中國(guó)藥典林可糖肽與安莎類(lèi)抗生素修訂與前瞻

2010年版中國(guó)藥典林可類(lèi)、

糖肽類(lèi)和安莎類(lèi)抗生素標(biāo)準(zhǔn)

的修訂與前瞻山東省藥品檢驗(yàn)所謝元超2010年9月山東省藥品檢驗(yàn)所1第一部分

林可霉素類(lèi)抗生素標(biāo)準(zhǔn)的

修訂與前瞻

一．鹽酸林可霉素及其制劑標(biāo)準(zhǔn)山東省藥品檢驗(yàn)所21.鹽酸林可霉素及其制劑標(biāo)準(zhǔn)增、修訂的項(xiàng)目1.1鹽酸林可霉素⑴【鑒別】主要增訂了鑒別⑴TLC鑒別項(xiàng)并對(duì)4項(xiàng)鑒別中的前2項(xiàng)做了“二選一”的規(guī)定（注射液、膠囊和片劑同時(shí)照此增訂）。山東省藥品檢驗(yàn)所3即“取本品與林可霉素對(duì)照品適量，分別加甲醇制成每1ml中約含10mg的溶液，作為供試品溶液和對(duì)照品溶液；另取林可霉素對(duì)照品和克林霉素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml中各約含10mg的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用溶液。山東省藥品檢驗(yàn)所4照薄層色譜法（附錄VB）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯–甲酸（1.5：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，置碘蒸汽中顯色。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用溶液中林可霉素和克林霉素應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)；供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置應(yīng)與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)的顏色和位置相同”。山東省藥品檢驗(yàn)所5⑵【檢查】主要增訂了有關(guān)物質(zhì)、細(xì)菌內(nèi)毒素2項(xiàng)檢查并修訂了水分檢查限度和林可霉素B色譜條件。即：①“有關(guān)物質(zhì)取本品適量，加流動(dòng)相制成每1ml中約含林可霉素4mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流動(dòng)相定量稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。山東省藥品檢驗(yàn)所6照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，取對(duì)照溶液10μl，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成份色譜峰的峰高約為滿量程的20%，精密量取供試品溶液和對(duì)照溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成份峰保留時(shí)間的3倍，供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，除林可霉素B峰外，其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積（1.0%），其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的2倍（2.0%），供試品溶液中任何小于對(duì)照溶液主峰面積0.05倍的峰可忽略不計(jì)”。山東省藥品檢驗(yàn)所7②“細(xì)菌內(nèi)毒素取本品，依法檢查（附錄ⅪE），每1mg林可霉素中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.5EU（供注射用）”。③“取本品，照水分測(cè)定法（附錄ⅧM第一法A）測(cè)定，含水分應(yīng)為3.1%~6.0%”⑶【含量測(cè)定】

修訂了流動(dòng)相pH值及其組成比例。即：山東省藥品檢驗(yàn)所8“色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以0.05mol/L硼砂溶液（用85%磷酸溶液調(diào)解pH值至6.0調(diào)整為6.1）-甲醇（1：1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm。林可霉素峰與林可霉素B峰（林可霉素B峰為林可霉素峰相對(duì)保留時(shí)間的0.4～0.7）的分離度應(yīng)大于2.6。林可霉素峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求”。山東省藥品檢驗(yàn)所9

1.2鹽酸林可霉素注射液⑴【檢查】主要增訂了有關(guān)物質(zhì)、苯甲醇、無(wú)菌、細(xì)菌內(nèi)毒素4項(xiàng)檢查并修訂了林可霉素B色譜條件。①“有關(guān)物質(zhì)即將原來(lái)的以0.05mol/L硼砂溶液（用85%磷酸溶液調(diào)解pH值至5.0）-甲醇-乙腈（60：36：4）調(diào)整為（67：33：2）。山東省藥品檢驗(yàn)所10并規(guī)定：記錄色譜圖至主成份峰保留時(shí)間的3倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，除輔料峰及林可霉素B峰外，其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積（1.0%），其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的2倍（2.0%）（供試品溶液中任何小于對(duì)照溶液主峰面積0.05倍的峰可忽略不計(jì)）”。山東省藥品檢驗(yàn)所11

②“苯甲醇精密量取本品適量，照有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下的方法制備供試品溶液；另精密稱(chēng)取苯甲醇適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中約含0.13mg的溶液，作為對(duì)照溶液。照有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下的方法測(cè)定，精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，每1ml鹽酸林可霉素注射液含苯甲醇不得超過(guò)9.45mg”。

山東省藥品檢驗(yàn)所12

③“無(wú)菌取本品，轉(zhuǎn)移至不少于500ml的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，用薄膜過(guò)濾法處理，依法檢查（附錄Х?H），應(yīng)符合規(guī)定”。

1.3鹽酸林可霉素片⑴【鑒別】主要增訂了鑒別⑴TLC鑒別項(xiàng)并對(duì)2項(xiàng)鑒別做了“二選一”的規(guī)定。⑵【檢查】主要增訂了有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)并修訂了林可霉素B色譜條件。⑶【含量測(cè)定】修訂了流動(dòng)相pH值及其組成比例。山東省藥品檢驗(yàn)所13

1.4鹽酸林可霉素膠囊⑴【鑒別】主要增訂了鑒別⑴TLC鑒別項(xiàng)并對(duì)3項(xiàng)鑒別中的前2項(xiàng)做了“二選一”的規(guī)定。⑵【檢查】主要增訂了有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)并修訂了林可霉素B色譜條件。⑶【含量測(cè)定】修訂了流動(dòng)相pH值及其組成比例。

2.增、修訂的主要依據(jù)和操作中值得注意的一些問(wèn)題的探討

2.1鹽酸林可霉素⑴【鑒別】⑴山東省藥品檢驗(yàn)所14山東省藥品檢驗(yàn)所15

§1.增訂依據(jù)：依照中國(guó)藥品生物制品檢定所【2008】599號(hào)文“關(guān)于中國(guó)藥典2010年版二部抗生素品種增訂鑒別實(shí)驗(yàn)的函”的要求通過(guò)對(duì)本品薄層色譜鑒別方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證后并經(jīng)收集樣品實(shí)驗(yàn)考察本品顯色反應(yīng)后增訂。

§2.操作中需要注意的問(wèn)題：如TLC展開(kāi)顯色后斑點(diǎn)欠清晰，可以根據(jù)薄層板載量等因素適當(dāng)提高或調(diào)整點(diǎn)樣液中的鹽酸林可霉素濃度。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，當(dāng)濃度為2mg/ml時(shí)，所呈現(xiàn)斑點(diǎn)不夠清晰。鹽酸林可霉素濃度為5mg/ml、8mg/ml、10mg/ml、15mg/ml的溶液雖然均能分離并呈現(xiàn)可見(jiàn)斑點(diǎn)，仍以10mg/ml濃度為宜。

山東省藥品檢驗(yàn)所16⑵【檢查】

有關(guān)物質(zhì)及林可霉素B§1.增訂依據(jù)：林可霉素發(fā)酵過(guò)程中已有報(bào)道伴生的有關(guān)物質(zhì)以及過(guò)量酸性條件下的降解產(chǎn)物至少可能有如下7個(gè)，分別為：①林可霉素B、②丙烯基類(lèi)似物和Z-異構(gòu)體、③α-酰胺差向異構(gòu)體、④N去甲林可霉素、⑤7-差向林可霉素、⑥甲基-1-硫代-林可霉糖、⑦4-丙基古液酸及其他可能的并且尚待結(jié)構(gòu)確證的未知雜質(zhì)，它們的分子結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖2～8。山東省藥品檢驗(yàn)所17山東省藥品檢驗(yàn)所18山東省藥品檢驗(yàn)所19山東省藥品檢驗(yàn)所20山東省藥品檢驗(yàn)所21山東省藥品檢驗(yàn)所22山東省藥品檢驗(yàn)所23山東省藥品檢驗(yàn)所24而林可霉素B與7-差向林可霉素等的抗菌活性均不及林可霉素抗菌活性的一半，其它有關(guān)物質(zhì)的抗菌活性也均不及林可霉素，多年來(lái)對(duì)不同生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量考察結(jié)合液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行的初步分析結(jié)果表明，國(guó)產(chǎn)鹽酸林可霉素原料中以檢出過(guò)少量林可霉素B、痕量7-差向林可霉素（其結(jié)構(gòu)見(jiàn)標(biāo)記有★者）或Z—異構(gòu)體、α-酰胺基差向異構(gòu)林可霉素等發(fā)酵過(guò)程中伴生或提取分離等過(guò)程中產(chǎn)生的同系物。但是由于國(guó)產(chǎn)本品純度的不斷提高，當(dāng)它們的含量遠(yuǎn)低于檢出限時(shí)，則未必能夠檢出。因其結(jié)構(gòu)與毒理均尚待進(jìn)一步的研究，故而必須加以控制。山東省藥品檢驗(yàn)所25圖9-1林可霉素有關(guān)物質(zhì)檢查的色譜圖山東省藥品檢驗(yàn)所26經(jīng)多年考察和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，通常只有在本品經(jīng)歷了強(qiáng)力破壞試驗(yàn)后方能檢出甲基-1-硫代-林可霉糖和4-丙基古液酸。

§2.操作中需要注意的問(wèn)題：近年據(jù)有關(guān)生產(chǎn)企業(yè)反映，因?yàn)閭€(gè)別甲醇生產(chǎn)廠商在甲醇中添加了抗氧劑，從而導(dǎo)致在大約9分鐘處出現(xiàn)了干擾峰，更換其它品牌甲醇后，即可解決，見(jiàn)圖9-2。山東省藥品檢驗(yàn)所27圖9-2加有抗氧劑的甲醇所造成的異常色譜峰山東省藥品檢驗(yàn)所28水分

§1.修訂依據(jù)：根據(jù)單晶XRD測(cè)定結(jié)果，鹽酸林可霉素晶型Ⅰ的化學(xué)計(jì)量式為化學(xué)計(jì)量式為：C18H34N2O6S·HCL·H2O，由于晶型Ⅰ晶胞內(nèi)每一個(gè)林可霉素分子只靠氫鍵結(jié)合一個(gè)結(jié)晶水，其含水分的理論值為3.91%；晶型Ⅱ的化學(xué)計(jì)量式為（C18H34N2O6S·HCL·H2O）2·（H2O）0.5，則其含水分的理論值為為4.84%；山東省藥品檢驗(yàn)所29兩種晶型熱重分析測(cè)定的結(jié)果則證實(shí)，晶型Ⅰ失重率為3.482%；晶型Ⅱ失重率為5.729%；晶型II的熱重曲線與晶型I明顯不同，它會(huì)先失去一個(gè)分子水，爾后才失去兩個(gè)分子共用的0.5個(gè)分子水。同時(shí)參照歐洲藥典6.0、英國(guó)藥典2008、美國(guó)藥典31、日本藥局方15版，將水分定為3.1%~6.0%。

山東省藥品檢驗(yàn)所30§2.操作中需要注意的問(wèn)題：鹽酸林可霉素晶體粉末具有引濕性，在25℃，RH89％時(shí)，實(shí)際測(cè)定的鹽酸林可霉素引濕增重率可達(dá)6.96％，測(cè)定水分時(shí)應(yīng)注意控制環(huán)境的溫度和相對(duì)濕度。山東省藥品檢驗(yàn)所31⑶【含量測(cè)定】§1.修訂依據(jù)：為了增加各有關(guān)物質(zhì)的分離度，將原2005年版中國(guó)藥典鹽酸林可霉素含量測(cè)定項(xiàng)下HPLC法流動(dòng)相組成比例做了調(diào)整其典型色譜圖見(jiàn)圖10。山東省藥品檢驗(yàn)所32山東省藥品檢驗(yàn)所對(duì)照品的系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜圖33山東省藥品檢驗(yàn)所典型色譜圖，保留時(shí)間為19.51者為林可霉素峰；保留時(shí)間為10.134者為林可霉素B峰34酸破壞后的樣品色譜圖山東省藥品檢驗(yàn)所35§2.操作中需要注意的問(wèn)題：①由于0.05mol/L硼砂溶液和甲醇按一定比例混合時(shí)，會(huì)釋放出大量溶解熱并使流動(dòng)相產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致泵壓不穩(wěn)，從而使檢測(cè)器信號(hào)波動(dòng)與噪聲增大，乃至造成色譜圖基線漂移或出現(xiàn)“假峰”，經(jīng)過(guò)實(shí)踐和反復(fù)比較，證明流動(dòng)相用前應(yīng)混合均勻，冷卻至室溫，超聲脫氣后使用，則可有效防止上述現(xiàn)象的發(fā)生。故不宜將0.05mol/L硼砂溶液（用85%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6.1）與甲醇在二元或多元泵內(nèi)混合后洗脫。②當(dāng)各有關(guān)物質(zhì)峰分離欠佳時(shí)，可依照附錄規(guī)定適度調(diào)整流動(dòng)相比例或色譜柱。山東省藥品檢驗(yàn)所36

2.2鹽酸林可霉素注射液

【檢查】

苯甲醇

§1.修訂依據(jù)：①國(guó)外對(duì)人類(lèi)紅血球與苯甲醇相互作用研究的結(jié)果說(shuō)明，當(dāng)人類(lèi)靜脈輸入苯甲醇后，其會(huì)與紅血球細(xì)胞膜結(jié)合并引發(fā)溶血。當(dāng)溫度為37℃，苯甲醇濃度為100mM時(shí)，1小時(shí)后造成50%的紅血球溶血；經(jīng)放射性示蹤法檢測(cè)，結(jié)果證明苯甲醇系由簡(jiǎn)單擴(kuò)散進(jìn)入紅血球；當(dāng)人類(lèi)紅血球懸浮液（Ht16.6%）接觸到濃度低于80mM的苯甲醇時(shí)，在37℃，60分鐘內(nèi)極少或不會(huì)發(fā)生溶血。當(dāng)苯甲醇濃度高于80mM時(shí)，溶血作用則會(huì)增加。山東省藥品檢驗(yàn)所37

（按照MerckIndex14版No:1124,p1121所載,其密度于20℃和25℃時(shí)分別為1.04535和1.04156，經(jīng)計(jì)算：100mM/ml苯甲醇換算成百分濃度約為10.814mg/ml；80mM/ml換算成百分濃度則約為8.6512mg/ml）。山東省藥品檢驗(yàn)所38

②另外的報(bào)道則說(shuō)明，苯甲醇在人體內(nèi)會(huì)被迅速氧化為苯甲酸并與甘氨酸結(jié)合形成馬尿酸，再以尿中葡萄糖醛酸鹽排泄。由于苯甲醇主要靠肝臟中的醇類(lèi)脫氫酶（ADH）代謝，故而對(duì)于體內(nèi)醇類(lèi)脫氫酶水平低下者、因基因多態(tài)性而顯性表達(dá)醇類(lèi)脫氫酶2（ADH2）為3個(gè)等位異構(gòu)體——ADH2＊1;ADH2＊2;ADH2＊3者均很容易因血漿中苯甲醇的濃度蓄積增高并使其毒性隨之增加。山東省藥品檢驗(yàn)所39③依據(jù)《臨床用藥須知》所述，按照每支規(guī)格為2ml:0.6mg的鹽酸林可霉素注射液加入100ml0.9%氯化鈉注射液的臨床給藥法，將含有20mg/ml,10mg/ml,9.45mg/ml,9mg/ml苯甲醇的鹽酸林可霉素注射液以及不含苯甲醇的鹽酸林可霉素注射液分別稀釋?zhuān)蠓謩e與2%普通級(jí)家兔血紅細(xì)胞混懸液混合，靜置于37℃隔水式培養(yǎng)箱中的溶血試驗(yàn)結(jié)果表明，山東省藥品檢驗(yàn)所40凡是含有超過(guò)9.45mg/ml苯甲醇的鹽酸林可霉素注射液在加入到2%普通級(jí)家兔血紅細(xì)胞混懸液中后，在2.5小時(shí)～3小時(shí)內(nèi)，至少會(huì)引起血紅細(xì)胞變性。4小時(shí)后則會(huì)出現(xiàn)溶血并且尤以含有20mg/ml的本品為甚，凡是未加苯甲醇者則均不會(huì)出現(xiàn)紅細(xì)胞變性和溶血現(xiàn)象，（見(jiàn)圖10、11、12）。山東省藥品檢驗(yàn)所41山東省藥品檢驗(yàn)所42山東省藥品檢驗(yàn)所43山東省藥品檢驗(yàn)所44④根據(jù)國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心統(tǒng)計(jì)分析，截止到2003年第一季度，在國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心數(shù)據(jù)庫(kù)中，有關(guān)林可霉素的不良反應(yīng)病例報(bào)告共144例，嚴(yán)重不良反應(yīng)有呼吸困難2例，聽(tīng)力下降7例（均為18歲以下），四肢無(wú)力、吞咽困難1例，休克樣反應(yīng)16例，表現(xiàn)為面色蒼白、血壓下降，嚴(yán)重者呼吸心跳驟停，其中5例死亡，故而國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心以“林可霉素注射液的不良反應(yīng)”發(fā)布了第五期《藥品不良反應(yīng)信息通報(bào)》（2003年12月），這些不良反應(yīng)與國(guó)外報(bào)道苯甲醇的不良反應(yīng)基本一致。山東省藥品檢驗(yàn)所45⑤我國(guó)SFDA于2001年即已要求凡含有苯甲醇的注射劑嚴(yán)禁給兒童肌肉注射。詳見(jiàn)《關(guān)于加強(qiáng)苯甲醇注射液管理的通知》（國(guó)食藥監(jiān)注[2005]263號(hào)）⑥美國(guó)FDA繼1982年發(fā)布了禁止給新生兒使用苯甲醇或應(yīng)調(diào)整配方的警示之后，又于2008年12月在其工業(yè)指南中要求生產(chǎn)廠商必須依照CFR§§201.66(c)(8)and701.3(a)規(guī)定，將苯甲醇等非活性成分以其在處方中作用的顯著性的順序列出并明確標(biāo)示于藥品標(biāo)簽上。山東省藥品檢驗(yàn)所46綜上所述并根據(jù)：

ⅰ.實(shí)驗(yàn)中加有苯甲醇的鹽酸林可霉素注射液使紅血球變色或溶血的現(xiàn)象；

ⅱ.對(duì)國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)與發(fā)生鹽酸林可霉素注射液臨床不良反應(yīng)的生產(chǎn)企業(yè)處方中苯甲醇含量的統(tǒng)計(jì)，并經(jīng)實(shí)樣考察，發(fā)現(xiàn)臨床不良反應(yīng)病例數(shù)與所用生產(chǎn)企業(yè)處方中苯甲醇含量確實(shí)具有一定的相關(guān)性；

ⅲ.結(jié)合不良反應(yīng)癥狀及國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道癥狀的比較并參考了FDA的規(guī)定，初步認(rèn)為這些不良反應(yīng)可能由苯甲醇引起，所以決定增訂對(duì)苯甲醇的限度檢查。山東省藥品檢驗(yàn)所47§2.操作中需要注意的問(wèn)題：山東省藥品檢驗(yàn)所48①通過(guò)對(duì)生產(chǎn)廠家提供的配方資料歸納分析，共有以下幾種輔料：苯甲醇、焦亞硫酸鈉、EDTA-2Na、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫酸氫鈉、碳酸氫鈉。均按最大處方量配制后試驗(yàn)，結(jié)果證明：出現(xiàn)在林可霉素峰后者為苯甲醇峰；其他輔料峰約出現(xiàn)在溶劑峰處，均能與林可霉素峰及其雜質(zhì)峰完全分離。在有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)，則不應(yīng)將輔料峰納入計(jì)算。山東省藥品檢驗(yàn)所49②該色譜法系經(jīng)過(guò)單純型優(yōu)化建立，當(dāng)pH值低于4.5時(shí)，林可霉素峰出現(xiàn)前延，當(dāng)pH值高于5.4時(shí)，林可霉素峰與苯甲醇峰不能完全分離，pH值為5.0時(shí)，分離效果較好。山東省藥品檢驗(yàn)所50二．鹽酸克林霉素及其制劑標(biāo)準(zhǔn)

1.鹽酸克林霉素及其制劑標(biāo)準(zhǔn)增、修訂的主要項(xiàng)目

1.1鹽酸克林霉素⑴【鑒別】主要增訂了鑒別⑴TLC鑒別項(xiàng)并對(duì)4項(xiàng)鑒別中的前2項(xiàng)做了“二選一”的規(guī)定（膠囊同時(shí)照此增訂）。山東省藥品檢驗(yàn)所51即“取本品與克林霉素對(duì)照品適量，分別加甲醇制成每1ml中約含10mg的溶液，作為供試品溶液和對(duì)照品溶液；另取克林霉素對(duì)照品和林可霉素對(duì)照品適量，置同一量瓶中，加甲醇制成每1ml中約含10mg克林霉素和10mg林可霉素的溶液，照薄層色譜法（附錄VB）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯–甲酸（1.5：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，置碘蒸汽中顯色。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用溶液中克林霉素和林可霉素應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置應(yīng)與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)的顏色和位置相同”。山東省藥品檢驗(yàn)所52⑵【檢查】主要增訂了有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)。即：“有關(guān)物質(zhì)取本品適量，加流動(dòng)相稀釋制成每1ml中含4.0mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取適量，用流動(dòng)相稀釋制成每1ml中含0.02mg溶液，作為對(duì)照溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，取對(duì)照溶液20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20％；山東省藥品檢驗(yàn)所53再精密量取供試品溶液和對(duì)照溶液各20μl,分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，7-差向克林霉素的峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積（2.0%），克林霉素B(相對(duì)保留時(shí)間約為0.65)的峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積（2.0%），其它單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.5倍（1.0%），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的3倍（6.0％）”。山東省藥品檢驗(yàn)所54⑶【含量測(cè)定】

修訂了流動(dòng)相pH值及其組成比例。即：“色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸二氫鉀溶液（每1ml中含磷酸二氫鉀6.8g，用250g/L的KOH溶液調(diào)節(jié)至pH7.5）-乙腈（55：45）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；取克林霉素對(duì)照品適量，加流動(dòng)相稀釋制成每1ml中含4.0mg的溶液，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；克林霉素主峰的保留時(shí)間約為10分鐘?？肆置顾谺(相對(duì)保留時(shí)間約為0.65)與7-差向克林霉素(相對(duì)保留時(shí)間約為0.8)與克林霉素峰間的分離度應(yīng)大于3.0”。山東省藥品檢驗(yàn)所551.2鹽酸克林霉素膠囊⑴【鑒別】主要增訂了鑒別⑴TLC鑒別項(xiàng)并對(duì)3項(xiàng)鑒別中的前2項(xiàng)做了“二選一”的規(guī)定。⑵【檢查】主要增訂了有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)。⑶【含量測(cè)定】同原料藥【含量測(cè)定】。2.增、修訂的主要依據(jù)和操作中值得注意的一些問(wèn)題的探討山東省藥品檢驗(yàn)所562.1鹽酸克林霉素

【鑒別】⑴圖1不同廠家樣品的考察（1蘇州第四制藥廠ch0708019；2浙江天臺(tái)有限公司080203*5；3仁和藥業(yè)藥業(yè)；4南陽(yáng)普康藥業(yè)200802221；5華藥海翔藥業(yè)070101；6對(duì)照品；7系統(tǒng)適用性對(duì)照液）山東省藥品檢驗(yàn)所57

§1.增訂依據(jù)：依照中國(guó)藥品生物制品檢定所【2008】599號(hào)文“關(guān)于中國(guó)藥典2010年版二部抗生素品種增訂鑒別實(shí)驗(yàn)的函”的要求通過(guò)分別采用青島海洋化工廠分廠（批號(hào)20081025）和青島勝?；び邢薰荆ㄅ?hào)20050330規(guī)格：50×200mm厚度：0.20–0.25mm）薄層板對(duì)本品薄層色譜鑒別方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證后并經(jīng)收集樣品實(shí)驗(yàn)考察本品顯色反應(yīng)后增訂。

§2.操作中需要注意的問(wèn)題：如TLC展開(kāi)顯色后斑點(diǎn)欠清晰，可以根據(jù)薄層板載量等因素適當(dāng)提高或調(diào)整點(diǎn)樣液中的鹽酸克林霉素濃度。山東省藥品檢驗(yàn)所58⑵【檢查】

有關(guān)物質(zhì)

§1.增訂依據(jù)：①中國(guó)藥典2005版鹽酸克林霉素有關(guān)物質(zhì)和含量的測(cè)定方法均有別于國(guó)外藥典，色譜條件及進(jìn)樣濃度都有較大不同。中國(guó)藥典的方法理論塔板數(shù)低（約2000），拖尾嚴(yán)重，檢測(cè)出的雜質(zhì)峰較少（3個(gè)），EP、BP、USP的方法理論塔板數(shù)高（約10000），峰型對(duì)稱(chēng)，檢測(cè)出的雜質(zhì)峰較多（6-8個(gè)），國(guó)外藥典的標(biāo)準(zhǔn)制定也較為嚴(yán)格，規(guī)定了三個(gè)單一雜質(zhì)的限度，總雜質(zhì)不得過(guò)6.0%，中國(guó)藥典只規(guī)定了總雜質(zhì)不得過(guò)8.0%，對(duì)單一雜質(zhì)沒(méi)有要求。因此本次只對(duì)有關(guān)物質(zhì)和含量的測(cè)定方法進(jìn)行修訂；含量的限度略低于歐洲藥典，高于美國(guó)藥典，其典型色譜圖見(jiàn)圖2。山東省藥品檢驗(yàn)所59山東省藥品檢驗(yàn)所60②已知的各有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)及其活性山東省藥品檢驗(yàn)所圖中所示的有關(guān)物質(zhì)：

A.R1=CH2-CH2-CH3,R2=OH,R3＝H，即lincomycin,林可霉素；

B.R1=C2H5,R2=H,R3=Cl，即clindamycinB，克林霉素B；

C.Rl=CH2-CH2-CH3,,R2=Cl,R3=H，即7-epiclindamycin,7-差向克林霉素。

61林可霉素抗菌活性僅為克林霉素抗菌活性的1/4～1/8；7-差向克林霉素抗菌活性均不及克林霉素抗菌活性的1/2，克林霉素B的抗菌活性更低，所以均應(yīng)予以限制。經(jīng)考察，雖然擬定的限度與BP2009,USP31版基本一致，但是由于考察的7個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的10樣品中雜質(zhì)7-差向克林霉素的測(cè)定值均低于2.0%，7-差向克林霉素的限度比BP2009，USP31的規(guī)定還要低一倍，所以預(yù)期實(shí)施應(yīng)無(wú)問(wèn)題。山東省藥品檢驗(yàn)所62§2.操作中需要注意的問(wèn)題：①建議用4.6×250mm,5μm的ODS色譜柱。在該色譜柱上將流動(dòng)相流速調(diào)整為約1ml/min時(shí)；克林霉素主峰的保留時(shí)間約為10分鐘。②近年據(jù)有關(guān)生產(chǎn)企業(yè)反映，因?yàn)閭€(gè)別甲醇生產(chǎn)廠商在甲醇中添加了抗氧劑，從而導(dǎo)致在大約9分鐘處出現(xiàn)了干擾峰，更換其它品牌甲醇后，即可解決，見(jiàn)圖4。山東省藥品檢驗(yàn)所63

2.2鹽酸克林霉素膠囊

【鑒別】⑴§1.增訂依據(jù)：依照中國(guó)藥品生物制品檢定所【2008】599號(hào)文“關(guān)于中國(guó)藥典2010年版二部抗生素品種增訂鑒別實(shí)驗(yàn)的函”的要求通過(guò)對(duì)本品薄層色譜鑒別方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證后并經(jīng)收集樣品實(shí)驗(yàn)考察本品顯色反應(yīng)后增訂。山東省藥品檢驗(yàn)所64

圖4不同樣品的考察（圖中依次為1上海新亞050701；2浙江亞太藥業(yè)公司；3廣州白云山c27005；4仁和藥業(yè)080102；5石家莊康賀威；6對(duì)照品；7系統(tǒng)適用性對(duì)照品溶液。山東省藥品檢驗(yàn)所65

§2.操作中需要注意的問(wèn)題：①本次收集到了一些藥廠的膠囊的配方，其中輔料主要有：淀粉、硬脂酸鎂、微晶纖維素、乳糖、微粉硅膠、羧甲基淀粉鈉、滑石粉、白炭黑。按廠家提供的配方標(biāo)準(zhǔn)，稱(chēng)取各輔料（取其中最大量），配制成一定濃度的輔料空白溶液，結(jié)果在5分鐘前有一個(gè)較小的輔料峰，對(duì)有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定無(wú)影響。②因歐美藥典均把克林霉素B的相對(duì)保留時(shí)間定為0.65，如遇到克林霉素B保留時(shí)間出現(xiàn)變化，可依照對(duì)照品出峰順序推定。山東省藥品檢驗(yàn)所66三．質(zhì)量研究與標(biāo)準(zhǔn)提高的展望

1.根據(jù)我國(guó)林可霉素發(fā)酵工藝與克林霉素合成工藝的實(shí)際，進(jìn)一步加強(qiáng)伴生有關(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物結(jié)構(gòu)確證和生物活性及其毒理分析。

2.根據(jù)我國(guó)鹽酸林可霉素制劑與鹽酸克林霉素制劑生產(chǎn)實(shí)際，結(jié)合臨床不良反應(yīng)，努力做好生產(chǎn)配方及其工藝的合理性分析。

3.緊緊圍繞持續(xù)提高藥品標(biāo)準(zhǔn)對(duì)藥品質(zhì)量的實(shí)際可控性，實(shí)現(xiàn)確保藥品安全有效。山東省藥品檢驗(yàn)所67第二部分

糖肽類(lèi)抗生素標(biāo)準(zhǔn)的修訂與前瞻肽類(lèi)抗生素是既有一些是主要以氨基酸以肽鍵相連，又有一些間或連有脂肪酸基、芳香酸基、羥基酸基、糖（如吡喃糖等）、胺基、雜環(huán)等化學(xué)基團(tuán)的一類(lèi)有機(jī)化合物的統(tǒng)稱(chēng)。肽類(lèi)抗生素大致可依其結(jié)構(gòu)組成分為兩類(lèi)，一類(lèi)是僅由氨基酸通過(guò)酰胺鍵或內(nèi)酯鍵相連的環(huán)狀多肽類(lèi)，如多粘菌素、桿菌肽、放線菌素、卷曲霉素、環(huán)孢素等；另一類(lèi)是分子中除氨基酸組成的肽鏈外，還通過(guò)苷鍵與糖相連的糖肽類(lèi)抗生素，如萬(wàn)古霉素、去甲萬(wàn)古霉素、博萊霉素、平陽(yáng)霉素等。山東省藥品檢驗(yàn)所68一．鹽酸萬(wàn)古霉素及其粉針標(biāo)準(zhǔn)

1.鹽酸萬(wàn)古霉素及其粉針標(biāo)準(zhǔn)增、修訂的項(xiàng)目共3項(xiàng)：殘留溶劑；有關(guān)物質(zhì)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)；溶液的顏色。具體是：①殘留溶劑本品系在中國(guó)藥典2005年版增補(bǔ)本重新收載的基礎(chǔ)上增訂了殘留溶劑檢查項(xiàng)。即：“殘留溶劑乙醇取本品約0.2g，精密稱(chēng)定，置頂空瓶中，精密加水5ml使溶解，密封，作為供試品溶液；精密稱(chēng)取無(wú)水乙醇適量，用水制成每1ml約含0.2mg的溶液，精密量取5ml置頂空瓶中，密封，作為對(duì)照品溶液。山東省藥品檢驗(yàn)所69照殘留溶劑測(cè)定法（附錄ⅧP第一法）測(cè)定，以聚乙二醇（PEG-20M）（或極性相近）為固定液的毛細(xì)管柱為色譜柱，柱溫為50℃；進(jìn)樣溫度為150℃;檢測(cè)器溫度為250℃；頂空瓶平衡溫度為80℃，平衡時(shí)間為30分鐘。量取供試品溶液與對(duì)照品溶液分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。應(yīng)符合規(guī)定”。山東省藥品檢驗(yàn)所70②有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下增訂了系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，即：“另取萬(wàn)古霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量，用水溶解并制成每1ml中含0.5mg的溶液，在65℃下加熱24小時(shí)，冷卻，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液，量取20μl，注入液相色譜儀，記錄的色譜圖中，主峰的信噪比應(yīng)大于5.0，另取供試品溶液（b）20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，萬(wàn)古霉素B峰的拖尾因子應(yīng)小于1.6”。③溶液的澄清度與顏色，即：“取本品5份，分別加水制成每1ml中含0.1g的溶液，溶液應(yīng)澄清；如顯渾濁，依法檢查（附錄ⅨB），與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較，均不得更濃；如顯色，依法檢查（附錄ⅨA第一法），與黃色或橙黃色6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液比較，均不得更深”。山東省藥品檢驗(yàn)所71

2.增、修訂的主要依據(jù)和操作中值得注意的一些問(wèn)題的探討。

§1.增、修訂依據(jù)：①殘留溶劑

根據(jù)目前我國(guó)實(shí)際，鹽酸萬(wàn)古霉素生產(chǎn)工藝路線的最后三步中只使用了乙醇一種有機(jī)溶劑，依照現(xiàn)行新藥審批和中國(guó)藥典的要求，必須對(duì)其殘留溶劑進(jìn)行檢測(cè)控制。所以按照中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅧP殘留溶劑檢查法第一法和ICH的要求，建立了毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定鹽酸萬(wàn)古霉素中乙醇的方法，并在考察了3批樣品中的殘留溶劑后予以增訂。而原中國(guó)藥典2005年版增補(bǔ)本本品標(biāo)準(zhǔn)中殘留溶劑檢查項(xiàng)下的丙酮限度檢查，則由于目前實(shí)際采用的制劑工藝及檢驗(yàn)中并沒(méi)有使用，故而予以刪除。山東省藥品檢驗(yàn)所72②有關(guān)物質(zhì)檢查與含量測(cè)定項(xiàng)下的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)其典型色譜圖見(jiàn)圖1與圖2。山東省藥品檢驗(yàn)所73山東省藥品檢驗(yàn)所74③溶液的澄清度與顏色制劑工藝中有脫色、過(guò)濾除菌、凍干、充氮等處理，因此溶液的澄清度與顏色項(xiàng)比原料藥控制更嚴(yán)格，同時(shí)由于制劑添加有穩(wěn)定劑，所以其穩(wěn)定性比原料藥好，貯藏條件也比原料藥要求低。經(jīng)實(shí)樣觀察，溶液的顏色確實(shí)介于黃色和橙黃色之間，因此標(biāo)準(zhǔn)中增加了橙黃色色澤描述。山東省藥品檢驗(yàn)所75

§2.操作中需要注意的問(wèn)題：①殘留溶劑試驗(yàn)結(jié)果表明，毛細(xì)管氣相色譜柱的理論板數(shù)以≧60000為好（實(shí)際測(cè)定無(wú)水乙醇對(duì)照液的理論板數(shù)為60006）。通過(guò)逐級(jí)降低濃度，進(jìn)樣測(cè)定，確定檢測(cè)限，結(jié)果表明，信噪比為3:1時(shí)，乙醇測(cè)定的最低檢測(cè)濃度可達(dá)0.4g/ml。山東省藥品檢驗(yàn)所76實(shí)際回收率測(cè)定結(jié)果：精密稱(chēng)取已測(cè)定乙醇含量的樣品9份,精密加入乙醇對(duì)照品溶液適量,使成三個(gè)不同的濃度，照標(biāo)準(zhǔn)中方法測(cè)定，用所得9個(gè)測(cè)定結(jié)果計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為95.9%，RSD為4.0%（n=9）。在通過(guò)取乙醇對(duì)照品溶液6份，分別進(jìn)樣后，計(jì)算所得結(jié)果的RSD為2.7％(n=6)則表明本法重現(xiàn)性良好，試驗(yàn)中可供借鑒。②萬(wàn)古霉素B和有關(guān)物質(zhì)檢查依該法檢查，經(jīng)流動(dòng)相洗脫后出峰的順序依次為：分解產(chǎn)物1；分解產(chǎn)物2；萬(wàn)古霉素、分解產(chǎn)物3；注意調(diào)整流速或流動(dòng)相比例，以使萬(wàn)古霉素與分解產(chǎn)物2峰間的分離度≧5.0,詳見(jiàn)圖3。山東省藥品檢驗(yàn)所77山東省藥品檢驗(yàn)所78二．鹽酸去甲萬(wàn)古霉素及其粉針標(biāo)準(zhǔn)

1.鹽酸去甲萬(wàn)古霉素及其粉針標(biāo)準(zhǔn)增、修訂的主要項(xiàng)目①本版藥典增、修訂了溶液的澄清度與顏色檢查項(xiàng)，即:“溶液的澄清度與顏色：取本品5份，各0.3g，分別加水5ml，溶解后，溶液應(yīng)澄清；如顯渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液（附錄ⅨB）比較，均不得更濃；如顯色，與橙黃色6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液（附錄ⅨA第一法）比較，均不得更深”。山東省藥品檢驗(yàn)所79②有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下增定了系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。即：“去甲萬(wàn)古霉素主峰的保留時(shí)間控制在18～22分鐘，理論板數(shù)按去甲萬(wàn)古霉素峰計(jì)算不低于1500。”系統(tǒng)適用性試驗(yàn)其他規(guī)定則與含量測(cè)定項(xiàng)方法一致。山東省藥品檢驗(yàn)所80

2.修訂的主要依據(jù)和檢驗(yàn)操作中一些問(wèn)題的探討

§1.增、修訂依據(jù)：①溶液的澄清度與顏色據(jù)初步核查，我國(guó)目前生產(chǎn)鹽酸去甲萬(wàn)古霉素原料藥的生產(chǎn)企業(yè)只有兩家，經(jīng)實(shí)樣考察兩家生產(chǎn)的鹽酸去甲萬(wàn)古霉素樣品6批，在固定時(shí)間內(nèi)大都能夠達(dá)到限定標(biāo)準(zhǔn)。據(jù)上海華山醫(yī)院統(tǒng)計(jì)，華北制藥集團(tuán)生產(chǎn)的鹽酸去甲萬(wàn)古霉素原料藥及其制劑由于實(shí)施了發(fā)酵液過(guò)濾分離與新的純化與脫色新工藝，使收率、結(jié)晶率分別提高18%和13%，成品色澤從淺棕色提高至類(lèi)白色，HPLC純度提高了10%。上海華山醫(yī)院提供的數(shù)據(jù)表明：工藝改進(jìn)后，產(chǎn)品的不良反應(yīng)率下降約為3%。因此，有效控制溶液的澄清度與顏色對(duì)于提高鹽酸去甲萬(wàn)古霉素原料藥及其制劑質(zhì)量和安全性確有必要。山東省藥品檢驗(yàn)所81②有關(guān)物質(zhì)檢查去甲萬(wàn)古霉素系由7個(gè)氨基酸和2個(gè)糖結(jié)合而成的大分子糖肽類(lèi)抗生素，其穩(wěn)定性較差，易發(fā)生天門(mén)冬酰胺重排，還可以發(fā)生水解(脫糖)反應(yīng)，從而產(chǎn)生低活性降解物。在發(fā)酵過(guò)程中，同時(shí)會(huì)伴生萬(wàn)古霉素同系物，從而使其有產(chǎn)品中出現(xiàn)降解物與同系物同時(shí)存在的情況，為確保臨床用藥安全，必須控制有關(guān)物質(zhì)及其總量。山東省藥品檢驗(yàn)所82§2.操作中需要注意的問(wèn)題：①溶液的澄清度與顏色試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果表明，放置的時(shí)間是檢查溶液的顏色結(jié)果的重要因素之一。美國(guó)禮來(lái)公司的注射用鹽酸萬(wàn)古霉素始終帶有淺棕色，而英、日藥典標(biāo)準(zhǔn)卻均規(guī)定鹽酸萬(wàn)古霉素應(yīng)為白色或類(lèi)白色。經(jīng)多次試驗(yàn)，為使檢驗(yàn)結(jié)果能夠一致，檢查時(shí)以控制在5～10分鐘觀察為好。②有關(guān)物質(zhì)檢查山東省藥品檢驗(yàn)所§2.操作中需要注意的問(wèn)題：①溶液的澄清度與顏色試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果表明，放置的時(shí)間是檢查溶液的顏色結(jié)果的重要因素之一。美國(guó)禮來(lái)公司的注射用鹽酸萬(wàn)古霉素始終帶有淺棕色，而英、日藥典標(biāo)準(zhǔn)卻均規(guī)定鹽酸萬(wàn)古霉素應(yīng)為白色或類(lèi)白色。經(jīng)多次試驗(yàn)，為使檢驗(yàn)結(jié)果能夠一致，檢查時(shí)以控制在5～10分鐘觀察為好。②有關(guān)物質(zhì)檢查83圖4天門(mén)冬酰胺重排反應(yīng)與異構(gòu)化反應(yīng)山東省藥品檢驗(yàn)所84山東省藥品檢驗(yàn)所85天門(mén)冬酰胺重排

經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，鹽酸去甲萬(wàn)古霉素有關(guān)物質(zhì)中主要有關(guān)物質(zhì)的色譜峰為天門(mén)冬酰胺重排產(chǎn)生的CDPI，而CDPI則由于CDPIM和CDPIm存在互變異構(gòu)平衡，可被同時(shí)檢出，但在不同溫度及其他因素條件時(shí)，由于互變異構(gòu)平衡常數(shù)會(huì)隨著條件變化而改變，從而造成兩個(gè)色譜峰的峰面積所代表的兩個(gè)互變異構(gòu)體的含量會(huì)也會(huì)相應(yīng)變化，有關(guān)物質(zhì)測(cè)定時(shí)應(yīng)予以注意。山東省藥品檢驗(yàn)所86圖6-1CDP-I-M（即上圖中2）和CDP-I-m（即上圖中3）的分子結(jié)構(gòu)山東省藥品檢驗(yàn)所87圖10鹽酸去甲萬(wàn)古霉素有關(guān)物質(zhì)HPLC檢查法的典型色譜圖山東省藥品檢驗(yàn)所88三．質(zhì)量研究與標(biāo)準(zhǔn)提高的展望

1、萬(wàn)古霉素類(lèi)抗生素是臨床上用于治療嚴(yán)重革蘭氏陽(yáng)性菌感染，特別是耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌（MRSA）和耐甲氧西林的表皮葡萄球菌(MRSE)等所致嚴(yán)重感染的首選藥物之一，在當(dāng)前抗生素濫用嚴(yán)重的情況下，萬(wàn)古霉素類(lèi)抗生素質(zhì)量的穩(wěn)定則尤為重要。因此，關(guān)注鹽酸萬(wàn)古霉素純化、精制、凍干的每一步改進(jìn)所帶來(lái)的活性、穩(wěn)定性的變化應(yīng)該是我們今后質(zhì)量研究與標(biāo)準(zhǔn)提高的重點(diǎn)。山東省藥品檢驗(yàn)所89

2、無(wú)論是降解物，還是伴生的同系物的結(jié)構(gòu)的確證，都是我們今后生產(chǎn)實(shí)際需要解決的重點(diǎn)（例如：我國(guó)已有人從國(guó)產(chǎn)萬(wàn)古霉素中檢出了去氯萬(wàn)古霉素以及尚待進(jìn)一步研究的萬(wàn)古霉素的同系伴生物）。惟其如此，我們才能在色譜圖中明確各有關(guān)物質(zhì)峰的歸屬，特別是我國(guó)生產(chǎn)工藝及其所用原材料與國(guó)外工藝及其所用原材料均會(huì)有所不同，做好這項(xiàng)研究會(huì)對(duì)做大做強(qiáng)民族醫(yī)藥工業(yè)十分有益。山東省藥品檢驗(yàn)所90

3、注射用鹽酸萬(wàn)古霉素中如果添加了肽聚糖類(lèi)似物（Peptidoglycananalogs）,則建議不但要關(guān)注其對(duì)穩(wěn)定性的影響，還要格外關(guān)注其可能帶來(lái)的安全性風(fēng)險(xiǎn)并結(jié)合臨床不良反應(yīng)予以科學(xué)評(píng)估。山東省藥品檢驗(yàn)所91第三部分

安莎類(lèi)抗生素-利福平及其制劑標(biāo)準(zhǔn)的

修訂與前瞻

一、利福平質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的增、修訂

1.利福平標(biāo)準(zhǔn)增、修訂的項(xiàng)目共3項(xiàng)，分別是：鑒別；有關(guān)物質(zhì)；含量測(cè)定①【鑒別】增訂了鑒別⑴TLC鑒別項(xiàng)并對(duì)3項(xiàng)鑒別中的前2項(xiàng)做了“二選一”的規(guī)定（膠囊、片劑和滴眼劑同時(shí)照此增訂）。即：山東省藥品檢驗(yàn)所92“取本品和利福平對(duì)照品各適量分別加乙醇溶解并稀釋成每1ml含10mg利福平的溶液，作為供試品溶液與對(duì)照品溶液；取利福平對(duì)照品適量，加乙醇制成每1ml含10mg利福平的溶液，作為對(duì)照品溶液；另取利福平對(duì)照品和利福噴丁對(duì)照品適量，加乙醇制成每1ml含10mg利福平和10mg利福噴丁的混合溶液，照薄層色譜法（附錄VB）試驗(yàn)，，吸取上述3種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－濃氨溶液（8：2：0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，日光下檢視?；旌先芤簯?yīng)顯兩個(gè)完全分離的斑點(diǎn)。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置應(yīng)與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)的顏色和位置相同”。山東省藥品檢驗(yàn)所93②【檢查】有關(guān)物質(zhì)做了如下修訂：“取本品適量，精密稱(chēng)定，用乙腈溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液，作為供試品溶液；精密稱(chēng)取利福平對(duì)照品適量，加乙腈溶解并定量稀釋制成每1ml中約含10μg的溶液，作為對(duì)照溶液；另精密稱(chēng)取醌式利福平、N-氧化利福平、3－甲酰利福霉素SV對(duì)照品各適量，加乙腈溶解并稀釋制成每1ml中各約10μg的溶液，作為雜質(zhì)對(duì)照品溶液，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，山東省藥品檢驗(yàn)所94取對(duì)照溶液10μl，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分峰高約為滿量程的25%，再精密量取對(duì)照溶液、雜質(zhì)對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μl分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的4倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，醌式利福平、N-氧化利福平、3－甲酰利福霉素SV按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，分別不得過(guò)1.5%、0.5%、0.5%，其余各雜質(zhì)峰面積的和，不得大于對(duì)照溶液主峰面積的3倍（3.0％）”。即將原2005年版中國(guó)藥典本品項(xiàng)下的加校正因子的對(duì)照品法檢查醌式利福平、N-氧化利福平、3－甲酰利福霉素SV修訂為采用雜質(zhì)對(duì)照品法分別檢測(cè)這3種雜質(zhì)的量。山東省藥品檢驗(yàn)所95③【含量測(cè)定】刪去了原2005年版中國(guó)藥典本品項(xiàng)下的“理論板數(shù)按利福平峰計(jì)算不低于1500”的規(guī)定并將系統(tǒng)適用性試驗(yàn)修訂為：“用辛基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0.075mol/L磷酸二氫鉀溶液-1.0mol/L枸櫞酸溶液(30∶30∶36∶4)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。取利福平對(duì)照品、醌式利福平對(duì)照品、N-氧化利福平對(duì)照品、3－甲酰利福霉素SV對(duì)照品和利福霉素SV對(duì)照品適量，加乙腈溶解制成每1ml中含0.04mg的溶液，取10μl注入液相色譜儀，各峰間的分離度均應(yīng)符合要求?！鄙綎|省藥品檢驗(yàn)所962.增、修訂的主要依據(jù)和操作中值得注意的一些問(wèn)題的探討。①【鑒別】§1.增、修訂主要依據(jù)：按中檢函[2008]600號(hào)“關(guān)于〈〈中國(guó)藥典〉〉2010年版二部抗生素品種增訂鑒別試驗(yàn)”要求，通過(guò)對(duì)本品薄層色譜鑒別方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證后并經(jīng)收集樣品實(shí)驗(yàn)考察本品顯色反應(yīng)后增訂。

§2.操作中需要注意的問(wèn)題：用該方法分別對(duì)1批原料、5批膠囊和3批滴眼用利福平分別進(jìn)行試驗(yàn)，其中原料與膠囊鑒別均得到正反應(yīng)，用GF254板和硅膠G板結(jié)果一致。山東省藥品檢驗(yàn)所97②【檢查】有關(guān)物質(zhì)

§1.增、修訂主要依據(jù)：為了簡(jiǎn)化操作與計(jì)算，在已具備各有關(guān)物質(zhì)對(duì)照品的前提下，將原2005年版中國(guó)藥典本檢查項(xiàng)下加校正因子的對(duì)照品法檢查醌式利福平、N-氧化利福平、3－甲酰利福霉素SV修訂為直接檢測(cè)這3種雜質(zhì)的含量是否超過(guò)限度。經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，按本法色譜條件進(jìn)樣，得到各自的檢測(cè)限（以3倍信噪比計(jì)）和定量限（以10倍信噪比計(jì)），見(jiàn)下表。山東省藥品檢驗(yàn)所98山東省藥品檢驗(yàn)所99最低檢出限和最低定量檢出限驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明：醌式利福平在濃度為0.01802～180.2μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；N-氧化利福平在濃度為0.02174～217.4μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；3－甲酰利福霉素SV對(duì)照品在濃度為0.01398μ～139.8g/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，（均為r=0.9999）。山東省藥品檢驗(yàn)所100經(jīng)比較兩種測(cè)定方法結(jié)果（見(jiàn)表2），可以看出，新方法測(cè)定結(jié)果與原方法測(cè)定結(jié)果很接近，以上幾批樣品均符合原方法中原料和膠囊有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下的規(guī)定。所以盡管修訂為直接計(jì)算的新方法，仍然保留原方法的限度。山東省藥品檢驗(yàn)所101山東省藥品檢驗(yàn)所102§2.操作中需要注意的問(wèn)題：溫度對(duì)雜質(zhì)對(duì)照品溶液穩(wěn)定性影響的考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：除這三種主要雜質(zhì)外的其他雜質(zhì)放置6小時(shí)仍符合規(guī)定。溫度對(duì)利福平在乙腈中的溶解度和穩(wěn)定性影響的考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，有關(guān)物質(zhì)檢查所需的約1mg/ml濃度的樣品，在17℃和32℃之間放置6小時(shí)，未出現(xiàn)顯著差異。表明利福平原料及膠囊在乙腈溶液中較穩(wěn)定，室溫放置6小時(shí)均未發(fā)生明顯降解，能夠滿足有關(guān)物質(zhì)檢查的需要。山東省藥品檢驗(yàn)所103山東省藥品檢驗(yàn)所104③【含量測(cè)定】§1.修訂主要依據(jù)：由于目前普遍認(rèn)為，起源于上一世紀(jì)并借鑒了氣相色譜法中對(duì)色譜柱理論板數(shù)的規(guī)定在應(yīng)用于液相色譜法針對(duì)結(jié)構(gòu)相近或結(jié)構(gòu)并不相近的分離分析目標(biāo)物（如復(fù)方制劑中的另一個(gè)API）時(shí)，并不能確切地表達(dá)色譜柱的分離能力，因此，各國(guó)藥典也均不再以此衡量液相色譜柱的柱效，有鑒于此，刪去了原2005年版中國(guó)藥典本品項(xiàng)下的“理論板數(shù)按利福平峰計(jì)算不低于1500”的規(guī)定。山東省藥品檢驗(yàn)所105§2.操作中需要注意的問(wèn)題：經(jīng)實(shí)驗(yàn)考查，采用NovapakC83.9×250mm、SpherisorbC84.6×250mm、AgilentSB-C84.6×250mm三種品牌色譜柱均能檢出并分離利福平、醌式利福平、N-氧化利福平、3－甲酰利福霉素SV，似可以表明修訂后的本法能夠適用于較多品牌的色譜柱。溫度對(duì)利福平在乙腈中的溶解度和穩(wěn)定性影響的考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利福平原料及膠囊在乙腈溶液中較穩(wěn)定，室溫放置6小時(shí)含量均未發(fā)生明顯變化，能夠滿足含量測(cè)定的需要。但在實(shí)驗(yàn)溫度范圍之外會(huì)否發(fā)生變化，建議在含量測(cè)定時(shí)，注意控制環(huán)境條件。山東省藥品檢驗(yàn)所106二、滴眼用利福平質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的增、修訂1.滴眼用利福平標(biāo)準(zhǔn)增、修訂的項(xiàng)目共4項(xiàng)，分別是：鑒別；有關(guān)物質(zhì)和滲透壓檢查；含量測(cè)定①【鑒別】增訂了【鑒別】⑴TLC鑒別項(xiàng)并對(duì)3項(xiàng)鑒別中的前2項(xiàng)做了“二選一”的規(guī)定。②【檢查】有關(guān)物質(zhì)做了如下修訂：“用辛基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0.075mol/L磷酸二氫鉀溶液-1.0mol/L枸櫞酸溶液(30∶30∶36∶4)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。取利福平對(duì)照品與利福霉素SV對(duì)照品適量，分別加乙腈溶解并稀釋制成每1ml中含0.04mg的溶液，等體積混勻，取10μl注入液相色譜儀，利福平峰與利福霉素SV峰的分離度應(yīng)符合要求”。山東省藥品檢驗(yàn)所107③【檢查】增訂了滲透壓，即：“滲透壓摩爾濃度取本品，用所附緩沖液配制成滴眼液濃度，依法檢查（附錄ⅨG）應(yīng)為260～320mOsm/kg”。④【含量測(cè)定】修訂為：“取本品5片（丸、管），用所附緩沖液溶解并定量制成每1ml中約含利福平1mg的溶液，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液適量，用乙腈定量稀釋制成每1ml中約含利福平0.08mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取利福平對(duì)照品適量，用乙腈溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.08mg的溶液，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得?！鄙綎|省藥品檢驗(yàn)所108

2.增、修訂的主要依據(jù)和操作中值得注意的一些問(wèn)題的探討。①【鑒別】（1）

§1.修訂主要依據(jù)：同原料藥。

§2.操作中需要注意的問(wèn)題：山東省藥品檢驗(yàn)所109但是在3批利福平滴眼劑試驗(yàn)驗(yàn)證中，由于有一批滴眼用利福平處方中加有聚維酮K而造成其嚴(yán)重拖尾，不能得到滿意斑點(diǎn)，用GF254板也存在相同問(wèn)題。因其會(huì)嚴(yán)重干擾薄層色譜法的檢測(cè)結(jié)果，在尚未解決之前，遇到此種樣品時(shí)，宜選用【鑒別】（2），以免造成誤判，詳見(jiàn)圖2。山東省藥品檢驗(yàn)所110山東省藥品檢驗(yàn)所111②【檢查】有關(guān)物質(zhì)

§1.修訂主要依據(jù)：同原料藥。

§2.操作中需要注意的問(wèn)題：多年實(shí)踐表明：確保利福平峰與利福霉素SV峰分離度達(dá)到藥典附錄的規(guī)定是有關(guān)物質(zhì)檢查實(shí)驗(yàn)操作的關(guān)鍵，只要二者分離度符合要求，其他峰之間均能有效分離（見(jiàn)圖1）。山東省藥品檢驗(yàn)所112③【檢查】增訂了滲透壓

§1.增訂的主要依據(jù)：盡管用SMC30滲透壓摩爾濃度測(cè)定儀測(cè)定了3個(gè)廠家滴眼用利福平緩沖液的滲透壓并與生理鹽水（282mOsm/kg）做了比較，試驗(yàn)結(jié)果證明這3個(gè)廠家均未在處方和工藝實(shí)施中調(diào)控滲透壓摩爾濃度，但是鑒于該項(xiàng)檢查事關(guān)患者眼睛的用藥安全，所以必須予以規(guī)定。山東省藥品檢驗(yàn)所113

§2.操作中需要注意的問(wèn)題：建議注意滲透壓摩爾濃度測(cè)定儀的校準(zhǔn)，以確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確與重現(xiàn)。④【含量測(cè)定】§1.修訂的主要依據(jù)：系統(tǒng)適用性試驗(yàn)由于利福平峰與利福霉素SV峰最難分離，只要二者分離度符合要求，其他峰之間均能有效分離。故將系統(tǒng)適用性試驗(yàn)修訂為山東省藥品檢驗(yàn)所114對(duì)溶劑的選擇和溶解方法考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明：來(lái)自3個(gè)廠家的緩沖液配方均不相同，對(duì)利福平對(duì)照品的溶解情況也不相同，有的溶解性較差，影響含量測(cè)定的準(zhǔn)確度。其中一個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的的滴眼用利福平緩沖液對(duì)利福平對(duì)照品的溶解較好，用乙腈也能完全溶解對(duì)照品，用這2種溶劑分別溶解利福平對(duì)照品后，均用乙腈稀釋至約0.08mg/ml，分別進(jìn)樣，計(jì)算進(jìn)樣濃度與峰面積的比值，結(jié)果2者幾乎無(wú)差異。但是另2家廠的緩沖液均不能完全溶解對(duì)照品，濃度與峰面積的比值偏大，影響含量測(cè)定結(jié)果。因此將原標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)照品第一步“用所附緩沖液溶解”修改為“用乙腈溶解”。山東省藥品檢驗(yàn)所115而對(duì)緩沖液對(duì)供試品的溶解能力考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果