內(nèi)毒素及葡聚糖定量檢測的臨床評價任

內(nèi)毒素及葡聚糖定量檢測的臨床評價任第一頁，共八十一頁，2022年，8月28日內(nèi)毒素的定義

英文稱作Endotoxin

，是G-菌細胞壁上的特有結構，內(nèi)毒素為外源性致熱原，它可激活中性粒細胞等，使之釋放出一種內(nèi)源性熱原質(zhì)，作用于體溫調(diào)節(jié)中樞引起發(fā)熱。內(nèi)毒素的主要化學成分為脂多糖（LPS）中的類脂A。

第二頁，共八十一頁，2022年，8月28日(1-3)--D-葡聚糖定義

葡聚糖為真菌細胞壁結構成分之一，占其干重的80%-90%。其中1-3--D-糖苷鍵連接的葡萄糖殘基骨架作為主鏈，分支狀(1-3)--D-葡聚糖殘基作為側(cè)鏈。對于(1-3)--D-葡聚糖在深部真菌感染中的意義，與內(nèi)毒素在G-陰性桿菌感染中的意義類似。第三頁，共八十一頁，2022年，8月28日

內(nèi)毒素血癥第四頁，共八十一頁，2022年，8月28日

一、細菌內(nèi)毒素生物活性1、發(fā)熱反應：內(nèi)毒素直接作用于下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞，或作用于白細胞使之釋放內(nèi)原性致熱原。2、促使血管活性物質(zhì)如緩激肽、組胺、5-羥色胺、血管緊張素等釋放，使血壓下降，導致微循環(huán)障礙。第五頁，共八十一頁，2022年，8月28日3、引起白細胞和血小板減少，激活凝血、纖溶系統(tǒng)，產(chǎn)生出血傾向；彌漫性血管內(nèi)凝血。4、經(jīng)C3旁路或經(jīng)典途徑激活補體。5、直接或間接損害肝臟，引起糖代謝紊亂及酶學、蛋白代謝的改變。6、激活白三烯、前列腺素、巨噬細胞、單核細胞及內(nèi)皮細胞活性。第六頁，共八十一頁，2022年，8月28日二、內(nèi)毒素血癥產(chǎn)生原因

內(nèi)毒素血癥是由于血中細菌或病灶內(nèi)細菌釋放出大量內(nèi)毒素至血液，或輸入大量內(nèi)毒素污染的液體而引起。內(nèi)毒素血癥分為內(nèi)源性和外源性兩類。

第七頁，共八十一頁，2022年，8月28日1、內(nèi)源性內(nèi)毒素血癥發(fā)生的原因。

在嚴重創(chuàng)傷、感染等應激狀態(tài)下可出現(xiàn)，此時機體全身網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)功能障礙，免疫機能下降，腸道吸收的內(nèi)毒素過多而超過機體清除能力；腸道粘膜缺血、壞死、屏障破壞，大量內(nèi)毒素釋放入血；腸道吸收的內(nèi)毒素因肝功能障礙由側(cè)枝循環(huán)直接入體循環(huán)；某些組織、器官的感染引起外源性內(nèi)毒素入血。

第八頁，共八十一頁，2022年，8月28日（1）腸道內(nèi)毒素的吸收： 正常機體內(nèi)菌落失調(diào)后，腸道內(nèi)內(nèi)毒素可被大量吸收入血。（2）敗血癥時血中細菌的釋放： 革蘭陰性桿菌敗血癥時，細菌在機體血液內(nèi)大量繁殖，死亡解體的細菌可釋放出大量內(nèi)毒素。第九頁，共八十一頁，2022年，8月28日（3）有效的抗菌治療后，由于血中細菌大量死亡崩解，可加重內(nèi)毒素血癥。因此，在臨床上可能出現(xiàn)感染控制而以器官損害為特點的病情繼續(xù)惡化的情況，此時需要抗內(nèi)毒素治療。第十頁，共八十一頁，2022年，8月28日2、外源性內(nèi)毒素：由于治療的需要輸入了含有細菌內(nèi)毒素的液體、藥物或血液等。因此，內(nèi)毒素檢測是制藥工業(yè)中質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)。第十一頁，共八十一頁，2022年，8月28日三、內(nèi)毒素血癥的臨床癥狀

內(nèi)毒素血癥臨床癥狀主要決定于宿主對內(nèi)毒素的抵抗力。癥狀和體征有：發(fā)熱，白細胞數(shù)變化，出血傾向，心力衰竭、腎功能減退、肝臟損傷、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，以及休克等。內(nèi)毒素可引起組胺、5-羥色胺、前列腺素、激肽等的釋放，導致微循環(huán)擴張，靜脈回流血量減少，血壓下降，組織灌流不足，缺氧及酸中毒等。

第十二頁，共八十一頁，2022年，8月28日內(nèi)毒素血癥最嚴重的后果是可以出現(xiàn)在多系統(tǒng)的多種疾病中，通常導致致死性感染性休克、全身炎癥綜合征、多器官功能衰竭、彌漫性血管內(nèi)凝血等，病死率極高。

第十三頁，共八十一頁，2022年，8月28日圖1LPS分子結合附在巨噬細胞表面的CD14結合位點上，通過釋放細胞因子激發(fā)全身性炎癥反應。第十四頁，共八十一頁，2022年，8月28日四、各類疾病內(nèi)毒素血癥的發(fā)生率

肺炎100%、尿路感染70-80%、腹腔感染72-84%、燒傷85%、急性胰腺炎90%、敗血癥70%、急性肝炎37-64%、暴發(fā)性肝炎58-100%、丙肝61.54%、膽石癥伴急性梗阻性化膿性感染85%、多器官功能衰竭100%。

第十五頁，共八十一頁，2022年，8月28日五、內(nèi)毒素檢測的臨床意義革蘭陰性菌敗血癥是住院病人死亡的重要原因。革蘭陰性菌釋放的內(nèi)毒素是造成革蘭陰性菌敗血癥的真正原因。檢測血漿和體液中的內(nèi)毒素含量對診斷革蘭陰性細菌感染、支原體感染有重要的臨床參考意義，特別當缺乏直接細菌學證據(jù)時，為臨床醫(yī)生制定抗菌素治療方案提供參考。第十六頁，共八十一頁，2022年，8月28日1、細菌性感染的輔助診斷、治療和預后判斷（1）全身性細菌感染：全身性細菌感染主要見于敗血癥。革蘭陰性細菌性敗血癥尤常并發(fā)內(nèi)毒素血癥。這種敗血癥較常見的致病菌為沙門氏菌屬、腦膜炎雙球菌屬及擬桿菌屬。這些致病菌多通過泌尿道、腸道、膽道及呼吸道而引起感染，也可通過外傷、外科手術、導管檢查或留置，以及器械操作等途徑而進入血液，并大量繁殖引起敗血癥，從而造成內(nèi)毒素血癥。

第十七頁，共八十一頁，2022年，8月28日另外一些低致病力、如大腸桿菌、克雷伯氏菌、產(chǎn)氣桿菌、沙雷氏菌、變形桿菌和綠膿桿菌它們可導致泌尿系統(tǒng)感染、呼吸系統(tǒng)感染和傷口感染引起敗血癥。上述各類感染的患者多伴有免疫功能降低，尤其是體液免疫功能低下。因此免疫防御和治療非常重要。對患者進行血漿內(nèi)毒素測定，可以指導治療，及時控制感染。第十八頁，共八十一頁，2022年，8月28日細菌性腦膜炎發(fā)病急，因此尋求一個快速、簡便、可靠的檢測病原方法，是臨床搶救病人，提供特異抗菌藥物治療的重要依據(jù)。迄今多家報道一致認為鱟試驗檢測腦脊液中內(nèi)毒素，是診斷革蘭陰性細菌腦膜炎的一個快速、可靠、敏感的方法。

第十九頁，共八十一頁，2022年，8月28日（2）局部性細菌感染：局部性細菌感染造成內(nèi)毒素血癥的有肺炎、膽囊炎、燒傷合并感染、穿孔性腹膜炎、化膿性膽管炎、肝膿腫、腎盂炎、卵巢囊腫扭轉(zhuǎn)伴尿路感染、腸結核及肺結核伴綠濃桿菌感染、非特異性出血性小腸炎及腎周圍炎等。其致病菌多為革蘭陰性桿菌。對尿液進行內(nèi)毒素測定可成功地檢出革蘭陰性細菌菌尿癥，也可檢出厭氧性性陰性桿菌菌尿癥且方法簡便、快速，結果誤差小。

第二十頁，共八十一頁，2022年，8月28日我們統(tǒng)計了臨床資料相對比較齊全的病例87例，其中病毒性感染17例（其中上呼吸道感染13例，傳染性單核細胞增多癥4例）、肺炎45例（其中G+菌感染20例、G-菌感染9例，細菌類型不明確的12例，所有肺炎患者均有胸部X影象學證據(jù)）、上尿路感染17例（有細菌學證據(jù)11例，缺乏細菌學證據(jù)6例）、其他感染8例。第二十一頁，共八十一頁，2022年，8月28日表187例不同感染病人血清內(nèi)毒素檢測結果-----------------------------------------------------------------------

疾病例數(shù)內(nèi)毒素水平（pg/ml，Xsd）-----------------------------------------------------------------------

正常人103.483.05

病毒性感染174.263.79G+球菌感染3027.6515.96*

肺炎2440.1327.45*

化扁512.368.26

皮膚14.07-----------------------------------------------------------------------第二十二頁，共八十一頁，2022年，8月28日表187例不同感染病人血清內(nèi)毒素檢測結果（續(xù)）---------------------------------------------------------------------------

疾病例數(shù)內(nèi)毒素水平（pg/ml，Xsd）---------------------------------------------------------------------------G-桿菌感染22592.14307.28**

肺炎9724.67475.36**

尿路感染11269.89128.72**

膽囊炎2537細菌類型不明確的感染18308.67112.11**

肺炎12231.96107.58**

尿路感染6399.3378.26**--------------------------------------------------------------------------說明：**表示p0.001，*表示p0.05第二十三頁，共八十一頁，2022年，8月28日在細菌性肺炎患者的細菌學檢查中，主要根據(jù)痰涂片革蘭染色判斷細菌種類，24例G+菌中有15例培養(yǎng)出細菌，其中肺炎鏈球菌5例、溶血性鏈球菌3例、表皮葡萄球菌3例、金黃色葡萄球菌3例、模擬葡萄球菌1例；9例G-菌中有6例培養(yǎng)出細菌，其中大腸桿菌3例、克雷白肺炎桿菌2例、綠膿桿菌1例。其它未培養(yǎng)出細菌。第二十四頁，共八十一頁，2022年，8月28日國內(nèi)另一組（南京中醫(yī)藥大學、瀘洲醫(yī)學員附屬醫(yī)院等）細菌性肺炎103例的血漿內(nèi)毒素檢測報告，其結果100%存在內(nèi)毒素血癥。其中除了革蘭陰性桿菌、支原體、衣原體這些可直接產(chǎn)生內(nèi)毒素的致病菌外，其他革蘭陽性菌引起的肺炎，內(nèi)毒素均來自腸道。第二十五頁，共八十一頁，2022年，8月28日第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院檢驗科報告，革蘭陰性菌肺炎22例血漿內(nèi)毒素水平為160.41222.78pg/ml；革蘭陰性菌菌血癥10例檢測水平為2671.73523.91pg/ml；而正常對照30例為3.301.73pg/ml。經(jīng)SPSS統(tǒng)計軟件T檢驗分析，有顯著差異（T=2.608，p=0.025）。第二十六頁，共八十一頁，2022年，8月28日2、原因不明的發(fā)熱內(nèi)毒素是一個強力的熱源物質(zhì)，每毫升血液中達pg級的內(nèi)毒素就能使人發(fā)燒。免疫低下兒童發(fā)燒在診斷和治療上一直存在問題。AdaHass等人對一些檢查不出菌血癥和臨床感染的發(fā)燒的免疫低下兒童，作了內(nèi)毒素檢查，其結果是所有發(fā)燒兒童在發(fā)燒期間內(nèi)毒素水平均高于正常兒童水平，發(fā)燒恢復后內(nèi)毒素含量都降致正常水平。第二十七頁，共八十一頁，2022年，8月28日這與Harris等人對成年人進行的類似研究的結果一致。因此，內(nèi)毒素血癥可能是免疫低下患者原因不明發(fā)燒的因素之一。因而血漿內(nèi)毒素的檢測可以發(fā)現(xiàn)隱蔽的易被忽略的感染。第二十八頁，共八十一頁，2022年，8月28日SanderJ.H.vanDeventer等人對473個連續(xù)發(fā)燒的病人進行血漿內(nèi)毒素測定。其實驗結果表明，內(nèi)毒素血癥是臨床上預測革蘭陰性菌敗血癥到來的有用指標（正預測值為48%），而沒有內(nèi)毒素血癥就可以完全排除發(fā)生敗血癥的可能（負預測值為99%）。第二十九頁，共八十一頁，2022年，8月28日過去的臨床工作中，找不到一個可靠的指標準確地預測病人將要發(fā)生敗血癥。Sander等人的研究表明，鱟試驗法檢測結果預測敗血癥的敏感性為79％，特異性為96％。從全體發(fā)燒病人有4％會發(fā)展為敗血癥來計算，鱟試驗的陽性預測值為48％，陰性預測值為99％。凡是內(nèi)毒素試驗結果為陰性的病人基本上排除3日內(nèi)發(fā)生敗血癥的可能，而內(nèi)毒素陽性的發(fā)燒病人則有發(fā)生敗血癥的高度危險性。

第三十頁，共八十一頁，2022年，8月28日3、肝臟疾病

肝臟是阻止腸道內(nèi)毒素進入大循環(huán)的有效屏障，一旦肝臟功能障礙、肝臟受損后，對內(nèi)毒素解毒能力大為減弱，內(nèi)毒素進入血循環(huán)并經(jīng)直接及間接作用引起肝外組織的損傷。第三十一頁，共八十一頁，2022年，8月28日肝炎病人也常并發(fā)內(nèi)毒素血癥。甲肝的內(nèi)毒素血癥發(fā)生率為58%，平均內(nèi)毒素濃度為54.71pg/ml。在肝發(fā)病后第1、3、5周檢測血漿內(nèi)毒素，內(nèi)毒素血癥發(fā)生率分別為79%、37.8%、17.1%，平均值為65.5pg/ml、37.7pg/ml、26.8pg/ml。到第五周時幾乎均恢復正常。其發(fā)病率和內(nèi)毒素水平均隨著病程的延長而下降，兩者與病程均有非常顯著的意義（p<0.01）。第三十二頁，共八十一頁，2022年，8月28日乙肝的內(nèi)毒素血癥發(fā)生率與病理類型有關。有文獻報導急性病毒性乙肝內(nèi)毒素血癥發(fā)病率占51.9%，隨著病情的緩解內(nèi)毒素水平逐漸下降。慢性活動性乙肝時出現(xiàn)內(nèi)毒素血癥者占53.7%，并且有80%患者持續(xù)存在內(nèi)毒素血癥。丙型肝炎中的慢性活動性肝炎內(nèi)毒素血癥發(fā)病率最高，但血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶水平與內(nèi)毒素血癥發(fā)生率及含量無明顯關系。第三十三頁，共八十一頁，2022年，8月28日內(nèi)毒素血癥與肝炎病情程度有密切關系。重型病毒重性肝炎內(nèi)毒素血癥的發(fā)生率可高達92.8%，這些病人較易并發(fā)彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC）及腎功能衰竭，死亡率高。

第三十四頁，共八十一頁，2022年，8月28日中日友好醫(yī)院報告，在27名肝病患者中肝硬化的陽性率為100%，肝硬化患者內(nèi)毒素水平明顯高于對照組。肝硬化晚期時，血漿內(nèi)毒素水平很高。乙肝的陽性率為88.89%，與對照組比較明顯升高，隨著病情的緩解內(nèi)毒素水平逐漸降低。第三十五頁，共八十一頁，2022年，8月28日4、膽道疾病

內(nèi)毒素是腸道內(nèi)大量存在的革蘭陰性菌細胞壁內(nèi)的一種脂多糖，正常情況下來自膽汁的膽酸、膽鹽及分泌型IgA等能抑制腸內(nèi)菌群的過度繁殖和內(nèi)毒素的產(chǎn)生。維持粘膜屏障的完整，阻止內(nèi)毒素的吸收。梗塞性黃疸時，單核巨噬細胞系統(tǒng)尤其是肝臟Kupffer細胞功能受抑，腸道中膽汁缺失使內(nèi)毒素池增大，致內(nèi)毒素血癥發(fā)生率增高。第三十六頁，共八十一頁，2022年，8月28日內(nèi)毒素濃度與梗塞性黃疸的程度（血清膽紅素）以及持續(xù)時間有一定關系，與術后并發(fā)癥發(fā)生率也有密切關系。因此術前檢測內(nèi)毒素對預測術后病情有一定價值。已有報導術后內(nèi)毒素血癥發(fā)生率為50-75%。因為內(nèi)毒素血癥是梗塞性黃疸病人術后出現(xiàn)并發(fā)癥和死亡的一個重要原因，所以對梗黃病人進行圍手術期血漿內(nèi)毒素檢測有助于引導治療，降低阻黃病人圍手術期并發(fā)癥和死亡的發(fā)生率。據(jù)個別報導，膽石癥伴膽囊炎的內(nèi)毒素血癥的發(fā)生率為78%，化膿性膽管炎為20%。第三十七頁，共八十一頁，2022年，8月28日5、急性胰腺炎

有文獻報導，急性胰腺炎的輕重程度與血漿內(nèi)毒素水平呈正相關。急性胰腺炎，腸道推動力下降，腸道細菌過度繁殖，腸粘膜屏障功能損害，血漿內(nèi)毒素水平增高。內(nèi)毒素還可以誘導巨噬細胞大量分泌腫瘤壞死因子，腫瘤壞死因子是內(nèi)毒素介導的休克和組織損害的關鍵介質(zhì)。第三十八頁，共八十一頁，2022年，8月28日急性胰腺炎并發(fā)內(nèi)毒素血癥較為常見，約占66%。值得注意的是死亡病例生前均并發(fā)內(nèi)毒素血癥且持續(xù)存在直至死亡。因此急性胰腺炎早期測定血漿內(nèi)毒素有助于判斷疾病的嚴重程度，指導治療。第三十九頁，共八十一頁，2022年，8月28日(1-3)--D-葡聚糖與真菌感染第四十頁，共八十一頁，2022年，8月28日一、真菌病真菌種類很多，與細菌相比，對人致病者相對較少，約150種。近年來由于廣譜抗生素、腎上腺皮質(zhì)激素和免疫抑制劑的大量應用，真菌感染有明顯增長。真菌病根據(jù)病變部位不同可分成淺部真菌病和深部真菌病兩大類。淺部真菌病主要侵犯含有角質(zhì)的組織，如皮膚、毛發(fā)和指甲等處，引起各種癬病。深部真菌病侵犯皮膚深層和內(nèi)臟，如肺、腦、消化道等器官，危害性較大。

第四十一頁，共八十一頁，2022年，8月28日據(jù)統(tǒng)計，近30年深部真菌感染的發(fā)病率增加了3-5倍，真菌感染為艾滋病的重要死亡原因之一。引起深部真菌感染的病原菌主要有白色念珠菌、曲菌和隱球菌等。由于診斷困難、進展迅速、頑固難治、病死率高。如念珠菌血癥,若不治療死亡率可以達到45%～76%，侵襲性曲霉病死亡率高達55%～70%。

第四十二頁，共八十一頁，2022年，8月28日二、誘發(fā)深部真菌病的因素有以下幾種：1、慢性消耗性疾病，如惡性腫瘤、糖尿病和尿毒癥等，可使機體免疫功能和抵抗力降低。2、長期使用廣譜抗生素，敏感的細菌被抑制，消除了正常菌群中與真菌相拮抗的細菌，使真菌得以大量繁殖。第四十三頁，共八十一頁，2022年，8月28日3、腎上腺皮質(zhì)激素破壞淋巴細胞，使抗體形成減少。

4、大劑量X線照射、抗腫瘤藥物和免疫抑制劑都能抑制骨髓，使中性粒細胞和巨噬細胞減少，機體的免疫功能和抵抗力降低。5、侵入性檢查和治療（如長時間靜脈插管，留置導尿管和大手術）可引起局部損傷，成為真菌侵入的門戶，在機體抵抗力低落時在體內(nèi)繁殖致病。

第四十四頁，共八十一頁，2022年，8月28日三、真菌病診斷方法：臨床表現(xiàn)，真菌形態(tài)學、免疫學和病理學。最直接的方法是能證明真菌存在于組織中，或在滲出物中可分離培養(yǎng)。病理組織學的改變只有少數(shù)病變具有特征性。第四十五頁，共八十一頁，2022年，8月28日傳統(tǒng)的檢測方法主要為血培養(yǎng)和組織活檢，但血培養(yǎng)歷時太長，且陽性率較低，而深部真菌感染的臨床征象錯綜復雜，又使得組織活檢缺乏典型改變，影響正確診斷，這些都使得這些方法所起的作用極為有限。第四十六頁，共八十一頁，2022年，8月28日四、非傳統(tǒng)真菌檢查近年來，用于檢則真菌的抗原、抗體及代謝產(chǎn)物的血清學檢查和真菌核酸檢測（PCR技術）已用于深部真菌感染的實驗室檢測，并已成為這一領域研究的熱點。第四十七頁，共八十一頁，2022年，8月28日1-3-beta-D-葡聚糖檢測葡聚糖廣泛存在于真菌細胞壁中，占其干燥重量的80%-90%。其中1-3-beta-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，尤其在酵母樣真菌中其含量可更高，其形式以1-3-beta-糖苷鍵連接的葡萄糖殘基骨架作為主鏈，分支狀1-6-beta-D-葡聚糖殘基作為側(cè)鏈。第四十八頁，共八十一頁，2022年，8月28日關于1-3-beta-葡聚糖在深部真菌感染中的作用，目前認為可能與內(nèi)毒素在革蘭陰性桿菌感染中的作用類似

，但目前暫未明了。

第四十九頁，共八十一頁，2022年，8月28日由于1-3-beta-D-葡聚糖僅廣泛存在于真菌的細胞壁中，當真菌進入人體血液或深部組織后，經(jīng)吞噬細胞的吞噬、消化等處理后，1-3-beta-D-葡聚糖可從胞壁中釋放出來，從而使血液及其它體液（如尿、腦脊液、腹水、胸水等）中1-3-beta-D-葡聚糖含量增高。當真菌在體內(nèi)含量減少時，機體免疫可迅速清除1-3-beta-D葡聚糖。而在淺部真菌感染中，1-3-beta-D-葡聚糖未被釋放出來，故其在體液中的量不增高。

第五十頁，共八十一頁，2022年，8月28日20世紀90年代初發(fā)現(xiàn)，1-3-beta-D-葡聚糖可特異性激活自鱟變形細胞溶解產(chǎn)物提取的G因子，此過程稱為G試驗。臨床上，由于深部真菌感染的嚴重程度常常與血漿多糖的升高水平一致，故可將G試驗應用于深部真菌感染的診斷（包括念珠菌感染和曲菌感染等）。

第五十一頁，共八十一頁，2022年，8月28日為了解G試驗在深部真菌感染和真菌性發(fā)熱中的診斷價值，Oba-yashi等檢測了202例病員標本。1-3-beta-D-葡聚糖的血漿濃度20pg/ml為界值，41例確診病員（以活檢和培養(yǎng)陽性為標準）中有37例為陽性，陽性率為90%；59例其他原因所致發(fā)全部陰性，陰性率為100%。第五十二頁，共八十一頁，2022年，8月28日Kawayana等檢測了92例病員標本以比較深部真菌感染中血清學方法和培養(yǎng)的臨床價值，其中17例為深部真菌病確診病員。在取自17例確診病員的52份血標本中，45份血標本G試驗陽性，與此同時，僅有10份血標本真菌培養(yǎng)陽性，結果顯示，G試驗在深部真菌感染的早期診斷中具有較高敏感性和特異性。

第五十三頁，共八十一頁，2022年，8月28日我們收集了8例病人，其中真菌性肺炎3例、真菌性尿路感染2例、真菌性肺膿腫2例、真菌性腹瀉1例。具體檢測結果見表2。第五十四頁，共八十一頁，2022年，8月28日表28例1-3--D葡聚糖真菌葡聚糖檢查結果（pg/ml）------------------------------------------------------------------------病人

臨床診斷培養(yǎng)結果

檢測結果------------------------------------------------------------------------65/M肺炎

白色念珠菌

79.273/M肺炎

熱帶念珠菌

45.222/F肺膿腫

毛霉菌

480.947/M肺膿腫

煙曲霉菌

235.169/M肺炎

熱帶念珠菌

39.572/F尿路感染

光滑念珠菌

50.276/M腹瀉

白色念珠菌

22.468/F尿路感染

近平滑念珠菌

30.6---------------------------------------------------------------------------第五十五頁，共八十一頁，2022年，8月28日第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院檢驗科報告，深部真菌感染35例，均經(jīng)顯微鏡檢查和培養(yǎng)證實，其血漿1-3-beta-D-葡聚糖檢測最高168.9pg/ml，最低14.93pg/ml，平均值為54.0636.13

pg/ml；而正常對照組30例，檢測結果最高7.29pg/ml，最低0.45pg/ml，平均值為2.832.4

pg/ml57，差異非常顯著（t=7.741，p0.001）第五十六頁，共八十一頁，2022年，8月28日上述35中病例均為念珠菌感染，其中白色念珠菌23株，熱帶念珠菌8株，季也蒙念珠菌1株，克柔念珠菌1株，光滑球擬假絲酵母菌2株。他們認為，如果以10pg/ml為cutoff值，則診斷的陽性率為100%，如果以20pg/ml為cutoff值，則診斷的陽性率為91.4%。第五十七頁，共八十一頁，2022年，8月28日1-3-beta-D-葡聚糖可用于早期診斷深部真菌感染，其缺點是不能確定具體真菌類型，而且此法不能檢測出隱球菌感染，可能是因為隱球菌具有厚壁胞膜，且在免疫缺體內(nèi)生長緩慢，導致試驗呈假陰性。

第五十八頁，共八十一頁，2022年，8月28日2、某些感染癥狀的鑒別診斷（G+菌／G-菌／真菌／病毒等）3、大多數(shù)免疫功能低下患者及不名疾病的早期診斷4、對給藥方案提供實驗理論數(shù)據(jù)5、對給藥后的治療效果以及預后判斷具有很大意義。第五十九頁，共八十一頁，2022年，8月28日臨床細菌內(nèi)毒素及

(1-3)--D-Glucan檢測的方法第六十頁，共八十一頁，2022年，8月28日 Endotoxin (1-3)-D-Glucan

ActivatedActivatedFactorC FactorC GFactorGFactor

FactorBActivatedFactorB

ProclottingEnzyme ClottingEnzyme

Coagulogen Coagulin

定量濁度儀 TurbidimetrictechniqueGEL

圖6比濁法反應機理圖表第六十一頁，共八十一頁，2022年，8月28日動態(tài)比濁法：采用光電轉(zhuǎn)換原理，通過測定生物試劑與微生物細胞的特定結構反應產(chǎn)生的濁度/色度變化值，建立反應時間（T）和微生物含量（C）之間關系的標準曲線，從而定量測定樣品中微生物的含量。

第六十二頁，共八十一頁，2022年，8月28日標準內(nèi)毒素為CAPECOD研究所出品的大腸桿菌內(nèi)毒素標準用蒸餾水制成100ng/ml的母液，4C

儲存?zhèn)溆?。使用時，用蒸餾水作系列稀釋測定，制作標準曲線。第六十三頁，共八十一頁，2022年，8月28日血漿樣品經(jīng)特殊處理后去除抑制物質(zhì)，與內(nèi)毒素試劑混合后置37C反應30min，在反應過程中內(nèi)毒素試劑中的酶被從多肽上由內(nèi)毒素切割下類的硝基苯受激活而發(fā)生連鎖反應，硝基苯胺被水解成黃色的腈。為了避免血漿膽紅素引起的誤差，反應中添加亞硝酸鈉和偶氯試劑，使反應完成并呈現(xiàn)紅色，于450nm處測定吸光度，然后與標準曲線對比，計算出內(nèi)毒素含量。第六十四頁，共八十一頁，2022年，8月28日

試劑與儀器第六十五頁，共八十一頁，2022年，8月28日國外：血液（包括血漿、腦脊液、血清、腹水液、尿液、唾液、乳汁等）中內(nèi)毒素以及(1-3)--D-Glucan微量定量檢測已經(jīng)成為現(xiàn)實，目前在美國、日本等國均已出現(xiàn)專用細菌內(nèi)毒素及(1-3)--D-Glucan檢測儀器及配套的檢測試劑盒，而且獲得FDA及厚生省批準文號，作為一種日常檢測項目。第六十六頁，共八十一頁，2022年，8月28日日本和光純藥工業(yè)株式會社生產(chǎn)的β–葡聚糖試劑盒有助于對深部真菌感染的診斷、治療方法選擇及療效的判定。

試劑盒特征：

1、特異性測定（1-3）-β-D-葡聚糖

2、單種試劑無需配制

3、通過稀釋加熱法對標本進行預處理

4、用比濁時間分析法能進行定量測定

5、對深部真菌感染的早期診斷有用第六十七頁，共八十一頁，2022年，8月28日國內(nèi)：MB-80檢測系統(tǒng)，為國內(nèi)獨家研制和生產(chǎn)的檢測臨床內(nèi)毒素及(1-3)--D-Glucan的專用儀器，同時具有配套的檢測試劑盒

EKT-5MsetandGKT-%Mset

獲得SDA批準文號,第六十八頁，共八十一頁，2022年，8月28日參考值正常人血漿中內(nèi)毒素水平一般在7pg/ml以下。正常人血漿1-3--D-葡聚糖含量水平一般在10pg/ml以下。第六十九頁，共八十一頁，2022年，8月28日真菌1-3--D-葡聚糖檢測臨床判斷值：

10-20pg/ml：病變觀察期20pg/ml：深部真菌感染第七十頁，共八十一頁，2022年，8月28日標本采集和處理1、標本采集抗凝劑可用肝素。專用的無菌及無致熱源的采血管。

第七十一頁，共八十一頁，2022年，8月28日2、標本處理：血液中內(nèi)毒素除了游離狀態(tài)存在外，還大量附著在血小板上。因此試驗中要分離富含血小板血漿?？刹捎靡韵聝煞N分離方法：（1）4C、1000g、10min（2）常溫、3000g、1min

分離過程中絕對避免細菌污染，如暫不檢測可與-30C冰凍保存1個月。第七十二頁，共八十一頁，2022年，8月28日3、檢測時間：60min4、主要技術指標（1）檢測范圍內(nèi)毒素：5-1000pg/ml1-3--D-Glucan：10-9000pg/ml（2）平均回收率：80%-125%（3）重現(xiàn)性：CV10%第七十三頁，共八十一頁，2022年，8月28日對MB-80微生物快速動態(tài)檢測儀的性能評價我們對金山川科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)的MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)進行了初步的性能評價，評價包括重復性、準確度、線性范圍和比對試驗。結果如下：第七十四頁，共八十一頁，2022年，8月28日1、取一份細菌性肺炎病人標本，重復測定10次，內(nèi)毒素的CV值為5.3%。2、取一份真菌性肺炎病人標本，重復測定10次，真菌葡聚糖的CV值為6.7%。3、用公司提供的內(nèi)毒素標準品，測定5次，取均值，然后計算相對誤差為23.4%。4、用公司提供的真菌葡聚糖標準品，測定5次，取均值然后計算相對誤差為21.8%。第七十五頁，共八十一頁，2022年，8月28日5、線性（1）我們?nèi)?nèi)毒素的標準品，按照公司提供的檢測范圍，從1000pg/ml開始做5倍稀釋，共稀釋5次，進行檢測，做直線回歸分析，相關系數(shù)（r）為0.985。（2）我們?nèi)≌婢劬厶堑臉藴势?，按照公司提供的檢測范圍，從5000pg/ml開始做10倍稀釋，共稀釋5次，進行檢測，做直線回歸分析，相關系數(shù)（r）為0.901。第七十六頁，共八十一頁，2022年，8月28日6、比對試驗我們使用金川公司生產(chǎn)的內(nèi)毒素和真菌葡糖試劑和日本和光公司生產(chǎn)的兩種試劑，在MB-80微生物動態(tài)檢測儀上做試劑的比對試驗，結果見表2和表3。第七十七頁，共八十一頁，2022年，8月28日表3關于內(nèi)毒素試劑的比對試驗（pg/ml）------------------------------------------------------------------------病人細菌培養(yǎng)結果金川試劑和光試劑------------------------------------------------------------------------38/F肺炎克雷白菌21.418.678/M大腸埃希菌34.63