探究酵母菌種群數(shù)量的變化實(shí)驗(yàn)

關(guān)于探究酵母菌種群數(shù)量的變化實(shí)驗(yàn)第一頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日探究：培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化目的要求1、學(xué)習(xí)利用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法2、實(shí)驗(yàn)探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化3、注意樣方法的應(yīng)用4、體會(huì)影響種群數(shù)量變化的因素第二頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日1、酵母菌的繁殖方式主要是:2、酵母菌的呼吸方式是:兼性厭氧(可進(jìn)行有氧呼吸和無(wú)氧呼吸)回顧思考:出芽生殖3、酵母菌的培養(yǎng)條件要注意那些問(wèn)題?

比如要用適宜的溫度培養(yǎng),調(diào)節(jié)好PH值,溶氧量的控制等。

釀酒和做面包都需要酵母菌。這些酵母菌可以用液體培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）來(lái)培養(yǎng)。培養(yǎng)液中酵母菌種群的增長(zhǎng)情況，與發(fā)酵食品的制作有密切關(guān)系。第三頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量開(kāi)始一段時(shí)間是“J”型增長(zhǎng)，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗，有害代謝產(chǎn)物的積累，PH值的改變，種群數(shù)量呈“S”型增長(zhǎng)。探究：培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化問(wèn)題：培養(yǎng)液中酵母菌種群的數(shù)量是怎樣隨時(shí)間變化的？溫度會(huì)影響酵母菌的生長(zhǎng)嗎？營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)影響酵母菌的生長(zhǎng)嗎？

作出假設(shè)根據(jù)前面所學(xué)的知識(shí)，針對(duì)這一問(wèn)題作出假設(shè)：討論探究思路探究所需要的菌種和無(wú)菌馬鈴薯培養(yǎng)液或肉湯培養(yǎng)液、試管、血球計(jì)數(shù)板（2mm×2mm方格）、滴管、顯微鏡等，都由老師提供。在制訂計(jì)劃前，你需要思考以下問(wèn)題，并與同學(xué)討論。第四頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

將9支試管分成ABC三組，每組3支。A組為實(shí)驗(yàn)組，裝培養(yǎng)液10mL，酵母菌母液0.1mL,環(huán)境溫度28℃。B組裝培養(yǎng)液10mL，酵母菌母液0.1mL,環(huán)境溫度5℃，與A組形成溫度條件對(duì)照。C組不裝培養(yǎng)液，只裝無(wú)菌水10mL,酵母菌母液0.1mL,環(huán)境溫度28℃，與A組形成營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)照。

第五頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)操作：(1)、配制無(wú)菌馬鈴薯培養(yǎng)液和酵母菌母液；(2)、預(yù)先設(shè)計(jì)分裝。先每次用10mL刻度吸管吸取10mL培養(yǎng)液到A組和B組試管，用另一支10mL刻度吸管吸取10mL無(wú)菌水到C組試管。待分裝完畢，每支試管加塞后把試管扎成捆后，然后用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基的名稱、組別、日期。(3)、用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌；(4)、接種菌種：用滅菌干凈的1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母液，往每支試管中加入。（注意滴加量不要太多，避免初始菌數(shù)過(guò)多。）(5)、培養(yǎng)：將A、C試管置于28℃的恒溫箱中培養(yǎng)。將B試管置于5℃的恒溫箱中培養(yǎng)。（5℃的恒溫箱可由某些型號(hào)冰箱保溫室設(shè)定5℃時(shí)代替。）(6)、計(jì)數(shù)和記錄：每天取樣時(shí)間大體一致，每次每組按序號(hào)取一支試管。計(jì)數(shù)過(guò)程中一定要遵守?zé)o菌操作規(guī)范，取樣的吸管要干凈且分開(kāi)使用，每次取樣前要試管振蕩搖勻。顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)后，立即將數(shù)據(jù)填到記錄表格中。第六頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日

分析結(jié)果，得出結(jié)論將所得數(shù)值用曲線圖表示出來(lái)，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否支持你所做的假設(shè)。酵母菌的種群數(shù)量在營(yíng)養(yǎng)條件有限的情況下是呈“S”型增長(zhǎng)，但之后會(huì)下降。溫度、營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)影響酵母菌種群數(shù)量的變化。探究的結(jié)論：第七頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日一、怎樣進(jìn)行酵母菌的計(jì)數(shù)？提示：對(duì)一支試管中的培養(yǎng)液(可定為10ml)中的酵母菌逐個(gè)計(jì)數(shù)是非常困難的，可以采用抽樣檢測(cè)的方法：先將蓋玻片放在計(jì)數(shù)室上，用吸管吸取培養(yǎng)液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入，多余培養(yǎng)液用濾紙吸去，稍待片刻，待酵母菌細(xì)胞全部沉降到計(jì)數(shù)室底部，將計(jì)數(shù)板放在載物臺(tái)的中央，計(jì)數(shù)一個(gè)小方格內(nèi)的酵母菌數(shù)量，再以此為根據(jù)，估算試管中的酵母菌總數(shù)。第八頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日

介紹:血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造1、血球計(jì)數(shù)板：是顯微鏡上的外掛物件，可用來(lái)測(cè)量細(xì)胞，細(xì)菌等一些微小物體的長(zhǎng)度，還有就是測(cè)量數(shù)量，如單位體積細(xì)胞的數(shù)量。血球計(jì)數(shù)板是由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四條下凹的槽，構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)，中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面,刻有一個(gè)方格網(wǎng)。第九頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日化放大后的方格網(wǎng)計(jì)數(shù)室IHGFEDCBA25×1616×252、方格網(wǎng)的構(gòu)成：方格網(wǎng)上刻有9個(gè)大方格，其中只有中間的一個(gè)大方格為計(jì)數(shù)室，計(jì)數(shù)室通常有兩種規(guī)格：一種是大方格內(nèi)分為16中格，每一中格又分為25小格；另一種是大方格內(nèi)分為25中格，每一中格又分為16小格。但是不管計(jì)數(shù)室是哪一種構(gòu)造，它們都有一個(gè)共同的特點(diǎn)，即每一大方格都是由16×25=25×16=400個(gè)小方格組成。第十頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日3、使用方法:

將血球計(jì)數(shù)板用擦鏡紙擦凈，在中央的計(jì)數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片，將稀釋后的酵母菌懸液，用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣，使菌液緩緩滲入，多余的菌液用吸水紙吸取，稍待片刻，使酵母菌全部沉降到血球計(jì)數(shù)室內(nèi)，加蓋蓋玻片。第十一頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日5、單位換算:以1mm×1mm為例，大方格的長(zhǎng)和寬各為1mm，深度為0.1mm，其體積為0.1mm3。換算為1mL：1000/0.1=104即1mL是104個(gè)0.1mm3

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4、計(jì)數(shù)室的規(guī)格：計(jì)數(shù)室長(zhǎng)×寬有：1mm×1mm,2mm×2mm,3mm×3mm等深度均為0.1mm。第十二頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日

如果使用規(guī)格為16格×25格的計(jì)數(shù)室，要按對(duì)角方位，取左上、右上、左下、右下4個(gè)中格(即100個(gè)小格)的酵母菌數(shù)。如果使用規(guī)格為25格×16格的計(jì)數(shù)室，除了取其4個(gè)對(duì)角方位外，還需再數(shù)中央的一個(gè)中格(即80個(gè)小方格)的酵母菌數(shù)（五點(diǎn)取樣法）。

出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí)，即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算。

6、如何計(jì)數(shù)呢？第十三頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日規(guī)格為25格×16格的計(jì)數(shù)室，五點(diǎn)取樣法第十四頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日7、蓋玻片下的培養(yǎng)液厚度為0.1mm，請(qǐng)推算出將一個(gè)小方格范圍內(nèi)的酵母菌數(shù)，換算成10ml培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)的公式。每1ml菌液中所含的酵母菌個(gè)數(shù)計(jì)算公式（以1mm×1mm為例）：

（1）16格×25格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式

酵母細(xì)胞數(shù)/ml=(100小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/100)×400×104×稀釋倍數(shù)即：一小方格內(nèi)酵母菌個(gè)數(shù)×4×

106×稀釋倍數(shù)

（2）25格x16格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式

酵母細(xì)胞數(shù)/ml=(80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/80)×400×104×稀釋倍數(shù)即：一小方格內(nèi)酵母菌個(gè)數(shù)×4×

106×稀釋倍數(shù)第十五頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日

課本中大方格的長(zhǎng)和寬各為2mm，深度為0.1mm，其體積為0.4mm3。換算為1mL：1000/0.4=2.5×103，即1mL是2.5×103個(gè)

0.4mm3。

則：每1ml菌液中所含的酵母菌個(gè)數(shù)計(jì)算公式（2mm×2mm

）：（1）16格×25格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式酵母細(xì)胞數(shù)/ml=(100小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/100)×400×2.5×103×稀釋倍數(shù)即：一小方格內(nèi)酵母菌個(gè)數(shù)×106×稀釋倍數(shù)（2）25格x16格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式:

酵母細(xì)胞數(shù)/ml=(80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/80)×400×2.5×103×稀釋倍數(shù)

即：一小方格內(nèi)酵母菌個(gè)數(shù)×106×稀釋倍數(shù)第十六頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日使酵母菌混合均勻。不需要，因不同時(shí)間取樣已形成對(duì)照。

需要。盡量減少誤差。對(duì)每個(gè)樣品計(jì)數(shù)三次,取其平均值。二、從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)之前，建議你將試管輕輕振蕩幾次。這是為什么？

三、本探究需要設(shè)置對(duì)照嗎？如果需要,請(qǐng)討論對(duì)照組應(yīng)怎樣設(shè)計(jì)和操作，如果不需要，請(qǐng)說(shuō)明理由。四、需要做重復(fù)實(shí)驗(yàn)嗎？第十七頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日五、怎樣記錄結(jié)果？記錄表怎樣設(shè)計(jì)？第十八頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28日

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只計(jì)數(shù)相鄰兩邊及其頂角的酵母細(xì)胞數(shù)

稀釋培養(yǎng)液。稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計(jì)數(shù)，以每小方格內(nèi)含有4-5個(gè)酵母細(xì)胞為宜，一般稀釋10倍即可。八、血球計(jì)數(shù)板的清潔

血球計(jì)數(shù)板使用后，用自來(lái)水沖洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，或用95%的乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑脫水使其干燥。通過(guò)鏡檢觀察每小格內(nèi)是否殘留菌體或其他沉淀物，若不干凈，則必須重復(fù)清洗直到干凈為止。六、如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過(guò)多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)采取怎樣的措施？

七、對(duì)于壓在小方格界線上的酵母菌，應(yīng)當(dāng)怎樣計(jì)數(shù)？

第十九頁(yè)，共二十一頁(yè)，2022年，8月28