API質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定及分析方法開發(fā)-課件

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的依據(jù)

1.QBD理念、TQC、ICH指導(dǎo)原則2.相關(guān)文獻(xiàn)3.驗(yàn)證批API的實(shí)際質(zhì)量情況4.制劑對(duì)API的相關(guān)要求5.最終的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的依據(jù)1QBD：質(zhì)量源于設(shè)計(jì)，根據(jù)工藝情況制定合理的檢測(cè)項(xiàng)目，分析方法及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)TQC：全面質(zhì)量管理，從原料，中間體到成品的全程控制雜質(zhì)譜ICH：人用藥品國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議分析研發(fā)的指導(dǎo)性原則

QBD：質(zhì)量源于設(shè)計(jì)，根據(jù)工藝情況制定合理的檢測(cè)項(xiàng)目，分析方2檢測(cè)項(xiàng)目

起始物料：鑒別、含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)、水分、殘?jiān)?、重金屬等中間體：

經(jīng)過處理得到的固體：含量，水分，有關(guān)物質(zhì)

反應(yīng)液：監(jiān)控反應(yīng)的完成情況，反應(yīng)過程的雜質(zhì)不是其主要的考察項(xiàng)目檢測(cè)項(xiàng)目

起始物料：鑒別、含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)、水分、殘?jiān)?、?成品檢測(cè)項(xiàng)目常規(guī)的檢測(cè)項(xiàng)目：性狀，溶解度，熔點(diǎn)，鑒別，含量測(cè)定，有關(guān)物質(zhì)，殘?jiān)瑲埩羧軇?，水分以及一些特殊的檢測(cè)項(xiàng)目水溶性藥物的pH值結(jié)構(gòu)中含手性官能團(tuán)藥物的比旋度成鹽藥物的酸堿離子含量微生物限度口服藥物的顆粒度分布作為注射劑原料藥的澄清度，內(nèi)毒素藥品中添加的輔料穩(wěn)定劑的含量晶型藥物的晶型分析檢測(cè)項(xiàng)目，如DSC，X衍射，紅外等含結(jié)晶水藥物的結(jié)晶水分析：加測(cè)TGA，確定結(jié)晶水的個(gè)數(shù)非日常檢測(cè)的項(xiàng)目（成品研究項(xiàng)目）

pKa，LgP，結(jié)構(gòu)確證的一些檢測(cè)項(xiàng)目如NMR，元素分析，MS，單晶衍射

發(fā)酵產(chǎn)品的蛋白殘留，降壓物質(zhì)等

特定物質(zhì)的殘留研究

潛在基因雜質(zhì)，高毒性物質(zhì)，中間體殘留，可能副反應(yīng)雜質(zhì)研究，催化劑殘留，樹脂殘留等等

成品檢測(cè)項(xiàng)目常規(guī)的檢測(cè)項(xiàng)目：性狀，溶解度，熔點(diǎn)，鑒別，含量測(cè)4雜質(zhì)分類雜質(zhì)性質(zhì)：有機(jī)雜質(zhì)，無機(jī)雜質(zhì)雜質(zhì)產(chǎn)生途徑來源：工藝雜質(zhì)，降解雜質(zhì)

工藝雜質(zhì)包括起始原料，中間體，副產(chǎn)物，對(duì)映體等

降解雜質(zhì)包括氧化，酸堿水解，光，高溫，高濕等雜質(zhì)危害性：信號(hào)雜質(zhì)，一般雜質(zhì)，高危害性毒性（基因毒性及致癌性物質(zhì)）

信號(hào)雜質(zhì)：如鈉離子，氯離子等本身無危害性，對(duì)成品穩(wěn)定性也無影響，是考察工藝的控制水平的一類雜質(zhì)

潛在基因雜質(zhì)在最后一步引入，需列入最重質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，不是最后一步引入的可在中間環(huán)節(jié)控制

若樣品中含量小于30%限度可不列入最終標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)樣品以可采用中試6批或成品商品化三批雜質(zhì)的可知性：已知雜質(zhì)，未知雜質(zhì)

雜質(zhì)分類雜質(zhì)性質(zhì)：有機(jī)雜質(zhì)，無機(jī)雜質(zhì)5API有關(guān)物質(zhì)

哪些雜質(zhì)要列入已知雜質(zhì)

文獻(xiàn)中提到的雜質(zhì)一般均須進(jìn)行研究

工藝中的中間體，副反應(yīng)產(chǎn)物，潛在的高毒性物質(zhì)

成品中大于0.10%的雜質(zhì)雜質(zhì)的限度：

已知雜質(zhì)限度參考原研廠家標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)還須用原研樣品質(zhì)量比較

沒有文獻(xiàn)特別說明的，雜質(zhì)含量一般需控制在0.15%以內(nèi)，未知雜質(zhì)一般需控制在0.10%以內(nèi)；大于0.10%雜質(zhì)需進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證對(duì)高于ICH要求的，可基于下列理由做適當(dāng)?shù)南薅日{(diào)整

藥典專論或科學(xué)文獻(xiàn)

主要代謝產(chǎn)物

與原研要進(jìn)行雜質(zhì)對(duì)比

藥理毒理研究

API有關(guān)物質(zhì)哪些雜質(zhì)要列入已知雜質(zhì)

文獻(xiàn)中提到的雜質(zhì)一般6相關(guān)文獻(xiàn)法定藥典原研廠家標(biāo)準(zhǔn)專利文獻(xiàn)學(xué)術(shù)論文相關(guān)文獻(xiàn)法定藥典7制劑對(duì)API的相關(guān)要求劑型：

注射劑：內(nèi)毒素、澄清度

口服制劑：晶型及顆粒度對(duì)制劑的溶出曲線（即生物利用度）影響很大

但速釋藥物晶型和顆粒度可不做要求，比如口崩片

制劑對(duì)API的相關(guān)要求劑型：

注射劑：內(nèi)毒素、澄清度

口服8.驗(yàn)證批API的實(shí)際質(zhì)量情況有關(guān)物質(zhì)

對(duì)涉及到的已知雜質(zhì)進(jìn)行研究分析

工藝中存在的雜質(zhì)根據(jù)實(shí)際情況列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

降解雜質(zhì)根據(jù)長(zhǎng)期穩(wěn)定性結(jié)果訂入

成品中沒有的且不會(huì)降解產(chǎn)生的的進(jìn)行不存在驗(yàn)證，存在的列入標(biāo)準(zhǔn)晶型：根據(jù)晶型制定合理的檢測(cè)方法其它項(xiàng)目穩(wěn)定性的各檢測(cè)項(xiàng)目的趨勢(shì)及結(jié)果.驗(yàn)證批API的實(shí)際質(zhì)量情況有關(guān)物質(zhì)

對(duì)涉及到的已知雜質(zhì)進(jìn)行9分析方法開發(fā)與驗(yàn)證分析研發(fā)在新藥研發(fā)的地位主要的檢測(cè)手段已有相關(guān)藥典藥物的分析研究（主要指國(guó)外藥典）不足信回復(fù)的相關(guān)研究及策略分析與其它部門的配合問題分析方法開發(fā)與驗(yàn)證分析研發(fā)在新藥研發(fā)的地位10分析研發(fā)在新藥研發(fā)的地位建立控制藥品質(zhì)量的分析方法優(yōu)化工藝參數(shù)，確定工藝條件；提高收率與質(zhì)量，減少副反應(yīng)（確定設(shè)計(jì)空間與正常操作范圍）建立起始物料、中間體及成品分析方法，并進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)進(jìn)行穩(wěn)定性考察，作為新藥注冊(cè)申報(bào)的質(zhì)量研究部分的資料上報(bào)，是新藥申報(bào)核心內(nèi)容。

分析研發(fā)在新藥研發(fā)的地位建立控制藥品質(zhì)量的分析方法11主要的檢測(cè)手段

色譜方法、滴定法、比色法、光譜法、質(zhì)譜法、核磁共振以及方法之間的聯(lián)用色譜法：HPLC（UPLC）、IC、TLC、GC滴定法：酸堿中和、非水滴定法、氧化-還原滴定、絡(luò)合滴定、沉淀滴定、熱量滴定光譜法：紅外、紫外、熒光、原子吸收及發(fā)射、X-衍射質(zhì)譜：電離方式

檢測(cè)模式核磁共振：碳譜、氫譜聯(lián)用：HPLC-MS、HPLC-UV、HPLC-FL、HPLC-MSICP-MSGC-MS液相色譜的其它檢測(cè)器：示差、蒸發(fā)光散射、電導(dǎo)、電化學(xué)（后面為ＩＣ中使用到）ＧＣ檢測(cè)器：熱導(dǎo)、電子捕捉器、氫離子火焰、氮磷檢測(cè)器主要的檢測(cè)手段色譜方法、滴定法、比色法、光譜法、質(zhì)譜法、核12TLC簡(jiǎn)單方便，常作為中間體及起始物料的檢測(cè)，一般不作為成品的檢測(cè)方法。IC是離子色譜（嚴(yán)格講也屬于HPLC），適用于檢測(cè)各種陰陽(yáng)離子，單糖，多糖，以及氨基酸的檢測(cè)，具備色譜法的所有優(yōu)點(diǎn)，在藥品分析方法中有越來越多的應(yīng)用。

主要有戴安及萬通兩家，各有優(yōu)缺點(diǎn)。TLC簡(jiǎn)單方便，常作為中間體及起始物料的檢測(cè)，一般不作為成品13GC的優(yōu)點(diǎn)及適用范圍靈敏度高，理論塔板數(shù)高，分離度好方法開發(fā)較為簡(jiǎn)便技術(shù)成熟一般用于具有揮發(fā)性物質(zhì)或經(jīng)過衍生具有揮發(fā)性的物質(zhì)的檢測(cè)API殘留溶劑的主要檢測(cè)方法GC的優(yōu)點(diǎn)及適用范圍靈敏度高，理論塔板數(shù)高，分離度好14GC方法開發(fā)的要點(diǎn)色譜柱載氣柱溫檢測(cè)器進(jìn)樣方式稀釋溶液的選擇GC方法開發(fā)的要點(diǎn)色譜柱15色譜柱的選擇色譜柱：填充柱，毛細(xì)管柱，一般采用毛細(xì)管柱

柱極性：極性柱innowax，F(xiàn)FAP，DB23中等級(jí)性DB624，HP-50非極性HP-1，HP-5根據(jù)化合物的機(jī)型選擇合適的色譜柱，達(dá)到最佳的分離效果。不同的溶劑組合采用不同的色譜柱，最常用為HP-5和DB624。氣相色譜法采用保留時(shí)間進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)時(shí)，一定要用不同極性的色譜柱進(jìn)行定位，同時(shí)保留時(shí)間一致，才可判定為同一物質(zhì)。涂膜厚度：0.1um到1um等多種規(guī)格，一般涂膜厚度越大，保留性越強(qiáng)，色譜柱壽命越長(zhǎng)；拖尾嚴(yán)重，熱穩(wěn)定性較差，氣質(zhì)聯(lián)用（柱流失更少，干擾?。┮话悴捎猛磕ê穸容^小的色譜柱內(nèi)徑：0.13mm到0.53mm柱長(zhǎng)度：30m，60m，120m，增加長(zhǎng)度可增加分離度，提高柱效

內(nèi)徑和長(zhǎng)度不同，載氣流量設(shè)置也不同手性柱：商品化的手性色譜柱主要有β、γ環(huán)糊精填料的色譜柱，隨聚合度的增加，分離能力增強(qiáng)。較主流的品牌為supelco、agilent。色譜柱的選擇色譜柱：填充柱，毛細(xì)管柱，一般采用毛細(xì)管柱

柱極16載氣：氮?dú)狻⒑?/p>

氮?dú)庥休^好的經(jīng)濟(jì)性，氦氣有更高的分離效果。

載氣：氮?dú)?、氦?/p>

17柱溫及進(jìn)樣口溫度的選擇進(jìn)樣口溫度高于柱溫20℃

需考慮測(cè)定物質(zhì)氣化溫度以及樣品的穩(wěn)定性柱溫：一般采用程序升溫法檢測(cè)，柱溫越高，洗脫能力越強(qiáng)。一般根據(jù)待測(cè)物質(zhì)的沸點(diǎn)以及極性選擇合適的柱溫程序。

優(yōu)點(diǎn)：可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)物質(zhì)，同時(shí)還可老化色譜柱，避免前后兩次分析的殘留干擾。

柱溫及進(jìn)樣口溫度的選擇進(jìn)樣口溫度高于柱溫20℃

需考慮測(cè)定18檢測(cè)器FID：氫離子火焰檢測(cè)器。通用檢測(cè)器，碳?xì)浜枯^高的化合物信號(hào)強(qiáng)，靈敏度高，適用于大多數(shù)揮發(fā)性物質(zhì)ECD：電子捕捉器，適用于含鹵素的化合物檢測(cè)。殘留溶劑檢測(cè)氯仿盡量采用此檢測(cè)器，F(xiàn)ID靈敏度較差，很難達(dá)到限度要求氮磷檢測(cè)器：含氮磷硫等元素的化合物靈敏度高，在殘留農(nóng)藥的檢測(cè)方面有很廣的應(yīng)用熱導(dǎo)檢測(cè)器：通用型檢測(cè)器，靈敏度低，應(yīng)用較少。元素分析儀采用此檢測(cè)器，可檢測(cè)CO2，H2O等其他檢測(cè)器無法檢測(cè)的化合物。檢測(cè)器FID：氫離子火焰檢測(cè)器。通用檢測(cè)器，碳?xì)浜枯^高的19進(jìn)樣方式直接進(jìn)樣法：靈敏度低，干擾大，重現(xiàn)性也較差，進(jìn)樣體積一般1ul以下，主要應(yīng)用于高沸點(diǎn)物質(zhì)以及歸一化法測(cè)定純度頂空進(jìn)樣：干擾小，靈敏度高，重現(xiàn)性好。低沸點(diǎn)物質(zhì)的分析的首選方法。

參數(shù)設(shè)置：頂空溫度一般90℃，特殊情況可升高，一般要求低于溶劑沸點(diǎn)。頂空平衡時(shí)間一般15分鐘左右，太短未達(dá)平衡，重現(xiàn)性差；太長(zhǎng)藥物降解，產(chǎn)生未知峰，同時(shí)頂空瓶密閉性變差，影響重現(xiàn)性進(jìn)樣方式直接進(jìn)樣法：靈敏度低，干擾大，重現(xiàn)性也較差，進(jìn)樣體20殘留溶劑檢測(cè)稀釋劑的選擇溶解性：樣品須完全溶解，必要時(shí)可加熱穩(wěn)定性：不與待測(cè)溶劑反應(yīng)，樣品在此溶劑條件下不降解產(chǎn)生干擾檢測(cè)的降解峰待測(cè)溶劑的溶解性：待測(cè)溶劑在稀釋劑中有較好的溶解性，必要時(shí)可采用混合溶劑干擾：溶劑中的雜質(zhì)峰不干擾待測(cè)溶劑檢測(cè)，盡量采用色譜純的溶劑溶劑酸堿性：不與待測(cè)溶劑反應(yīng)成鹽影響待測(cè)溶劑揮發(fā)性殘留溶劑檢測(cè)稀釋劑的選擇溶解性：樣品須完全溶解，必要時(shí)可加熱21氣相殘留溶劑遇到的常見問題

回收率不佳：基質(zhì)效應(yīng)、溶劑的酸堿性、降解反應(yīng)未知溶劑峰：降解反應(yīng)，樣品本身污染、遺漏的檢測(cè)溶劑重現(xiàn)性差：待測(cè)溶劑與稀釋劑互溶性差，溶液濃度不均一；樣品在稀釋液中溶解不完全氣相殘留溶劑遇到的常見問題回收率不佳：基質(zhì)效應(yīng)、溶劑的酸堿22有關(guān)物質(zhì)方法的開發(fā)查閱相關(guān)資料

化合物的結(jié)構(gòu)：紫外吸收，pKa，極性大小，紫外吸收，穩(wěn)定性，溶解性等

工藝路線：確定需要研究的已知雜質(zhì)文獻(xiàn)參考USP論壇，專利文獻(xiàn)等，對(duì)于發(fā)酵類的藥物，雜質(zhì)譜研究很難，一般最好在已有注冊(cè)方法基礎(chǔ)進(jìn)行微調(diào)，以免發(fā)生嚴(yán)重問題類似化合物的方法等有關(guān)物質(zhì)方法的開發(fā)查閱相關(guān)資料

化合物的結(jié)構(gòu)：紫外吸收，pK23色譜方法的開發(fā)液相方法包括流動(dòng)相組成（包括緩沖液的類型，鹽濃度，pH值，有機(jī)溶劑的種類，比例等），梯度程序，色譜柱型號(hào)，柱溫，以及檢測(cè)器的選擇，通常這些配置相互關(guān)聯(lián)；同時(shí)還包括樣品濃度的設(shè)定，稀釋液選擇，樣品溶液制備的振搖或超聲時(shí)間，溶解所采用的量瓶材質(zhì)等較多參數(shù)。

色譜方法的開發(fā)液相方法包括流動(dòng)相組成（包括緩沖液的類型，鹽24有關(guān)物質(zhì)方法的評(píng)價(jià)專屬性：工藝雜質(zhì)（包括中間體、副反應(yīng)雜質(zhì)，起始物料，以及雜質(zhì)在反應(yīng)過程中引入的雜質(zhì)等），降解雜質(zhì)與API之間分離效果良好，同時(shí)各雜質(zhì)在同一方法中均能被檢出（洗脫并檢測(cè)）。特別要求：主峰相鄰雜質(zhì)盡量分開，主峰后雜質(zhì)分離度最好在3以上。柱效及保留時(shí)間：API成品非UPLC的方法保留時(shí)間在10-20min之間，盡量提高理論塔板數(shù)，同時(shí)具有較好的對(duì)稱性，盡量小的半峰寬靈敏度：雜質(zhì)LOQ至少要在限度的30%以下回收率：雜質(zhì)回收率要求在80%以上方法的重現(xiàn)性：開發(fā)過程中盡量對(duì)不同品牌的色譜柱，流動(dòng)相的pH值，柱溫，流動(dòng)相比例等參數(shù)進(jìn)行充分研究，確定其耐用范圍，以保證方法的重現(xiàn)性方法的簡(jiǎn)便性與儀器的要求：盡量采用比較簡(jiǎn)單的方法，采用最為穩(wěn)定的稀釋液，盡量避免現(xiàn)配現(xiàn)做的方法；盡量采用較為普及的儀器色譜柱的穩(wěn)定性：流動(dòng)相與柱溫等參數(shù)設(shè)置盡量在色譜柱的耐受范圍，避免采用色譜柱不穩(wěn)定的檢測(cè)方法

有關(guān)物質(zhì)方法的評(píng)價(jià)專屬性：工藝雜質(zhì)（包括中間體、副反應(yīng)雜質(zhì)，25如何合理選擇檢測(cè)方法

GC，HPLC，離子色譜，電位滴定原則：根據(jù)待檢物質(zhì)的結(jié)構(gòu)性質(zhì)，選擇合適的檢測(cè)方法有紫外吸收物質(zhì)，盡量采用LC-UV檢測(cè)有關(guān)物質(zhì)及含量，滴定法測(cè)定含量可做為液相方法的補(bǔ)充或印證無紫外吸收的殘留溶劑盡量采用GC，熱不穩(wěn)定或樣品易降解產(chǎn)生的物質(zhì)可考慮離子色譜或液相衍生方法進(jìn)行檢測(cè)，有揮發(fā)性有紫外吸收的穩(wěn)定化合物可酌情選擇GC或LC不揮發(fā)，無紫外吸收物質(zhì)可采用示差或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，含特定基團(tuán)可考慮衍生檢測(cè)對(duì)映異構(gòu)體：盡可能采用手性柱直接檢測(cè)如何合理選擇檢測(cè)方法GC，HPLC，離子色譜，電位滴定26半胱胺鹽酸鹽工藝流程半胱胺鹽酸鹽工藝流程27半胱胺文獻(xiàn)資料的檢測(cè)方法氧化還原法

直接碘量法返還滴定法光譜法

半胱胺與亞硝酸反應(yīng)形成S-亞硝基衍生物，破壞剩余亞硝酸，以Hg2+水解S-亞硝基衍生物，釋放的亞硝酸與磺胺試劑生成偶氮染料，544nm亞硝基衍生物

原子吸收測(cè)定硫原子色譜法

GC衍生法：半胱胺與氯甲酸甲酯反應(yīng)，正戊烷萃取，空氣干燥，乙酸乙酯溶解，F(xiàn)ID檢測(cè)器測(cè)定

HPLC：柱前衍生生成熒光物質(zhì)，液相檢測(cè)；與水合乙醛酸反應(yīng)，十六烷基三甲基硫酸氫銨為離子對(duì)試劑在反相離子對(duì)色譜上分離，檢測(cè)波長(zhǎng)265nm

離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器（積分安培模式）高效薄層色譜毛細(xì)管電泳

半胱胺文獻(xiàn)資料的檢測(cè)方法氧化還原法

直接碘量法返還滴定法28供應(yīng)商的檢測(cè)項(xiàng)目及方法性狀含量：99%碘量法滴定鐵離子：20ppm干失：0.5%硫酸根：0.5%pH：3-5熔點(diǎn)：62-70℃供應(yīng)商的檢測(cè)項(xiàng)目及方法性狀29半胱胺有關(guān)物質(zhì)方法色譜柱：WatersXselectCHSC18250*4.6mm5μm檢測(cè)波長(zhǎng)：200nm進(jìn)樣量：20μl柱溫：30℃流動(dòng)相A：0.1%全氟丁基磺酸∶乙腈=85：15流動(dòng)相B：0.1%全氟丁基磺酸∶乙腈=70：30梯度洗脫：稀釋劑：0.01N鹽酸水溶液流速：1.0ml/min進(jìn)樣盤溫度：2～8℃樣品濃度：1.5mg/ml半胱胺有關(guān)物質(zhì)方法色譜柱：WatersXselectCH30檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇31稀釋劑的選擇半胱胺鹽酸鹽對(duì)照溶液（水溶解）（4小時(shí)對(duì)比）半胱胺鹽酸鹽對(duì)照溶液（0.01N鹽酸溶解）（20小時(shí)以上對(duì)比）稀釋劑的選擇半胱胺鹽酸鹽對(duì)照溶液（水溶解）（4小時(shí)對(duì)比）半胱32有關(guān)物質(zhì)方法圖譜樣品及空白有關(guān)物質(zhì)方法圖譜樣品及空白33兩批檢驗(yàn)結(jié)果S120418保留時(shí)間(min)雜質(zhì)名稱含量（%）歸一化含量（%）校正因子1.9鹽酸空白峰///3.7411,3-噻唑烷-2-酮0.41.39260.35.3622-巰基-1,3-噻唑烷0.02770.00750.2711.464半胱胺/97.0356N/A24.520未知雜質(zhì)0.25220.2522N/A29.559胱胺1.67340.97181.72S111024保留時(shí)間(min)雜質(zhì)名稱含量（%）歸一化含量（%）校正因子1.9鹽酸空白峰///3.7351,3-噻唑烷-2-酮0.0180.06540.35.3622-巰基-1,3-噻唑烷NDND0.2711.435半胱胺/97.6698N/A24.496未知雜質(zhì)0.25220.2522N/A29.512胱胺3.742.191.72兩批檢驗(yàn)結(jié)果S120418雜質(zhì)名稱含量（%）歸一化含量（%）34檢測(cè)方法及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)性狀：白色或類白色粉末鑒別：供試品的保留時(shí)間與對(duì)照品在含量測(cè)定項(xiàng)下保留時(shí)間一致干失：60℃減壓干燥小于1.0%含量：≥95%有關(guān)物質(zhì)：1，3噻唑烷-2-酮＜2.0%

胱胺＜3.0%

單雜＜1.0%

總雜＜5.0%檢測(cè)方法及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)性狀：白色或類白色粉末35已有相關(guān)藥典藥物的分析研究采用藥典方法進(jìn)行所有項(xiàng)目的常規(guī)檢測(cè)工藝雜質(zhì)的研究

考察特有工藝雜質(zhì)在已有藥典有關(guān)物質(zhì)方法的分離檢出情況方法驗(yàn)證：在不改變方法情況下，進(jìn)行方法確認(rèn)即可

已有相關(guān)藥典藥物的分析研究采用藥典方法進(jìn)行所有項(xiàng)目的常規(guī)檢測(cè)36不足信回復(fù)的相關(guān)研究及策略

國(guó)內(nèi)申報(bào)的不足信回復(fù)

背景：質(zhì)量研究的不足信一般是與國(guó)內(nèi)其它企業(yè)進(jìn)行對(duì)比，未作研究或不合理的地方

策略：逐條認(rèn)真核實(shí)進(jìn)行分析研究，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成回復(fù)國(guó)外不足信回復(fù)（質(zhì)量部分，與分析相關(guān)）

背景：取得國(guó)內(nèi)注冊(cè)批文后進(jìn)行國(guó)外申報(bào)，基本無太大原則性問題，主要突出表現(xiàn)在審評(píng)員對(duì)質(zhì)量研究的個(gè)人見解

策略：能進(jìn)行分析研究的不考慮其合理性；難以進(jìn)行分析研究的從工藝角度解釋不足信回復(fù)的相關(guān)研究及策略國(guó)內(nèi)申報(bào)的不足信回復(fù)

背景：質(zhì)量37非布司他的SFDA不足信及策略1.提供的制備工藝資料比較簡(jiǎn)單，請(qǐng)補(bǔ)充物料控制、中間體控制以及工藝過程控制、關(guān)鍵工藝步驟等工藝研究資料。精制工藝與產(chǎn)品的純度、晶型密切相關(guān)，注意提供精制工藝研究資料。

策略：分析中心對(duì)關(guān)鍵起始物料及最后三步的反應(yīng)中間體建立檢測(cè)HPLC方法并對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證。2.在中間體VI的合成中，使用了試劑1-溴-2-甲基丙烷（溴代異丁烷），其中可能含有溴代正丁烷、溴代正丙烷、溴代異丙烷等雜質(zhì)，經(jīng)后續(xù)的反應(yīng)步驟，可能產(chǎn)生與非布司他結(jié)構(gòu)類似的工藝雜質(zhì)，建議增訂所用溴代異丁烷的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，注意對(duì)雜質(zhì)（單雜、總雜）、含量等項(xiàng)目的控制。提供質(zhì)控方法的驗(yàn)證資料，說明雜質(zhì)檢查方法對(duì)類似結(jié)構(gòu)雜質(zhì)的專屬性。

策略：補(bǔ)充：鑒于含溴代正丁烷、溴代正丙烷、溴代異丙烷等基團(tuán)的雜質(zhì)復(fù)雜，短時(shí)間無法提供，根據(jù)建議嚴(yán)格制定物料1-溴-2-甲基丙烷的標(biāo)準(zhǔn)，包括單雜、總雜、含量等項(xiàng)目，并提供檢測(cè)方法驗(yàn)證報(bào)告。非布司他的SFDA不足信及策略1.提供的制備工藝資料比較簡(jiǎn)單383.有關(guān)物質(zhì)：檢測(cè)波長(zhǎng)建議修訂為不超過220nm，再對(duì)流動(dòng)相組成/比例進(jìn)行考察，重新進(jìn)行方法學(xué)研究；根據(jù)制備工藝、適度條件降解試驗(yàn)，對(duì)本品中可能存在的工藝雜質(zhì)（原料引入的雜質(zhì)、反應(yīng)副產(chǎn)物等）、降解產(chǎn)物進(jìn)行研究分析，以驗(yàn)證方法的專屬性，光照降解建議對(duì)藥物的乙腈溶液進(jìn)行，另請(qǐng)?zhí)峁┐制返腍PLC圖譜，注意考察主峰與非布司他結(jié)構(gòu)中氰基被甲醛基替代的雜質(zhì)（第5步反應(yīng)中未反應(yīng)完全的中間體IV的后續(xù)反應(yīng)產(chǎn)物）的分離情況；請(qǐng)與原研制劑進(jìn)行雜質(zhì)譜（種類、含量）的對(duì)比研究，參照相關(guān)技術(shù)要求對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行研究，合理制定雜質(zhì)限度。

策略：鑒于藥審中心對(duì)原上報(bào)的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法不認(rèn)可（230nm），請(qǐng)參照華東批準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)方法研究（219nm），請(qǐng)工藝負(fù)責(zé)人提供工藝中可能存在的反應(yīng)副產(chǎn)物，反應(yīng)副產(chǎn)物、起始物料、中間體均需做在成品中的不存在驗(yàn)證。因本品較穩(wěn)定，不易降解，如采用極限降解仍無法降解，光降解請(qǐng)用乙腈溶解后的溶液降解。4.請(qǐng)補(bǔ)充氯化物、硫酸鹽的檢查。5.穩(wěn)定性研究請(qǐng)?jiān)黾訉傩缘木涂疾熘笜?biāo)，采用修訂后的有關(guān)物質(zhì)方法重新進(jìn)行影響因素試驗(yàn)，提供放大規(guī)模生產(chǎn)樣品的穩(wěn)定性研究資料3.有關(guān)物質(zhì)：檢測(cè)波長(zhǎng)建議修訂為不超過220nm，再對(duì)流動(dòng)相39非布司他工藝路線非布司他工藝路線40API質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定及分析方法開發(fā)-課件41分析與其它部門的配合問題API的質(zhì)量研究是一個(gè)系統(tǒng)工程，不僅僅是分析研發(fā)部門的內(nèi)部事務(wù)研發(fā)的各個(gè)階段

初始階段：路線打通

小試中試階段：工藝優(yōu)化

工藝驗(yàn)證階段：各種質(zhì)量研究以及最終質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及檢測(cè)方法的確定

工藝改進(jìn)變更：評(píng)估質(zhì)量變化情況研發(fā)的各個(gè)部門

研發(fā)ＱＡ：根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)及質(zhì)量情況制定合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

工藝開發(fā)部門：提供工藝路線及結(jié)構(gòu)信息，提供雜質(zhì)及可用于驗(yàn)證的樣品

新藥申報(bào)部門：確定研發(fā)進(jìn)度，統(tǒng)籌資源

ＱＣ：方法轉(zhuǎn)移工藝路線的每個(gè)環(huán)節(jié)

從起始物料到最終成品每一個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量監(jiān)控

分析與其它部門的配合問題API的質(zhì)量研究是一個(gè)系統(tǒng)工程，不42分析是一個(gè)支持工作，是一個(gè)潤(rùn)物細(xì)無聲的角色準(zhǔn)確，及時(shí)，有效是最重要的原則，也是分析的生命分析是一個(gè)支持工作，是一個(gè)潤(rùn)物細(xì)無聲的角色43質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的依據(jù)

1.QBD理念、TQC、ICH指導(dǎo)原則2.相關(guān)文獻(xiàn)3.驗(yàn)證批API的實(shí)際質(zhì)量情況4.制劑對(duì)API的相關(guān)要求5.最終的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的依據(jù)44QBD：質(zhì)量源于設(shè)計(jì)，根據(jù)工藝情況制定合理的檢測(cè)項(xiàng)目，分析方法及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)TQC：全面質(zhì)量管理，從原料，中間體到成品的全程控制雜質(zhì)譜ICH：人用藥品國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議分析研發(fā)的指導(dǎo)性原則

QBD：質(zhì)量源于設(shè)計(jì)，根據(jù)工藝情況制定合理的檢測(cè)項(xiàng)目，分析方45檢測(cè)項(xiàng)目

起始物料：鑒別、含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)、水分、殘?jiān)?、重金屬等中間體：

經(jīng)過處理得到的固體：含量，水分，有關(guān)物質(zhì)

反應(yīng)液：監(jiān)控反應(yīng)的完成情況，反應(yīng)過程的雜質(zhì)不是其主要的考察項(xiàng)目檢測(cè)項(xiàng)目

起始物料：鑒別、含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)、水分、殘?jiān)⒅?6成品檢測(cè)項(xiàng)目常規(guī)的檢測(cè)項(xiàng)目：性狀，溶解度，熔點(diǎn)，鑒別，含量測(cè)定，有關(guān)物質(zhì)，殘?jiān)?，殘留溶劑，水分以及一些特殊的檢測(cè)項(xiàng)目水溶性藥物的pH值結(jié)構(gòu)中含手性官能團(tuán)藥物的比旋度成鹽藥物的酸堿離子含量微生物限度口服藥物的顆粒度分布作為注射劑原料藥的澄清度，內(nèi)毒素藥品中添加的輔料穩(wěn)定劑的含量晶型藥物的晶型分析檢測(cè)項(xiàng)目，如DSC，X衍射，紅外等含結(jié)晶水藥物的結(jié)晶水分析：加測(cè)TGA，確定結(jié)晶水的個(gè)數(shù)非日常檢測(cè)的項(xiàng)目（成品研究項(xiàng)目）

pKa，LgP，結(jié)構(gòu)確證的一些檢測(cè)項(xiàng)目如NMR，元素分析，MS，單晶衍射

發(fā)酵產(chǎn)品的蛋白殘留，降壓物質(zhì)等

特定物質(zhì)的殘留研究

潛在基因雜質(zhì)，高毒性物質(zhì)，中間體殘留，可能副反應(yīng)雜質(zhì)研究，催化劑殘留，樹脂殘留等等

成品檢測(cè)項(xiàng)目常規(guī)的檢測(cè)項(xiàng)目：性狀，溶解度，熔點(diǎn)，鑒別，含量測(cè)47雜質(zhì)分類雜質(zhì)性質(zhì)：有機(jī)雜質(zhì)，無機(jī)雜質(zhì)雜質(zhì)產(chǎn)生途徑來源：工藝雜質(zhì)，降解雜質(zhì)

工藝雜質(zhì)包括起始原料，中間體，副產(chǎn)物，對(duì)映體等

降解雜質(zhì)包括氧化，酸堿水解，光，高溫，高濕等雜質(zhì)危害性：信號(hào)雜質(zhì)，一般雜質(zhì)，高危害性毒性（基因毒性及致癌性物質(zhì)）

信號(hào)雜質(zhì)：如鈉離子，氯離子等本身無危害性，對(duì)成品穩(wěn)定性也無影響，是考察工藝的控制水平的一類雜質(zhì)

潛在基因雜質(zhì)在最后一步引入，需列入最重質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，不是最后一步引入的可在中間環(huán)節(jié)控制

若樣品中含量小于30%限度可不列入最終標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)樣品以可采用中試6批或成品商品化三批雜質(zhì)的可知性：已知雜質(zhì)，未知雜質(zhì)

雜質(zhì)分類雜質(zhì)性質(zhì)：有機(jī)雜質(zhì)，無機(jī)雜質(zhì)48API有關(guān)物質(zhì)

哪些雜質(zhì)要列入已知雜質(zhì)

文獻(xiàn)中提到的雜質(zhì)一般均須進(jìn)行研究

工藝中的中間體，副反應(yīng)產(chǎn)物，潛在的高毒性物質(zhì)

成品中大于0.10%的雜質(zhì)雜質(zhì)的限度：

已知雜質(zhì)限度參考原研廠家標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)還須用原研樣品質(zhì)量比較

沒有文獻(xiàn)特別說明的，雜質(zhì)含量一般需控制在0.15%以內(nèi)，未知雜質(zhì)一般需控制在0.10%以內(nèi)；大于0.10%雜質(zhì)需進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證對(duì)高于ICH要求的，可基于下列理由做適當(dāng)?shù)南薅日{(diào)整

藥典專論或科學(xué)文獻(xiàn)

主要代謝產(chǎn)物

與原研要進(jìn)行雜質(zhì)對(duì)比

藥理毒理研究

API有關(guān)物質(zhì)哪些雜質(zhì)要列入已知雜質(zhì)

文獻(xiàn)中提到的雜質(zhì)一般49相關(guān)文獻(xiàn)法定藥典原研廠家標(biāo)準(zhǔn)專利文獻(xiàn)學(xué)術(shù)論文相關(guān)文獻(xiàn)法定藥典50制劑對(duì)API的相關(guān)要求劑型：

注射劑：內(nèi)毒素、澄清度

口服制劑：晶型及顆粒度對(duì)制劑的溶出曲線（即生物利用度）影響很大

但速釋藥物晶型和顆粒度可不做要求，比如口崩片

制劑對(duì)API的相關(guān)要求劑型：

注射劑：內(nèi)毒素、澄清度

口服51.驗(yàn)證批API的實(shí)際質(zhì)量情況有關(guān)物質(zhì)

對(duì)涉及到的已知雜質(zhì)進(jìn)行研究分析

工藝中存在的雜質(zhì)根據(jù)實(shí)際情況列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

降解雜質(zhì)根據(jù)長(zhǎng)期穩(wěn)定性結(jié)果訂入

成品中沒有的且不會(huì)降解產(chǎn)生的的進(jìn)行不存在驗(yàn)證，存在的列入標(biāo)準(zhǔn)晶型：根據(jù)晶型制定合理的檢測(cè)方法其它項(xiàng)目穩(wěn)定性的各檢測(cè)項(xiàng)目的趨勢(shì)及結(jié)果.驗(yàn)證批API的實(shí)際質(zhì)量情況有關(guān)物質(zhì)

對(duì)涉及到的已知雜質(zhì)進(jìn)行52分析方法開發(fā)與驗(yàn)證分析研發(fā)在新藥研發(fā)的地位主要的檢測(cè)手段已有相關(guān)藥典藥物的分析研究（主要指國(guó)外藥典）不足信回復(fù)的相關(guān)研究及策略分析與其它部門的配合問題分析方法開發(fā)與驗(yàn)證分析研發(fā)在新藥研發(fā)的地位53分析研發(fā)在新藥研發(fā)的地位建立控制藥品質(zhì)量的分析方法優(yōu)化工藝參數(shù)，確定工藝條件；提高收率與質(zhì)量，減少副反應(yīng)（確定設(shè)計(jì)空間與正常操作范圍）建立起始物料、中間體及成品分析方法，并進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)進(jìn)行穩(wěn)定性考察，作為新藥注冊(cè)申報(bào)的質(zhì)量研究部分的資料上報(bào)，是新藥申報(bào)核心內(nèi)容。

分析研發(fā)在新藥研發(fā)的地位建立控制藥品質(zhì)量的分析方法54主要的檢測(cè)手段

色譜方法、滴定法、比色法、光譜法、質(zhì)譜法、核磁共振以及方法之間的聯(lián)用色譜法：HPLC（UPLC）、IC、TLC、GC滴定法：酸堿中和、非水滴定法、氧化-還原滴定、絡(luò)合滴定、沉淀滴定、熱量滴定光譜法：紅外、紫外、熒光、原子吸收及發(fā)射、X-衍射質(zhì)譜：電離方式

檢測(cè)模式核磁共振：碳譜、氫譜聯(lián)用：HPLC-MS、HPLC-UV、HPLC-FL、HPLC-MSICP-MSGC-MS液相色譜的其它檢測(cè)器：示差、蒸發(fā)光散射、電導(dǎo)、電化學(xué)（后面為ＩＣ中使用到）ＧＣ檢測(cè)器：熱導(dǎo)、電子捕捉器、氫離子火焰、氮磷檢測(cè)器主要的檢測(cè)手段色譜方法、滴定法、比色法、光譜法、質(zhì)譜法、核55TLC簡(jiǎn)單方便，常作為中間體及起始物料的檢測(cè)，一般不作為成品的檢測(cè)方法。IC是離子色譜（嚴(yán)格講也屬于HPLC），適用于檢測(cè)各種陰陽(yáng)離子，單糖，多糖，以及氨基酸的檢測(cè)，具備色譜法的所有優(yōu)點(diǎn)，在藥品分析方法中有越來越多的應(yīng)用。

主要有戴安及萬通兩家，各有優(yōu)缺點(diǎn)。TLC簡(jiǎn)單方便，常作為中間體及起始物料的檢測(cè)，一般不作為成品56GC的優(yōu)點(diǎn)及適用范圍靈敏度高，理論塔板數(shù)高，分離度好方法開發(fā)較為簡(jiǎn)便技術(shù)成熟一般用于具有揮發(fā)性物質(zhì)或經(jīng)過衍生具有揮發(fā)性的物質(zhì)的檢測(cè)API殘留溶劑的主要檢測(cè)方法GC的優(yōu)點(diǎn)及適用范圍靈敏度高，理論塔板數(shù)高，分離度好57GC方法開發(fā)的要點(diǎn)色譜柱載氣柱溫檢測(cè)器進(jìn)樣方式稀釋溶液的選擇GC方法開發(fā)的要點(diǎn)色譜柱58色譜柱的選擇色譜柱：填充柱，毛細(xì)管柱，一般采用毛細(xì)管柱

柱極性：極性柱innowax，F(xiàn)FAP，DB23中等級(jí)性DB624，HP-50非極性HP-1，HP-5根據(jù)化合物的機(jī)型選擇合適的色譜柱，達(dá)到最佳的分離效果。不同的溶劑組合采用不同的色譜柱，最常用為HP-5和DB624。氣相色譜法采用保留時(shí)間進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)時(shí)，一定要用不同極性的色譜柱進(jìn)行定位，同時(shí)保留時(shí)間一致，才可判定為同一物質(zhì)。涂膜厚度：0.1um到1um等多種規(guī)格，一般涂膜厚度越大，保留性越強(qiáng)，色譜柱壽命越長(zhǎng)；拖尾嚴(yán)重，熱穩(wěn)定性較差，氣質(zhì)聯(lián)用（柱流失更少，干擾小）一般采用涂抹厚度較小的色譜柱內(nèi)徑：0.13mm到0.53mm柱長(zhǎng)度：30m，60m，120m，增加長(zhǎng)度可增加分離度，提高柱效

內(nèi)徑和長(zhǎng)度不同，載氣流量設(shè)置也不同手性柱：商品化的手性色譜柱主要有β、γ環(huán)糊精填料的色譜柱，隨聚合度的增加，分離能力增強(qiáng)。較主流的品牌為supelco、agilent。色譜柱的選擇色譜柱：填充柱，毛細(xì)管柱，一般采用毛細(xì)管柱

柱極59載氣：氮?dú)狻⒑?/p>

氮?dú)庥休^好的經(jīng)濟(jì)性，氦氣有更高的分離效果。

載氣：氮?dú)?、氦?/p>

60柱溫及進(jìn)樣口溫度的選擇進(jìn)樣口溫度高于柱溫20℃

需考慮測(cè)定物質(zhì)氣化溫度以及樣品的穩(wěn)定性柱溫：一般采用程序升溫法檢測(cè)，柱溫越高，洗脫能力越強(qiáng)。一般根據(jù)待測(cè)物質(zhì)的沸點(diǎn)以及極性選擇合適的柱溫程序。

優(yōu)點(diǎn)：可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)物質(zhì)，同時(shí)還可老化色譜柱，避免前后兩次分析的殘留干擾。

柱溫及進(jìn)樣口溫度的選擇進(jìn)樣口溫度高于柱溫20℃

需考慮測(cè)定61檢測(cè)器FID：氫離子火焰檢測(cè)器。通用檢測(cè)器，碳?xì)浜枯^高的化合物信號(hào)強(qiáng)，靈敏度高，適用于大多數(shù)揮發(fā)性物質(zhì)ECD：電子捕捉器，適用于含鹵素的化合物檢測(cè)。殘留溶劑檢測(cè)氯仿盡量采用此檢測(cè)器，F(xiàn)ID靈敏度較差，很難達(dá)到限度要求氮磷檢測(cè)器：含氮磷硫等元素的化合物靈敏度高，在殘留農(nóng)藥的檢測(cè)方面有很廣的應(yīng)用熱導(dǎo)檢測(cè)器：通用型檢測(cè)器，靈敏度低，應(yīng)用較少。元素分析儀采用此檢測(cè)器，可檢測(cè)CO2，H2O等其他檢測(cè)器無法檢測(cè)的化合物。檢測(cè)器FID：氫離子火焰檢測(cè)器。通用檢測(cè)器，碳?xì)浜枯^高的62進(jìn)樣方式直接進(jìn)樣法：靈敏度低，干擾大，重現(xiàn)性也較差，進(jìn)樣體積一般1ul以下，主要應(yīng)用于高沸點(diǎn)物質(zhì)以及歸一化法測(cè)定純度頂空進(jìn)樣：干擾小，靈敏度高，重現(xiàn)性好。低沸點(diǎn)物質(zhì)的分析的首選方法。

參數(shù)設(shè)置：頂空溫度一般90℃，特殊情況可升高，一般要求低于溶劑沸點(diǎn)。頂空平衡時(shí)間一般15分鐘左右，太短未達(dá)平衡，重現(xiàn)性差；太長(zhǎng)藥物降解，產(chǎn)生未知峰，同時(shí)頂空瓶密閉性變差，影響重現(xiàn)性進(jìn)樣方式直接進(jìn)樣法：靈敏度低，干擾大，重現(xiàn)性也較差，進(jìn)樣體63殘留溶劑檢測(cè)稀釋劑的選擇溶解性：樣品須完全溶解，必要時(shí)可加熱穩(wěn)定性：不與待測(cè)溶劑反應(yīng)，樣品在此溶劑條件下不降解產(chǎn)生干擾檢測(cè)的降解峰待測(cè)溶劑的溶解性：待測(cè)溶劑在稀釋劑中有較好的溶解性，必要時(shí)可采用混合溶劑干擾：溶劑中的雜質(zhì)峰不干擾待測(cè)溶劑檢測(cè)，盡量采用色譜純的溶劑溶劑酸堿性：不與待測(cè)溶劑反應(yīng)成鹽影響待測(cè)溶劑揮發(fā)性殘留溶劑檢測(cè)稀釋劑的選擇溶解性：樣品須完全溶解，必要時(shí)可加熱64氣相殘留溶劑遇到的常見問題

回收率不佳：基質(zhì)效應(yīng)、溶劑的酸堿性、降解反應(yīng)未知溶劑峰：降解反應(yīng)，樣品本身污染、遺漏的檢測(cè)溶劑重現(xiàn)性差：待測(cè)溶劑與稀釋劑互溶性差，溶液濃度不均一；樣品在稀釋液中溶解不完全氣相殘留溶劑遇到的常見問題回收率不佳：基質(zhì)效應(yīng)、溶劑的酸堿65有關(guān)物質(zhì)方法的開發(fā)查閱相關(guān)資料

化合物的結(jié)構(gòu)：紫外吸收，pKa，極性大小，紫外吸收，穩(wěn)定性，溶解性等

工藝路線：確定需要研究的已知雜質(zhì)文獻(xiàn)參考USP論壇，專利文獻(xiàn)等，對(duì)于發(fā)酵類的藥物，雜質(zhì)譜研究很難，一般最好在已有注冊(cè)方法基礎(chǔ)進(jìn)行微調(diào)，以免發(fā)生嚴(yán)重問題類似化合物的方法等有關(guān)物質(zhì)方法的開發(fā)查閱相關(guān)資料

化合物的結(jié)構(gòu)：紫外吸收，pK66色譜方法的開發(fā)液相方法包括流動(dòng)相組成（包括緩沖液的類型，鹽濃度，pH值，有機(jī)溶劑的種類，比例等），梯度程序，色譜柱型號(hào)，柱溫，以及檢測(cè)器的選擇，通常這些配置相互關(guān)聯(lián)；同時(shí)還包括樣品濃度的設(shè)定，稀釋液選擇，樣品溶液制備的振搖或超聲時(shí)間，溶解所采用的量瓶材質(zhì)等較多參數(shù)。

色譜方法的開發(fā)液相方法包括流動(dòng)相組成（包括緩沖液的類型，鹽67有關(guān)物質(zhì)方法的評(píng)價(jià)專屬性：工藝雜質(zhì)（包括中間體、副反應(yīng)雜質(zhì)，起始物料，以及雜質(zhì)在反應(yīng)過程中引入的雜質(zhì)等），降解雜質(zhì)與API之間分離效果良好，同時(shí)各雜質(zhì)在同一方法中均能被檢出（洗脫并檢測(cè)）。特別要求：主峰相鄰雜質(zhì)盡量分開，主峰后雜質(zhì)分離度最好在3以上。柱效及保留時(shí)間：API成品非UPLC的方法保留時(shí)間在10-20min之間，盡量提高理論塔板數(shù)，同時(shí)具有較好的對(duì)稱性，盡量小的半峰寬靈敏度：雜質(zhì)LOQ至少要在限度的30%以下回收率：雜質(zhì)回收率要求在80%以上方法的重現(xiàn)性：開發(fā)過程中盡量對(duì)不同品牌的色譜柱，流動(dòng)相的pH值，柱溫，流動(dòng)相比例等參數(shù)進(jìn)行充分研究，確定其耐用范圍，以保證方法的重現(xiàn)性方法的簡(jiǎn)便性與儀器的要求：盡量采用比較簡(jiǎn)單的方法，采用最為穩(wěn)定的稀釋液，盡量避免現(xiàn)配現(xiàn)做的方法；盡量采用較為普及的儀器色譜柱的穩(wěn)定性：流動(dòng)相與柱溫等參數(shù)設(shè)置盡量在色譜柱的耐受范圍，避免采用色譜柱不穩(wěn)定的檢測(cè)方法

有關(guān)物質(zhì)方法的評(píng)價(jià)專屬性：工藝雜質(zhì)（包括中間體、副反應(yīng)雜質(zhì)，68如何合理選擇檢測(cè)方法

GC，HPLC，離子色譜，電位滴定原則：根據(jù)待檢物質(zhì)的結(jié)構(gòu)性質(zhì)，選擇合適的檢測(cè)方法有紫外吸收物質(zhì)，盡量采用LC-UV檢測(cè)有關(guān)物質(zhì)及含量，滴定法測(cè)定含量可做為液相方法的補(bǔ)充或印證無紫外吸收的殘留溶劑盡量采用GC，熱不穩(wěn)定或樣品易降解產(chǎn)生的物質(zhì)可考慮離子色譜或液相衍生方法進(jìn)行檢測(cè)，有揮發(fā)性有紫外吸收的穩(wěn)定化合物可酌情選擇GC或LC不揮發(fā)，無紫外吸收物質(zhì)可采用示差或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，含特定基團(tuán)可考慮衍生檢測(cè)對(duì)映異構(gòu)體：盡可能采用手性柱直接檢測(cè)如何合理選擇檢測(cè)方法GC，HPLC，離子色譜，電位滴定69半胱胺鹽酸鹽工藝流程半胱胺鹽酸鹽工藝流程70半胱胺文獻(xiàn)資料的檢測(cè)方法氧化還原法

直接碘量法返還滴定法光譜法

半胱胺與亞硝酸反應(yīng)形成S-亞硝基衍生物，破壞剩余亞硝酸，以Hg2+水解S-亞硝基衍生物，釋放的亞硝酸與磺胺試劑生成偶氮染料，544nm亞硝基衍生物

原子吸收測(cè)定硫原子色譜法

GC衍生法：半胱胺與氯甲酸甲酯反應(yīng)，正戊烷萃取，空氣干燥，乙酸乙酯溶解，F(xiàn)ID檢測(cè)器測(cè)定

HPLC：柱前衍生生成熒光物質(zhì)，液相檢測(cè)；與水合乙醛酸反應(yīng)，十六烷基三甲基硫酸氫銨為離子對(duì)試劑在反相離子對(duì)色譜上分離，檢測(cè)波長(zhǎng)265nm

離子色譜-電化學(xué)檢測(cè)器（積分安培模式）高效薄層色譜毛細(xì)管電泳

半胱胺文獻(xiàn)資料的檢測(cè)方法氧化還原法

直接碘量法返還滴定法71供應(yīng)商的檢測(cè)項(xiàng)目及方法性狀含量：99%碘量法滴定鐵離子：20ppm干失：0.5%硫酸根：0.5%pH：3-5熔點(diǎn)：62-70℃供應(yīng)商的檢測(cè)項(xiàng)目及方法性狀72半胱胺有關(guān)物質(zhì)方法色譜柱：WatersXselectCHSC18250*4.6mm5μm檢測(cè)波長(zhǎng)：200nm進(jìn)樣量：20μl柱溫：30℃流動(dòng)相A：0.1%全氟丁基磺酸∶乙腈=85：15流動(dòng)相B：0.1%全氟丁基磺酸∶乙腈=70：30梯度洗脫：稀釋劑：0.01N鹽酸水溶液流速：1.0ml/min進(jìn)樣盤溫度：2～8℃樣品濃度：1.5mg/ml半胱胺有關(guān)物質(zhì)方法色譜柱：WatersXselectCH73檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇74稀釋劑的選擇半胱胺鹽酸鹽對(duì)照溶液（水溶解）（4小時(shí)對(duì)比）半胱胺鹽酸鹽對(duì)照溶液（0.01N鹽酸溶解）（20小時(shí)以上對(duì)比）稀釋劑的選擇半胱胺鹽酸鹽對(duì)照溶液（水溶解）（4小時(shí)對(duì)比）半胱75有關(guān)物質(zhì)方法圖譜樣品及空白有關(guān)物質(zhì)方法圖譜樣品及空白76兩批檢驗(yàn)結(jié)果S120418保留時(shí)間(min)雜質(zhì)名稱含量（%）歸一化含量（%）校正因子1.9鹽酸空白峰///3.7411,3-噻唑烷-2-酮0.41.39260.35.3622-巰基-1,3-噻唑烷0.02770.00750.2711.464半胱胺/97.0356N/A24.520未知雜質(zhì)0.25220.2522N/A29.559胱胺1.67340.97181.72S111024保留時(shí)間(min)雜質(zhì)名稱含量（%）歸一化含量（%）校正因子1.9鹽酸空白峰///3.7351,3-噻唑烷-2-酮0.0180.06540.35.3622-巰基-1,3-噻唑烷NDND0.2711.435半胱胺/97.6698N/A24.496未知雜質(zhì)0.25220.2522N/A29.512胱胺3.742.191.72兩批檢驗(yàn)結(jié)果S120418雜質(zhì)名稱含量（%）歸一化含量（%）77檢測(cè)方法及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)性狀：白色或類白色粉末鑒別：供試品的保留時(shí)間與對(duì)照品在含量測(cè)定項(xiàng)下保留時(shí)間一致干失：60℃減壓干燥小于1.0%含量：≥95%有關(guān)物質(zhì)：1，3噻唑烷-2-酮＜2.0%

胱胺＜3.0%

單雜＜1.0%

總雜＜5.0%檢測(cè)方法及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)性狀：白色或類白色粉末78已有相關(guān)藥典藥物的分析研究采用藥典方法進(jìn)行所有項(xiàng)目的常規(guī)檢測(cè)工藝雜質(zhì)的研究

考察特有