microRNA論文：子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中microRNA差異表達(dá)譜分析及其靶基因預(yù)測的研究

microRNA論文：子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中microRNA差異表達(dá)譜分析及其靶基因預(yù)測的研究【中文摘要】與子宮內(nèi)膜癌是累及女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,在很多歐美國家,其發(fā)病率居女性生殖系統(tǒng)癌癥的首位。而在我國,子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率也僅次于子宮頸癌,居女性生殖系統(tǒng)癌癥的第二位，且有逐年上升趨勢。子宮內(nèi)膜癌中有85%-90%為I型子宮內(nèi)膜樣腺癌(雌激素依賴型),嚴(yán)重危害女性健康。目前認(rèn)為子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生可能與長期持續(xù)的雌激素刺激或者肥胖、高血壓、糖尿病、不孕等因素相關(guān)，但其機(jī)制尚不明確。因此對子宮內(nèi)膜癌尤其是內(nèi)膜樣腺癌發(fā)病機(jī)制和新診斷方法的探討與研究十分必要。microRNA(MicroRNA)是一種由22-25個核苷酸組成的非編碼單鏈小RNA,目前認(rèn)為在哺乳動物體內(nèi)microRNA與靶基因作用，使靶基因的mRNA在轉(zhuǎn)錄后的翻譯過程中被抑制或直接降解導(dǎo)致靶基因的蛋白表達(dá)水平降低,從而間接參與到包括生長發(fā)育、造血、器官形成、細(xì)胞增殖、凋亡乃至腫瘤發(fā)生的過程中。近些年來,很多研究圍繞著microRNA與各種腫瘤間的關(guān)系展開而針對子宮內(nèi)膜樣腺癌中microRNA變化的研究目前尚不多。本研究通過篩查子宮內(nèi)膜樣腺癌組織與正常對照組子宮內(nèi)膜組織中microRNA的表達(dá)差異,同時結(jié)合已有資料對表達(dá)差異明顯的microRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測，并使用微陣預(yù)測分析(PAM)工具初步預(yù)測一組可以用于區(qū)分不同病理分化子宮內(nèi)膜樣腺癌的microRNA。進(jìn)而從分子學(xué)水平探討子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)病機(jī)制。方法：1?使用丹麥ExiqonTM公司microRNA芯片檢測出子宮內(nèi)膜樣腺癌組織和正常內(nèi)膜組織microRNA表達(dá)譜，篩選出表達(dá)差異明顯的microRNA。2.挑選出上調(diào)及下調(diào)明顯的microRNA各1例使用實(shí)時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(realtimeRT-PCR)進(jìn)行驗(yàn)證。3.結(jié)合以往研究中與子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜癌關(guān)系密切的基因結(jié)果，使用三種不同的預(yù)測軟件對本實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)明顯差異表達(dá)的microRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測，并統(tǒng)合結(jié)果。4.使用微陣預(yù)測分析工具處理高、中、低分化子宮內(nèi)膜樣腺癌及正常內(nèi)膜中表達(dá)的microRNA數(shù)據(jù),初步得出一組能夠區(qū)分以上四組樣本的microRNA標(biāo)記。結(jié)果：1.在芯片覆蓋的847條人microRNA中，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織相較于正常內(nèi)膜組織出現(xiàn)18個明顯上調(diào),31個明顯下調(diào)的microRNA。2.包括PTEN、FOX家族等基因在內(nèi)的51種基因被認(rèn)為是上述差異表達(dá)的microRNA的預(yù)測靶基因。3.Mir-200c等9種microRNA是一組可用于鑒別不同分化子宮內(nèi)膜樣腺癌的生物標(biāo)記microRNA。結(jié)論：1?相較于正常內(nèi)膜組織多種microRNA在子宮內(nèi)膜樣腺癌中出現(xiàn)明顯表達(dá)差異。2.mir-205等microRNA在子宮內(nèi)膜樣腺癌中表現(xiàn)出明顯的變化趨勢可能是影響子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵microRNA。3.mir-205、mir-200家族、mir-183家族等多種成簇排列的microRNA家族在子宮內(nèi)膜樣腺癌中出現(xiàn)集體性變化。4.PTEN、FOX等多種基因被預(yù)測為子宮內(nèi)膜樣腺癌中差異表達(dá)microRNA的靶基因,microRNA可能通過調(diào)控這些靶基因從而影響子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展過程?！居⑽恼緽ackgroundand:Endometrialcarcinomaisoneofthemostcommongynecologicalmalignanttumors.TheincidenceofendometrialcarcinomainAmericaandEuropeancountriesranksfirstinthegynecologicmalignancy.InChina,thisdiseaseisthesecondcommongynecologicmalignancyandranksaftercervicalcancer.Anditsincidenceisincreasingyearbyyear.Asadiseasedoesgreatharmtowomen'shealth,about85%-90%ofallendometrialcarcinomasareestrogen-relatedendometrialcancer(typeI).AndmostoftypeIendomtetrialcancercasesareendometrioidendometrialadenocarcinoma(EEC).Excessivestimulationofestrogen,obesity,hypertension,diabetes,infertilityandotherfactorsareconsideredrelatedtothetumorigenesisofendometrialcancercurrently,butthemechanismisunclear.So,itismeaningfultoexplorethepathogenesisofendometrialcancer,especiallyEEC.MicroRNAisaclassofnon-proteincoding,single-strandedsmallRNAsof22-25nucleotideslength.Theycanregulatemultipletargetgenes.Inmammals,targetgeneexpressionisrepressedbypost-transcriptionally.Andittakespartinmanyphysiologicalprocessesincludingbodygrowthanddevelopment,hematopoiesis,organformation,cellproliferation,apoptosiseventumorigenesis.Inrecentyears,therearemanystudiesontherelationshipbetweenmicroRNAandtumorgenesis.ButfewofthemreferredEEC.Inourstudy,differentialexpressionmicroRNAsprofilewasdetectedfromEECcomparedwithnormalendometrium.ThentargetsofthesedifferentialexpressionmicroRNAswerepredictedthroughwebdatabases.Predictionanalysisformicroarray(PAM)wasusedforthefirsttimetopredictagroupofmicroRNAbiomarkers.ThesemarkerscouldbeusedtoidentifydifferentdifferentiationofEEC.Methods:MicroRNAmicroarraywasusedtodetectthedifferentialexpressionmicroRNAs,andrealtimeRT-PCRwasusedtoverifytheresults.ThentargetsofthesemicroRNAsinEECwerepredictedthroughwebdatabases.PAMwasusedtopredictagroupofmicroRNAbiomarkers,whichcouldbeusedtoidentifydifferentiationofEEC.Results:18obviouslyup-regulatedand31obviouslydown-regulatedmicroRNAsintumorgroupwereidentified.51geneswerepredictedastargetsofthesedysregulatedmicroRNAs.Mir-200candother8microRNAswereconsideredasmembersofthebiomarkersthatcouldidentifydifferentiation.ManymembersfromsamemicroRNAfamilies(microRNAcluster)changedatthesametimeinEEC.Conclusion:SeveralmicroRNAswerefoundhavespecialchangesinEECandthesemicroRNAsandtheirpredictedtargetsmightplayanimportantroleinEEC.TherewerealotofcollectivemicroRNAsfromthefamilychangedtogetherinEECinourstudy.Theycouldco-expressthesameroleintumorigenesis.ThepredictedtargetsofdysregulatedmicroRNAinEECjustlikePTENandFOXmightberegulatedbymicroRNAandtookpartintumorigenesis.【關(guān)鍵詞】icroRNA子宮內(nèi)膜樣腺癌microRNA芯片靶基因微陣預(yù)測分析【英文關(guān)鍵詞】MicroRNAEndometrioidendometrialadenocarcinomaMicroRNAmicroarrayTargetgenePredictionanalysisformicroarray【目錄】子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中microRNA差異表達(dá)譜分析及其靶基因預(yù)測的研究中文摘要6-8ABSTRACT8-9英文縮寫詞表