Nanodrop中文操作手冊(cè)

PAGEPAGE37Nanodrop2000/2000C分光光度計(jì)V1.0用戶手冊(cè)基因有限公司儀器應(yīng)用技術(shù)支持親愛的用戶，您好！非常感謝您選購(gòu)我公司代理的儀器。我們將竭誠(chéng)為您提供優(yōu)質(zhì)的售后服務(wù)及免費(fèi)的專業(yè)應(yīng)用培訓(xùn)。為了更好地進(jìn)行儀器的應(yīng)用培訓(xùn)，我們根據(jù)您所選購(gòu)的儀器特點(diǎn)，將需要您配合準(zhǔn)備的工作敬告如下：應(yīng)用培訓(xùn)內(nèi)容：儀器操作培訓(xùn)和軟件應(yīng)用培訓(xùn)。儀器操作培訓(xùn)包括：儀器的操作、維護(hù)和儀器使用注意事項(xiàng)。軟件應(yīng)用培訓(xùn)包括：用戶本次所購(gòu)買的同儀器配套的所有軟件的軟件應(yīng)用培訓(xùn)。培訓(xùn)時(shí)間：儀器正式安裝調(diào)試后，由安裝工程師現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)儀器操作。應(yīng)用培訓(xùn)中所需準(zhǔn)備的試劑、耗材和儀器均需由用戶提供，并在系統(tǒng)培訓(xùn)開始前準(zhǔn)備好。用戶簽收售后服務(wù)工作報(bào)告后，基因公司正式的系統(tǒng)培訓(xùn)內(nèi)容即完成。您以后在使用的過程中有任何疑問都可以向我們咨詢，我們非常樂意為您們解決應(yīng)用上遇到的問題。在儀器的使用過程中，無論遇到您認(rèn)為多么微小或繁瑣的問題，請(qǐng)您及時(shí)和我們聯(lián)系，一個(gè)及時(shí)的通知能節(jié)約您的時(shí)間，也能幫助我們更好的了解儀器和軟件。聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)您提供：儀器型號(hào)、軟件名稱，版本、錯(cuò)誤代碼、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒉僮飨到y(tǒng)（98/2k/xp/NT）、維修歷史等相關(guān)資料。本守則提的信息僅供參考，本守則包含的所有信息應(yīng)該是正確和完整的。如果對(duì)本守則中的描述有疑問，請(qǐng)參考廠家的英文操作說明。如果由于您的不正當(dāng)使用而對(duì)儀器造成損壞或者導(dǎo)致儀器的性能損傷，本公司將不會(huì)對(duì)此負(fù)責(zé)。

儀器介紹儀器描述ThermoScientificNanoDrop2000/2000C分光光度計(jì)可以檢測(cè)0.5-2ul的樣本，而且檢測(cè)是非常高的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。ND2000C分光光度計(jì)不僅提供了NanoDrop樣品保留專利技術(shù)的便利性，也可以使用傳統(tǒng)的比色皿來進(jìn)行樣本檢測(cè)。樣本保留系統(tǒng)應(yīng)用了表面張力來把樣本保留在兩根檢測(cè)光纖中間，這使得儀器可以檢測(cè)較高濃度的樣本而不用稀釋。應(yīng)用這個(gè)技術(shù)，全波長(zhǎng)（190－840nm）NanoDrop2000/2000C分光光度計(jì)檢測(cè)樣本的最高濃度是標(biāo)準(zhǔn)比色皿的200倍。儀器規(guī)格NanoDrop2000/2000C—基座模式儀器類型：分光光度計(jì)最小樣品量：0.5ul波長(zhǎng)：1mm（可以自動(dòng)調(diào)整到0.05mm）光源：氙閃爍燈檢測(cè)器類型：2048—象素線型硅CCD陣列波長(zhǎng)范圍：190－840nm波長(zhǎng)準(zhǔn)確性：±1nm光譜分辨率：≤1.8nm（FWHM@Hg253.7nm）吸收光精確性：0.002吸光值（1mm光程）吸收光準(zhǔn)確性：±2％（257nm波長(zhǎng)下，0.76個(gè)吸光值）吸光值范圍：0.02—300（等同于10mm光程時(shí)）檢測(cè)極限：2ng/uldsDNA最大檢測(cè)濃度：15,000ng/ul（dsDNA）檢測(cè)時(shí)間：<5秒儀器占地面積;14cm×20cm重量：2kg樣本基座材料：303不銹鋼以及石英光纖工作電壓;12V工作功率：12－18W（最大30W）軟件兼容性;WindowsXP和Vista（32bit）NanoDrop2000C—比色皿模式光束高度：8.5mm加熱：37±0.5℃攪拌：150－850RPM光程：10，5，2，1mm檢測(cè)極限：0.4ng/uldsDNA最大檢測(cè)濃度：750ng/uldsDNA檢測(cè)時(shí)間：<3秒重量：2.1kg樣品保留基座檢測(cè)用移液器加1－2ul樣品到檢測(cè)基座上，對(duì)于高濃度的核酸和蛋白A280檢測(cè)，最少可以使用0.5ul的樣本。在基座上包埋一根光纖（接受光纖），把待檢測(cè)樣本加到檢測(cè)基座上，第二根光纖（光源光纖）放下來與液體樣本接觸，在兩根光纖末端形成液柱。由一個(gè)脈沖氙燈作為光源并且使用一個(gè)線性CCD陣列來檢測(cè)通過液體的光信號(hào)。儀器由一個(gè)裝由Nanodrop軟件的電腦控制，所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)都以workbook（*.twbk）文件形式保存在電腦中。基座檢測(cè)需要的樣本量雖然基座檢測(cè)時(shí)樣本的量不是特別關(guān)鍵，但是必須保證兩根光纖之間形成完整的液柱，這樣才能保證兩根光纖之間形成樣本液橋。決定液滴表面張力的主要因素是溶液中水分子的氫鍵結(jié)合力。通常情況下，溶液中所有的溶質(zhì)（包括：蛋白，DNA，RNA，鹽離子，去垢劑分子）都會(huì)降低表面張力，因?yàn)檫@些分子能夠和水分子的氫鍵產(chǎn)生作用。雖然一般情況下1ul的樣本就足可以檢測(cè)了，但對(duì)于那些表面張力比較小的樣本最好使用2ul樣本來檢測(cè)?，F(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)表明下列樣本的用量足夠得到準(zhǔn)確重復(fù)性高的檢測(cè)結(jié)果：核酸水溶液：1ul純蛋白：2ulBradford，BCA，Lowry或者蛋白Pierce660nm試驗(yàn)：2ul微生物細(xì)胞懸浮液：2ul最好使用精確的移液器（0－2ul）和tip頭來取樣來保證取樣的準(zhǔn)確。低精確度的移液器（0－10ul或者更大的）很難準(zhǔn)確的加1ul樣本到檢測(cè)基座上。如果用戶對(duì)樣本的特征或者移液器精確性不太確認(rèn)，最好使用2ul樣本來做檢測(cè)?；臼褂锰饦悠繁?，把樣品加到檢測(cè)基座上。放下樣品臂，使用電腦上的軟件開始吸光值檢測(cè)。在上下兩個(gè)光纖之間會(huì)自動(dòng)拉出一個(gè)樣品柱，然后進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)檢測(cè)完成后，抬起樣品臂，并用干凈的無塵紙把上下基座上的樣品擦干凈。這樣擦拭樣品就可以避免樣品在基座上的殘留。比色皿檢測(cè)Nanodrop2000C可以檢測(cè)最高48mm的10mm光程的比色皿。當(dāng)使用微量，半微量或者超微量的比色皿時(shí)，我們建議使用周邊不透明的比色皿，不透明的比色皿保證了光穿過樣本后全部到達(dá)檢測(cè)器。而透明的比色皿會(huì)讓那些沒有透過樣本的光也到達(dá)檢測(cè)器，這樣會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)特別是低濃度樣品的檢測(cè)不準(zhǔn)確。當(dāng)檢測(cè)的波長(zhǎng)為紫外區(qū)域時(shí)（<340nm），要使用石英白色皿，這樣才能透過紫外光。雖然有一些制造商提供紫外透過的一次性塑料比色皿，但是即使質(zhì)量最好的塑料比色皿也不能讓低于220nm以下波長(zhǎng)的紫外光透過，而大部分玻璃和塑料比色皿是完全紫外非透過性的。一般單光束的分光光度計(jì)都會(huì)推薦相配的比色皿，而許多比色皿生產(chǎn)廠家都有嚴(yán)格的質(zhì)控來保證比色皿的性能而不用在換比色皿時(shí)需要校準(zhǔn)，這些比色皿都可以用在Nanodrop2000C上。比色皿檢測(cè)樣品量在樣品檢測(cè)時(shí)必須保證比色皿中的樣品量足夠，能夠讓光線完整穿過樣品。2mm的光速?gòu)谋壬蟮撞恳陨?.5mm的位置穿過，請(qǐng)參考比色皿生產(chǎn)廠家的建議來確定需要的樣品體積。比色皿檢測(cè)基本操作把樣品加到比色皿中，要保證加入的樣品量足夠，要蓋過光束。抬器樣品臂，把比色皿查入到儀器中，插入比色皿時(shí)要注意儀器上面的光路的指向的方向。在做比色皿檢測(cè)時(shí)樣品臂必須放下來。使用電腦上的軟件對(duì)儀器進(jìn)行初始話。當(dāng)檢測(cè)完成后，移出比色皿，倒出樣品，清洗干凈比色皿?？瞻讓?duì)照和吸收光計(jì)算當(dāng)Nanodrop2000/2000C分光光度計(jì)做好空白對(duì)照后，儀器會(huì)自動(dòng)記錄空白參照液的光譜結(jié)果并保存起來作為波長(zhǎng)的光強(qiáng)度參比值。當(dāng)進(jìn)行樣品檢測(cè)時(shí)，透過樣品的光強(qiáng)度將被記錄下來。樣品的透過光強(qiáng)度和空白對(duì)照的透過光強(qiáng)度按下列公式來計(jì)算樣品吸光值：這樣，可以通過樣本和空白對(duì)照的透過光強(qiáng)度來計(jì)算特定波長(zhǎng)下的吸光值。通過Beer－Lamber定律來確定樣品濃度和吸光值之間的關(guān)系：

A＝吸光值（A）ε＝波長(zhǎng)依賴的摩爾消光系數(shù)（單位L/mol*cm）b＝光程（單位cm）c＝樣品濃度（單位mol/L）參比溶液，或者空白溶液，通常是那些融解靶向分子的溶劑，這個(gè)溶劑要和樣品溶液具有相同的pH值和離子強(qiáng)度?；鶛z測(cè)空白循環(huán)我們建議把空白對(duì)照當(dāng)成樣品來檢測(cè)，這樣可以確認(rèn)儀器性能完好并且基座上沒有樣品殘留，按下列操作來運(yùn)行空白循環(huán)：軟件中打開將進(jìn)行的操作模式，把空白對(duì)照加到基座上，并把樣品臂放下。點(diǎn)擊Blank來進(jìn)行空白對(duì)照檢測(cè)并保存參比圖譜。重新加空白對(duì)照到基座上，把它當(dāng)成樣品一樣來檢測(cè)，點(diǎn)擊Measure來進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果應(yīng)該是差不多為一水平線，吸光值變化應(yīng)不超過0.04A（10mm光程）擦去上下基座上的液體，重生進(jìn)行上面的操作，直到檢測(cè)光譜圖的變化不超過0.04A（10mm光程）。雖然不需要在每個(gè)樣品之間進(jìn)行空白校準(zhǔn)，但我們建議在檢測(cè)多個(gè)樣品時(shí)，最好每30min進(jìn)行一次空白校準(zhǔn)。30min后，最后一次做空白檢測(cè)的時(shí)間將顯示在軟件下面的狀態(tài)欄上。熒光染料在進(jìn)行MicroArray和Protein&Labels檢測(cè)時(shí)，軟件使用Beer－Lambert定律來進(jìn)行熒光染料計(jì)算。用戶可以使用Dye/Chrom來編寫新的新的染料。下表是軟件中保存的染料的參數(shù)：

2．軟件電腦配置MicrosoftWindowsXP或者Vista（32bit）操作系統(tǒng)1.5GHz或者更高速的處理器CDROM光驅(qū)1GB或者更高的內(nèi)存（Vista系統(tǒng)需要2GB）40MB硬盤空間具有USB端口（儀器通過USB與電腦連接）軟件安裝系統(tǒng)軟件必須在儀器連接到電腦上之前安裝好，安裝軟件時(shí)必須使用管理員用戶進(jìn)入電腦。按下列步驟來正確的安裝軟件：關(guān)閉所有程序，并把USB線拔出。把軟件光盤插入到驅(qū)動(dòng)器中，軟件的安裝menu會(huì)自動(dòng)顯示，如果安裝不能自動(dòng)開始，點(diǎn)擊Start并選擇Run。在Run對(duì)話框，輸入x:\Set-up，這里的“x”代表電腦的光驅(qū)，點(diǎn)擊OK.按照屏幕提示來進(jìn)行操作來安裝軟件，然后連接USB線。如果出現(xiàn)“發(fā)現(xiàn)新硬件提示”，WindowsXPSP2操作系統(tǒng)將詢問是否需要通過Internet來尋找合適的軟件，選擇—No，notthistime，然后自動(dòng)進(jìn)行軟件安裝。這時(shí)NanoDrop2000/2000c分光光度計(jì)就可以使用了。如果軟件不能打開，參考“DiagnosticsandTroubleshooting”來尋找解決辦法?？梢栽贜anoDrop公司的網(wǎng)站上及時(shí)下載軟件更新。Thermo軟件安裝資質(zhì)Thermo軟件的安裝資質(zhì)程序執(zhí)行NanoDrop2000/2000c軟件的安裝資質(zhì)。安裝資質(zhì)檢驗(yàn)安裝的是否是正確的軟件，并可用來檢驗(yàn)這些文件在安裝時(shí)是否被修改，刪除或者覆蓋。運(yùn)行Thermo軟件安裝資質(zhì)程序：選擇桌面Start打開Startmenu。選擇Allprograms>Thermo>ThermoSoftwareIQ。按照操作提示來認(rèn)證您系統(tǒng)軟件的安裝。使用Help菜單進(jìn)入ThermoIQUserGuidePDF.線連接在使用儀器進(jìn)行樣品檢測(cè)前，需要使用USB連接線把儀器和電腦相連，把12V的電源線接到儀器背面的插口上，并連接電源。當(dāng)儀器不使用時(shí)，電源不用拔下，當(dāng)儀器處于“待命”狀態(tài)時(shí)，其功率為5W，這時(shí)閃爍氙燈處于關(guān)閉狀態(tài)。在儀器背面的電源線插口上面有一個(gè)LED燈指示儀器正連接上12V電源。注冊(cè)您的儀器請(qǐng)及時(shí)注冊(cè)您的儀器，我們會(huì)在網(wǎng)上升級(jí)軟件并且免費(fèi)增加新的特性。我們會(huì)及時(shí)更新我們的用戶名單，這樣我們可以及時(shí)通知您這些軟件的更新。所有提供的信息都市完全可信的，請(qǐng)?jiān)诰W(wǎng)上注冊(cè)您的儀器。軟件特征NanoDrop2000/2000c軟件被分為左右兩塊，狀態(tài)欄和工作按鍵在左側(cè)，而右側(cè)顯示主菜單和數(shù)據(jù)窗口。在NanoDrop2000的用戶守則中有一個(gè)“附件”中包括一頁(yè)軟件特征總則。軟件左側(cè)部分任務(wù)欄任務(wù)欄選項(xiàng)包括以下幾個(gè)選項(xiàng)：Home－顯示特定用戶群所能夠操作的應(yīng)用的主菜單，默認(rèn)的用戶群為Classic。MyDate－管理數(shù)據(jù)的存檔和恢復(fù)。樣品數(shù)據(jù)保存在用戶指定的文件夾中，請(qǐng)參考“數(shù)據(jù)和帳戶管理”來查看詳細(xì)內(nèi)容。Options－包括4個(gè)控制鍵，請(qǐng)參考“數(shù)據(jù)和帳戶管理”來查看詳細(xì)內(nèi)容。任務(wù)工具欄選項(xiàng)可以打開特定的應(yīng)用，包括：Measure（指定應(yīng)用）－顯示最近選擇的應(yīng)用。Reports－包括下列三個(gè)功能鍵：Report－顯示累積的樣品數(shù)據(jù)結(jié)果表格，并顯示選擇樣品的吸光圖譜。Configuration－選擇一個(gè)報(bào)告欄顯示，并選擇報(bào)告欄顯示的順序。Print－選擇需要打印的相關(guān)信息，設(shè)定打印頁(yè)面格式和報(bào)告中打印圖標(biāo)的格式。OligoCalc（僅應(yīng)用于核酸和MicroArray）－計(jì)算特定核酸分子的分子量，激發(fā)效率，濃度因子和熔點(diǎn)。請(qǐng)參考“核酸”和“MicroArray”中的“OligoCalc”來獲取詳細(xì)信息。Dye/Chrom.Editor（僅應(yīng)用于MiroArray和Protein&Labels）－讓用戶進(jìn)入并編寫新的染料參數(shù)，參考MiroArray和Protein&Labels中的Dye/Chrom.Editor來獲取詳細(xì)信息。EditorOptions（方法編輯欄內(nèi)）－微編輯方法設(shè)定可用的選擇。功能鍵當(dāng)應(yīng)用被打開時(shí)，下列的四個(gè)功能鍵被顯示在左側(cè)欄的頂部：Measure－開始進(jìn)行樣品檢測(cè)，這個(gè)功能鍵在剛進(jìn)入一個(gè)應(yīng)用時(shí)是灰色的，當(dāng)做好空白對(duì)照后才能使用。PrintScreen－在默認(rèn)打印機(jī)上打印樣品的數(shù)據(jù)和相應(yīng)的光譜圖。Blank－使用溶解樣品的緩沖液來做空白對(duì)照。在進(jìn)行樣品檢測(cè)前必須先做空白對(duì)照。Re-Blank－使用溶解樣品的緩沖液來再做個(gè)空白對(duì)照。Re-Blank功能會(huì)對(duì)最近的一個(gè)樣品濃度重新計(jì)算，并在屏幕上顯示修正后的光譜圖。當(dāng)選擇MethodEditor或者KineticEditor時(shí)，會(huì)顯示下列四個(gè)功能鍵：New－開始建立一個(gè)新的客戶定制型方法。Save－在當(dāng)前選擇的組中保存編寫的方法。Measure－打開新編寫好的方法。Delete－刪除一個(gè)方法。左側(cè)欄的其他特征選擇主工具欄選擇File－主工具欄下拉菜單中包括下列選項(xiàng)：NewWorkbook－打開一個(gè)新的工作本，而當(dāng)前使用的工作本將被保存并自動(dòng)關(guān)閉。CloseWorkbookandgoHome－關(guān)閉當(dāng)前的工作本并回到主頁(yè)面，當(dāng)工作本被關(guān)閉時(shí)所有的數(shù)據(jù)都會(huì)自動(dòng)保存。CloseAllWorkbookandgoHome－關(guān)閉所有工作本（所有運(yùn)用和方法）并回到主頁(yè)面。PrintReport－在默認(rèn)打印機(jī)上打印當(dāng)前報(bào)告。Usecurrentsettingasdefault－當(dāng)一個(gè)新的應(yīng)用工作本被打開時(shí)，把當(dāng)前的應(yīng)用參數(shù)如：樣品類型，單位，基線校準(zhǔn)波長(zhǎng)和比色皿類型設(shè)定為默認(rèn)。設(shè)定好后，當(dāng)前報(bào)告格式也會(huì)被設(shè)定為默認(rèn)。這個(gè)功能在每個(gè)應(yīng)用和方法中設(shè)定特定用戶選擇時(shí)非常有用。E-mailcurrentworkbook－把當(dāng)前的工作本粘貼到一個(gè)新的Email中。當(dāng)要把這些數(shù)據(jù)發(fā)到NanoDrop殘破技術(shù)支持那里時(shí)，請(qǐng)使用MyDate任務(wù)欄來定位合適的自動(dòng)保存文件。使用軟件打開文件并發(fā)送給技術(shù)支持。注意：雖然在打開自動(dòng)保存的文件時(shí)所有報(bào)告內(nèi)容不能顯示，但是所有內(nèi)容可以被技術(shù)支持恢復(fù)。Help－在任何界面下都有可以運(yùn)用[Ctrl]-m，[Ctrl]-h或者F1鍵來進(jìn)入幫助文件。在幫助菜單下的上訴選項(xiàng)都市針對(duì)當(dāng)前的軟件版本和儀器型號(hào)的。左欄儀器設(shè)定AddtoReport－顯示哪些樣品數(shù)據(jù)被添加到當(dāng)前的報(bào)告中。雖然所有數(shù)據(jù)被備份到自動(dòng)保存工作本中并可以以后恢復(fù)。在日常使用中最好把AddtoReport選擇上，這樣使數(shù)據(jù)恢復(fù)更容易。在樣品檢測(cè)前選擇添加到報(bào)告中來把結(jié)果保存到報(bào)告和工作本中。Overlayspectra－顯示獨(dú)個(gè)光譜圖，一個(gè)交叉指針被顯示并和最近檢測(cè)的樣品相關(guān)聯(lián)。當(dāng)覆蓋光譜被選擇，點(diǎn)擊一個(gè)光譜來關(guān)聯(lián)交叉指針。覆蓋的樣品編號(hào)顯示在左側(cè)突變的頂部，最后一個(gè)檢測(cè)的樣品顯示在圖的最上面并被標(biāo)記為紅色。在不同的圖譜上點(diǎn)擊可以把這個(gè)圖譜顯示為紅色。在進(jìn)行新樣品檢測(cè)時(shí)，去選擇OverlaySpectra將清空所有光譜。Smallsamplevolume－（僅僅適用于核酸和蛋白A280運(yùn)用）－當(dāng)樣品在10mm光程的吸光值在3.0或者以上時(shí)，可以只使用0.5ul樣品進(jìn)行檢測(cè)。UseCuvette（僅僅適用于NanoDrop2000c）－激活比色皿檢測(cè)，客戶使用比色皿檢測(cè)時(shí)可進(jìn)行的選擇包括：Pathlengh－包括10，5，2，和1mmStirSpeed－速度設(shè)定范圍是1－10，默認(rèn)設(shè)定為關(guān)閉。Heatto37℃－把比色皿槽加入到37±5℃。選擇上后，當(dāng)前的溫度將被顯示在軟件屏幕的底部。加熱需要大約1－10min才能達(dá)到37℃。把樣品加熱到37℃需要的時(shí)間依賴于樣品溫度，在默認(rèn)情況下，加熱模塊是關(guān)閉的。注意：如果更改一個(gè)不同的應(yīng)用，加入模塊將被關(guān)閉。然而如果使用相同的運(yùn)用但使用基座檢測(cè)，加熱模塊將繼續(xù)運(yùn)行。右側(cè)欄右側(cè)欄包括下列主菜單：Groupdrop-downbox－選擇首選菜單顯示和相應(yīng)的應(yīng)用，默認(rèn)的選擇是ClassicNanoDrop。Predefinedapplicationbuttons－額外的主菜單選擇。User-Definedlist－在用戶定義方法或者動(dòng)力學(xué)前是空的，當(dāng)客戶定義了方法或者動(dòng)力學(xué)，定量方法左邊有一個(gè)量標(biāo)簽，而動(dòng)力學(xué)方法左邊有一個(gè)時(shí)鐘標(biāo)簽。當(dāng)一個(gè)應(yīng)用被打開時(shí)，右邊欄顯示樣品的光譜圖以及相關(guān)運(yùn)用的數(shù)據(jù)。在用戶守則文件圖標(biāo)上部有基座檢測(cè)或者比色皿檢測(cè)的標(biāo)簽。圖像顯示圖像面板顯示最新檢測(cè)的樣品光譜圖。當(dāng)選擇了附件圖片的功能，就可以顯示多個(gè)樣品的數(shù)據(jù)結(jié)果。樣品名稱號(hào)顯示在左側(cè)欄的頂部。最近檢測(cè)的樣品顯示在結(jié)果欄的最上面，其光譜圖顯示為紅色。注意：點(diǎn)擊較早檢測(cè)的樣品名可以打開結(jié)果并讓其圖譜顯示為紅色。雖然樣品光譜圖顯示的數(shù)量沒有限度，軟件在全屏狀態(tài)下只能在左邊最多顯示28個(gè)樣品的名稱。當(dāng)達(dá)到顯示最大數(shù)量時(shí)，樣品列表就會(huì)出現(xiàn)一個(gè)下拉框。光譜圖上的區(qū)域可以被放大，點(diǎn)擊鼠標(biāo)左鍵，在想放大的區(qū)域拉一個(gè)框，然后再點(diǎn)擊一下框。要把放大的區(qū)域縮小回去，鼠標(biāo)右擊顯示多選擇菜單：Autoscaleallsample－為高濃度樣品設(shè)定較高的Y-軸上限，為低濃度樣品設(shè)定較低的上限，來保證樣品吸收光圖譜完整顯示。FullDisplayallsamples－為所有樣品重新設(shè)定X和Y軸值來顯示全部光譜圖。SetScale－手動(dòng)設(shè)定Y軸最大和最小值。Samplelabels（僅適用于UV-Vis）－為最近的樣品選擇一個(gè)特定的吸收光波長(zhǎng)，顯示在光譜圖中。Samplelegend－確定是否要顯示樣品的名稱數(shù)據(jù)和帳戶管理我的數(shù)據(jù)樣品檢測(cè)的結(jié)果被記錄在工作薄中并保存在客戶指定的文件夾。通過左側(cè)欄我的數(shù)據(jù)任務(wù)欄來保存工作薄。使用查詢框來找到保存的感興趣的工作薄。當(dāng)我的數(shù)據(jù)任務(wù)欄被選擇時(shí)在左邊欄有兩個(gè)有效的工具。選擇New打開一個(gè)新的工作薄在右側(cè)突出其應(yīng)用。選擇Open打開選擇的工作薄并開始相關(guān)的應(yīng)用。額外的檢測(cè)結(jié)果可以添加到打開的工作薄中。在新建和打開按鍵下有五個(gè)快速鏈接可以進(jìn)入存檔的工作薄，然后顯示在右側(cè)欄中。雙擊一個(gè)工作薄打開文件，并可讓其他的檢測(cè)結(jié)果附加到工作薄中。注意：如果要把一個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果加到一個(gè)工作薄中，在進(jìn)行樣品檢測(cè)前必須把“添加到報(bào)告”鍵選上。Report報(bào)告是用戶定制型的顯示樣品結(jié)果的表格。一旦打開一個(gè)應(yīng)用或者用戶方法，就可以看到報(bào)告任務(wù)欄，可以通過點(diǎn)擊任務(wù)欄來打開報(bào)告。當(dāng)選擇了報(bào)告任務(wù)欄后，在右欄中顯示下列三個(gè)設(shè)定：Report－在一個(gè)打開的工作薄中顯示保存的樣品數(shù)據(jù)。在頁(yè)面底部的報(bào)告欄中可以顯示選擇的樣品光譜圖。如果沒有選擇樣品，則報(bào)告欄顯示表格中第一個(gè)樣品的光譜圖?？梢酝ㄟ^選擇報(bào)告表格中的的多個(gè)樣品數(shù)據(jù)來顯示多個(gè)光譜圖。Configuration－選擇報(bào)告欄顯示的內(nèi)容和順序。只有那些選擇的欄目的信息才會(huì)出現(xiàn)在導(dǎo)出的報(bào)告文件中。參考下列的導(dǎo)出報(bào)告內(nèi)容獲取更多信息。Print－為報(bào)告添加標(biāo)題和副標(biāo)題。檢測(cè)的方法信息和光譜圖可以隨報(bào)告表格一起打印。注意：可以通過點(diǎn)擊應(yīng)用或者檢測(cè)方法顯示圖下面的波浪圖標(biāo)簽來顯示一個(gè)僅僅查看的報(bào)告文件。當(dāng)選擇了報(bào)告任務(wù)欄，在左側(cè)欄的頂部可以顯示三個(gè)圖標(biāo)：Preview－在打印報(bào)告前預(yù)覽報(bào)告。應(yīng)用選擇工具欄或者打印圖標(biāo)來顯示選擇的頁(yè)眉和頁(yè)腳信息。參考“DateandAccountManagement”中的“Options”來獲取詳細(xì)信息。Print－開始打印一個(gè)報(bào)告。把報(bào)告導(dǎo)出為.xml，.tsv，或者.tebk格式文件，特定的選項(xiàng)包括：Report，ExcelXMLSpreadsheet（*.xml）－把報(bào)告保存為可以使用Excel表格打開的文件。這個(gè)保存格式只能把報(bào)告保存為表格。在保存報(bào)告前必須配置報(bào)告顯示內(nèi)容。Report，TabSeparatedValues（*.xml）－把報(bào)告保存為可以用記事本或者Excel文件打開的格式。這個(gè)保存格式只能把報(bào)告保存為表格。在保存報(bào)告前必須配置報(bào)告顯示內(nèi)容。Spectrum，ExcelXMLSpreadsheet（*.xml）－保存選擇樣品的每個(gè)波長(zhǎng)下的吸光值，可以在Excel表格中打開結(jié)果。如果選擇了多個(gè)樣品，則可以在Excel的多個(gè)工作表中保存每個(gè)波長(zhǎng)下相應(yīng)的吸光值。Spectrum，TabSeparatedValue（*.tsv）－保存選擇樣品的每個(gè)波長(zhǎng)下的吸光值，可以在Excel表格或者記事本中打開結(jié)果。多個(gè)樣品的結(jié)果可以分別保存在一個(gè)工作欄中。Spectra，NewWorkbook（*.twbk）－把選擇的樣品數(shù)據(jù)保存為一個(gè)新的工作薄，可以在NanoDrop2000/2000c軟件中再打開。NDLegacy（*.tsv）－保存相應(yīng)波長(zhǎng)下的每個(gè)吸光值，并在報(bào)告中保存調(diào)整好的特定區(qū)域。這個(gè)功能可以在一個(gè)工作薄中保存多個(gè)樣品數(shù)據(jù)并可以使用記事本或者Excel打開。在導(dǎo)出前必須配置報(bào)告顯示內(nèi)容。注意：Spectra，NewWorkbook（*.twbk）和NDLegacy（*.tsv）在動(dòng)力學(xué)檢測(cè)時(shí)不能使用。如果電腦不能識(shí)別.xml文件為Excel，可以通過Excel打開這些文件。向以前的工作薄中添加數(shù)據(jù)如果在一個(gè)工作薄打開時(shí)關(guān)閉軟件，會(huì)出現(xiàn)一個(gè)信息為你是否想把數(shù)據(jù)添加到工作薄中，這樣下次打開這個(gè)應(yīng)用時(shí)就可以顯示這些信息。通過我的數(shù)據(jù)工具欄來打開工作薄，這樣可以在軟件關(guān)閉前把數(shù)據(jù)添加到關(guān)閉的工作薄中。在做蛋白定量實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議在添加新結(jié)果到工作薄之前，按照操作說明建立一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。重新處理在某些應(yīng)用模式下，在左側(cè)欄的頂部有重新處理工具。這個(gè)工具可以基于不同的基線校準(zhǔn)波長(zhǎng)，濃度單位或者樣品類型對(duì)樣品重新進(jìn)行濃度計(jì)算。這個(gè)功能不能用于重命名的樣品。重新處理欄可以在報(bào)告內(nèi)容配置欄上選取。注意：重新處理的樣品數(shù)據(jù)將作為一個(gè)新的數(shù)據(jù)出現(xiàn)在當(dāng)前報(bào)告中，重新處理數(shù)據(jù)不會(huì)備份倒自動(dòng)保存的工作薄中。重命名一個(gè)樣品任何時(shí)間都可以在報(bào)告中修改樣品的名稱。注意：樣品名稱的修改不會(huì)反應(yīng)到自動(dòng)保存的文件中。自動(dòng)保存文件除動(dòng)力學(xué)檢測(cè)結(jié)果，其他所有結(jié)果都自動(dòng)存檔為Autosavefile（*.twbk），存檔位置依賴于電腦的操作系統(tǒng)。Vista:C:\Users\Public\PublicDocuments\Thermo\Autosave\(SoftwareApplication)XP:C:\DocumentsandSettings\AllUsers\SharedDocuments\Thermo\NanoDrop2000\Autosave\(SoftwareApplication)自動(dòng)保存文件包括了24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)的所有樣品數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)按應(yīng)用和方法自動(dòng)分類。自動(dòng)保存文件并不是用戶可以修改的工作薄。由于數(shù)據(jù)可以附加到用戶定制型的工作薄中，用戶定制的工作薄通常和自動(dòng)保存文件不匹配。如果需要恢復(fù)用戶定制的工作薄中沒有保存的數(shù)據(jù)，使用NanoDrop2000/2000c軟件打開相關(guān)的自動(dòng)保存文件，選擇感興趣的樣品，導(dǎo)出結(jié)果為Spectra，NewWorkbook（*.twbk），使用我的數(shù)據(jù)任務(wù)欄來查看新的工作薄。如果自動(dòng)保存的工作薄已經(jīng)打開，在新的檢測(cè)之前必須關(guān)閉工作薄。選項(xiàng)在選擇任務(wù)欄下有絲個(gè)工具欄：Application－添加新的用戶組和相關(guān)的應(yīng)用方法設(shè)定。要添加一個(gè)新的組，輸入組名并點(diǎn)擊Add?？梢园岩粋€(gè)或者多個(gè)應(yīng)用拉到空白鍵中來定制組的顯示內(nèi)容。有兩個(gè)方法可以顯示客戶定制方法而不是標(biāo)準(zhǔn)方法：把客戶定制的方法拉到一個(gè)特定的菜單按鍵中。把方法列表包括到一個(gè)主菜單選項(xiàng)中。當(dāng)前的方法不會(huì)顯示在選項(xiàng)屏幕中，而回顯示在對(duì)應(yīng)組的主頁(yè)中，由于文本框的大小限制，方法列表只能顯示最上面的9個(gè)菜單按鍵。使用Deletegroup按鍵可以刪除整個(gè)組，使用頁(yè)面底部的ClearAppButtons來重新設(shè)定應(yīng)用鍵。ReportMasterPage－編寫打印報(bào)告的頁(yè)眉和頁(yè)腳的布局。使用這個(gè)功能，可以選擇頁(yè)眉是否包括單位名稱，Logo，日期或者時(shí)間。頁(yè)腳選項(xiàng)包括額外文本和頁(yè)碼。這些選項(xiàng)可以用來打印所有應(yīng)用和用戶定制方法的報(bào)告。頁(yè)面設(shè)定按鍵可以顯示頁(yè)面大小和打印邊框的窗口。Preferences－確認(rèn)這些設(shè)定是對(duì)特定的用戶可用還是對(duì)所有用戶可用。選擇SupportDymoLabelprinter來應(yīng)用獨(dú)立的程序來打印報(bào)告。在這個(gè)標(biāo)簽下，可以選擇快捷鍵，請(qǐng)參考下表的快捷鍵。在動(dòng)力學(xué)方法中，Re-Blank功能鍵被Stop功能鍵所替代。Account－管理那些用戶或者用戶群有權(quán)限更改或者調(diào)整報(bào)告，定義默認(rèn)設(shè)定和修改標(biāo)準(zhǔn)曲線。另外，覆蓋文件或者改變文件保存路徑也是由Account鍵控制。帳戶頁(yè)的左側(cè)顯示一系列控制類別的路徑。每個(gè)控制類別包括特定用戶或者用戶組的軟件特征夠可以進(jìn)入?？梢赃M(jìn)入的類別包括：Allowaccessto：Options－讓用戶或者組能夠進(jìn)入：應(yīng)用，報(bào)告管理頁(yè)面，參數(shù)選擇和帳戶。Reports－能夠讓客戶或者組能夠在報(bào)告屏幕下可以進(jìn)入配置標(biāo)簽和再生鍵。Editor－讓用戶或組能夠刪除用戶編寫的方法，保存動(dòng)力學(xué)方法。UseCurrentSettingsasdefault－把當(dāng)前的應(yīng)用參數(shù)設(shè)定衛(wèi)為默認(rèn)值。Overwritefiles－在已存的工作薄名下保存一個(gè)新的工作薄。AllowaccesstoGroups：用戶可以進(jìn)入，添加，刪除，修改組。要進(jìn)入上面描述的特定的路徑：在左側(cè)突出顯示感興趣的特征，對(duì)每個(gè)小類的路徑都必須分別授權(quán)。使用Listnamesfrom和Organization的下拉菜單來選擇特定的用戶和組。點(diǎn)擊Add把用戶或者組移動(dòng)到中間框中。只有那些在中間框中的名稱才能進(jìn)入左邊欄的突出的軟件特征。在默認(rèn)情況下，對(duì)于每個(gè)應(yīng)用用戶組都要添加到允許的路徑中。下拉框和列表框：Listnamefrom－顯示可以從中選擇的區(qū)域列表。Organization－顯示選擇區(qū)域中的組織列表。（如果本地區(qū)域被選擇了，就不選擇這個(gè)列表了）Allowaccessto－授權(quán)給用戶或者組可以使用前面描述的軟件參數(shù)。要添加一個(gè)用戶或組到用戶或組列表中，在頁(yè)面底部的Selectorenteraname區(qū)域輸入一個(gè)有效的用戶名或組名，再點(diǎn)擊Add鍵。名稱必須包括區(qū)域名，如果一個(gè)名稱是有效的，就可以出現(xiàn)再授權(quán)列表中。如果如果命名無效，將會(huì)出現(xiàn)一個(gè)警告信息提示您。UserandGroups－一個(gè)選擇的區(qū)域中的有效的用戶列表。

3．應(yīng)用總論使用NanoDrop2000/2000c分光光度計(jì)可以方便的使用微量樣品進(jìn)行紫外－可見分光檢測(cè)。NanoDrop2000/2000c可以應(yīng)用于如下檢測(cè)：不用稀釋可以檢測(cè)濃度小于15000ng/ul（dsDNA）的核酸濃度和純度普通的紫外－可見分光光度檢測(cè)純蛋白濃度檢測(cè)（A280）Microarray和Protein&Labels應(yīng)用中的熒光染料基團(tuán)檢測(cè)擴(kuò)展的光譜檢測(cè)，定量應(yīng)該標(biāo)記蛋白，金屬蛋白BCA蛋白定量分析Bradford蛋白定量分析Lowry法蛋白定量分析Pierce660nm蛋白定量分析微生物細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)動(dòng)力學(xué)檢測(cè)用戶自己編輯檢測(cè)方法快速啟動(dòng)雙擊軟件圖標(biāo)，并在右欄中選擇感興趣的軟件應(yīng)用。在進(jìn)行檢測(cè)簽選擇Addtoreport來把樣品數(shù)據(jù)保存到一個(gè)工作薄中。使用合適的緩沖液來建立一個(gè)空白對(duì)照?；Ｊ剑喝?－2ul空白液加到底部基座上，放下檢測(cè)臂并點(diǎn)擊Bank。比色皿模式（僅僅2000c）：選擇UseCuvette，按儀器上指示箭頭插入比色皿。檢測(cè)光束（2mm）位置在比色皿底部以上8.5mm，參考比色皿生產(chǎn)廠家的建議來確定需要液體體積。注意：使用比色皿檢測(cè)時(shí)，也需要把檢測(cè)臂放下。在使用基座檢測(cè)時(shí)，建議把比色皿拿出以保證基座臂能放到合適的位置。使用干凈無塵紙把基座上的空白液擦干凈，在合適的位置輸入樣品名稱，取1ul樣品進(jìn)行檢測(cè)。注意：每次檢測(cè)的樣品都必須是剛加入的。檢測(cè)后：使用干凈的無塵紙擦掉上下基座上的樣品，即可用于下一個(gè)樣品檢測(cè)。當(dāng)使用比色皿檢測(cè)時(shí)，拿出比色皿，在做下一個(gè)樣品前清洗干凈并涼干。雖然沒有必要在做每個(gè)樣品之前都做空白對(duì)照，但建議在做一種樣品檢測(cè)30min后做一次空白對(duì)照。30min后，最后一次做的空白對(duì)照的時(shí)間會(huì)顯示在底部狀態(tài)欄上。在NanoDrop2000的用戶指南的附件上有一個(gè)快速使用指南，其中有空白對(duì)照和樣品檢測(cè)的操作說明。建議把這個(gè)指南打印出來貼在儀器附近作為參考。注意：上面說的染料的檢測(cè)范圍只針對(duì)基座檢測(cè)。核酸總論使用NanoDrop2000/2000c可以很方便的檢測(cè)核酸的濃度和質(zhì)量。要檢測(cè)核酸在主頁(yè)面上選擇NucleicAcid功能。核酸濃度計(jì)算使用Beer－Lambert定律來進(jìn)行核酸濃度計(jì)算：C＝核酸濃度，單位ng/mlA＝AU的吸光值ε＝消光系數(shù)，單位ng-cm/mlb＝光程，單位cm通常情況下核酸的消光系數(shù)為：雙鏈DNA：50ng-cm/ul單鏈DNA：33ng-cm/ulRNA：40ng-cm/ul當(dāng)選擇基座模式，NanoDrop2000/2000c分光光度計(jì)使用1.0mm到0.05mm的短光程來進(jìn)行檢測(cè)，這樣保證不用稀釋就可以檢測(cè)高濃度樣品。注意：報(bào)告中的吸光值可以象軟件屏中顯示的模式存檔。不論基座檢測(cè)還是比色皿檢測(cè)，核酸檢測(cè)的吸光值被一致化為1cm光程下的讀數(shù)值。NanoDrop2000/2000c分光光度計(jì)可以準(zhǔn)確檢測(cè)≤15000ng/ul的雙鏈DNA而不用稀釋。對(duì)每個(gè)樣品，軟件會(huì)自動(dòng)選擇最佳的檢測(cè)光程進(jìn)行檢測(cè)。參考“MeasurementRanges”來獲得詳細(xì)信息。當(dāng)檢測(cè)樣品的吸光值≥3.0時(shí)（1cm光程下），可以使用較少量的樣品進(jìn)行檢測(cè)。獨(dú)特的屏幕顯示右側(cè)欄顯示核酸檢測(cè)特定的配置，左側(cè)的任務(wù)欄在“SoftwareOverview”中有詳細(xì)描述光譜圖中顯示的數(shù)據(jù)都是一致化為10mm光程下的讀數(shù)。光譜顯示的右欄包括以下內(nèi)容：SampleID－輸入樣品名稱，在進(jìn)行樣品檢測(cè)時(shí)應(yīng)輸入樣品的名稱。Type－一個(gè)下列菜單來選擇檢測(cè)的核酸類型，選擇DNA-50做dsDNA檢測(cè)，RNA-40做RNA檢測(cè)，ssDNA-33做單鏈DNA檢測(cè)。其他選擇包括，DNA寡核苷酸核RNA寡核苷酸，需要輸入相應(yīng)的吸光系數(shù)?？梢暂斎氲奈庀禂?shù)范圍時(shí)15－150。Conc－通過260nm處的吸光值和消光系數(shù)計(jì)算得到的濃度值，濃度單位可以在后面的下拉框中選擇。參考“NucleicAcidCalculations”中的詳細(xì)信息。A260－顯示10mm光程下的260nm處的吸光值。A280－顯示10mm光程下的280nm處的吸光值。260/280－260nm和280nm處的吸光值的比值，這個(gè)值用來判定DNA和RNA的純度。純DNA的比值在1.8左右，純RNA的比值在2.0左右。如果這個(gè)比值偏小，表明有蛋白，苯酚或者其他污染物存在，這些物質(zhì)在280nm處有明顯的光吸收。260/230－260nm和230nm處的吸光值的比值，這是一個(gè)次要的核酸濃度指示值。純核酸的這個(gè)比值比260/280比值大，一般在1.8-2.2之間，如果比值偏低，表示核酸中有污染物。Baselinecorrection－如果選擇了基線校準(zhǔn)，默認(rèn)的校準(zhǔn)波長(zhǎng)為340nm。用戶可以根據(jù)試驗(yàn)需要輸入不同的校準(zhǔn)波長(zhǎng)。在任何試驗(yàn)下，基線都是自動(dòng)設(shè)定為選擇波長(zhǎng)下的吸光值。所有波長(zhǎng)下的讀數(shù)都要減去這個(gè)值。注意：如果不選擇基線校準(zhǔn)，光譜值將會(huì)產(chǎn)生偏移，計(jì)算的濃度也會(huì)改變。核酸濃度檢測(cè)在主菜單中選擇核酸模式，如果顯示波長(zhǎng)校準(zhǔn)窗口，放下基座臂點(diǎn)擊OK。選擇檢測(cè)的樣品類型，默認(rèn)的設(shè)定為DNA-50。選擇濃度單位，默認(rèn)的為ng/ul。默認(rèn)的校準(zhǔn)波長(zhǎng)為340nm，重新選擇一個(gè)校準(zhǔn)波長(zhǎng)或者去選擇Baseline來不選擇校準(zhǔn)波長(zhǎng)。選擇AddtoReport自動(dòng)把檢測(cè)結(jié)果添加到當(dāng)前報(bào)告中去，默認(rèn)設(shè)置是把每個(gè)樣品都添加到報(bào)告中。要把樣品數(shù)據(jù)保存到工作薄中，在檢測(cè)前必須選上Addtoreport。選擇Overlayspectra可以在同一時(shí)間顯示多個(gè)光譜。使用合適的液體建立空白對(duì)照，空白對(duì)照液體是溶解目標(biāo)分子的液體。空白對(duì)照液體的pH值和離子濃度應(yīng)和檢測(cè)樣品一樣。基座模式：取1-2ul空白對(duì)照加到基座上，放下檢測(cè)臂，點(diǎn)擊Blank鍵。比色皿模式（僅ND2000c）：插入比色皿時(shí)注意儀器上箭頭指示方向。光束（2mm寬）位置再比色皿底部以上8.5nm的位置，請(qǐng)按照比色皿生產(chǎn)廠家的建議加入液體。注意：對(duì)于所有模式檢測(cè)，檢測(cè)臂都必須放下。在做基座檢測(cè)前，要把比色皿拿出來了，這樣可以保證檢測(cè)臂放到正確的位置。在指定的位置輸入樣品名稱，按上面檢測(cè)空白對(duì)照的操作進(jìn)行樣品檢測(cè)。注意：每次檢測(cè)的樣品都必須是新加的。檢測(cè)后使用干凈的無塵紙擦干凈上下基座，這樣儀器就可以進(jìn)行下一個(gè)樣品檢測(cè)了。當(dāng)使用比色皿時(shí)，取出比色皿，徹底清洗比色皿并晾干。OligoCalcOligoCalc用來計(jì)算特定核酸序列的分子量，消光系數(shù)，濃度因子和溶點(diǎn)。選擇這個(gè)任務(wù)欄將顯示兩個(gè)鍵：OligoCalc－用來輸入感興趣的序列，并選擇合適的樣品類型。MeltingPoint－顯示DNA序列熔點(diǎn)的結(jié)算結(jié)果。這個(gè)功能鍵僅在DNA序列檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)。要使用OligoCalc：使用如下方法來輸入一個(gè)堿基序列：使用堿基序列顯示框下的按鍵。鍵盤（僅僅能使用A，C，G，T，和U來輸入堿基）復(fù)制和粘貼一個(gè)序列到顯示框（僅僅能使用A，C，G，T，和U來輸入堿基）清除堿基序列框中的序列，點(diǎn)擊序列框右側(cè)的Clear鍵，單個(gè)可以手動(dòng)來刪除。選擇磷酸化程度，可以選擇：DNA單磷酸化，RNA單磷酸化和三磷酸化。如果需要可以選擇雙鏈，互補(bǔ)的雙鏈序列能夠包括在計(jì)算中。在下拉框中，選擇檢測(cè)的核酸類型，默認(rèn)的為DNA。如果要添加序列選擇Modification并輸入相關(guān)的分子量。OligoCalc分析結(jié)果區(qū)域包括：分子量－顯示堿基序列計(jì)算得到的分子量。消光系數(shù)－顯示260nm波長(zhǎng)依賴的消光系數(shù)，單位是ng-cm/ml。濃度因子－基于消光系數(shù)的常數(shù)，用來計(jì)算堿基序列的濃度。堿基數(shù)－顯示輸入多少個(gè)堿基。%GC－顯示序列中的G/C含量。要計(jì)算DNA序列的熔點(diǎn)：按上面說明輸入序列，如果序列已經(jīng)輸入到OligoCalcTab中，序列框中將自動(dòng)計(jì)算序列的熔點(diǎn)。按下列說明在框中輸入合適的數(shù)值：OligoMolarity－輸入樣品序列的摩爾濃度，默認(rèn)的值為10um，但是可以根據(jù)不同的樣品更改。CationMolarity－輸入樣品的陽離子濃度，默認(rèn)的值為50um，但是可以根據(jù)不同的樣品更改。％Formamide－輸入樣品中的氨基濃度，默認(rèn)值為0，但是可以根據(jù)不同的樣品更改。熔點(diǎn)分析結(jié)果區(qū)域包括：SaltAdjusted－計(jì)算序列的熔點(diǎn)，不考慮鹽對(duì)相鄰堿基的相互作用影響。NearestNeighbor－計(jì)算序列的熔點(diǎn)，考慮鹽對(duì)相鄰堿基的相互作用影響。微陣列總論通過這個(gè)功能可以篩選有效的熒光標(biāo)記雜交探針用于芯片試驗(yàn)，這樣避免潛在的不好的探針，可以提高試驗(yàn)效率。NanoDrop2000/2000c可以檢測(cè)熒光染料的吸收光強(qiáng)度，最低可以檢測(cè)0.2pmol/ul的熒光染料。軟件可以自動(dòng)應(yīng)用相應(yīng)的波長(zhǎng)檢測(cè)樣品的吸光值。檢測(cè)濃度范圍NanoDrop2000/2000c可以準(zhǔn)確檢測(cè)熒光染料標(biāo)記的核酸濃度達(dá)：100pmol/ul的Cy3以及750ng/ul的DNA。染料/發(fā)色團(tuán)編輯用戶可以在NanoDrop2000/2000c軟件中選擇預(yù)設(shè)好的染料，也可以使用染料/發(fā)色團(tuán)編輯功能來添加新的染料。要添加一個(gè)新的染料，選擇Show欄（第一列），這將激活手動(dòng)輸入的區(qū)域，參照染料制造廠家的說明來填寫合適的校準(zhǔn)參數(shù)。當(dāng)合適的染料被選擇了，260nm的校準(zhǔn)將被自動(dòng)應(yīng)用到核酸濃度計(jì)算中。當(dāng)所有參數(shù)填寫好后，保存這些信息。要?jiǎng)h除一個(gè)用戶自定義的染料，點(diǎn)擊左側(cè)（＋）鍵旁邊的灰色框選擇要?jiǎng)h除的染料，然后點(diǎn)擊鍵盤上的Delete鍵或者使用鼠標(biāo)右鍵來刪除。預(yù)編輯好的那些熒光染料，在編制欄是被鎖定的，不能被刪除。默認(rèn)的設(shè)定是染料1是Cy3，染料2是Cy5。獨(dú)特的屏幕顯示右側(cè)欄顯示MicroArray應(yīng)用獨(dú)特的功能鍵，左側(cè)任務(wù)欄上的功能鍵參考“SoftwareOverview”的描述。光譜顯示了當(dāng)前樣本在1nm光程下的數(shù)據(jù)，光程信息顯示在Y軸。右側(cè)的光譜顯示欄包括下列部分：SampleID－輸入樣品名稱的區(qū)域。應(yīng)在樣品檢測(cè)前輸入樣品名稱。Type－用戶可以在下拉菜單中選擇檢測(cè)的核酸類型。選項(xiàng)包括：DNA-50用于檢測(cè)DNA，RNA-40用于檢測(cè)RNA，ssDNA-33用于檢測(cè)單鏈DNA，其他選項(xiàng)還有OligoDNA和OligoRNA，可以根據(jù)不同的序列使用合適的消光系數(shù)。Custom選項(xiàng)可以輸入消光系數(shù)的范圍是15－150。Conc－使用特定的消光系數(shù)和260nm波長(zhǎng)下的吸光值來計(jì)算濃度。濃度單位可以在下拉框中選擇。使用Beer定律來計(jì)算核酸濃度，可以參考“NucleicAcidCalculations”。A260－顯示校準(zhǔn)到10mm光程下的260nm波長(zhǎng)下的吸光值。注意：顯示的A260值并不同于樣品在260nm下的吸光值（以750nm波長(zhǎng)為參比波長(zhǎng)）。A260值在計(jì)算核酸濃度時(shí)考慮到染料對(duì)吸光值的影響，采用染料校準(zhǔn)因子對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了校準(zhǔn)，吸光值校準(zhǔn)采用選擇的校準(zhǔn)波長(zhǎng)和750nm基線。從而顯示的A260值和用來計(jì)算的核酸濃度的吸光值不一樣。260/280－260和280nm吸光值的比值。這個(gè)比值用來判定DNA和RNA的純度。對(duì)于DNA來說比值為1.8時(shí)認(rèn)為是純的DNA，對(duì)于RNA來說比值為2.0時(shí)認(rèn)為是純的RNA。如果比值偏低，表明核酸中存在蛋白，酚或其他在280nm處有吸光的雜質(zhì)。Dye1（2）：選擇染料，默認(rèn)的選擇是：染料1（Cy3），染料2（Cy5）。Abs－每個(gè)染料在1mm光程下的吸光值。pmol/ul－基于每個(gè)熒光染料的消光系數(shù)計(jì)算出來的濃度，可以在下拉框中選擇濃度單位。Analysiscorrection－在計(jì)算濃度前，減去參比波長(zhǎng)下的吸光值。這僅僅影響報(bào)告的核酸濃度，默認(rèn)的參比波長(zhǎng)為340nm。注意：對(duì)所有可見光檢測(cè)，軟件的校準(zhǔn)波長(zhǎng)為750nm，并自動(dòng)以400nm和750nm吸光值為基線進(jìn)行染料濃度計(jì)算。進(jìn)行微陣列檢測(cè)在主菜單中選擇MicroArray功能，如果顯示了波長(zhǎng)確認(rèn)窗口，確保檢測(cè)臂放下，并點(diǎn)擊OK。選擇檢測(cè)樣品的類型，默認(rèn)的設(shè)定為ssDNA-33。在下列框中選擇濃度單位，默認(rèn)的單位是ng/ul.使用染料1或者染料2后面的下拉框來選擇染料，默認(rèn)的染料設(shè)定：染料1（Cy3），染料2（Cy5），如果僅標(biāo)記了一個(gè)染料，在染料2類型上選擇None。默認(rèn)以340nm的吸光值為核酸校準(zhǔn)值。通過取消選擇Analysiscorrection框來選擇或者不選擇參比波長(zhǎng)校準(zhǔn)。在文件下拉條中選擇Usecurrentsettingsasdefault，這是一個(gè)便捷的方法來限定每個(gè)心工作薄的設(shè)定時(shí)間。選擇Addtoreport來自動(dòng)把當(dāng)前檢測(cè)的結(jié)果添加到報(bào)告中去。默認(rèn)的設(shè)定是把所有的報(bào)告添加到報(bào)告中。為了把一個(gè)檢測(cè)結(jié)果保存到工作薄中，必須在檢測(cè)前把Addtoreport選擇上。選擇Overlayspectra來同時(shí)顯示多個(gè)光譜圖。使用合適的buffer來檢測(cè)空白對(duì)照：基座模式：取1－2ul空白溶液加到基座上，放下檢測(cè)臂并點(diǎn)擊Blank。比色皿模式（僅2000c）：按照比色皿生產(chǎn)廠家的建議加入適量的空白溶液，按照儀器上標(biāo)記的光路放心，插入比色皿。注意：用任何模式檢測(cè)時(shí)檢測(cè)臂都必須放下，在用基座檢測(cè)時(shí)，建議把比色皿從儀器上取出，以保證檢測(cè)臂放到合適的位置。輸入樣品名稱，按做空白一樣加入樣品點(diǎn)擊Measure開始檢測(cè)。注意：每次檢測(cè)的樣品必須是新鮮加入的！檢測(cè)以后：用干凈的無塵紙擦拭干凈上下基座，這樣儀器就可以進(jìn)行下一個(gè)樣品的檢測(cè)了。當(dāng)使用比色皿模式時(shí)，取出比色皿，徹底清洗干凈然后再進(jìn)行下一個(gè)樣品檢測(cè)。OligoCalcOligoCalc軟件功能可以用來計(jì)算特定核酸序列的分子量，消光系數(shù)，濃度因子和熔點(diǎn)。選擇這個(gè)任務(wù)欄：OligoCalc－用來輸入感興趣的序列并選擇合適的樣品類型。MeltingPoint－顯示了DNA鏈計(jì)算的熔點(diǎn)，這個(gè)功能只有在DNA序列上有效。要使用OligoCalc：使用下列的方法來輸入堿基序列：堿基序列顯示框下面的按鍵。鍵盤（僅使用A，C，G，T和U來輸入序列）復(fù)制和粘貼序列。要清楚堿基序列，點(diǎn)擊顯示框右邊的Clear鍵。單個(gè)堿基可以使用手動(dòng)來刪除。選擇磷酸化程度，可以選擇：?jiǎn)瘟姿峄―NA），單，雙或者三磷酸化（RNA）.可以選擇雙鏈，在計(jì)算時(shí)可以自動(dòng)包含其互補(bǔ)的鏈序列。在下列菜單中，選擇分析的核酸類型，默認(rèn)的為DNA。對(duì)于額外的堿基序列，選擇Modification并輸入分子量。OligoCalc試驗(yàn)結(jié)果區(qū)域包括：分子量－顯示計(jì)算的堿基序列的分子量。消光系數(shù)－顯示260nm處的消光系數(shù)，單位ng-cm/ul。濃度因子－恒數(shù)，基于消光系數(shù)來計(jì)算檢測(cè)序列的濃度。堿基數(shù)－顯示輸入了多少個(gè)堿基。%GC－顯示序列的GC含量。要計(jì)算DNA序列的熔點(diǎn)：按上面描述的方法輸入序列。注意：如果一個(gè)堿基序列已經(jīng)輸入到OligoCalc中，熔點(diǎn)框的堿基序列框?qū)⒆詣?dòng)輸入那個(gè)序列。在每個(gè)框中輸入合適的的數(shù)據(jù)：OligoMolarity－輸入樣品的摩爾濃度，默認(rèn)的值為10uM，可以針對(duì)樣品更改為更合適的數(shù)據(jù)。CationMolarity－輸入樣品的陽離子濃度，默認(rèn)的值為50mM，可以針對(duì)樣品更改為更合適的數(shù)據(jù)。％Formamide－輸入樣品中的甲酰氨濃度，默認(rèn)的值為0，可以針對(duì)樣品更改為更合適的數(shù)據(jù)。熔點(diǎn)分析結(jié)果包括：Salt-Adjusted－計(jì)算序列的熔點(diǎn)而不考慮相鄰堿基序列的干擾。Nearest-Neighbor－顯示序列的熔點(diǎn)同時(shí)考慮相鄰堿基序列的干擾。UV-VIS總論UV-VIS功能使NanoDrop2000/2000c可以想普通的紫外-可見分光光度計(jì)一樣行使功能?？梢燥@示從190到840nm的樣品的吸光值。最多可以同時(shí)指定檢測(cè)40個(gè)波長(zhǎng)下的吸光值并把數(shù)據(jù)顯示在報(bào)告中。檢測(cè)濃度范圍在使用自動(dòng)光程模式下，NanoDrop2000/2000c能夠檢測(cè)相當(dāng)于10mm光程下300A的吸光值。獨(dú)特的屏幕特征右側(cè)欄顯示UV-VIS獨(dú)有的特征，左側(cè)任務(wù)欄的說明參見“SoftwareOverview”。光譜圖顯示了當(dāng)前樣品校準(zhǔn)到1mm光程下的吸光值，光程信息顯示在Y軸上。光譜圖的右側(cè)，包括下列內(nèi)容：SampleID－輸入樣品名稱區(qū)域，在檢測(cè)樣品前應(yīng)輸入樣品名稱。AutoPathlendth－在檢測(cè)高濃度樣品時(shí)自動(dòng)調(diào)整合適的光程。如果選擇了這個(gè)功能，在220nm到840nm間任何波長(zhǎng)下的吸光值為1.25左右時(shí)，檢測(cè)使用短的光程。對(duì)于波長(zhǎng)在190nm到219nm范圍內(nèi)，1mm光程下的吸光值為1.0左右時(shí)改為短光程檢測(cè)。短光程對(duì)于高濃度樣品檢測(cè)是非常有用的。雖然這個(gè)功能對(duì)其他應(yīng)用是自動(dòng)進(jìn)行的，在UV-VIS功能下，用戶可以選擇自動(dòng)光程功能或者限定基座檢測(cè)光程為1mm。在其他情況下，吸光值數(shù)據(jù)將顯示為1mm光程下的數(shù)據(jù)?；€校準(zhǔn)－自動(dòng)設(shè)定基線，樣品檢測(cè)的數(shù)據(jù)以基線的數(shù)據(jù)為參考。默認(rèn)的波長(zhǎng)為750nm，如果不使用基線校準(zhǔn)，光譜可能會(huì)發(fā)生基線偏移。添加波長(zhǎng)－在版面上添加指示波長(zhǎng)和指示吸光值。當(dāng)一個(gè)樣品被檢測(cè)，把鼠標(biāo)十字號(hào)指示移動(dòng)到感興趣的波長(zhǎng)并點(diǎn)擊添加波長(zhǎng)，或者可以在選擇區(qū)域輸入波長(zhǎng)即可。ClearWavelengh－清除波長(zhǎng)界面上的一個(gè)輸入。ClearAll－清除波長(zhǎng)界面上的所有輸入。在其他應(yīng)用中，在圖譜顯示狂中右擊鼠標(biāo)可以產(chǎn)生一個(gè)多選擇的菜單框。在UV-VIS中，可以選擇開啟/關(guān)閉一個(gè)額外的樣品標(biāo)簽。樣品標(biāo)簽選擇可以顯示或者隱藏每個(gè)選擇波長(zhǎng)下的吸光值。右擊一個(gè)標(biāo)簽可以編輯，改變顏色和字體，旋轉(zhuǎn)和刪除。進(jìn)行UV-VIS檢測(cè)在主菜單中選擇UV-VIS功能，如果出現(xiàn)波長(zhǎng)確認(rèn)窗口，確保檢測(cè)臂放下，并點(diǎn)擊OK。默認(rèn)用750nm對(duì)重鎘酸鹽進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化?？梢赃x擇其他參考波長(zhǎng)或者通過去選擇Baselinecorrection來不選擇光譜校準(zhǔn)。在nm-Addwavelength(s)框重可以最多向屏幕中添加40個(gè)波長(zhǎng)。選擇第一排，輸入波長(zhǎng)并點(diǎn)擊Enter。下一行就可以變亮，這樣就可以添加額外的波長(zhǎng)。另外，還可以通過在感興趣波長(zhǎng)的位置上點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵并選擇AddWavelength來添加。還可以選擇刪除一個(gè)或者多個(gè)波長(zhǎng)。在下拉選擇中選擇Usecurrentsettingasdefault，這樣可以方便每個(gè)工作薄的設(shè)定時(shí)間。選擇Addtoreport來把所有檢測(cè)結(jié)果包括到當(dāng)前的報(bào)告中。默認(rèn)的設(shè)定是把所有樣品都添加到報(bào)告中，要把樣品數(shù)據(jù)保存到工作薄中，必須要在檢測(cè)前把Addtoreport檢測(cè)框選上。選擇Overlayspectra在同時(shí)選擇多個(gè)光譜圖。使用合適的緩沖液建立一個(gè)空白對(duì)照?；Ｊ剑喝?－2ul空白溶液加到基座上，放下檢測(cè)臂并點(diǎn)擊Blank。比色皿模式（僅2000c）：按照比色皿生產(chǎn)廠家的建議加入適量的空白溶液，按照儀器上標(biāo)記的光路放心，插入比色皿。注意：用任何模式檢測(cè)時(shí)檢測(cè)臂都必須放下，在用基座檢測(cè)時(shí)，建議把比色皿從儀器上取出，以保證檢測(cè)臂放到合適的位置。輸入樣品名稱，按做空白一樣加入樣品點(diǎn)擊Measure開始檢測(cè)。注意：每次檢測(cè)的樣品必須是新鮮加入的！檢測(cè)完成以后：用干凈的無塵紙擦拭干凈上下基座，這樣儀器就可以進(jìn)行下一個(gè)樣品的檢測(cè)了。當(dāng)使用比色皿模式時(shí)，取出比色皿，徹底清洗干凈然后再進(jìn)行下一個(gè)樣品檢測(cè)。ProteinA280總論蛋白和核酸不一樣，具有很強(qiáng)的多樣性。ProteinA280功能應(yīng)用于檢測(cè)那些含有Trp，Tyr殘基或者含有Cys-Cys二硫鍵的純蛋白，這些蛋白在280nm出有明顯吸光值。這個(gè)方法不需要構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線而是檢測(cè)吸光值后軟件直接計(jì)算蛋白濃度。而象BCA，Pierce660nm，Bradford和Lowry這些檢測(cè)顏色的方法通常用來檢測(cè)那些消光系數(shù)不確定的樣品或者細(xì)胞裂解液。如果你經(jīng)常使用顏色檢測(cè)法來定量蛋白，建議使用軟件中預(yù)編輯好的程序。ProteinA280顯示紫外吸收光譜，檢測(cè)280nm處的吸光值后計(jì)算濃度（mg/ml）。和核酸檢測(cè)一樣，ProteinA280記錄顯示的是10mm光程下的數(shù)據(jù)。檢測(cè)濃度范圍NanoDrop2000/2000c在基座模式下可以最多檢測(cè)400mg/ml的BSA而不用稀釋。軟件可以自動(dòng)使用選擇光程來檢測(cè)每個(gè)樣品的吸光值。在樣品的10mm吸光值>3.0（>4.5mg/mlBSA）時(shí)可以選擇Smallsamplevolume。檢測(cè)需要的樣品量雖然檢測(cè)的樣品量不是很關(guān)鍵，但在使用基座檢測(cè)時(shí)要確保形成液柱，這樣在上下基座之間形成樣品橋。決定液體表面張力的主要因素時(shí)溶液中水分子之間的氫鍵。通常情況下，水中的物質(zhì)，如：蛋白，鹽離子，去污劑等都會(huì)通過破壞水分子之間的氫鍵來減小表面張力。雖然對(duì)于大部分樣品來說，1ul的量就足夠用于檢測(cè)了，我們建議在做蛋白檢測(cè)時(shí)由于表面張力下降做好使用2ul的樣品來檢測(cè)以保證形成液柱。在使用比色皿檢測(cè)時(shí)，要確保液面的高度高于光線通過比色皿的高度，參考比色皿生產(chǎn)廠家的說明來確定需要的液體量?；偕鷰в斜砻婊钚詣┑娜芤夯蛘咴噭?huì)破壞檢測(cè)基座上液柱的形成。在這種情況下，使用Nanodrop基座再生復(fù)合物來快速再說基座表面。關(guān)于PR-1的其他信息請(qǐng)參考網(wǎng)頁(yè)。獨(dú)特的屏幕顯示右側(cè)顯示欄是蛋白A280檢測(cè)的欄目，左側(cè)部門這里沒有說明，請(qǐng)參考“軟件總論”。光譜圖顯示的數(shù)據(jù)是樣品標(biāo)準(zhǔn)化到10mm光程下的結(jié)果。在光譜圖右側(cè)包括下列內(nèi)容：SampleID－輸入樣品名稱的位置，應(yīng)在檢測(cè)前輸入樣品名稱。Type－六個(gè)預(yù)設(shè)樣品可供選擇來進(jìn)行蛋白分析和濃度計(jì)算。可以在Type旁邊的下拉框中進(jìn)行這些選擇。默認(rèn)的是1Abs＝1mg/ml。1mg/ml蛋白在280nm處的吸光值為1A。小牛血清白蛋白參照，蛋白濃度計(jì)算的質(zhì)量消光系數(shù)是：10mg/ml的蛋白在280nm處的質(zhì)量消光系數(shù)為6.7。IgG參考，蛋白濃度計(jì)算的質(zhì)量消光系數(shù)是：10mg/ml的蛋白在280nm處的質(zhì)量消光系數(shù)為13.7。溶菌酶參考，蛋白濃度計(jì)算的質(zhì)量消光系數(shù)是：10mg/ml的蛋白在280nm處的質(zhì)量消光系數(shù)為26.4。用戶可以自己輸入摩爾消光系數(shù)和分子量（KD），作為檢測(cè)蛋白的參考用戶可以自己輸入質(zhì)量消光系數(shù)，作為10mg/ml蛋白的參考。Ext.Coeff，E1%L/gm-cm－當(dāng)選擇OtherProtein（E1%）會(huì)出現(xiàn)這個(gè)項(xiàng)目，在檢測(cè)前應(yīng)輸入合適的消光系數(shù)。Conc－根據(jù)蛋白在280nm處的吸光值和選擇的消光系數(shù)計(jì)算出來的濃度值。濃度單位可以從旁邊的下拉框中選擇。默認(rèn)的單位是mg/ml。A280（10mm光程）－蛋白在280nm處的吸光值。顯示的數(shù)據(jù)被標(biāo)準(zhǔn)化到10mm光程。260/280－260nm和280nm處吸光值的比值。Baselinecorrection－如果選擇了這個(gè)功能，默認(rèn)的重鎘酸鹽校準(zhǔn)波長(zhǎng)為340nm，用戶可以自己手動(dòng)隨便輸入重鎘酸鹽的校準(zhǔn)波長(zhǎng)。每次檢測(cè)時(shí)，都會(huì)自動(dòng)把選擇波長(zhǎng)處的吸光值作為檢測(cè)的基線。所有波長(zhǎng)下的吸光值都會(huì)減去這個(gè)基線值。如果不選擇基線校準(zhǔn)這個(gè)功能，光譜的基線會(huì)發(fā)生偏移，計(jì)算的蛋白濃度值會(huì)比真實(shí)值偏高。進(jìn)行蛋白A280檢測(cè)從主菜單中選擇ProteinA280，如果波長(zhǎng)確認(rèn)窗口打開，確保檢測(cè)臂放下并點(diǎn)擊OK。從樣品下拉框中選擇檢測(cè)樣品的類型，默認(rèn)的設(shè)定為1Abs＝1mg/ml。選擇濃度單位，默認(rèn)的單位是mg/ml。默認(rèn)的重鎘酸鹽校準(zhǔn)波長(zhǎng)為340nm，可以選擇其他的校準(zhǔn)波長(zhǎng)，或者去選擇Baselinecorrection來不做光譜校準(zhǔn)。選擇文件下拉選擇中的Usecurrentsettingsasdefault來節(jié)約每個(gè)新的工作薄的設(shè)定時(shí)間。選擇Addtoreport來自動(dòng)把所有檢測(cè)結(jié)果添加到當(dāng)前報(bào)告中。默認(rèn)的設(shè)定是把所有樣本添加到報(bào)告。在進(jìn)行樣品檢測(cè)前必須把Addtoreport框選上才能把樣品結(jié)果數(shù)據(jù)保存到工作薄中。選擇Overlayspectra來同時(shí)顯示多個(gè)光譜圖。使用合適的緩沖液做空白對(duì)照?；Ｊ剑喝?－2ul空白溶液加到基座上，放下檢測(cè)臂并點(diǎn)擊Blank。比色皿模式（僅2000c）：按照比色皿生產(chǎn)廠家的建議加入適量的空白溶液，按照儀器上標(biāo)記的光路放心，插入比色皿。注意：用任何模式檢測(cè)時(shí)檢測(cè)臂都必須放下，在用基座檢測(cè)時(shí)，建議把比色皿從儀器上取出，以保證檢測(cè)臂放到合適的位置。輸入樣品名稱，按做空白一樣加入樣品點(diǎn)擊Measure開始檢測(cè)。注意：每次檢測(cè)的樣品必須是新鮮加入的！檢測(cè)完成以后：用干凈的無塵紙擦拭干凈上下基座，這樣儀器就可以進(jìn)行下一個(gè)樣品的檢測(cè)了。當(dāng)使用比色皿模式時(shí)，取出比色皿，徹底清洗干凈然后再進(jìn)行下一個(gè)樣品檢測(cè)。Protein&Labels總論P(yáng)rotein&Labels可以用來檢測(cè)蛋白的濃度（A280nm）和熒光染料的濃度（蛋白芯片標(biāo)記物）。它還可通過吸光值的比值來檢測(cè)金屬蛋白（如血色素）的純度。檢測(cè)濃度范圍Nanodrop2000/2000c能夠準(zhǔn)確檢測(cè)100pmol/ul的熒光染料和20mg/ml的蛋白（BSA）而不用稀釋。檢測(cè)需要的樣品量雖然檢測(cè)的樣品量不是很關(guān)鍵，但在使用基座檢測(cè)時(shí)要確保形成液柱，這樣在上下基座之間形成樣品橋。決定液體表面張力的主要因素時(shí)溶液中水分子之間的氫鍵。通常情況下，水中的物質(zhì)，如：蛋白，鹽離子，去污劑等都會(huì)通過破壞水分子之間的氫鍵來減小表面張力。雖然對(duì)于大部分樣品來說，1ul的量就足夠用于檢測(cè)了，我們建議在做蛋白檢測(cè)時(shí)由于表面張力下降做好使用2ul的樣品來檢測(cè)以保證形成液柱。在使用比色皿檢測(cè)時(shí)，要確保液面的高度高于光線通過比色皿的高度，參考比色皿生產(chǎn)廠家的說明來確定需要的液體量。基座再生帶有表面活性劑的溶液或者試劑會(huì)破壞檢測(cè)基座上液柱的形成。在這種情況下，使用Nanodrop基座再生復(fù)合物來快速再說基座表面。關(guān)于PR-1的其他信息請(qǐng)參考網(wǎng)頁(yè)。染料/熒光基團(tuán)編輯NanoDrop2000/2000c軟件既可以讓用戶選擇設(shè)定好的染料也可以使用DyeChromophoreEditor來編寫輸入新的染料。要輸入一個(gè)新的染料，選擇顯示欄框（最后一列），這就可以激活輸入信息的區(qū)域了，參考染料生產(chǎn)廠家的說明來輸入合適的校準(zhǔn)因子。280nm的校準(zhǔn)參數(shù)將會(huì)自動(dòng)應(yīng)用到蛋白濃度計(jì)算。當(dāng)輸入好后，這些信息就被保存了。要?jiǎng)h除一個(gè)用戶定義的染料，選擇這個(gè)染料，直接點(diǎn)擊鍵盤上的刪除鍵來刪除，或者右擊鼠標(biāo)選擇刪除。預(yù)先編寫好的染料在編輯器中被鎖定的，是不能編輯和刪除的。默認(rèn)的設(shè)定是Dye1為Cy3，Dye2為Cy5。獨(dú)特的屏幕特征右側(cè)的顯示是Protein&Labels特有的。左側(cè)的任務(wù)欄在“SoftwareOverview”中有詳細(xì)描述。光譜圖顯示當(dāng)前樣品校準(zhǔn)到10mm光程下的吸光值。光譜顯示右側(cè)包括下拉參數(shù)“SampleID－輸入樣品名稱的位置，應(yīng)在檢測(cè)前輸入樣品名稱。Type－六個(gè)預(yù)設(shè)樣品可供選擇來進(jìn)行蛋白分析和濃度計(jì)算?？梢栽赥ype旁邊的下拉框中進(jìn)行這些選擇。默認(rèn)的是1Abs＝1mg/ml。Ext.Coeff，E1%L/gm-cm－當(dāng)選擇OtherProtein（E1%）會(huì)出現(xiàn)這個(gè)項(xiàng)目，在檢測(cè)前應(yīng)輸入合適的消光系數(shù)。ε/1000andM.W.(KDa)－當(dāng)Otherprotein（E&MW）被選擇時(shí)可以顯示，在檢測(cè)前應(yīng)輸入合適的參數(shù)。Conc－根據(jù)蛋白在280nm處的吸光值和選擇的消光系數(shù)計(jì)算出來的濃度值。濃度單位可以從旁邊的下拉框中選擇。默認(rèn)的單位是mg/ml。Dye1（2）：選擇染料，默認(rèn)的選擇是：染料1（Cy3），染料2（Cy5）。Abs－每個(gè)染料在1mm光程下的吸光值。uM－基于每個(gè)熒光染料的消光系數(shù)計(jì)算出來的濃度，可以在下拉框中選擇濃度單位。A280（10mm光程）－蛋白在280nm處的吸光值。顯示的數(shù)據(jù)被標(biāo)準(zhǔn)化到10mm光程。注意：顯示的A280值并不同于樣品在280nm下的吸光值（以750nm波長(zhǎng)為參比波長(zhǎng)）。A280值在計(jì)算蛋白濃度時(shí)考慮到染料對(duì)吸光值的影響，采用染料校準(zhǔn)因子對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了校準(zhǔn)，吸光值校準(zhǔn)采用選擇的校準(zhǔn)波長(zhǎng)和750nm基線。從而顯示的A280值和用來計(jì)算的蛋白濃度的吸光值不一樣。Analysiscorrection－在進(jìn)行濃度計(jì)算之前，分析波長(zhǎng)下的吸光值要減去校準(zhǔn)波長(zhǎng)下的吸光值。這僅僅影響報(bào)告中的蛋白濃度。SlopingDyeCorrection－選擇這項(xiàng)時(shí)，染料檢測(cè)波長(zhǎng)下的吸光值要減去400nm到750nm校準(zhǔn)波長(zhǎng)下的吸光值。這僅僅影響報(bào)告的染料的吸收峰和濃度。進(jìn)行Protein&Labels檢測(cè)從主菜單中選擇Protein&Labels，如果波長(zhǎng)確認(rèn)窗口打開，確保檢測(cè)臂放下并點(diǎn)擊OK。從樣品下拉框中選擇檢測(cè)樣品的類型，默認(rèn)的設(shè)定為1Abs＝1mg/ml。選擇濃度單位，默認(rèn)的單位是mg/ml。使用下拉菜單來選擇染料，默認(rèn)的染料1為Cy3，染料2為Cy5。如果蛋白僅標(biāo)記一種染料，染料2選擇為None。默認(rèn)的重鎘酸鹽校準(zhǔn)波長(zhǎng)為340nm，可以選擇其他的校準(zhǔn)波長(zhǎng)，或者去選擇Baselinecorrection來不做光譜校準(zhǔn)。選擇文件下拉選擇中的Usecurrentsettingsasdefault來節(jié)約每個(gè)新的工作薄的設(shè)定時(shí)間。選擇Addtoreport來自動(dòng)把所有檢測(cè)結(jié)果添加到當(dāng)前報(bào)告中。默認(rèn)的設(shè)定是把所有樣本添加到報(bào)告。在進(jìn)行樣品檢測(cè)前必須把Addtoreport框選上才能把樣品結(jié)果數(shù)據(jù)保存到工作薄中。選擇Overlayspectra來同時(shí)顯示多個(gè)光譜圖。使用合適的緩沖液做空白對(duì)照。基座模式：取1－2ul空白溶液加到基座上，放下檢測(cè)臂并點(diǎn)擊Blank。比色皿模式（僅2000c）：按照比色皿生產(chǎn)廠家的建議加入適量的空白溶液，按照儀器上標(biāo)記的光路放心，插入比色皿。注意：用任何模式檢測(cè)時(shí)檢測(cè)臂都必須放下，在用基座檢測(cè)時(shí)，建議把比色皿從儀器上取出，以保證檢測(cè)臂放到合適的位置。輸入樣品名稱，按做空白一樣加入樣品點(diǎn)擊Measure開始檢測(cè)。注意：每次檢測(cè)的樣品必須是新鮮加入的！檢測(cè)完成以后：用干凈的無塵紙擦拭干凈上下基座，這樣儀器就可以進(jìn)行下一個(gè)樣品的檢測(cè)了。當(dāng)使用比色皿模式時(shí)，取出比色皿，徹底清洗干凈然后再進(jìn)行下一個(gè)樣品檢測(cè)。

ProteinBCA總論BCA是一種通過比色來檢測(cè)非純蛋白的濃度的方法，它通常用于稀釋的蛋白濃度檢測(cè)以及那些含有在紫外區(qū)域有光吸收的雜質(zhì)的蛋白的濃度檢測(cè)。不象ProteinA280，BCA法需要在蛋白定量前構(gòu)建一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。BCA法是檢測(cè)Cu+1離子的方法，在堿性環(huán)境下，Cu＋2離子會(huì)被蛋白還原為Cu+1離子。兩個(gè)聯(lián)喹啉二羧酸BCA分子和一個(gè)Cu+1離子形成紫色的螯合物，這樣在有蛋白存在情況下，Cu-BCA形成的螯合物在562nm出有最大光吸收，并以750nm光系數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)化。可以從ThermoFisher購(gòu)買BCA和CuSO4試劑盒。BCA法檢測(cè)范圍商業(yè)化的BCA試劑盒有兩種蛋白檢測(cè)范圍：常規(guī)檢測(cè)使用試劑/蛋白樣品的體積比為20：1，這個(gè)試劑盒檢測(cè)范圍從0.20mg/ml到8.0mg/ml（BSA）。當(dāng)使用基座檢測(cè)時(shí)，推薦使用4ul樣品和80ulBCA試劑。微量檢測(cè)使用1：1試劑/樣品，可以檢測(cè)蛋白濃度范圍從0.01mg/ml至0.20mg/ml。要準(zhǔn)備足夠的樣品來做基座檢測(cè)，建議使用10ul樣品和10ulBCA試劑（使用PCR管）。按照試劑盒廠家建議的操作來構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品準(zhǔn)備。確保在所有檢測(cè)過程中使用相同的時(shí)間和溫度。注意：如果試驗(yàn)操作溫度高于60度，最好使用2倍的試驗(yàn)體積，這樣避免揮發(fā)導(dǎo)致的樣品濃縮。在BCA試劑盒中同樣包括用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)品。由于NanoDrop2000/2000c能夠檢測(cè)比常規(guī)比色皿檢測(cè)更高的濃度，用戶需要使用比廠家推薦的標(biāo)準(zhǔn)品更高的濃度。檢測(cè)需要的樣品量雖然檢測(cè)的樣品量不是很關(guān)鍵，但在使用基座檢測(cè)時(shí)要確保形成液柱，這樣在上下基座之間形成樣品橋。決定液體表面張力的主要因素時(shí)溶液中水分子之間的氫鍵。通常情況下，水中的物質(zhì)，如：蛋白，鹽離子，去污劑等都會(huì)通過破壞水分子之間的氫鍵來減小表面張力。雖然對(duì)于大部分樣品來說，1ul的量就足夠用于檢測(cè)了，我們建議在做蛋白檢測(cè)時(shí)由于表面張力下降做好使用2ul的樣品來檢測(cè)以保證形成液柱。在使用比色皿檢測(cè)時(shí)，要確保液面的高度高于光線通過比色皿的高度，參考比色皿生產(chǎn)廠家的說明來確定需要的液體量?；偕鷰в斜砻婊钚詣┑娜芤夯蛘咴噭?huì)破壞檢測(cè)基座上液柱的形成。在這種情況下，使用Nanodrop基座再生復(fù)合物來快速再說基座表面。關(guān)于PR-1的其他信息請(qǐng)參考網(wǎng)頁(yè)。獨(dú)特的屏幕特征右側(cè)的顯示是BCA特有的。左側(cè)的任務(wù)欄在“SoftwareOverview”中有詳細(xì)描述。光譜顯示口顯示當(dāng)前樣品的數(shù)據(jù)，使用基座檢測(cè)的結(jié)果是標(biāo)準(zhǔn)化到1mm光程下的數(shù)據(jù)，而使用比色皿檢測(cè)時(shí)是選擇的光程下的數(shù)據(jù)。光程的信息顯示在Y軸上。Datatab－顯示當(dāng)前樣品的數(shù)據(jù)StandardCurvetab－顯示標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以顯示R2值和標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線類型包括多參數(shù)方程，線形，多級(jí)方程等，默認(rèn)的選擇是線形。Valid/InvalidCurve－顯示是否有最小量的標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)被檢測(cè)了。當(dāng)滿足要求時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的狀態(tài)將從無效的狀態(tài)（紅色）變成有效曲線（綠色）。注意：這狀態(tài)僅僅表示檢測(cè)樣品數(shù)已經(jīng)滿足標(biāo)準(zhǔn)曲線需要的最少樣品點(diǎn)。標(biāo)準(zhǔn)曲線狀態(tài)不指示標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合情況，要包括一個(gè)比較寬的檢測(cè)濃度范圍，需要更多的標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)。Sampleradiobutton－當(dāng)構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線滿足要求時(shí)，樣品ID位置將能夠可以選擇，在檢測(cè)樣品前應(yīng)輸入樣品名稱。Standardsradiobutton－選擇上后可以輸入標(biāo)準(zhǔn)名稱和濃度。Concentrationmg/ml－當(dāng)前樣品的濃度單位。Absorbanceat562nm－Cu-BCA復(fù)合物在562nm處吸光值。BCA標(biāo)準(zhǔn)曲線BCA分析時(shí)需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線例子：20:1試劑/樣品體積一個(gè)最簡(jiǎn)單的標(biāo)準(zhǔn)曲線可以有兩個(gè)點(diǎn)組成，包括兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)或者一個(gè)參考點(diǎn)（僅僅有BCA試劑，沒有蛋白）和一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)。最多可包括7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)，檢測(cè)各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)沒有順序。標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)只能在樣品檢測(cè)時(shí)添加到標(biāo)準(zhǔn)曲線中，當(dāng)開始檢測(cè)第一個(gè)樣品，就不能向標(biāo)準(zhǔn)曲線中添加標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)了。在樣品檢測(cè)前可以隨機(jī)刪除任何一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)。右擊結(jié)果表格可以刪除一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品或者刪除標(biāo)準(zhǔn)品結(jié)果表格。在重復(fù)孔數(shù)據(jù)上點(diǎn)擊右鍵可以刪除特定標(biāo)準(zhǔn)品的重復(fù)。在第一個(gè)樣品開始檢測(cè)后，刪除的標(biāo)準(zhǔn)品不能被添加或者重新檢測(cè)。要建立一個(gè)新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，必須先建立一個(gè)新的工作薄。如果把樣品添加到以前的工作薄中，可以使用以前構(gòu)建好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。建議在添加數(shù)據(jù)到工作薄之前要按照試劑生產(chǎn)廠家的說明來構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。注意：如果選擇以前保存的工作薄，所有樣品的濃度計(jì)算都是基于工作薄中的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行的。每個(gè)工作薄只能保存一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。進(jìn)行BCA檢測(cè)參考試劑生產(chǎn)廠家說明準(zhǔn)備樣品。零點(diǎn)參考標(biāo)準(zhǔn)是與其他標(biāo)準(zhǔn)品和樣品同樣的樣品/試劑比例進(jìn)行操作，只是里面沒有蛋白。按照廠家操作說明準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。使用的空白對(duì)照要與標(biāo)準(zhǔn)品，樣品的pH值和鹽離子濃度一樣。標(biāo)準(zhǔn)品的濃度范圍要覆蓋全面樣品的濃度范圍。操作過程：從主菜單中選擇ProteinBCA，如果出現(xiàn)波長(zhǎng)確認(rèn)窗口，確保檢測(cè)臂放下并點(diǎn)擊OK.在右側(cè)表格中輸入每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，軟件可以最多檢測(cè)7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品。參考和標(biāo)準(zhǔn)品可以檢測(cè)多個(gè)重復(fù)。注意：標(biāo)準(zhǔn)曲線最少需要2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)或者一個(gè)0參考點(diǎn)和一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)。推薦檢測(cè)多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度范圍要覆蓋樣品的濃度范圍。選擇Addtoreport把檢測(cè)的結(jié)果自動(dòng)保存到當(dāng)前報(bào)告中去。默認(rèn)的設(shè)定是把所有樣品添加到報(bào)告中。要把樣品結(jié)果保存到工作薄中，必須在檢測(cè)樣品前把Addtoreport選上。選擇文件下拉選擇中的Usecurrentsettingsasdefault來節(jié)約每個(gè)新的工作薄的設(shè)定時(shí)間。選擇Overlayspectra來同時(shí)顯示多個(gè)光譜圖。使用合適的緩沖液做空白對(duì)照。通常使用純水做為空白對(duì)照?；Ｊ剑喝?－2ul純水加到基座上，放下檢測(cè)臂并點(diǎn)擊Blank。比色皿模式（僅2000c）：按照比色皿生產(chǎn)廠家的建議加入適量的空白溶液，按照儀器上標(biāo)記的光路放心，插入比色皿。注意：用任何模式檢測(cè)時(shí)檢測(cè)臂都必須放下，在用基座檢測(cè)時(shí)，建議把比色皿從儀器上取出，以保證檢測(cè)臂放到合適的位置。在標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽下，選擇一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，按上面做空白一樣加樣，點(diǎn)擊Measure開始檢測(cè)，要在所有標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)完成