細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及回答

如何選用培養(yǎng)基培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，首選MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，各種目的無培養(yǎng)的首選是AIMV培養(yǎng)基為什么要熱滅活培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活。L－谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎－谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后，－谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。－谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時(shí)間后會(huì)降解，但是確切的降解率一直沒有最終確定。－谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對(duì)于一些細(xì)胞具性。GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I？這個(gè)二肽有多穩(wěn)定GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，將其不穩(wěn)定的α－氨基用L－丙氨酸來保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L－谷氨酰胺供利用GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L－谷氨酰胺幾乎完全降解為什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（雌激素。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí)，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時(shí)，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。如何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞用無培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200－2000個(gè)/毫升，在0.1毫升的細(xì)胞中加入0.1毫升的0.4％的臺(tái)盼蘭溶液。輕輕混勻，數(shù)分鐘后，用血球計(jì)如何消除組織培養(yǎng)的污染室劑培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過濾器。性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0mg/ml每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2－3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2－3代在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代重復(fù)步驟4在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4－6代，確定污染是否以已被消培養(yǎng)基中酸鈉的作用是什么酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源。盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝酸鈉為什么在冰箱中的胎牛會(huì)出現(xiàn)沉淀GIBICO的胎牛沒有預(yù)老化，在2－8℃時(shí)，中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能而形成沉（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別)以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2中，溶液會(huì)變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液。如果僅僅是將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中的組織，用Hanks液就可以了。Qualified和Certified胎牛有什么差別Certified胎牛包括了Qualified胎牛執(zhí)行的所有的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)程序，而且除了這些標(biāo)準(zhǔn)檢測，Certified胎牛還有如下一些附加的檢測End-PointDeterminationofEndotoxinSf9細(xì)胞生長促進(jìn)及方法學(xué)檢二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時(shí)加入EDTA的目的是什么二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清lipid-DNA的方影響轉(zhuǎn)染效率嗎？是的。對(duì)于LIPOFECTAMlNEReagent，稀釋試劑在100μlOPTI-MEM中，稀釋DNA100μlOPTI-MEM中。混合兩種溶液在室溫下孵育15分鐘。對(duì)于LIPOFECTINReagent，在加入DNA溶液前允許稀釋的試劑和培養(yǎng)基孵育至少30分鐘可以增加3倍的效率。確保復(fù)合物在沒有的情況下應(yīng)該在與脂混合之前首先與PlusReagent混合。LIPOFECTAMlNE2000的操作步驟允許在一個(gè)很小的體積下混合DNA和脂，接下來可以我使用SF900Ⅱ時(shí)，細(xì)胞生長良好，但是為什么我的蛋白產(chǎn)物不如使用Graces液和10%胎牛時(shí)效果好如果目的蛋白是一個(gè)后期蛋白它將與蛋白酶一起表達(dá)這些蛋白酶將會(huì)作用于目的蛋白在加有的培養(yǎng)基中這些蛋白酶將作用到中的蛋白從而使目的蛋白產(chǎn)品保持完好在無配方中蛋白酶作用的唯一底物是你的目的蛋白為了避免這一問題加入一些蛋白酶抑制劑或加入少量的（少于1％，讓給蛋白酶提供作用底物。如何檢測內(nèi)毒素(熱源)水平LAL（LimulusAmebocyteLysate）試驗(yàn)是可用的最敏感和特異的檢測細(xì)菌內(nèi)毒素的方法。LevinBang發(fā)現(xiàn)細(xì)菌可引起鱟（Limuluspolyphemus）而，形成不可溶的基質(zhì)。LAL試劑緩沖的鱟（血細(xì)胞）裂解物。胎牛的內(nèi)毒素檢測是在GrandIsland，按照手冊(cè)上Gel-clot方法進(jìn)行的。在對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行內(nèi)毒素檢測前，用無熱源的水1：10稀釋樣品。稀釋樣品沸水育5分鐘，以消除抑制劑（通常，血液中的內(nèi)毒素結(jié)合成份的出現(xiàn)會(huì)抑制凝膠過程，使內(nèi)毒素不能與LAL反應(yīng)。樣品預(yù)先熱處理可以我可以使用固體形式的MurashigeSkog培養(yǎng)基嗎如果使用固體形式的培養(yǎng)基，需要加入瓊脂。瓊脂加入前要先滅菌。應(yīng)該避免MS溶液加入到MS培養(yǎng)基中。對(duì)于普通使用的緩沖液，PH值隨溫度變化而變化。下表列出溫度改變10℃時(shí)，PH值的變化情緩沖系統(tǒng)pKa/20[Delta]pKa/10℃Mes6.15-0.110Ada6.60-Pipes6.80-Aces6.90-Bes7.15-Mops7.20-Bicine8.35-Glycylglycine8.40-室溫下(25℃)配制的Tris-HCl溶液，在37℃使用時(shí)PH值是多少緩沖液的PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mMTris-HC溶液在4℃，25℃，37℃時(shí)，不同的PH值4℃25℃8.17.58.27.68.47.88.57.98.68.08.78.18.88.28.98.39.08.49.18.59.28.69.38.79.48.8昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的最適PH值和滲透壓是多少生長培養(yǎng)基的PH值對(duì)細(xì)胞的增值和或重組蛋白的生產(chǎn)均會(huì)產(chǎn)生影響對(duì)于大部分鱗翅類昆蟲細(xì)胞系在PH值60－64范圍的大部分應(yīng)用效345－380msmg.PH值和滲透壓在以上所列的范圍之內(nèi)。HighFive細(xì)胞有任何其它名稱嗎HighFive細(xì)胞也被稱為Trichoplasiani5B1-4BTI-TN-5B1-4PFHM-IIHYBRIDOMA-SFM之間有什么差別PFHM-IIProtein-freeHybridomaMedium)是不包含有蛋白質(zhì)的單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。如果作為雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基使用，PFHM-II可能需要補(bǔ)充低水平的。HYBRIDOMA-SFM即是雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基，也是單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。它包含低水平的蛋白質(zhì)。在HighFive無培養(yǎng)基中去污劑的濃度是多少HighFive細(xì)胞用多大的密度凍存3.0x10E6在我的果蠅培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)形成白色沉淀，加熱后溶解。它是什么？對(duì)我的細(xì)胞有害嗎可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的濃度比在RPMI1640中高25倍，而且比谷氨酰胺更加難以溶解。沉淀也可能是不止一種成分的復(fù)合物。它可能是由于在局部溫度較低的地方引起。只要沉淀在培養(yǎng)條件下可以如何從T25瓶中轉(zhuǎn)移sf9細(xì)胞？能用胰蛋白酶消化嗎我們強(qiáng)力推薦使用脫落細(xì)胞的方法，因?yàn)檫@項(xiàng)技術(shù)破壞性最小，生最高。正如手冊(cè)上所顯示，通過使用巴氏德吸液管，讓細(xì)胞上培養(yǎng)基流動(dòng)。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶。只有在絕對(duì)必要的情況下，才使用胰酶消化細(xì)胞。胰酶消化一個(gè)T25瓶的sf9細(xì)胞去除培養(yǎng)基用2ml1xPBS（足以覆蓋細(xì)胞表面）洗滌細(xì)胞，去除加入2ml1x胰酶EDTA（恰好覆蓋細(xì)胞表面37℃孵育510分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動(dòng)向細(xì)胞中加入2ml細(xì)胞培養(yǎng)液，移入錐形管，用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁，移入同一錐形管中（培養(yǎng)基中的FBS終止了胰酶的活性離心（1100rpm）沉淀細(xì)胞。去除培養(yǎng)基用新的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。傳代Sf9Sf21,highFive細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時(shí)，肝素的使用量是多少為了防止懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細(xì)胞懸液如何評(píng)估ES細(xì)胞合格的胎牛使用D3ES細(xì)胞。這是一個(gè)對(duì)于胎牛中生長促進(jìn)、生長抑制和分化因子非常敏感的細(xì)胞系。當(dāng)ES細(xì)胞以非常低的密度傳入包含10％胎牛的生長培養(yǎng)基中，檢測開始和支持ES細(xì)胞克隆的能力細(xì)胞毒分析當(dāng)以非常低的密度傳入包含30％胎牛的生長培養(yǎng)基中，檢測ES細(xì)胞和feeder細(xì)胞的生長能力。檢測胎牛支持未分化ES細(xì)胞克隆的能力。通過堿性磷酸酶活性評(píng)估分化程度。未分化的ES細(xì)胞小顏色深紅粉紅，分化的細(xì)胞較大