梅毒的實驗室檢查與技術規(guī)范課件

梅毒的實驗室檢查與技術規(guī)范

朱穗蘭2013年3月2日主要內(nèi)容梅毒概述梅毒血清學檢測方法梅毒檢測技術規(guī)范梅毒概述（一）性接觸是主要的傳染途徑未經(jīng)治療的患者在感染后的1年內(nèi)最具有傳染性隨著病期的延長，傳染性越來越小到感染后2年，通過性接觸一般無傳染性母嬰傳播在妊娠7周時，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳染未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期>2年），但妊娠時仍可傳染給胎兒,病期越長，傳染性越小;梅毒概述（二）一期梅毒硬下疳和(或)腹股溝淋巴結腫大二期梅毒

可有一期梅毒史，病期在2年以內(nèi)有多形性皮疹、扁平濕疣等三期（晚期）梅毒可有一期或二期梅毒史，病期在2年以上皮膚黏膜損害等，包括神經(jīng)梅毒、心血管梅毒隱性（潛伏）梅毒早期：病期在2年以內(nèi)；晚期：病期在2年以上。無任何梅毒性的癥狀和體征胎傳（先天）梅毒早期：在2歲前發(fā)生；晚期：在2歲以后發(fā)病。胎傳隱性梅毒：無臨床表現(xiàn)梅毒概述（三）疑似病例、確證病例診斷依據(jù)：病史癥狀實驗室檢查梅毒的實驗室檢查結果對診斷有決定性意義梅毒實驗室檢測技術病原學檢測血清學檢測梅毒血清學檢測方法梅毒血清學檢測分類(1)非梅毒螺旋體抗原血清學試驗（非特異性梅毒抗體）(2)梅毒螺旋體抗原血清學試驗（特異性梅毒抗體）兩類方法。為什么梅毒實驗室診斷需要兩類血清學檢測方法？非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理人體感染了梅毒螺旋體后，組織受到破壞，釋放出來的一種類脂成分，與梅毒螺旋體結合形成完全抗原，刺激機體在3周-4周產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應素）。主要是IgM和IgG混合抗體?？贵w的作用無保護作用，治療監(jiān)測。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應素可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學試驗為什么有定性和定量兩種檢測法？非梅毒螺旋體抗原血清學試驗所有非梅毒螺旋體抗原血清試驗的抗原基本成分都是一樣方法包括：（1）快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR)（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）（3）性病研究實驗室試驗(VDRL)等?；境煞质切牧字蚜字湍懝檀伎乖贵w結合形成復合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似試驗特點點原理和成成分與試試驗相同同血清不需需要滅活活不需要顯顯微鏡觀觀測結果果可作定量量試驗有現(xiàn)成的的試劑盒盒攜帶方方便操作簡單單價格便宜宜操作要點點儀器：水平旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)儀。定性實驗驗加樣：吸吸取50ul血血清(漿)放在卡片片圈中，，并均勻勻地涂布布在整個個圈內(nèi)加抗原：：將抗原原輕輕搖搖勻，用用9號針頭加加1滴抗原反應：將將卡片置置水平旋旋轉(zhuǎn)儀旋旋轉(zhuǎn)8分鐘，立立即在亮亮光下觀觀察結果果3.定量試驗驗稀釋夜準準備：在在圈內(nèi)加加入50uL生理鹽水水（根據(jù)需需要確定定稀釋度度），勿勿將鹽水水涂開。。加樣：吸吸取50uL血清（漿漿）與各各圈中鹽鹽水作系列列稀釋，，并涂布布整個圈圈內(nèi)。下同定性性試驗。。非梅毒螺螺旋體抗抗原血清清學試驗驗結果判判斷RPRTRUST非梅毒螺螺旋體抗抗原血清清學試驗驗臨床意意義早期梅毒毒硬下疳疳出現(xiàn)1周-2周后，，血清可可呈陽性性。經(jīng)治療后后血清滴滴度可下下降并轉(zhuǎn)陰性，故故可作為為療效觀觀察、判判愈、復復發(fā)或再再感染的的指征。。為什么要要做定量量檢測？？非梅毒螺螺旋體抗抗原血清清學試驗驗臨床意意義一期梅毒毒1年后后轉(zhuǎn)為陰陰性二期梅毒毒2年后后轉(zhuǎn)為陰陰性。晚期梅毒毒治治療后血血清滴度度下降緩緩慢，2年后約約50%病人血血清反應應仍為陽陽性。TRUST結果果解釋示示意圖假陽性問問題假陽性：非梅毒毒患者的的血清反反應呈陽陽性①技術性假假陽性由于標本的的保存不當當（如細胞胞污染或溶溶血）、試試劑質(zhì)量差差或過期、、或?qū)嶒炇沂也僮麇e誤誤所造成。。②生物學假陽陽性是由于患者者有其他疾疾病或生理理狀態(tài)發(fā)生生變化，使使梅毒血清清試驗出現(xiàn)現(xiàn)陽性某些疾?。海航Y核、瘧瘧疾、肝病病、紅斑狼狼瘡、流感感、肺炎、、類風濕性性關節(jié)炎、、風濕性心心臟病、風風疹、系統(tǒng)統(tǒng)性硬化癥癥等，疾病病發(fā)展過程程中釋放心心磷脂到血血液中呈假陽性。老年人。生理機能發(fā)發(fā)生變化：：少數(shù)孕婦婦也可發(fā)生生生物學假假陽性。梅毒假陽性性反應的處處理技術性假陽陽性反應一一般是由于于操作錯誤誤引起的假假陽性反應應，經(jīng)過重重復試驗即即可除外。。對生物學假假陽性反應應，應做TPHA（（TPPA）等試驗驗進行排除除。前帶現(xiàn)象指非梅毒螺螺旋體抗原原血清試驗驗中，有時時血清中存存在高濃度度的抗體時時出現(xiàn)的弱弱陽性、不不典型或陰陰性反應的的結果，而而臨床上又又象二期梅梅毒，此時時將血清稀稀釋后再進進行試驗，，出現(xiàn)了陽陽性的結果果，該現(xiàn)象象稱為前帶帶現(xiàn)象。處理：將血清稀釋釋后再進行行試驗。耐血清性（（血清固定定）指經(jīng)抗梅毒毒治療后，，非梅毒螺螺旋體抗原原血清試驗驗在一定時時期內(nèi)不陰陰轉(zhuǎn)。早期期的耐血清清性常與治治療量不足足或不規(guī)則則治療、復復發(fā)、再感感染或有神神經(jīng)系統(tǒng)梅梅毒等因素素有關。梅毒螺旋體體抗原血清清學試驗梅毒螺旋體體抗原血清清學試驗方方法梅毒螺旋體體顆粒凝集集試驗(TPPA)梅毒螺旋體體血球凝集集試驗(TPHA)梅毒酶聯(lián)免免疫吸附試試驗（ELISA））梅毒免疫層層析法-梅梅毒快速檢檢測(RT)熒光螺旋體體抗體吸收收試驗（FTA-ABS）化學發(fā)光免免疫分析法法（CLIA）梅毒螺旋體體蛋白印跡跡試驗（WB）TPPATPPA試試驗用梅毒毒螺旋體致致敏明膠顆顆粒，此致致敏顆粒與與人血清中中的抗梅毒毒螺旋體抗抗體結合，，產(chǎn)生可見見的凝集反反應，具有有較高的敏敏感性和特特異性。TPPA是是目前WHO認可的的梅毒抗原原血清學試試驗的“金金標準”，，常用于新新方法、新新試劑評價價的參照標標準。TPPA(TPHA)試驗原理示示意圖梅毒螺旋體體抗原血清清試驗的臨臨床意義一般情況下下，一旦梅梅毒患者梅梅毒螺旋體體抗原血清清試驗呈陽陽性，即使使經(jīng)過正規(guī)規(guī)有效治療療治，仍將將終身陽性性。所以TPPA等等試驗不能能作為療效效觀察的指指標。作為非梅毒毒螺旋體抗抗原血清試試驗初篩陽陽性標本的的確證試驗驗。TPPA等等陽性不能能區(qū)分既往往感染和現(xiàn)現(xiàn)癥感染，，應結合非非梅毒螺旋旋體抗原血血清試驗結結果進行診診斷。TPPA結結果解釋示示意圖梅毒血清學學試驗結果果解釋梅毒血清學學試驗結果果解釋梅毒檢測技技術規(guī)范簡簡介全國梅毒檢檢測技術規(guī)規(guī)范第一章梅毒檢測樣樣品的采集集和處理第二章梅毒血清學學檢測第三章梅毒病原體體顯微鏡檢檢測第四章梅毒病原體體核酸檢測測第五章實驗室生物物安全第六章梅毒檢測實實驗室質(zhì)量量管理第一章樣樣品的采集集和處理血清、血漿漿、全血及及腦脊液:梅毒血清學學檢測或核核酸檢測皮損部位組組織液、淋淋巴穿刺液液:梅毒病原體體檢測或核核酸檢測。。梅毒血清學學試驗適用用范圍第二章梅梅毒血清學學檢測檢測目的:臨床診斷、、血液篩查查、流行病病學監(jiān)測以臨床診斷斷為目的的的檢測是為為了確定梅梅毒感染的的狀況。以血液篩查查為目的的的檢測是為為了防止梅梅毒的經(jīng)血血傳播。以流行病學學監(jiān)測為目目的的檢測測是為了調(diào)調(diào)查梅毒血血清學感染染率和發(fā)病病率。梅毒實驗室室檢測策略略選擇根據(jù)目的選選擇檢測方方法及檢測測策略?？刹捎萌魏魏我活惷范径狙鍖W檢檢測方法作作為篩查試試驗。以臨床診斷斷為目的檢檢測策略一一以臨床診斷斷為目的檢檢測策略二二策略一和策策略二比較較第三章梅梅毒體病原原學檢測檢測方法暗視野顯微微鏡檢查鍍銀染色檢檢查第四章梅梅毒核酸檢檢測可對血漿、、血清、皮皮損部位組組織液、淋淋巴穿刺液液及腦脊液液等標本的的梅毒螺旋旋體核酸檢檢測在早期梅毒毒、神經(jīng)梅梅毒和先天天梅毒等診診斷，以及及螺旋體現(xiàn)現(xiàn)癥感染和和既往感染染鑒別診斷斷中具有一一定的價值值可應用于梅梅毒螺旋體體的耐藥性性監(jiān)測、菌菌株流行病病學分型。。第五章實實驗室生物物安全梅毒的生物物危害梅毒螺旋體體屬第三類類病原微生生物，一般般情況下對對人、動物物或者環(huán)境境不構成嚴嚴重危害，，傳播風險險有限，實實驗室感染染后很少引引起嚴重疾疾病，是有有有效治療療和預防方方法的致病病微生物梅毒相關檢檢測的生物物安全級別別為了保證安安全，對臨臨床和現(xiàn)場場未知樣本本的梅毒血血清學檢測測應在符合合Ⅱ級生物物安全實驗驗室（BSL-2））要求的實實驗室中進進行。如有有艾滋病檢檢測實驗室室，可以在在艾滋病抗抗體檢測實實驗室中進進行。第六章實實驗室質(zhì)量量管理質(zhì)量保證質(zhì)量評估試劑評價質(zhì)量保證檢測方法和和試劑的選選擇用于臨床診診斷的檢測測方法應使使用經(jīng)國家家食品藥品品監(jiān)督管理理局注冊批批準的試劑劑，應選擇擇敏感性高高、特異性性好的試劑劑。性病參參比實驗室室和省級性性病中心實實驗室應定定期組織開開展梅毒診診斷試劑的的臨床質(zhì)量量評價和新新方法與技技術的評估估。質(zhì)量評價所有梅毒檢檢測實驗室室應參加外外部質(zhì)量評評價省級中心實實驗室應參參加國家級級職能工作作考核和PT其他實驗室室應參加省省級職能工工作考核和和PT。質(zhì)量評價考評組織單單位根據(jù)PT考核結結果、職能能工作評價價結果及對對部分實驗驗室現(xiàn)場評評價情況，，匯總各實實驗室的最最終考評結結果，上報報相關機構構?？荚u評單單位位應應將將考考評評得得分分及及扣扣分分原原因因反反饋饋各各參參評評實實驗驗室室，，以以適小結結1、、非非梅梅毒毒螺螺旋旋體體抗抗原原血血清清學學試試驗驗陽陽性性往往往往是是梅梅毒毒現(xiàn)現(xiàn)癥癥感感染染者者，，臨臨床床上上即即可可開開展展治治療療。。2、、非非梅梅毒毒螺螺旋旋體體抗抗原原血血清清學學試試驗驗定定量量試試驗驗可可作作為為療療效效觀觀察察的的指指標標。。3、、完完善操操作作的的標標準準化化，，杜杜絕絕有有個個人人特特點點的的操操作作。。4、、根根據(jù)據(jù)目目的的選選擇擇檢檢測測方方法法及及檢檢測測策策略略。?？煽刹刹捎糜萌稳魏魏我灰活愵惷访范径狙迩鍖W學檢檢測測方方法法作作為為篩篩查查試試驗驗。。5、、臨床9、靜靜夜夜四四無無鄰鄰，，荒荒居居舊舊業(yè)業(yè)貧貧。。。。12月月-2212月月-22Wednesday,December28,202210、雨中黃黃葉樹，，燈下白白頭人。。。21:26:3221:26:3221:2612/28/20229:26:32PM11、以我獨沈沈久，愧君君相見頻。。。12月-2221:26:3221:26Dec-2228-Dec-2212、故人江海別別，幾度隔山山川。。21:26:3221:26:3221:26Wednesday,December28,202213、乍見翻疑夢夢，相悲各問問年。。12月-2212月-2221:26:3221:26:32December28,202214、他鄉(xiāng)生白白發(fā)，舊國國見青山。。。28十二二月20229:26:32下下午21:26:3212月-2215、比不了了得就不不比，得得不到的的就不要要。。。十二月229:26下午午12月-2221:26December28,202216、行動出成果果，工作出財財富。。2022/12/2821:26:3221:26:3228December202217、做做前前，，能能夠夠環(huán)環(huán)視視四四周周；；做做時時，，你你只只能能或或者者最最好好沿沿著著以以腳腳為為起起點點的的射射線線向向前前。。。。9:26:32下下午午9:26下下午午21:26:3212月月-229、沒有有失敗敗，只只有暫暫時停停止成成功??！。12月月-2212月月-22Wednesday,December28,202210、很多多事情情努力力了未未必有有結果果，但但是不不努力力卻什什么改改變也也沒有有。。。21:26:3221:26:3221:2612/28/20229:26:32PM11、成功就是日日復一日那一一點點小小努努力的積累。。。12月-2221:26:3221:26Dec-2228-Dec-2212、世世間間成成事事，，不不求求其其絕絕對對圓圓滿滿，，留留一一份份不不足足，，可可得得無無限限完完美美。。。。21:26:3221:26:3221:26Wednesday,December28,202213、不知香積積寺，數(shù)里里入云峰。。。12月-2212月-2221:26:3221:26:32December28,202214、意志堅強的的人能把世界界放在手中像像泥塊一樣任任意揉捏。28十二月月20229:26:32下午21:26:3212月-2215、楚塞三三湘接，，荊門九九派通。。。。十二月229:26下午午12月-2221:26December28,202216、少年年十五五二十十時，，步行行奪得得胡馬馬騎。。。2022/12/2821:26:3221:26:3228December202217、空山新雨雨后，天氣氣晚來秋。。。9:26:32下下午9:26下下午21:26:3212月-229、楊柳柳散和和風，，青山山澹吾吾慮。。。12月月-2212月月-22Wednesday,December28,202210、閱閱讀讀一一切切好好書書如如同同和和過過去去最最杰杰出出的的人人談談話話。。21:26:3221:26:3321:2