微生物標(biāo)本接種

關(guān)于微生物標(biāo)本接種第一頁，共八十五頁，2022年，8月28日內(nèi)容血培養(yǎng)尿培養(yǎng)痰培養(yǎng)膿液腦脊液前列腺STD厭氧培養(yǎng)第二頁，共八十五頁，2022年，8月28日血培養(yǎng)增菌培養(yǎng)商品血培養(yǎng)瓶成人瓶、兒童瓶、中和抗生素瓶無菌操作采集血標(biāo)本接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕混勻以防血液凝固。立即送檢，切勿冷藏。采血量成人采血量是10～20ml，兒童1～5ml。血液和肉湯之比為1:5～1:10。35℃培養(yǎng)5-7天第三頁，共八十五頁，2022年，8月28日第四頁，共八十五頁，2022年，8月28日第五頁，共八十五頁，2022年，8月28日體積%陽性血培養(yǎng)結(jié)果vs.采集的套數(shù)%99%89%80%真陽性20ml/套MayoClinicStudy第六頁，共八十五頁，2022年，8月28日用于培養(yǎng)的血液體積體重

磅

千克體積(ml)/穿刺總量/2次穿刺1%全血體積%總血液體積<19<9122ml1%19-309-14366-10ml1-3%31-6015-2751010-20ml1-2%61-9028-41102020-30ml1-2%>90>422040>40ml1-2%第七頁，共八十五頁，2022年，8月28日采集血培養(yǎng)時間的重要性9%+14%+9%+11%+發(fā)熱高峰前12-2.5小時發(fā)熱高峰前小時發(fā)熱高峰期間發(fā)熱高峰后1-12小時166病人105病人199病人258病人Thomsonetal.1991.ASCP.MayoClinicStudy第八頁，共八十五頁，2022年，8月28日立即獲得足夠血液并且開始抗生素治療從不同部位獲得2-3套血培養(yǎng)(40-60ml血液)最好在5分鐘內(nèi)采集#1#2第九頁，共八十五頁，2022年，8月28日確定檢測陽性的培養(yǎng)時間陽性報(bào)警時間第十頁，共八十五頁，2022年，8月28日隨著時間推移敗血癥病原菌的變遷%住院患者血培養(yǎng)陽性結(jié)果#1

pathogenFromUW,MadisonandG.WashingtonUniv.,St.Louis第十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日血培養(yǎng)存在的主要問題如果皮膚定植的細(xì)菌沒有被殺死，這些細(xì)菌將通過針頭被吸入血培養(yǎng)瓶并在瓶中生長這些細(xì)菌(主要為凝固酶陰性葡萄球菌)引起導(dǎo)管相關(guān)性敗血癥(住院患者血培養(yǎng)第一位)醫(yī)生不能將真的凝固酶葡萄球菌感染和皮膚定植菌“污染”相區(qū)分，因此他們用萬古霉素治療患者第十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日皮膚凝固酶陰性葡萄球菌定植于輸液管第十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日皮膚不是無菌的;定植細(xì)菌“污染”血培養(yǎng)第十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日葡萄球菌在塑料CVC表面生長形成生物膜第十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日污染細(xì)菌血培養(yǎng)污染定義為在幾次血培養(yǎng)中單個血培養(yǎng)下列細(xì)菌陽性:凝固酶陰性葡萄球菌棒狀桿菌微球菌丙酸桿菌

芽孢桿菌第十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日血培養(yǎng)污染vs.皮膚消毒%污染StudiesfromBaylor,Nashville,&France第十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日血培養(yǎng)一旦提示陽性結(jié)果，涂片行革蘭染色，根據(jù)鏡檢結(jié)果決定轉(zhuǎn)種羊血平皿及巧克力平皿上，并分別放置普通培養(yǎng)箱及CO2燭缸內(nèi)35℃～37℃孵育培養(yǎng)需氧和兼性厭氧菌；轉(zhuǎn)種布氏血瓊脂，厭氧環(huán)境培養(yǎng)厭氧菌；轉(zhuǎn)種沙保羅培養(yǎng)基，培養(yǎng)真菌。將革蘭染色結(jié)果立即向臨床電話初級報(bào)告。待細(xì)菌鑒定及藥敏結(jié)果出來后再向臨床發(fā)出最終報(bào)告。第十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日血液培養(yǎng)【特別提醒】

厭氧菌從血液中培養(yǎng)出厭氧菌的比率相對比較少，不推薦每個病人常規(guī)增加一個厭氧血培養(yǎng)，但如果必要，選用其配套的厭氧培養(yǎng)基來培養(yǎng)厭氧菌。

營養(yǎng)苛刻的細(xì)菌（FastidiousBacteria）布魯氏菌屬可以在常規(guī)血液培養(yǎng)基中生長，并且盡管可以在三天內(nèi)分離到，但是推薦培養(yǎng)21天，且有必要進(jìn)行末次接種。HACEK群細(xì)菌—嗜泡沫嗜血桿菌（Haemphilusaphrophilus）、放線共生放線桿菌（Actinobacillusactinomycemcomitans）、人心桿菌(Cardiobacteriumhominis)、侵襲?？暇?Eikenelluscorrodens)和金氏桿菌（Kingellakingae）與細(xì)菌性心內(nèi)膜炎有關(guān)，常規(guī)血培養(yǎng)基中可以分離，但培養(yǎng)14天和進(jìn)行肉湯末次接種會更有效。

第十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日血培養(yǎng)常規(guī)血液培養(yǎng)基不能分離鉤端螺旋體。分枝桿菌（Mycobacteria）使用常規(guī)血培養(yǎng)基不能分離。導(dǎo)管頭培養(yǎng)導(dǎo)管頭是為了明確細(xì)菌來源。最常用的方法是半定量的方法，方法是用5cm長的導(dǎo)管末端部分在血液瓊脂平板上滾動4次。培養(yǎng)物出現(xiàn)15個以上的菌落，提示有潛在的導(dǎo)管相關(guān)性感染。第二十頁，共八十五頁，2022年，8月28日導(dǎo)管相關(guān)感染的診斷敏感性和特異性檢測管腔內(nèi)的&外周細(xì)菌不需要移走導(dǎo)管可靠性和可重復(fù)性易操作快速回報(bào)感染的微生物可以分離對患者安全關(guān)鍵點(diǎn):患者必須有菌血癥第二十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日檢測導(dǎo)管相關(guān)感染移走導(dǎo)管MakiRoll(半定量)超聲波降解和稀釋(定量)通過管腔抽吸(定量)保留導(dǎo)管管腔刷定量培養(yǎng)(CVC&外周血)達(dá)到陽性的時間(CVC&外周血)第二十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日哪部分用于培養(yǎng)第二十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日Maki滾動法第二十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日導(dǎo)管尖陽性培養(yǎng)結(jié)果第二十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日苛養(yǎng)菌不要放置常規(guī)血培養(yǎng)>5天由如下微生物引起的可疑的敗血癥或心內(nèi)膜炎:霉菌(組織胞漿菌,

鐮刀菌,等等秕糠馬拉癬菌軍團(tuán)菌屬巴爾通體新型隱球菌Q-熱惠普爾病支原體屬其他病原菌

3分離管咨詢ID醫(yī)生血清Ag凝集+分離培養(yǎng)第二十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日干預(yù)措施可以減少導(dǎo)管相關(guān)性感染手消毒

用洗必泰進(jìn)行皮膚消毒

在穿刺過程中完全無菌操作

鎖骨下靜脈穿刺

移去不必要的中央靜脈插管血管內(nèi)導(dǎo)管相關(guān)性感染預(yù)防指南.MMWRRecomRep2002:51(RR10)1-29soap第二十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日尿道感染每年850萬例尿路感染,90%為女性1/2.5個婦女在一生中會得UTI下行性感染：血流腎臟膀胱（金黃色葡萄球菌，酵母菌，結(jié)核分枝桿菌）上行性感染：尿道膀胱腎盂血流第二十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日AnatomyofUrinaryTract

尿路的解剖圖側(cè)面圖膀胱恥骨子宮頸尿道輸卵管卵巢子宮陰道直腸肛門第二十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日綜合病癥尿道炎或急性尿路綜合征膀胱炎-膀胱的炎癥腎盂腎炎-腎臟的炎癥

Age年齡5102030//60有癥狀的無癥狀的第三十頁，共八十五頁，2022年，8月28日尿路感染病原菌第三十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日大腸埃希菌與膀胱上皮細(xì)胞相互作用傘狀粘附膀胱上皮細(xì)胞第三十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日尿液運(yùn)輸方法無需冷藏第三十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日有癥狀婦女的尿路感染診斷性試驗(yàn)第三十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日尿液革蘭染色-革蘭陰性桿菌第三十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日傳統(tǒng)的尿培養(yǎng)使用校準(zhǔn)過的接種環(huán)(0.001or0.01ml)垂直插入裝有尿液的無菌容器中

在瓊脂平板上分區(qū)劃線：血平皿，麥康凱平皿或CLED平皿大多數(shù)尿路病原菌能在血平皿上生長麥康凱平皿有鑒別功能，為革蘭陰性桿菌的選擇性培養(yǎng)基第三十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日尿培養(yǎng)的劃線方式第一區(qū)=50,000cfu/ml第二區(qū)=75,000cfu/ml第三區(qū)=100,000cfu/ml沿中心線向下=50,000cfu/ml長向邊緣=100,000cfu/ml第三十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日

尿培養(yǎng)的培養(yǎng)基5%血平皿（美國用羊血，歐洲用馬血）伊紅美蘭平皿（EMB）大腸埃希菌為金屬綠麥康凱平皿–LFvsNLF胱氨酸-乳糖-低電解質(zhì)平皿（CLED）顯色平皿(BBL公司的CHROMagar，HardyBluEcoliBiplate)CUTI（Oxoid公司）;CPSID2（生物梅里埃公司）;UriSelect（Biorad公司）;Rambach;others第三十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日蛋白胨，酵母提取物，色原物科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（BBL）大腸埃希菌腸球菌無乳鏈球菌腐生葡萄球菌第三十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日同樣的接種物在科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（BBL）上生長大腸埃希菌，腸球菌和變形桿菌在血平皿上生長CHROMagar?Orientation(BBL)第四十頁，共八十五頁，2022年，8月28日chromIDCPS-生物梅里埃公司的產(chǎn)品快速鑒定大腸埃希菌，變形桿菌和腸球菌可分離所有尿道病原菌更好的可操作性更好的鑒定能力更高的可靠性第四十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日尿培養(yǎng)【操作步驟】1．培養(yǎng)皿放置至室溫，先充分搖勻尿液2．用1μl定量接種環(huán)或用微量移液器無菌吸取10ul尿液接種于羊血平皿和MAC上，然后用無菌接種環(huán)劃線涂布，置35℃，最好在5～10％co2環(huán)境下，孵育18～24小時3．次日觀察結(jié)果，根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷，陽性結(jié)果做細(xì)菌鑒定和藥敏。第四十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日尿培養(yǎng)【定量標(biāo)準(zhǔn)】用1μl接種環(huán)，結(jié)果×1000cfu/ml；用10μl接種環(huán)，結(jié)果×100cfu/ml。菌計(jì)≥10萬cfu/ml，繼續(xù)鑒定和藥敏。降低標(biāo)準(zhǔn)的情況：幼兒、兒童或男性的確定的尿路感染，其尿標(biāo)本定量也可＜10萬cfu/ml；插導(dǎo)管的患者、最近用過抗生素者、大量喝水者、伴發(fā)膿尿和有癥狀者、有尿路阻塞或由于血源性傳播而患有腎盂腎炎者，其尿標(biāo)本定量也可＜10萬cfu/ml；患有尿道綜合征的性活躍的年輕女性，其尿標(biāo)本定量也可＜100cfu/ml。第四十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日評價(jià)尿培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)病人標(biāo)本特征有意義的菌落形成單位/ml（非皮膚污染）無癥狀者清潔留取100,000有癥狀者，不固定的清潔留取10,0001-2種機(jī)會致病菌。若多于2種則認(rèn)為尿液被污染有癥狀者，性活躍女性清潔留取100個純菌落腸桿菌科菌男性清潔留取1000個機(jī)會致病菌任何人內(nèi)置導(dǎo)尿管100,000任意數(shù)量機(jī)會致病菌任何人通過直接導(dǎo)管獲得100任意數(shù)量機(jī)會致病菌任何人通過外科手術(shù)從腎臟獲得任意數(shù)量（肉湯增菌，厭氧菌）任何人Percutaneousbladdertap經(jīng)皮膀胱吸取任意數(shù)量（肉湯增菌，厭氧菌）任何人Any任何標(biāo)本任何數(shù)量金黃色葡萄球菌不同人有爭議任何數(shù)量的酵母菌第四十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日尿培養(yǎng)-注意事項(xiàng)標(biāo)本留取嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作。不要將尿液標(biāo)本接種于增菌肉湯培養(yǎng)基中。清潔中段尿標(biāo)本不要進(jìn)行離心處理。尿液標(biāo)本原則上不做厭氧培養(yǎng)。尿液收集后應(yīng)立即送檢，不能送檢者可置4℃～8℃冰箱儲藏，儲存時間≤24小時?；颊邞?yīng)在用藥前或停用抗生素后至少三天留取尿液，尿液中勿加防腐劑。第四十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日痰培養(yǎng)-操作步驟取適量痰液化劑放入痰標(biāo)本盒內(nèi)混勻放置30分鐘，

用無菌環(huán)挑2～3環(huán)標(biāo)本，分區(qū)劃線接種于羊血平皿或沙保培養(yǎng)基上、Mac置35℃孵育18～24小時,巧克力平板5％co235℃孵育18～24小時。觀察結(jié)果，根據(jù)細(xì)菌生長情況進(jìn)行鑒定及藥敏。挑取膿液部分涂片，革蘭染色鏡檢。判斷標(biāo)本是否合格。第四十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日痰培養(yǎng)-操作步驟痰標(biāo)本涂片染色顯微鏡檢查的分類：判斷標(biāo)準(zhǔn)比較簡單的方法就是確定鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)量：細(xì)胞數(shù)＞10/低倍視野，說明混有痰液。細(xì)胞數(shù)/低倍視野WBC＜10鱗狀上皮細(xì)胞＞25不合格WBC

10～25鱗狀上皮細(xì)胞＞25不合格WBC＞25鱗狀上皮細(xì)胞＞25不合格WBC＞25鱗狀上皮細(xì)胞10～25可接受WBC＞25鱗狀上皮細(xì)胞≤10合格WBC≤25鱗狀上皮細(xì)胞≤25可接受?第四十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日用革蘭氏染色來評估呼吸道標(biāo)本是否合格>10鱗狀上皮細(xì)胞/LPF——拒收！彈性纖維，中性粒細(xì)胞多，鱗狀上皮細(xì)胞少，有代表性的好標(biāo)本第四十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日形態(tài)學(xué)鑒別要訣——球菌革蘭陰性雙球菌——腎型豆子樣，平行縱軸排列=奈瑟菌屬革蘭陽性雙球菌——拉長，單個縱軸，末端呈點(diǎn)狀（柳葉刀狀）=鏈球菌（肺炎鏈球菌）第四十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日實(shí)際革蘭氏染色革蘭陰性雙球菌：在生殖道標(biāo)本或腦脊液中多為奈瑟菌屬；在下呼吸道分泌物中提示為卡他莫拉菌革蘭陽性雙球菌提示肺炎鏈球菌第五十頁，共八十五頁，2022年，8月28日形態(tài)學(xué)鑒別要訣——球菌革蘭陽性球菌成對，成鏈——較小、拉長的、從不4聯(lián)排列=鏈球菌屬革蘭陽性球菌呈堆排列，通常很圓，細(xì)胞較大，不拉長，可成對，但鏈不超過4個細(xì)胞?？赡芤蛎撋^度呈革蘭陰性。但如果不是腎型話不可能為革蘭陰性菌。第五十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日鏈狀的革蘭陽性球菌：提示鏈球菌短鏈，<6個細(xì)胞，提示腸球菌或B群鏈球菌；肺炎鏈球菌血培養(yǎng)中長鏈的革蘭陽性球菌（>6個細(xì)胞）提示化膿鏈球菌或草綠色鏈球菌革蘭氏陽性球菌第五十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日更多的革蘭氏染色形態(tài)學(xué)呈堆或四聯(lián)排列的革蘭陽性球菌提示葡萄球菌第五十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日革蘭陽性桿菌的形態(tài)學(xué)鑒別要訣革蘭氏陽性桿菌可以很規(guī)則，如果是需氧菌則非?？赡苁茄堪麠U菌屬，如果是厭氧則非?？赡苁撬缶鷮?。如果很小，可能是不呈鏈狀的李斯特菌屬，如果呈鏈狀則很可能是乳酸桿菌屬。革蘭陽性不規(guī)則的桿菌（多形態(tài)），一端比另一端粗。常相互吸附或呈籬笆樣排列=棒狀桿菌屬或丙酸桿菌屬第五十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌第五十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日革蘭陰性雙球菌第五十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日多形態(tài)提示混合厭氧菌感染第五十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日外型奇特的酵母菌，不像米老鼠的耳朵或白色念珠菌橢圓形孢子。報(bào)告“真菌成分和酵母樣細(xì)胞”。不要遺忘革蘭陰性桿菌。第五十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日痰培養(yǎng)-特別提醒洋蔥伯克霍爾德菌是一種重要的呼吸道致病原，可引起囊性纖維化。常規(guī)培養(yǎng)基中生長良好。諾卡菌（Nocardiaspp）諾卡菌是一種重要的呼吸道致病菌。培養(yǎng)的標(biāo)本應(yīng)立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查，如果延遲時間不長，4℃保存也可以接受。標(biāo)本革蘭染色檢查，可以發(fā)現(xiàn)小的革蘭陽性菌，外觀呈分枝狀、絲狀或球狀。沒有特異的培養(yǎng)諾卡菌的培養(yǎng)基，可用心浸液沙氏葡萄糖瓊脂、腦心浸液瓊脂、羊血瓊脂或胰蛋白大豆瓊脂。25-37℃孵育3周，37℃更好。鼻咽部—金黃色葡萄球菌確定金黃色葡萄球菌帶菌者，用聚酯頭拭子從前鼻孔取鼻咽分泌物，接種5％羊血，35℃孵育2d。第五十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日痰培養(yǎng)-特別提醒鼻咽部—腦膜炎奈瑟菌采集鼻咽拭子標(biāo)本，接種血瓊脂、巧克力瓊脂或MTM培養(yǎng)基，5％CO2的潮濕環(huán)境，35℃孵育72h。喉—A群鏈球菌喉部標(biāo)本最常用于診斷A群鏈球菌喉炎，標(biāo)本接種血瓊脂5～10％CO2環(huán)境，35℃孵育48h。第六十頁，共八十五頁，2022年，8月28日腦脊液-操作步驟將腦脊液標(biāo)本經(jīng)離心（≥1500g，15min）后，將上清液倒入消毒的試管，留下0.5ml沉淀和液體，充分混勻。無菌吸取標(biāo)本20～30ul分別劃線接種于羊血平皿、巧克力平皿，分別置燭缸和普通培養(yǎng)箱內(nèi)35℃孵育24～48小時。應(yīng)同時制備涂片，革蘭染色鏡檢。觀察結(jié)果，有細(xì)菌生長者進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏。第六十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日腦脊液-操作步驟也可將腦脊液標(biāo)本注入增菌培養(yǎng)瓶內(nèi)先行增菌培養(yǎng)，具體操作參見血液培養(yǎng)。采集CSF是為了診斷腦膜炎，細(xì)菌性腦膜炎分為急性和慢性兩種。急性腦膜炎在感染后24h內(nèi)產(chǎn)生癥狀，通常由化膿性細(xì)菌引起，最可能的病原菌根據(jù)患者年齡和疾病是否由社區(qū)或醫(yī)院感染而有變化。包括：B群鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌、大腸埃希菌、肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌等。慢性腦膜炎（癥狀持續(xù)至少4周）的典型致病菌包括：結(jié)核分枝桿菌、梅毒螺旋體、布魯氏菌、問號鉤端螺旋體和博氏疏螺旋體。腦脊液離心涂片抗酸染色，應(yīng)用3000～3600g30min。厭氧菌很少引起腦膜炎，因此不需要對腦脊液常規(guī)進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)。厭氧菌常與腦膿腫形成、硬腦膜下積膿和硬腦膜外膿腫有關(guān)。第六十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日膿液培養(yǎng)-標(biāo)本要求臨床醫(yī)生根據(jù)需要無菌操作取材，比較理想的方法是用注射器抽取膿性物質(zhì)。從膿腫底部或膿腫壁的取樣，效果最好。如果不能獲得抽取物，也可以用拭子從傷口深處采集滲出物，至少采集兩個拭子，一個用于涂片染色，一個用于培養(yǎng)。厭氧培養(yǎng)最好不用拭子。將采集的標(biāo)本置于無菌試管內(nèi)，立即送檢。厭氧培養(yǎng)標(biāo)本取材應(yīng)迅速、準(zhǔn)確，禁止接觸空氣，盛標(biāo)本容器內(nèi)要排盡空氣第六十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日膿液培養(yǎng)【標(biāo)本處理】標(biāo)本劃線接種于羊血平皿，35℃孵育24～48小時。同時涂片革蘭染色。厭氧培養(yǎng)接種布氏血瓊脂，厭氧環(huán)境培養(yǎng)。觀察結(jié)果，有細(xì)菌生長者進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏。第六十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日前列腺培養(yǎng)【標(biāo)本要求】

首先用無菌等滲鹽水的拭子洗凈尿道口。

由臨床醫(yī)生行前列腺按摩術(shù)留取標(biāo)本于無菌試管內(nèi)，立即送檢?！緲?biāo)本處理】

將標(biāo)本劃線接種于羊血平皿，35℃孵育24～48小時。觀察結(jié)果，有細(xì)菌生長者進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏?！咀⒁馐马?xiàng)】留取標(biāo)本注意避免污染。疑為性傳播疾病做相應(yīng)的STD培養(yǎng)。第六十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日淋球菌培養(yǎng)【操作步驟】待檢物劃線接種于專用MTM平皿上，將接種好的平皿置燭虹中置35℃溫箱孵育48小時；取出平皿，挑取可疑菌落進(jìn)行鑒定；

鑒定：涂片革蘭染色；氧化酶試驗(yàn)；β－內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)；生長試驗(yàn)；糖發(fā)酵試驗(yàn)。第六十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日支原體培養(yǎng)從4~10℃冰箱中取出所需數(shù)量地培養(yǎng)基瓶，恢復(fù)液及鑒別、定量、藥敏板，使其在接種前接近室溫。旋下外蓋，取下丁基橡膠內(nèi)塞，然后擠滴加入恢復(fù)液，培養(yǎng)基迅速融解、表面至標(biāo)簽上緣處（約1.8ml）應(yīng)隨即、直接往培養(yǎng)基瓶接種標(biāo)本（如果延遲接種，則標(biāo)本置室溫不超過2小時；在4~10℃時不超過8小時）混勻后，從瓶內(nèi)分別取50微升（1大滴）加到鑒別、定量、藥敏板的每一小孔中然后，在每孔正中上方，準(zhǔn)確、擠滴加入一滴石蠟油。將鑒別、定量、藥敏板置36℃孵育箱中培養(yǎng)12小時后，即可開始觀察結(jié)果;不見陽性者，則連續(xù)培養(yǎng)時間應(yīng)延長至48小時結(jié)束。第六十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日臨床細(xì)菌室厭氧菌培養(yǎng)基本程序厭氧培養(yǎng)基本設(shè)備厭氧標(biāo)本采集和運(yùn)送步驟厭氧菌的分離和鑒定步驟厭氧菌的報(bào)告厭氧菌的藥敏試驗(yàn)厭氧菌的菌種保存第六十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日厭氧培養(yǎng)基本設(shè)備輸送瓊脂Amies瓊脂(41998、41999)難辯梭菌瓊脂(43213)厭氧培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)裝置厭氧氣袋厭氧盒或厭氧罐厭氧培養(yǎng)箱厭氧菌鑒定方法第六十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日需要準(zhǔn)備的厭氧菌培養(yǎng)基斯氏瓊脂+5%羊血：適用所有厭氧菌生長斯氏萬古霉素+5%羊血：適用革蘭陰性厭氧菌難辯梭菌選擇培養(yǎng)基(CCFA)：分離難辯梭菌改良厭氧血平皿第七十頁，共八十五頁，2022年，8月28日改良厭氧血平皿配制血瓊脂基礎(chǔ)(按1000ml量）半胱氨酸：0.4克氯化血紅素(5mg/ml):1ml1%維生素K1:0.1ml加熱溶解冷卻后調(diào)整pH7.4高壓滅菌后冷卻至50℃時加入5-10%的脫釬維羊血混合后傾注平皿。營養(yǎng)好可供大多數(shù)厭氧菌生長質(zhì)量控制：產(chǎn)黑色素普雷沃菌形成典型菌落和色素產(chǎn)氣夾膜梭菌有雙圈溶血。第七十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日厭氧標(biāo)本的選擇、采集和運(yùn)送可疑厭氧菌感染特征感染局部產(chǎn)生氣體分泌物有惡臭分泌物帶血或呈黑色粘膜周圍的感染如肛周、口腔、鼻竇、咽頰等細(xì)菌培養(yǎng)陰性，但有菌血癥表現(xiàn)長期使用氨基糖苷類抗生素，但無效者有基礎(chǔ)疾病免疫低下者第七十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日需做厭氧血培養(yǎng)的高危人群腸膿毒癥、女性生殖道感染、褥瘡及呼吸道感染患者ICU患者或近期做過腹部外科手術(shù)的患者嚴(yán)重?zé)齻屯鈧颊甙橛袊?yán)重心血管疾病、糖尿病、惡性腫瘤、移植和免疫抑制患者老年患者臨床高度懷疑有厭氧菌感染的患者

絕大多數(shù)住院患者需要做厭氧血培養(yǎng)第七十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日正確地收集標(biāo)本不能做厭氧培養(yǎng)的標(biāo)本：咽、鼻、尿道或直腸拭子。咳出的痰，通過支氣管鏡取的分泌物排出或?qū)С龅哪蚣拔竷?nèi)容物。糞便（除難辨梭菌）第七十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日可做厭氧培養(yǎng)的標(biāo)本從未開放的膿腫抽取膿液尿：從恥骨聯(lián)合上方做膀胱穿刺吸出從腎造口管收集的氣管切開吸取的肺分泌物女性生殖器：后穹隆穿刺穿刺抽出的胸腔液、腹腔液、腦脊液竇道標(biāo)本：可插入小導(dǎo)管用注射器吸出竇道損傷部位取材做活組織檢查第