免疫學(xué)技術(shù)在食品安全檢測(cè)應(yīng)用

免疫學(xué)技術(shù)在食品安全檢測(cè)應(yīng)用第一頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日

本小組所選的論文中一共提到8種免疫學(xué)技術(shù)，但其中只有4種是我們學(xué)過(guò)的，因此本次的PPT匯報(bào)中僅列出了學(xué)過(guò)的4項(xiàng)。2第二頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日免疫熒光技術(shù)

論文中提及的檢測(cè)技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)免疫芯片

免疫傳感器技術(shù)12343第三頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)，是將可溶性抗原（抗體）吸附到某種固相載體表面，并保持抗原（抗體）免疫活性，這樣在與標(biāo)本中的抗體（抗原）反應(yīng)后，只需經(jīng)過(guò)固相洗滌的洗滌，就可以達(dá)到抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分離，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。4第四頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日試驗(yàn)操作圖和試驗(yàn)專用儀器5第五頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日試驗(yàn)所需試劑固相抗原或抗體酶標(biāo)記的抗原或抗體酶作用的底物ELISA方法中必要的三種試劑6第六頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日7第七頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日ELISA法在食品安全監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用

1977年LaWell首先采用了ELISA法來(lái)檢測(cè)了黃曲霉毒素，目前食品中許多致病菌如沙門(mén)氏菌、大腸桿菌O157等微生物都可用此方法來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。另外主要的藥物殘留如抗生素類，碘胺藥類、呋喃類、抗球蟲(chóng)類，激素藥類和驅(qū)蟲(chóng)藥類等的ELISA檢測(cè)方法都已經(jīng)建立。其中T-2毒素、黃曲霉毒素B1、脫氧雪腐鐮刀烯醇等的ELISA檢測(cè)方法已列入我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)方法?；贓LISA方法的檢測(cè)抗生素、農(nóng)藥、食品添加劑等的殘留檢測(cè)試劑盒已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化。8第八頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日單擊此處添加標(biāo)題ELISA常用技術(shù)類型間接法雙抗體夾心法競(jìng)爭(zhēng)法捕獲法9第九頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日間接法

間接法是檢測(cè)抗體最常用的方法，將已知抗原吸附于固相載體，加入待檢標(biāo)本（含相應(yīng)抗體）與之結(jié)合形成固體抗原復(fù)合物。洗滌后，計(jì)入酶標(biāo)二抗與故鄉(xiāng)復(fù)合物中的抗體結(jié)合，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。最后加酶的底物顯色，終止反應(yīng)后，目測(cè)性或用酶標(biāo)儀測(cè)光密度值測(cè)定，顏色的深度與標(biāo)本中受檢抗體的量成正比。10第十頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日雙抗體夾心法

雙抗體夾心法常用于測(cè)定大分子及顆粒多價(jià)抗原。將已知抗體A吸附于固相載體上，加入待檢標(biāo)本（喊相應(yīng)抗原）與之結(jié)合形成固相抗體-A-抗原復(fù)合物。溫育后洗滌，加入酶標(biāo)抗體B形成固相抗體-A-抗原-酶標(biāo)抗體B夾心式復(fù)合物，固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)量成正比。最后加入底物，夾心式復(fù)合物的酶催化底物成為有色產(chǎn)物，顏色的深度與抗原的量成正比。11第十一頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日競(jìng)爭(zhēng)法

將抗原連接到固相載體上，樣品中待測(cè)抗體與之結(jié)合成固相抗原-受檢抗體復(fù)合物，再用酶標(biāo)二抗(針對(duì)受檢抗體的抗體，如羊抗人IgG抗體)與固相免疫復(fù)合物中的抗體結(jié)合，形成固相抗原-受檢抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物，測(cè)定加底物后的顯色程度，確定待測(cè)抗體含量。12第十二頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日捕獲法

捕獲法（亦稱反向間接法）ELISA，主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測(cè)定。先將針對(duì)IgM的第二抗體（如羊抗人IgMμ鏈抗體）連接于固相載體，用以結(jié)合（“捕獲”）樣品中所有IgM（特異或非特異），洗滌出去IgG等無(wú)關(guān)物質(zhì)，然后加入特異抗原與待檢IgM結(jié)合；再加入抗原特異的酶標(biāo)抗體，最后形成固相二抗-IgM-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加酶底物作用顯色后，即可對(duì)樣品中待檢IgM是否存在及其含量進(jìn)行測(cè)定。13第十三頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日免疫熒光技術(shù)14第十四頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日免疫熒光技術(shù)基本原理：

免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在組織或細(xì)胞內(nèi)形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標(biāo)記的熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受外來(lái)激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光（黃綠色或橘紅色），可以看見(jiàn)熒光所在的組織細(xì)胞，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術(shù)測(cè)定含量。15第十五頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日16第十六頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日方法分類直接法間接法補(bǔ)體法17第十七頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日直接法18第十八頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日19第十九頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日20第二十頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日免疫傳感器技術(shù)21第二十一頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日

免疫傳感器技術(shù)是將免疫測(cè)定技術(shù)和傳感器技術(shù)相結(jié)合的一類新型生物傳感器，該技術(shù)具有精確度、靈敏度高、特異性強(qiáng)、樣品前處理簡(jiǎn)單的特點(diǎn)。其選擇性好、操作簡(jiǎn)單、攜帶方便、能重復(fù)利用，并能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)盒在線檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，有望成為食品安全檢測(cè)中最有效的新技術(shù)。22第二十二頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日

免疫傳感器是以抗原抗體作為分子感應(yīng)器的生物傳感器，利用抗原與抗體專一性結(jié)合引起的直接或間接物理化學(xué)變化，通過(guò)一定的信號(hào)轉(zhuǎn)化，大多轉(zhuǎn)化為光信號(hào)，再經(jīng)過(guò)放大處理即可檢測(cè)出反應(yīng)物量的變化，通過(guò)相關(guān)儀器可以進(jìn)行某些物質(zhì)的分析檢測(cè)。免疫傳感器一般有三部分組成：分子感應(yīng)器、轉(zhuǎn)導(dǎo)體、電子濾波放大器免疫傳感器類型：非標(biāo)記免疫傳感器和標(biāo)記免疫傳感器23第二十三頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日非標(biāo)記免疫傳感器抗原抗體直接或間接的方式連接至轉(zhuǎn)導(dǎo)體上，當(dāng)抗原和抗體在相互結(jié)合后，它們的結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，這種結(jié)構(gòu)的改變可以通過(guò)化學(xué)、光學(xué)、壓電和熱量改變的變化表現(xiàn)出來(lái)，從而能被轉(zhuǎn)導(dǎo)體直接或間接檢測(cè)到。24第二十四頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日標(biāo)記免疫傳感器

標(biāo)記免疫傳感器不是直接檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)，而是檢測(cè)免疫復(fù)合物上標(biāo)記物的信號(hào)（如熒光、放射性、酶催化反應(yīng)），因?yàn)槭褂昧司哂谢瘜W(xué)放大作用作用的標(biāo)記物，因此，其靈敏度比非標(biāo)記免疫傳感器有顯著提高。25第二十五頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日免疫傳感器在食品中的應(yīng)用

免疫傳感器在食品中的應(yīng)用，主要體現(xiàn)在對(duì)食品中的有毒有害物質(zhì)的檢測(cè)。食品中的有毒有害物質(zhì)有生物性物質(zhì)，如細(xì)菌、真菌、有毒動(dòng)植物和病毒及其產(chǎn)生的毒素或特征蛋白質(zhì)。目前已成功運(yùn)用于測(cè)定污染食品的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和鼠傷寒沙門(mén)菌，利用光纖傳感器與核酸放大系統(tǒng)相偶聯(lián)，可檢測(cè)食品中的少量病原菌、非生物性有毒有害物質(zhì)（包括農(nóng)藥、激素等小分子半抗原物質(zhì)）。26第二十六頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日免疫芯片27第二十七頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日

免疫芯片分析的實(shí)質(zhì)是在很小的表面積上有序的集成多重抗原（或抗體），利用抗原與抗體可進(jìn)行特異性的結(jié)合