狀態(tài)。精品

1.2免疫性基因治療的方法精品44

a.將某些細胞因子（如IL-2、TNF-a等）的基因轉染到機體免疫細胞（如TIL、LAK細胞及細胞毒淋巴細胞）中，大幅度提高機體免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞的識別和反應能力。使用細胞因子的基因治療在一定程度上克服了細胞因子注射療法需反復多次應用，副作用嚴重等缺點，療效有較大幅度提高?？梢赃@樣認為：腫瘤免疫細胞因子基因治療的開展，為惡性腫瘤患者帶來生的希望，其療效的穩(wěn)定，治療的簡單、安全，已成為腫瘤免疫基因治療研究的最常用方法而獨樹一幟，前景是令業(yè)內人士振奮的。精品a.將某些細胞因子（如IL-2、TNF-a等45

b.腫瘤細胞存在功能性MHCI類抗原和共刺激信號表達不足，將一些與免疫識別有關的基因（如HLA、B7等）轉染到體外培養(yǎng)的腫瘤細胞，經照射后再植入腫瘤患者體內;或者表達HLA-B7的病毒載體或質粒DNA與脂質復合物直接注射到瘤體內，以大幅度增強腫瘤細胞對機體免疫系統(tǒng)的免疫原性，誘導宿主的免疫反應而提高宿主的免疫監(jiān)視功能和對腫瘤細胞的攻擊能力，達到治愈率的提高具有積極作用。精品b.腫瘤細胞存在功能性MHCI類抗原和共刺46c.制備腫瘤KNA疫苗采用編碼特異抗原的基因直接注入人體，通過其在機體內的表達從而激發(fā)機體對編碼抗原的免疫反應。應用癌胚抗原（CEA）制備的DNA疫苗在實驗中顯示出一定效果，研究的前景可觀，進入臨床藥理實驗只是時間問題而毋庸置疑。精品c.制備腫瘤KNA疫苗精品472惡性腫瘤的病因性基因治療腫瘤病因性基因治療主要針對癌基因和抑癌基因，其治療策略是抑制、阻斷癌基因的表達或替代，恢復抑癌基因的功能。從而達到治療腫瘤的目的。精品2惡性腫瘤的病因性基因治療腫瘤病因性48

a.針對癌基因治療

采用反義寡核苷酸、核酸、三鏈結構寡核苷酸（Triplex-forming

oligonucleotides，TFO）抑制腫瘤細胞的基因轉錄，抑制癌基因的表達將有可能使腫瘤的基因表達調控回復到正常并使細胞重新分化或者誘發(fā)其凋亡（Apoptosis）。由于轉條是遺傳信息放大的過程，因此對癌基因的表達抑制來說更為有效，其治療前景是極為樂觀的。精品

a.針對癌基因治療

采用反義寡核苷酸、核49

b.針對抑癌基因治療

替代或恢復由于缺失或突變而丟失的抑癌基因（Tumorsuppressorgene）的正常功能是腫瘤病因性治療的手段而被世人所公認。利用抑癌基因治療腫瘤，在體外的實驗和實驗治療學中取得較好的療效；但在體內由于腫瘤體積較大；內環(huán)境又十分復雜，基因轉移率限制等因素的干擾，抑癌基因治療的確切療效不盡人意值得進一步研究。精品

b.針對抑癌基因治療

替代或恢復由于缺失503溶瘤腺病毒基因治療

a.溶瘤腺病毒的特點：①具有復制性，因此所需病毒顆粒較小；②能擴展至鄰邁腫瘤細胞，作用范圍廣泛；③溶瘤腺病毒可產生溶瘤和抗腫瘤免疫反應；④溶瘤腺病毒由于能夠復制故存在著不安全因素（轉移、擴散、活化）對腫瘤患者造成損害而失去可控性應引起注意和警惕。精品3溶瘤腺病毒基因治療

a.溶瘤腺病毒的特點：①具有復制51

b.溶瘤腺病毒的主要分類：①利用腫瘤特異表達的調控序例的表達：黑色素瘤表達酪氨酸酶，肝細胞癌表達甲胎蛋白（AFP），結直腸癌表達癌胚抗原（CEF）從而控制病毒復制。②利用腫瘤細胞生物學特性，如腺病毒復制時抵抗宿主細胞凋亡可能相關的EIB55K蛋白發(fā)生變異或缺失時，病毒復制的宿主細胞就會發(fā)生凋亡，從而使復制不能完成。代表為E1B55K剔除的d11520（onyx-015）腺病毒，它能夠在抑癌基因P53缺陷的腫瘤細胞中復制，從而達到裂鮮腫瘤細胞，同時又不損傷正常細胞的目的其特異的選擇性十分明顯。值得期待的是D11520和TH101病毒已進入III期臨床試驗。這時于癌癥的預防的作用將產生深遠的影響。精品

b.溶瘤腺病毒的主要分類：①利用腫瘤特異表達的調控序例的524自殺基因治療一些來自病毒或細菌的基因具有一些特殊的功能，其表達產物可將原先對哺乳動物細胞無毒的或毒性極低的前藥（Prodrug）轉換成毒性產物，導致這些細胞的凋亡。這類基因即稱為“自殺基因”（Suicidegene）由于自殺基因表達的產物多是能夠將前藥代謝為毒性產物的酶，故又稱為“前藥轉換酶基因”或“藥物敏感基因”。根據細胞自殺機制，將自殺基因作為治療性目的基因應用于腫瘤治療的研究稱為腫瘤的自殺基因方式。在臨床實踐中設計腫瘤細胞特異性自殺機制的基因治療方案對腫瘤治療具有重大的實際應用價值。精品4自殺基因治療一些來自病毒或細菌的基因具有一些特殊的功能53

a.自殺基因療法中酶和前藥

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a.自殺基因療法中酶和前藥精品54

b.自殺基因的特異性控制

要高效及特異性表達腫瘤自殺基因對腫瘤細胞的作用，自殺基因必須局現于腫瘤細胞以選擇性殺傷腫瘤細胞。一是利用免疫脂質體，受體介導法進行定向基因轉移或直接瘤內注射。二是利用腫瘤細胞生物學特性，通過逆轉錄病毒介導HSV-TK基因（I型單純皰疹病毒胸腺激酶）選擇性治療腦腫瘤。三是利用腫瘤特異表達的調控序例，如酪氨酸酶、甲胳蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA），在自殺基因的上游安插特異的轉條調節(jié)序例，可以實現自殺基因的特異表達，從而克服傳統(tǒng)化學治療藥物作選擇性問題和較為嚴重的細胞毒問題，使腫瘤治療有較大幅度的進展。精品

b.自殺基因的特異性控制精品55c.旁觀者效應（Bystandereffect）

用外源性自殺基因轉染腫瘤細胞后，未能轉染的腫瘤細胞可因鄰近的少數腫瘤細胞攜帶有自殺基因而被前體藥物殺傷。研究發(fā)現，旁觀者效應產生與自殺基因的種類、腫瘤細胞的類型及數量有關。TK/GCV系統(tǒng)的旁觀者效應是比較明顯和突出的。

精品c.旁觀者效應（Bystandereffect）精品56三.常采用的基因治療方法a.基因修飾腫瘤細胞“疫苗”療法

將某些細胞因子基因如IL-2、IL-4、TNF-α、INF-γ、GM-CSF等轉染腫瘤細胞，可使腫瘤細胞表達活性細胞因子。轉染細胞因子基因的腫瘤細胞基體內致瘤性喪失，耐動物預接腫這種轉基因腫瘤細胞后，該動物對再接種的同種腫瘤有抵抗作用。能分泌細胞因子的轉基因腫瘤細胞具有腫瘤疫苗作用，成為新型的腫瘤“疫苗”。這種腫瘤疫苗的作用機制是由于細胞因子表達后，