大孔樹脂純化川芎總提物工藝研究課件

大孔樹脂純化川芎總提物工藝研究基金項(xiàng)目：國(guó)家科技部“十一五”支撐計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2006BAI06A14-10）一.大孔吸附樹脂在中藥有效成分分離純化中的應(yīng)用

大孔樹脂是20世紀(jì)70年代末發(fā)展起來(lái)的一類有較好吸附性能的有機(jī)高聚物吸附劑，不溶于酸、堿及有機(jī)溶劑，對(duì)氧、熱、化學(xué)試劑穩(wěn)定及機(jī)械強(qiáng)度高的有機(jī)高分子聚合物，具有良好的吸附性能?，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于中藥有效成分的分離純化。

作為一種新型分離純化方法，選擇不同類型樹脂，可以對(duì)中藥中的多種有效成分達(dá)到富集純化作用。本研究采用大孔樹脂純化川芎總提物，以阿魏酸為指標(biāo)，通過(guò)樹脂篩選，系統(tǒng)研究了中極性大孔樹脂DM301對(duì)川芎乙醇提取物中阿魏酸的純化作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該樹脂能有效富集純化阿魏酸，精致度高。

川芎總提物（Ligusticumwallichiiauct.Sin.Non.Franch）。味苦、辛；氣味濃香稍有麻舌感，微回甜。主要成分為生物堿和酚酸類成分。有活血行氣，通經(jīng)活絡(luò)，祛風(fēng)止痛作用。川芎總提物經(jīng)文獻(xiàn)報(bào)道，生產(chǎn)工藝主要為乙醇提取，大孔樹脂純化。本研究主要就樹脂純化部分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，確定純化工藝。

三.研究?jī)?nèi)容1.樹脂的預(yù)處理及裝柱取大孔樹脂用95%乙醇浸泡24h，乙醇濕法裝柱，用乙醇在柱上流動(dòng)清洗，不時(shí)檢查流出的乙醇液，至乙醇液與水混合(1:5)不呈白色渾濁為止，使用前以大量蒸餾水洗去乙醇至無(wú)醇味。2.不同型號(hào)大孔吸附樹脂吸附量和解吸率的比較

量取各型樹脂（干重約1g）置150mL具塞錐形瓶中，分別精密加入川芎提取液90mL(經(jīng)測(cè)定阿魏酸濃度為0.29mg·mL-1，約含生藥量0.25g·mL-1)靜置24h，充分吸附后，濾過(guò)。測(cè)定濾液中剩余阿魏酸量。將吸附平衡后的樹脂轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，用95%的乙醇解吸，測(cè)定解吸液中阿魏酸的含量。計(jì)算解吸率。

表1各類大孔吸附樹脂物理性能

樹脂型號(hào)廠名極性比表面（㎡/g）平均孔徑（nm）D101天津農(nóng)藥股份有限公司樹酯分工司非極性40030DA201天津農(nóng)藥股份有限公司樹酯分工司極性15030DM301天津農(nóng)藥股份有限公司樹酯分工司中極性33019D140晨光化工研究院弱極性500~60095AB-8天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所弱極性480-52013-14樹脂型號(hào)吸附量（mg）解析率（％）D10110.3190.74DA20111.1484.78DM30112.0792.19D14010.9789.64AB-812.0184.62表2各型號(hào)樹脂對(duì)阿魏酸的吸附量和解吸率結(jié)果可以看出，綜合吸附量和解吸率兩方面的指標(biāo)，確定DM301樹脂適用于川芎中酚酸類成分的分離純化。3.2上樣藥液生藥濃度的確定

表4上樣濃度考察結(jié)果結(jié)果表明,上樣藥液生藥濃度為0.2g·ml-1時(shí)，DM301樹脂對(duì)阿魏酸的比吸附量最大。故上樣濃度以0.2g藥材?ml-1為宜。生藥濃度（g/ml）上樣體積(ml)上樣液阿魏酸的量(mg)未吸附阿魏酸量(mg)吸附量(mg)比吸附量(mg/g)0.2518054.6419.1535.498.870.2022554.6417.0337.619.400.1530054.6419.5835.068.760.1045054.6421.3633.288.320.0590054.6423.0431.607.904.DM301型樹脂純化工藝動(dòng)態(tài)解析階段

4.1洗脫劑的選擇

按上述確定的工藝條件，取4份上樣液通過(guò)4根裝有DM301型樹脂柱進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，先用蒸餾水洗至Molish反應(yīng)成陰性，再分別用20％乙醇，30％乙醇，50％乙醇，95％乙醇洗脫，收集洗脫液測(cè)定阿魏酸量及固形物量，計(jì)算阿魏酸含量及洗脫率。4.2洗脫溶媒用量的確定

取一定量上樣液依法上柱，先用蒸餾水洗至Molish反應(yīng)成陰性，再用30%乙醇10BV洗脫，以1BV/份收集流份。測(cè)定各流份中阿魏酸含量，計(jì)算洗脫率與固形物量，繪制洗脫率與收集份數(shù)曲線圖

表6洗脫試驗(yàn)數(shù)據(jù)洗脫溶媒溶劑用量(收集份數(shù))洗脫液中阿魏酸量(mg)洗脫液中固形物量(mg)洗脫率(%)蒸餾水6BV0.37462.321.7530%乙醇洗脫1BV(1)1.0612.525.012BV(2)3.4353.3515.803BV(3)5.6575.4126.724BV(4)2.2749.8110.745BV(5)0.8619.314.076BV(6)0.5710.402.707BV(7)0.415.211.948BV(8)0.303.071.429BV(9)0.171.200.8010BV(10)0.081.07-0.38圖2洗脫率與收集份數(shù)曲線圖

由測(cè)定結(jié)果和洗脫曲線可知：在第5份即洗脫劑用量為5BV時(shí)，能將大部分阿魏酸解吸下來(lái)，故確定洗脫劑用量為4倍量樹脂柱體積。5.樹脂重復(fù)使用次數(shù)的考察

按上述確定的吸附、洗脫條件,取樣品溶液進(jìn)行上柱、吸附和洗脫計(jì)算，在同一根柱子上重復(fù)操作5次，分別計(jì)算阿魏酸比吸附量，結(jié)果見下表7。

表7樹脂重復(fù)使用后阿魏酸比吸附量的變化

由表可知，隨著大孔樹脂吸附柱使用次數(shù)的增加，樹脂對(duì)阿魏酸吸附量明顯下降，樹脂重復(fù)使用3次后，阿魏酸比吸附量下降約50％需要再生才可繼續(xù)使用。次數(shù)12345阿魏酸比吸附量（mg·g-1）6.785.965.043.242.116.工藝驗(yàn)證

精密吸取上樣溶液3份，上柱洗脫。測(cè)定各流份中阿魏酸含量、固形物量，算洗脫率及精制度。

結(jié)果表明：川芎提取物經(jīng)大孔樹脂純化后有效地降低了固形物的含量，提高了阿魏酸的含量，阿魏酸的平均精制度達(dá)883.35％，該工藝穩(wěn)定、可行。表8工藝參數(shù)驗(yàn)證性試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)指標(biāo)試驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)2試驗(yàn)3平均結(jié)果RSD(%)上樣液中阿魏酸量(mg)21.0521.6821.3621.36水洗脫部位阿魏酸量(mg)0.410.490.380.43水洗脫部位固形物量(mg)465.07437.12492.54464.9130%乙醇洗脫部位阿魏酸量(mg)11.3410.8611.0311.0830%乙醇洗脫部位固形物量(mg)185.32195.91188.64189.9730%乙醇洗脫部位洗脫率(%)54.9451.2552.5752.94阿魏酸精制度(%)874.79893.34881.92883.351.05四結(jié)論及討論

川芎所含化學(xué)成分復(fù)雜，有酚酸類、生物堿、多糖、揮發(fā)油等。酚酸類成分含量少，富集、純化存在一定困難。川芎中酚酸性成分主要有阿魏酸、瑟丹酸、香草醛、香草酸、咖啡酸等，本研究以阿魏酸為指標(biāo)考察了對(duì)此類成分的富集純化，結(jié)果滿意。本研究采用