Waters1525型高效液相色譜儀操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程

1、第 頁共9頁QB-C-QD-SOP-013版本號01修訂號001目的：規(guī)范Waters1525型高效液相色譜儀的操作，確保檢測設(shè)備安全穩(wěn)定的運(yùn)行。2范圍：適用于Waters1525型高效液相色譜儀、Waters2489紫外檢測器、GCK3308全自動空氣源、ELSD2000ES蒸發(fā)光散射檢測器的操作使用。3職責(zé)：質(zhì)量管理部檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)本規(guī)程的執(zhí)行。4控制內(nèi)容與要求：4.1儀器及部件Waters1525輸液泵；Waters2489紫外檢測器；GCK3308全自動空氣源；ELSD2000ES蒸發(fā)光散射檢測器；Empower3色譜數(shù)據(jù)工作系統(tǒng)使用前檢查室內(nèi)溫濕度，保持在15-30C，和20-85%RH

2、；線路連接是否正常，外部組裝是否完整，液體管道連接是否正確，廢液瓶是否需要更換或者或者傾倒；若不正常應(yīng)盡快上報并檢修。4.2開機(jī)4.2.1依次打開Waters1525輸液泵（左面板上部）、Waters2489紫外檢測器（主面板底部）、柱溫箱電源（右板面下部），待自檢通過后打開計(jì)算機(jī)電源，進(jìn)入Empower色譜工作站。4.2.2依次打開Waters1525輸液泵（左面板上部）、GCK3308全自動空氣源（主面板底部）、ELSD2000ES蒸發(fā)光散射檢測器（后面板底部左側(cè)）、柱溫箱電源（右板面下部），（注意空氣源的排水及更換硅膠和活性炭）待達(dá)到設(shè)置的條件時打開計(jì)算機(jī)電源，進(jìn)入Empower色譜工作

3、站。根據(jù)情況可先用甲醇或者異丙醇沖洗色譜柱。4.3設(shè)置4.3.1設(shè)置系統(tǒng)進(jìn)入Empower3色譜數(shù)據(jù)工作系統(tǒng)，單擊“配置系統(tǒng)”單擊Empower3配置下“系統(tǒng)”若有在線系統(tǒng)，查看是否是所需系統(tǒng)，如果不是，則單擊在線系統(tǒng)，后右擊“離線”，單擊“確定”；再單擊所需系統(tǒng)，后右擊“啟用”，單擊“確定”。4.3.2設(shè)置項(xiàng)目和方法4.3.2.1設(shè)置項(xiàng)目配置系統(tǒng)一文件f新建f項(xiàng)目f下一步f設(shè)定表空間為250，取消全面審計(jì)跟蹤一下一步一選擇PDAf下一步f下一步f選擇一個源項(xiàng)目f下一步f項(xiàng)目名（例如:花青素20150922）f完成，關(guān)閉窗口4.3.3設(shè)置儀器方法雙擊“運(yùn)行樣品”，選擇已設(shè)置的項(xiàng)目和系統(tǒng)，單擊“

4、確定”。（1）頁面排版，調(diào)整為最佳狀態(tài)。檢查頁面上泵的流量及壓力窗口、檢測器、柱溫、儀器方法樣品信息框等信息。QB-C-QD-SOP-013版本號01修訂號00（2）儀器方法一編輯PCM/15xx流量一泵設(shè)定，壓力上限4000.0，壓力下限0.0；設(shè)定的流量，選擇泵模式等度或者梯度，設(shè)定等度或梯度流速以及總流量。事件一啟用事件監(jiān)視，時間：0.0，事件：事件1.功能：脈動，間隔：0.02。溶劑一溶劑說明：注明所使用溶劑的名稱W2489（波長模式：單）通道A-燈開啟；設(shè)置相應(yīng)波長（例如:540）；數(shù)據(jù)模式為吸光度；采樣速率1；濾光器時間常數(shù)：正常；波長改變時自動復(fù)零：維持基線。模擬輸出1一靈敏度2

5、.0000；極性：正（+）；電壓補(bǔ)償：0；啟用圖表標(biāo)記事件一矩形波段：0.2；脈沖寬度：1.0；運(yùn)行事件TCM區(qū)域1一啟用區(qū)域1，設(shè)定值：相應(yīng)的柱溫（例如：25）；上限110.0，下限0.0。保存一名稱（例如：花青素20150922）eSATIN常規(guī)f通用，環(huán)境60Hz，啟用BCD極性：正（+）；通道1,啟用通道：開；采樣率:2；說明：通道1;單位：mV；放大因子：1000.0；通道2,啟用通道：關(guān)。事件一初始狀態(tài)，繼電器：關(guān)；TTL1：關(guān)；TTL2:關(guān)；中繼操作模式：標(biāo)準(zhǔn)。4.3.4設(shè)置樣品方法頁面左側(cè)單進(jìn)樣樣品名：（例如：對照-150922-01）功能：樣品進(jìn)樣方法組：單擊開發(fā)方法f選擇儀

6、器方法（例如：花青素20150922）f下一步f下一步f完成樣品瓶：1進(jìn)樣體積：10.0運(yùn)行時間：（例如：40.0）4.3.5設(shè)置檢測器參數(shù)在ELSD2000ES蒸發(fā)光散射檢測器面板上出現(xiàn)MenuRun，按Menu對應(yīng)的下方鍵，面板顯示：1.Method2.Configuration3.Diagnostics，按數(shù)字鍵1,面板顯示：1.SelectMethod2.EditMethodf按數(shù)字鍵1,面板顯示編輯好的方法，按數(shù)字鍵盤選擇相應(yīng)的檢測方法f按OK下方鍵QB-C-QD-SOP-013版本號01修訂號00按RUN下方鍵；按數(shù)字鍵2,面板顯示各參數(shù)項(xiàng)目，通過數(shù)字鍵盤輸入相應(yīng)的參數(shù)，輸入完畢按

7、Save下方鍵按Run下方鍵，等各項(xiàng)參數(shù)達(dá)到設(shè)定值后方可使流動相進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測。各參數(shù)的確定根據(jù)流動相的種類、配比，參照Alltech2000ES蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）操作手冊中4.4.1，對溫度、氣體流量等進(jìn)行設(shè)置。如果是已設(shè)置的項(xiàng)目，核對設(shè)置的儀器方法、方法組、檢測器參數(shù)等信息。4.4操作運(yùn)行4.4.1根據(jù)樣品性質(zhì)選擇合適的系統(tǒng)，如果系統(tǒng)不合適，需要倒相：反相系統(tǒng)倒為正相系統(tǒng)斷開檢測器，不接色譜柱接入二通，先用甲醇沖洗系統(tǒng)，0.50ml/min:0.50ml/min的流速沖洗半小時左右，再用異丙醇0.50ml/min:0.50ml/min的流速沖洗2小時左右，也可根據(jù)實(shí)際情況確定

8、小流速沖洗較長時間。正相系統(tǒng)倒為反相系統(tǒng)斷開檢測器，不接色譜柱接入二通，先用異丙醇沖洗系統(tǒng)，0.50ml/min:0.50ml/min的流速沖洗1小時左右，再用甲醇0.50ml/min:0.50ml/min的流速沖洗1小時左右。4.4.2根據(jù)樣品性質(zhì)選擇合適的色譜柱，正確安裝色譜柱（注意箭頭朝上，且不能太緊）；選擇流動相類型，配制、過濾、并超聲脫氣。4.4.3按照要求開機(jī)、設(shè)置后，單擊進(jìn)入“運(yùn)行樣品”，打開排液閥（向內(nèi)至扳不動為止），設(shè)定流量A:3.00ml/min,B:3.00ml/min,變化率3min。待都達(dá)到3.00ml/min，觀察管路中是否還有氣泡，再設(shè)定相應(yīng)的流速（單泵或者雙泵）

9、，變化率1-3min，待都達(dá)到設(shè)定流速時，根據(jù)情況再用注射器抽去管道及泵頭內(nèi)氣泡，關(guān)閉排液閥（向外至扳不動為止），在儀器方法下選擇設(shè)置的方法，單擊“監(jiān)視”，進(jìn)行色譜柱平衡。觀察壓力變化情況，檢查是否漏液，監(jiān)視基線平穩(wěn)半小時以上，準(zhǔn)備進(jìn)樣。編輯樣品名稱，核對樣品方法、方法組，點(diǎn)擊進(jìn)樣圖標(biāo)，待下方顯示“等待進(jìn)樣”后，迅速進(jìn)樣即可。樣品分析4.5.1按照各樣品檢驗(yàn)SOP要求進(jìn)行樣品處理，再進(jìn)行色譜柱平衡、進(jìn)樣、數(shù)據(jù)采集及譜圖處理等操作。4.5.2進(jìn)樣時勻速穩(wěn)定，確保當(dāng)天的進(jìn)樣手法盡可能一致，進(jìn)樣針的使用應(yīng)注意，每次使用前應(yīng)洗針，使用結(jié)束時，用甲醇或先用異丙醇再用甲醇洗針，盡可能的洗掉殘留的物質(zhì)。4.

10、5.3結(jié)果及譜圖信息處理4.5.3.1結(jié)果保存QB-C-QD-SOP-013版本號01修訂號00進(jìn)入“瀏覽項(xiàng)目”，選擇所需樣品的項(xiàng)目，單擊“通道”，單擊“刷新”，選擇樣品名稱，雙擊或者右擊選擇“處理”自動積分或者手動積分，文件f保存f全部，保存當(dāng)前的處理方法f選擇相應(yīng)的名稱（例如：HM）,后關(guān)閉窗口。結(jié)果查看單擊“結(jié)果”，單擊“刷新”，選擇樣品名稱查看結(jié)果。譜圖處理單擊“結(jié)果”，選擇樣品名稱右擊一預(yù)覽/出版，打開報告方法一使用以下的報告方法一簡單報告或者進(jìn)樣綜合報告或者其他f確定f關(guān)閉f調(diào)整譜圖整體布局，平移至合適位置f右擊f字段屬性（或者單擊樣品類型）f編輯字段（標(biāo)記位置：數(shù)據(jù)之上）、字體、

11、排序規(guī)則、名稱等信息f確定f另存為f相應(yīng)文件夾f相應(yīng)譜圖名稱（例如：花青素對照1-1）。清洗及關(guān)機(jī)樣品分析結(jié)束后，關(guān)閉Waters2489紫外檢測器電源，按規(guī)定用10%甲醇或甲醇對色譜柱進(jìn)行清洗各最少0.5h。清洗結(jié)束后，先關(guān)閉工作站再關(guān)閉儀器電源和電腦電源，做好儀器使用記錄。樣品分析結(jié)束后，斷開色譜柱與ELSD2000ES蒸發(fā)光散射檢測器流路，通氣10min左右后，將檢測器溫度降至50C以下，再關(guān)閉檢測器電源和全自動空氣源電源。同時規(guī)定用10%甲醇或甲醇或75%異丙醇或異丙醇對色譜柱進(jìn)行清洗各最少0.5h。清洗結(jié)束后，先關(guān)閉工作站再關(guān)閉儀器電源和電腦電源，做好儀器使用記錄，有必要時卸下色譜柱

12、，接二通，。注意事項(xiàng)大流速排氣泡時要設(shè)定適當(dāng)?shù)淖兓俾?，升流速時一定要打開排氣閥；降流速時，要等總流速降至1ml/min后再關(guān)排氣閥，以防儀器報錯。色譜柱應(yīng)保存在色譜甲醇或者色譜異丙醇中，使用時輕拿輕放，連接正確，長時間未用的色譜柱，使用前用色譜甲醇或者色譜異丙醇沖洗。使用新色譜柱前，應(yīng)根據(jù)說明書要求使用性能測試的流動相，處理之后才能使用，安裝方向一定不能接反。更換溶劑瓶時，應(yīng)注意排氣。進(jìn)樣時要將外壁擦拭干凈，以防殘留的物質(zhì)積攢，污染進(jìn)樣口。流動相應(yīng)新鮮配制，尤其是有緩沖鹽的流動相，盡可能精準(zhǔn)，過濾、超聲脫氣后才能使用。樣品處理后，進(jìn)樣之前要用微孔過濾膜過濾以防雜質(zhì)污染色譜柱。梯度洗脫時，一個

13、程序未走完時，不能手動中斷后進(jìn)樣，否則會影響出峰情況。4.8異常情況及補(bǔ)救措施QB-C-QD-SOP-013版本號01修訂號00儀器出錯，檢查原因是因?yàn)榱魉龠^高排氣閥未開，還是柱壓達(dá)上限，信號連接器未開，修整后關(guān)機(jī)重啟，盡量減少關(guān)機(jī)重啟，傷害系統(tǒng)。溶劑走空，大流速排泵腔內(nèi)氣泡，后換用小流速沖洗2小時左右。壓力問題壓力不穩(wěn)的原因和解決方法（1）泵內(nèi)有空氣：清除泵內(nèi)空氣、溶劑脫氣和排氣（2）比例閥失效：更換比例閥（3）密封墊損壞：更換密封墊（4）系統(tǒng)漏液：查找漏液處，維護(hù)密封（5）梯度變化壓力為0的原因（1）泵頭內(nèi)沒有液體，充滿氣泡（2）單向閥完全堵死（3）柱塞桿折斷（4）壓力傳感器損壞，流動相流

14、動正常，但無壓力基線問題4.8.4.1規(guī)則的基線噪音（1）流動相、泵、檢測器中有空氣：流動相脫氣、沖洗系統(tǒng)（2）漏液：檢查管路接口是否松動、是否漏液、是否有鹽析出，扳緊接口（只用力），解決漏液問題，嚴(yán)重時更換泵密封（3）流動相混合不完全：手搖使混合均勻或使用低粘度溶劑（4）溫度影響，柱溫過高，檢測器未加熱：減少溫度差異，適當(dāng)降低柱溫，加上熱交換器（5）在同一條線上有其他電子設(shè)備（偶然噪音）：斷開檢測器、記錄儀等，檢查干擾是否來自外部，加以更正；采用精密穩(wěn)壓電源不規(guī)則的基線噪音（1）系統(tǒng)、檢測器中有空氣：清洗檢測器后安裝壓力調(diào)節(jié)器（2）漏液：檢查管路接口是否松動、是否漏液、是否有鹽析出，扳緊接口，解決漏液問題，嚴(yán)重時更換泵密封；檢查流通池是否漏液（3）流動相污染、變質(zhì)、由低質(zhì)溶劑配制：檢查流動相的組成，重新配制（4）流動相各溶劑不相溶：選擇互溶的流動相版本號01修訂號00第 頁共9頁QB-C-QD-SOP-013（5）檢測器燈能量不足：更換燈（6）色譜柱填料流失或堵塞：更換色譜柱維護(hù)或者更換混（7）流動相混合不均勻或混合器工作不正常:不走梯度時盡量不使用混合器合器（8）色譜柱污染：更換色譜柱（9）系統(tǒng)未平衡好：延長平衡時間，使用緩沖鹽更應(yīng)該注意平衡5.相關(guān)文件：5.1Alltech2000ES蒸發(fā)光散