免疫診斷與防治

免疫診斷與防治第一頁，共一百零七頁，2022年，8月28日教材內(nèi)容緒論（2學(xué)時(shí)）第一周第一篇免疫學(xué)第一章抗原（2學(xué)時(shí)）第一-二周第二章免疫細(xì)胞和免疫器官（4學(xué)時(shí)）第二-三周第三章免疫分子（8學(xué)時(shí)）第三-六周第四章免疫應(yīng)答（6學(xué)時(shí)）第六-七周第五章超敏反應(yīng)（2學(xué)時(shí)）第八周第七章免疫診斷與防治（2學(xué)時(shí)）第九周共26學(xué)時(shí)3學(xué)時(shí)/次課9周完成第二頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第七章免疫診斷與預(yù)防

ImmunologicaldiagnosisandPrevention第一節(jié)免疫診斷第二節(jié)免疫防治內(nèi)容提要第三頁，共一百零七頁，2022年，8月28日1、了解常用的免疫細(xì)胞分離、計(jì)數(shù)方法，細(xì)胞因子的常用檢測方法及免疫檢測中常用的分子生物學(xué)技術(shù)。2、掌握抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)、影響因素，血清學(xué)反應(yīng)的種類、實(shí)驗(yàn)方法及應(yīng)用，T細(xì)胞功能測定的方法。3、解決各種常用免疫檢測方法的實(shí)際操作方法。4、了解人工免疫的注意事項(xiàng)。5、掌握人工主動(dòng)、被動(dòng)免疫生物制劑的常見種類，常用的免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)劑、免疫抑制劑。6、重點(diǎn)掌握人工被動(dòng)免疫與人工自動(dòng)免疫的區(qū)別。教學(xué)基本要求

第四頁，共一百零七頁，2022年，8月28日檢測抗原抗體反應(yīng)的體外方法，檢測免疫細(xì)胞的方法，細(xì)胞因子的檢測及分子生物學(xué)技術(shù)在免疫檢測中的應(yīng)用，免疫預(yù)防的概念、種類及具體方法、注意事項(xiàng)，免疫治療的常用調(diào)節(jié)劑、抑制劑。教學(xué)基本內(nèi)容第五頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第七章免疫診斷與預(yù)防

ImmunologicaldiagnosisandPrevention第一節(jié)免疫診斷第二節(jié)免疫防治內(nèi)容提要第六頁，共一百零七頁，2022年，8月28日

免疫學(xué)技術(shù)是當(dāng)今生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究的重要手段之一，臨床上免疫學(xué)檢測技術(shù)被廣泛用于與免疫相關(guān)疾病的診斷、發(fā)病機(jī)制研究、免疫狀態(tài)監(jiān)測及療效評估。

第七頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第一節(jié)免疫診斷一、抗原與抗體的檢測1、凝集反應(yīng)2、沉淀反應(yīng)3、補(bǔ)體參與的反應(yīng)4、用標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原-抗體反應(yīng)二、淋巴細(xì)胞的測定1、淋巴細(xì)胞的類別鑒定2、淋巴細(xì)胞功能測定三、免疫診斷方法的應(yīng)用（不做要求）1、疾病的診斷2、免疫學(xué)監(jiān)測

第八頁，共一百零七頁，2022年，8月28日一、抗原與抗體的檢測

抗原-抗體反應(yīng)：1、已知的特異性抗體檢測未知的抗原；2、已知的抗原檢測未知的抗體?？乖?抗體反應(yīng)的特點(diǎn)：1、特異性：抗原-抗體的結(jié)合是特異性結(jié)合；2、可逆行：抗原抗體結(jié)合是分子表面的非共價(jià)鍵結(jié)合；3、可見性：抗原和抗體結(jié)合是否呈現(xiàn)可見的反應(yīng)現(xiàn)象。第九頁，共一百零七頁，2022年，8月28日一、抗原與抗體的檢測

----（1）凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)(Agglutination):細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集現(xiàn)象。1、直接凝集2、間接凝集第十頁，共一百零七頁，2022年，8月28日1、直接凝集(directagglutination)

細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集團(tuán)塊。

第十一頁，共一百零七頁，2022年，8月28日1、玻片凝集反應(yīng):（抗原定性檢測，如ABO血型鑒定，細(xì)菌鑒定）

未知抗原+已知抗體凝集團(tuán)塊混濁?2、試管凝集反應(yīng)：（抗體的定量檢測，如診斷傷寒的肥達(dá)實(shí)驗(yàn)）

定量抗原+系列稀釋抗體不同程度的凝集反應(yīng)YESNO確定抗體的滴度第十二頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第十三頁，共一百零七頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)材料：

滅活的傷寒菌液(7×108/ml),待測血清2.方法：0.50.50.50.50.50.50.50.50.51:201:401:801:1601:3200.5棄掉123450.160.9生理鹽水(ml)待測血清對照管0.9ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml①②③④滅活的傷寒菌液0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml抗體稀釋度徹底混勻56℃,1h第十四頁，共一百零七頁，2022年，8月28日4.結(jié)果+很小的凝集顆粒混濁-無凝集現(xiàn)象與對照相同++小、部分凝集塊中等混濁+++大多凝集管底輕度混濁++++大的凝集塊清亮凝集程度沉淀上清第十五頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、間接凝集反應(yīng)(indirectagglutination):

將可溶性抗原吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。

載體種類人O型紅細(xì)胞：

新鮮紅細(xì)胞吸附蛋白質(zhì)的能力差。一般先醛化后應(yīng)用。聚苯乙烯膠乳顆粒：

可物理吸附蛋白質(zhì)；常制備帶有化學(xué)活性基團(tuán)的顆粒第十六頁，共一百零七頁，2022年，8月28日載體可溶性抗原致敏致敏顆粒NS凝集顆粒第十七頁，共一百零七頁，2022年，8月28日

例1：類風(fēng)濕因子的檢測γ球蛋白（丙種球蛋白）乳膠顆粒包被類風(fēng)濕患者血清發(fā)生凝集（+）抗人丙種球蛋白抗體2、間接凝集反應(yīng)(indirectagglutination):

第十八頁，共一百零七頁，2022年，8月28日例2：庫姆斯實(shí)驗(yàn)（Coombs）是利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異抗體，使紅細(xì)胞凝集?？谷饲蚍ㄊ菣z測不完全抗體的經(jīng)典方法，其方法有兩類。直接Coombs試驗(yàn)：是檢查被檢紅細(xì)胞上有無不完全抗體。間接Coombs試驗(yàn)：是檢查血清中游離的不完全抗體2、間接凝集反應(yīng)(indirectagglutination):

第十九頁，共一百零七頁，2022年，8月28日不完全抗體就是半抗體，即此抗體能與相應(yīng)的抗原結(jié)合，但在一定條件下無可見的抗原抗體反應(yīng)現(xiàn)象。完全抗體是具有完整的Ig分子結(jié)構(gòu)，經(jīng)酶水解后可成片段Fab或F（ab`），而這2片段可表現(xiàn)不完全抗體的作用。不完全抗體是相對于完全抗體來說的。第二十頁，共一百零七頁，2022年，8月28日天然抗體與免疫血型抗體比較天然抗體免疫血型抗體性質(zhì)完全抗體不完全抗體IgIgMIgG抗原刺激沒有可察覺的抗原刺激經(jīng)抗原刺激后才產(chǎn)生免疫發(fā)生的時(shí)間早期晚期分子量90萬15萬分子長度950250沉淀系數(shù)19S7S電泳分析IgM球蛋白IgG球蛋白對HDN的意義＊小大通過胎盤能力＊不能能反應(yīng)溫度＊4℃比37℃強(qiáng)（冷抗體）37℃（溫抗體）對血型物質(zhì)＊能被血型物質(zhì)中和不被中和第二十一頁，共一百零七頁，2022年，8月28日IgM抗體在鹽水介質(zhì)中凝集紅細(xì)胞示意圖第二十二頁，共一百零七頁，2022年，8月28日IgG凝集紅細(xì)胞示意圖

IgG在鹽水介質(zhì)中一般不產(chǎn)生凝集第二十三頁，共一百零七頁，2022年，8月28日直接Coombs試驗(yàn)抗人球蛋白自身抗體致敏RBC可見凝集第二十四頁，共一百零七頁，2022年，8月28日間接Coombs試驗(yàn)抗人免疫球蛋白同種異型抗體第二十五頁，共一百零七頁，2022年，8月28日一、抗原與抗體的檢測

----（2）沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)：

可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合而發(fā)生的沉淀現(xiàn)象。1、單向免疫擴(kuò)散（瓊脂凝膠）；2、雙向免疫擴(kuò)散（瓊脂凝膠）；3、免疫電泳（瓊脂凝膠）；4、免疫比濁（液體）。第二十六頁，共一百零七頁，2022年，8月28日1、單向瓊脂擴(kuò)散2%瓊脂加熱溶解冷卻至50℃左右加抗體混勻制瓊脂板打孔（孔中加入相應(yīng)抗原）

抗原擴(kuò)散與抗體結(jié)合形成沉淀環(huán)其直徑或面積與抗原濃度呈正相關(guān)（定量檢測血清IgG、IgM、IgA和C3試驗(yàn)）

沉淀環(huán)直徑抗原含量第二十七頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、雙向瓊脂擴(kuò)散2%瓊脂加熱溶解制瓊脂板打孔抗原與相應(yīng)抗體在瓊脂中擴(kuò)散，相遇后形成沉淀線。AgAb常用于抗原或抗體的定性檢測第二十八頁，共一百零七頁，2022年，8月28日3、免疫電泳

是將瓊脂電泳和雙向瓊脂擴(kuò)散結(jié)合起來，用于分析抗原組成的一種定性方法。用于血清蛋白種類分析等等。βα2α1γAIb-+人血清抗人血清βα2α1γAIb人血清家兔抗人血清免疫產(chǎn)生第二十九頁，共一百零七頁，2022年，8月28日4、免疫比濁法在一定量的抗體中分別加入遞增量的抗原，經(jīng)一定時(shí)間后形成免疫復(fù)合物。用濁度計(jì)測量反應(yīng)液體的濁度，復(fù)合物形成越多則濁度越高，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)濁度推算樣品的抗原含量。該法快速簡便，應(yīng)用范圍廣泛，且適用于大批量標(biāo)本的測定。第三十頁，共一百零七頁，2022年，8月28日一、抗原與抗體的檢測

----（3）補(bǔ)體參與的反應(yīng)將紅細(xì)胞多次注射于動(dòng)物（如將綿羊紅細(xì)胞多次免疫家兔）可使之產(chǎn)生相應(yīng)的抗體（溶血素）。溶血素與紅細(xì)胞結(jié)合，若有補(bǔ)體存在，則紅細(xì)胞被溶解，這種現(xiàn)象稱為溶血反應(yīng)。紅細(xì)胞和溶血素被稱為溶血系統(tǒng)，常在補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中用作測定有無補(bǔ)體游離存在的指示劑。第三十一頁，共一百零七頁，2022年，8月28日Ag？SRBC溶血素AbC1、將待測抗原系統(tǒng)加入已知抗體系統(tǒng)中。2、加入定量補(bǔ)體3、加入指示系統(tǒng)4、觀察結(jié)果：不溶血（+）溶血（-）檢測系統(tǒng)指示系統(tǒng)Ag？SRBC溶血素AbC第三十二頁，共一百零七頁，2022年，8月28日一、抗原與抗體的檢測

--（4）用標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原-抗體反應(yīng)用熒光素、酶或放射性核素等標(biāo)記抗體或抗原，進(jìn)行抗原抗體測定。1、免疫熒光法；2、酶免疫測定；3、放射免疫測定法；4、化學(xué)發(fā)光免疫分析；5、免疫印跡法（WesternBlot）.第三十三頁，共一百零七頁，2022年，8月28日(1)免疫熒光法：

熒光素標(biāo)記抗體或補(bǔ)體等，進(jìn)行免疫組化測定。檢測組織切片、細(xì)胞涂片中的抗原。

常用的熒光素①異硫氰酸熒光素(FITC）－黃綠色熒光②藻紅蛋白（PE）－紅色熒光第三十四頁，共一百零七頁，2022年，8月28日(1)免疫熒光法：測定方法

（1）直接法-----熒光素標(biāo)記特異性抗體（熒光直接標(biāo)記一抗）（2）間接法-----熒光素標(biāo)記二抗，二抗再與一抗結(jié)合

Ag小鼠特異性抗體（小鼠IgG）（一抗）小鼠IgG兔兔抗鼠IgG（熒光標(biāo)記）（二抗）第三十五頁，共一百零七頁，2022年，8月28日細(xì)胞免疫熒光照片小腸組織免疫熒光照片第三十六頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、酶免疫測定當(dāng)酶標(biāo)記物與待測樣品中相應(yīng)的抗原或抗體相互作用時(shí)，可形成酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物。利用復(fù)合物上標(biāo)記的酶催化底物顯色，其顏色深淺與待測樣品中抗原或抗體的量相關(guān)。靈敏度可達(dá)到ng~pg/ml水平。常用的標(biāo)記物有辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP）等。1、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)---檢測可溶性抗原或抗體2、免疫組織化學(xué)技術(shù)---檢測組織或細(xì)胞的表面抗原第三十七頁，共一百零七頁，2022年，8月28日水沖水沖包被已知抗體加入待測抗原加入酶標(biāo)抗體加入底物酶標(biāo)儀測OD值底物待測抗原酶標(biāo)抗另一表位抗體2、酶免疫測定（1）、雙抗體夾心法第三十八頁，共一百零七頁，2022年，8月28日96孔板Elisa法染色結(jié)果第三十九頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、酶免疫測定（2）、間接法--（二抗法）水沖底物水沖第四十頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第四十一頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、酶免疫測定（3）、BAS-ELISA:生物素-親和素系統(tǒng)第四十二頁，共一百零七頁，2022年，8月28日小腸組織免疫組化結(jié)果HRP顯色2、酶免疫測定----（4）、免疫組化法第四十三頁，共一百零七頁，2022年，8月28日3、免疫放射技術(shù)用放射核素（125I、131I）標(biāo)記抗體或抗原。定量測定抗原抗體----高度敏感,達(dá)pg/ml水平。方法與ELISA相似常用于檢測微量物質(zhì)，如胰島素、生長激素等。第四十四頁，共一百零七頁，2022年，8月28日4、化學(xué)發(fā)光免疫分析用發(fā)光物質(zhì)（如吖啶酯等）標(biāo)記抗體或抗原。定量測定抗原抗體----高度敏感,達(dá)pg/ml水平。常用于檢測超微量物質(zhì)，如甲狀腺激素等。第四十五頁，共一百零七頁，2022年，8月28日5、免疫印跡法（WesternBlot）第四十六頁，共一百零七頁，2022年，8月28日5、免疫印跡法（WesternBlot）第四十七頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第一節(jié)免疫診斷一、抗原與抗體的檢測1、凝集反應(yīng)2、沉淀反應(yīng)3、補(bǔ)體參與的反應(yīng)4、用標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原-抗體反應(yīng)二、淋巴細(xì)胞的測定1、淋巴細(xì)胞的類別鑒定2、淋巴細(xì)胞功能測定三、免疫診斷方法的應(yīng)用1、疾病的診斷2、免疫學(xué)監(jiān)測

第四十八頁，共一百零七頁，2022年，8月28日二、免疫細(xì)胞及其功能檢測(一)免疫細(xì)胞的類型與數(shù)量檢測1、E花結(jié)試驗(yàn)2、尼龍棉分離法3、免疫磁珠分離法4、流式細(xì)胞術(shù)

(二)免疫細(xì)胞功能測定1、T細(xì)胞功能測定

(1)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)(2)細(xì)胞毒試驗(yàn)(3)皮膚試驗(yàn)2、B細(xì)胞功能測定(1)B細(xì)胞增殖試驗(yàn)(2)抗體形成細(xì)胞測定3、細(xì)胞因子檢測（elisa）第四十九頁，共一百零七頁，2022年，8月28日（一）、淋巴細(xì)胞的類別鑒定(1)外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）的分離PBMC:主要指淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，是免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常用的細(xì)胞群，也是進(jìn)行T細(xì)胞和B細(xì)胞分離純化的重要環(huán)節(jié)。方法：葡聚糖-泛影葡胺（淋巴細(xì)胞分離液）密度梯度離心法第五十頁，共一百零七頁，2022年，8月28日血液中PBMC的密度與其他成分不同：血小板的密度為1.030～1.035，粒細(xì)胞為1.092，紅細(xì)胞為1.093，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的密度為1.075。利用一種密度介于1.077近于等滲的溶液(分層液)進(jìn)行密度梯度離心，可使不同類別的血細(xì)胞按其相應(yīng)密度分布，從而被分離。常用的分層液有聚蔗糖-泛影葡胺分層液。第五十一頁，共一百零七頁，2022年，8月28日（一）、淋巴細(xì)胞的類別鑒定

（2）淋巴細(xì)胞亞群的分離

1、尼龍棉分離法：

因B淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞能黏附于尼龍纖維柱上（聚酰胺纖維柱），所以可將其與T淋巴細(xì)胞分離。

第五十二頁，共一百零七頁，2022年，8月28日（一）、淋巴細(xì)胞的類別鑒定

（2）淋巴細(xì)胞亞群的分離

2.E花環(huán)分離法

T細(xì)胞表面CD2分子+綿羊血紅細(xì)胞→玫瑰花結(jié)

第五十三頁，共一百零七頁，2022年，8月28日（一）、淋巴細(xì)胞的類別鑒定

（2）淋巴細(xì)胞亞群的分離

3.洗淘法

細(xì)胞表面抗原特異性抗體包被在聚苯乙烯培養(yǎng)板

表達(dá)相應(yīng)表面抗原的細(xì)胞被吸附

與懸液中的其它細(xì)胞相分離

第五十四頁，共一百零七頁，2022年，8月28日（一）、淋巴細(xì)胞的類別鑒定

（2）淋巴細(xì)胞亞群的分離

4.流式細(xì)胞術(shù)

(FlowCytometry,FCM)

是七十年代發(fā)展起來的高科學(xué)技術(shù),它集計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)于一體,同時(shí)具有分析和分選細(xì)胞功能。它不僅可測量細(xì)胞大小、內(nèi)部顆粒的性狀,還可檢測細(xì)胞表面和細(xì)胞漿抗原、細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA含量等,在血液學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、藥物、分子生物學(xué)等學(xué)科廣泛應(yīng)用。

第五十五頁，共一百零七頁，2022年，8月28日流式檢測原理第五十六頁，共一百零七頁，2022年，8月28日細(xì)胞亞群的檢測細(xì)胞周期檢測第五十七頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第五十八頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第五十九頁，共一百零七頁，2022年，8月28日（一）、淋巴細(xì)胞的類別鑒定

（2）淋巴細(xì)胞亞群的分離

5.磁分離技術(shù)

免疫磁性微珠用于細(xì)胞的分離和純化的基本原理及步驟是：首先將抗特異細(xì)胞表面抗原的抗體致敏到磁珠上，待它與混合體系中的細(xì)胞反應(yīng)后，利用磁力的作用，使與致敏結(jié)合的細(xì)胞與其它物質(zhì)分離，達(dá)到純化、分離的目的。

通常有二種分離方式：陽性分離和陰性分離。

陽性分離是直接從細(xì)胞混合液中分離出靶細(xì)胞，

陰性分離是利用磁珠去除無關(guān)細(xì)胞，使靶細(xì)胞得以分離。

第六十頁，共一百零七頁，2022年，8月28日免疫磁珠分離細(xì)胞已被廣泛應(yīng)用于人類各種細(xì)胞的分離，如T(CD3)、B(CD19)淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞(CD34)、造血祖細(xì)胞(CD34)、單核/巨噬細(xì)胞(CD14)、胰島細(xì)胞(胰島GK和GLUT2（葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子）)、多種腫瘤細(xì)胞等。第六十一頁，共一百零七頁，2022年，8月28日（一）、淋巴細(xì)胞的分離與類型鑒定葡聚糖-泛影葡胺全血離心玻璃或塑料吸附單核細(xì)胞尼龍毛吸附B細(xì)胞T細(xì)胞單個(gè)核細(xì)胞抗IgD、IgMB細(xì)胞抗CD4抗CD8CD4+T細(xì)胞CD8+T細(xì)胞抗CD8CD4+T細(xì)胞CD8+T細(xì)胞抗CD4磁珠法、淘選法、流式細(xì)胞術(shù)第六十二頁，共一百零七頁，2022年，8月28日（一）、淋巴細(xì)胞功能測定

（1）T細(xì)胞功能測定

1、T細(xì)胞增殖試驗(yàn)：

2、細(xì)胞毒試驗(yàn)：

3、皮膚試驗(yàn)（見超敏反應(yīng)）

1．3H-TdR摻入法2．MTT比色法（已被CCK8法替代）1．51Cr釋放法2.乳酸脫氫酶釋放法3．Tunel法第六十三頁，共一百零七頁，2022年，8月28日（1）T細(xì)胞功能測定T細(xì)胞在體外受到有絲分裂原或抗原的刺激后，細(xì)胞的代謝和形態(tài)發(fā)生變化，主要表現(xiàn)為胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸合成增加，發(fā)生一系列增殖反應(yīng)，如細(xì)胞變大、胞質(zhì)增多、胞質(zhì)現(xiàn)空泡、核染色質(zhì)疏松、核仁明顯，并轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)又稱淋巴細(xì)胞母細(xì)胞轉(zhuǎn)化。第六十四頁，共一百零七頁，2022年，8月28日常用刺激物體外刺激T細(xì)胞增殖反應(yīng)的刺激物包括植物血凝素(PHA)刀豆素A(ConA)美洲商陸(PWM)白喉類毒素破傷風(fēng)類毒素純化蛋白衍生物(PPD)白色念珠菌第六十五頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第六十六頁，共一百零七頁，2022年，8月28日1、T細(xì)胞增殖試驗(yàn)：2．MTT比色法（已被CCK8法替代）1．3H-TdR摻入法--進(jìn)入增殖期的T細(xì)胞CCK8可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。第六十七頁，共一百零七頁，2022年，8月28日（1）.51Cr釋放法：應(yīng)用放射性同位素（如51Cr）標(biāo)記靶細(xì)胞，當(dāng)靶細(xì)胞受到NK細(xì)胞攻擊，靶細(xì)胞被破壞，釋放出51Cr。51Cr輻射γ射線，通過測定受損傷或死亡靶細(xì)胞釋放到上清中51Cr的放射脈沖數(shù)（cpm)，即可計(jì)算出NK細(xì)胞活性。2、細(xì)胞毒試驗(yàn)第六十八頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、細(xì)胞毒試驗(yàn)存在于細(xì)胞內(nèi)，正常情況下，不能透過細(xì)胞膜。當(dāng)細(xì)胞受到損傷時(shí)，LDH可從細(xì)胞內(nèi)釋放至培養(yǎng)液中。釋放出來的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的過程中，使氧化型輔酶I(NAD+)變成還原型輔酶(NADH)，后者再通過遞氫體-吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)還原碘硝基氯化氮唑藍(lán)(INT)或硝基氯化四氮唑藍(lán)(NBT)形成有色的甲基化合物，在570nm波長處有一吸收峰，利用讀取的Ａ值，可測得殺傷細(xì)胞毒活性。（2）、乳酸脫氫酶釋放法第六十九頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、細(xì)胞毒試驗(yàn)（3）、第七十頁，共一百零七頁，2022年，8月28日（一）、淋巴細(xì)胞功能測定

（2）B細(xì)胞功能測定

1、B細(xì)胞增殖試驗(yàn)：

2、抗體形成細(xì)胞測定：溶血空斑試驗(yàn)

1．3H-TdR摻入法2．MTT比色法（已被CCK8法替代）第七十一頁，共一百零七頁，2022年，8月28日溶血空斑是檢測空斑形成細(xì)胞即B淋巴細(xì)胞分泌抗體功能的一種體外實(shí)驗(yàn)方法，可檢測機(jī)體體液免疫功能狀況。用綿羊紅細(xì)胞免疫小鼠，取小鼠脾臟制成細(xì)胞懸液，與一定量的SRBC混合后加入瓊脂糖凝膠中，其中每一個(gè)有活性的B細(xì)胞所產(chǎn)生的溶血素可致敏周圍的SRBC，在補(bǔ)體的參與下，SRBC溶解，形成肉眼可見的溶血斑，空斑的數(shù)目代表抗體生成細(xì)胞的多少，空斑的大小代表反映抗體生成細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力。第七十二頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第七十三頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第一節(jié)免疫診斷一、抗原與抗體的檢測1、凝集反應(yīng)2、沉淀反應(yīng)3、補(bǔ)體參與的反應(yīng)4、用標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原-抗體反應(yīng)二、淋巴細(xì)胞的測定1、淋巴細(xì)胞的類別鑒定2、淋巴細(xì)胞功能測定三、免疫診斷方法的應(yīng)用（自學(xué)）1、疾病的診斷2、免疫學(xué)監(jiān)測

第七十四頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第二節(jié)免疫防治一、免疫學(xué)預(yù)防1、人工主動(dòng)免疫2、人工被動(dòng)免疫3、計(jì)劃免疫二、免疫學(xué)治療1、主動(dòng)免疫治療2、被動(dòng)免疫治療三、生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑1、生物制劑2、化學(xué)合成藥物

第七十五頁，共一百零七頁，2022年，8月28日天花天花病毒:Smallpoxvirus是DNA病毒牛痘是一種溫和的天花病毒出疹的木乃伊（疑為天花）軀干皮膚天花損傷1979年WHO宣布在全球范圍內(nèi)消滅了天花病毒。也是到目前為止，在世界范圍被人類消滅的唯一一個(gè)傳染病第七十六頁，共一百零七頁，2022年，8月28日J(rèn)enner和Pasteur,著名的免疫學(xué)家，公認(rèn)為免疫接種和主動(dòng)免疫的先驅(qū)。EdwardJennerLouisPasteur第七十七頁，共一百零七頁，2022年，8月28日第二節(jié)免疫防治一、免疫學(xué)預(yù)防1、人工主動(dòng)免疫2、人工被動(dòng)免疫3、計(jì)劃免疫二、免疫學(xué)治療1、主動(dòng)免疫治療2、被動(dòng)免疫治療三、生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑1、生物制劑2、化學(xué)合成藥物

第七十八頁，共一百零七頁，2022年，8月28日一、免疫學(xué)預(yù)防天然獲得性免疫人工獲得性免疫人工主動(dòng)免疫(疫苗)人工被動(dòng)免疫（免疫血清）獲得性免疫天然主動(dòng)免疫（自然感染）天然被動(dòng)免疫（母源抗體）第七十九頁，共一百零七頁，2022年，8月28日疫苗（vaccine）:人工主動(dòng)免疫所使用的抗原。1、人工主動(dòng)免疫

------機(jī)體輸入抗原性物質(zhì)，產(chǎn)生類似感染的免疫過程。新型疫苗傳統(tǒng)疫苗----抗微生物感染的疫苗1、滅活疫苗（死疫苗）2、減毒活疫苗3、類毒素第八十頁，共一百零七頁，2022年，8月28日傳統(tǒng)疫苗（TraditionalVaccine）用減毒或無毒的活病原微生物用理化方法將病原微生物殺死制備的生物制劑第八十一頁，共一百零七頁，2022年，8月28日1、傳統(tǒng)疫苗

---（1）滅活疫苗（死疫苗，inactivatedvaccine）定義：免疫原性強(qiáng)的病原體，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法滅活而制成。特點(diǎn)：常用滅活疫苗：傷寒、白日咳、狂犬病、流感等。副作用：注射后可能引起較嚴(yán)重的局部和全身反應(yīng)。1、誘導(dǎo)體液免疫，維持血清抗體水平；2、多次免疫；3、不誘導(dǎo)細(xì)胞免疫。第八十二頁，共一百零七頁，2022年，8月28日流感疫苗制備流程第八十三頁，共一百零七頁，2022年，8月28日1、傳統(tǒng)疫苗

----（2）減毒活疫苗(live-attenuatedvaccine)定義：減毒或無毒力的活病原微生物制成。特點(diǎn)：常用活疫苗：卡介苗、麻疹活疫苗等。不足：1、疫苗體內(nèi)回復(fù)突變；2、免疫缺陷者和孕婦不宜接受活疫苗；3、不宜保存，易失效。1、誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫；2、一次免疫；3、免疫效果良好、持久。第八十四頁，共一百零七頁，2022年，8月28日減毒活疫苗牛型結(jié)核桿菌

Mycobacteriumbovis置于含膽汁的培養(yǎng)基，逐漸增加膽汁的濃度卡介苗BacillusCalmette-Guerin（BCG）在膽汁中適應(yīng)性生長，充分減毒成為預(yù)防肺結(jié)核的疫苗13年230次傳代法國科學(xué)家CalmetteGuerin第八十五頁，共一百零七頁，2022年，8月28日死疫苗和活疫苗的比較區(qū)別點(diǎn)滅活疫苗減毒活疫苗制劑特點(diǎn)死、強(qiáng)毒株活、弱毒或無毒接種劑量及次數(shù)較多，2-3次較少，1次副作用較大較小保存及有效期易保存，較穩(wěn)定易失效，4℃保存免疫效果較差，維持?jǐn)?shù)月至2年較好，維持3-5年或更長第八十六頁，共一百零七頁，2022年，8月28日1、傳統(tǒng)疫苗

----（3）類毒素(toxoid)定義：細(xì)菌外毒素經(jīng)1.3%-0.4%甲醛處理而成，無毒性，保留免疫原性。誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗毒素，從而中和外毒素的毒性。疫苗：破傷風(fēng)類毒素、白喉類毒素毒素類毒素毒素抗原決定簇第八十七頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、現(xiàn)代疫苗（Modernvaccine）：采用生物化學(xué)合成技術(shù)、人工變異技術(shù)、分子微生物學(xué)技術(shù)、基因工程技術(shù)等現(xiàn)代生物技術(shù)制造出的疫苗，是近年來新發(fā)展的疫苗。包括：1、亞單位疫苗；2、結(jié)合疫苗；3、合成肽疫苗；4、核酸疫苗；6、轉(zhuǎn)基因植物疫苗。第八十八頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、新型疫苗

----（1）亞單位疫苗(subunitvaccine)定義：提取或合成細(xì)菌、病毒外殼的特殊蛋白結(jié)構(gòu)，即抗原決定簇制成的疫苗，不是完整的病毒，而是病毒的一部分物質(zhì)。特點(diǎn)：僅有幾種主要表面蛋白，能消除病原體的無關(guān)抗原決定簇誘發(fā)的不良反應(yīng)。疫苗：乙型肝炎疫苗、百日咳疫苗、多糖疫苗(結(jié)合疫苗)。第八十九頁，共一百零七頁，2022年，8月28日滅活疫苗、減毒活疫苗和亞單位疫苗三類疫苗的比較滅活疫苗減毒活疫苗亞單位疫苗制備方法通過化學(xué)或物理方法使病原體失活通過非正常培養(yǎng)選擇減毒株或無毒株以化學(xué)方法獲得病原體的某些具有免疫原性的成分免疫機(jī)理病原體失去毒力但保持免疫原性，接種后產(chǎn)生特異抗體或致敏淋巴細(xì)胞接種后病原體在體內(nèi)有一定生長繁殖能力，類似隱性感染，產(chǎn)生細(xì)胞、體液和局部免疫接種后能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫疫苗穩(wěn)定性相對穩(wěn)定相對不穩(wěn)定穩(wěn)定毒力回升不可能有可能不可能免疫接種多次免疫接種一般為一次性多次免疫接種安全性較安全對免疫缺陷者有危險(xiǎn)安全性好常用疫苗乙腦、脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗麻疹、脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗白喉、破傷風(fēng)類毒素，A群腦膜炎球菌多糖疫苗第九十頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、新型疫苗

----（2）結(jié)合疫苗(conjugatevaccine)定義：

化學(xué)方法細(xì)菌莢膜—————白喉類毒素→T細(xì)胞依賴性抗原多糖的水解物（蛋白質(zhì)載體）（TI-Ag）（TD-Ag）特點(diǎn)：提高細(xì)菌疫苗多糖抗原的免疫原性；被T、B細(xì)胞所結(jié)合，產(chǎn)生IgG抗體。疫苗：b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗；腦膜炎球菌結(jié)合疫苗；肺炎球菌結(jié)合疫苗等。第九十一頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、新型疫苗

----（3）合成肽疫苗(syntheticpeptidevaccine)定義：

人工設(shè)計(jì)、合成的含免疫決定簇組分的小肽通常合成的肽鏈上含有被B、Th、CTL識(shí)別的表位。常用脂質(zhì)體作為免疫原性多肽的交聯(lián)載體。

特點(diǎn)：可誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫。

第九十二頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、新型疫苗

----（4）核酸疫苗(syntheticpeptidevaccine)定義：

是利用基因重組技術(shù)將編碼某種蛋白抗原的外源基因?qū)雱?dòng)物體細(xì)胞內(nèi)，在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)外源抗原基因，從而誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對該抗原的免疫應(yīng)答。特點(diǎn)：可同時(shí)誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答；制備工藝簡單，生產(chǎn)成本低，適于大批量生產(chǎn)。比傳統(tǒng)疫苗安全。性質(zhì)穩(wěn)定，易于保存、運(yùn)輸。可生產(chǎn)多價(jià)疫苗，同時(shí)預(yù)防多種病原體感染。第九十三頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、新型疫苗

----（5）轉(zhuǎn)基因植物疫苗定義：

將目的抗原基因?qū)肟墒秤弥参镏校参锟墒秤貌糠址€(wěn)定表達(dá)外源基因產(chǎn)物，通過攝食而被免疫接種初期研制階段。第九十四頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、人工被動(dòng)免疫定義：將含特異性抗體的血清或細(xì)胞因子等制劑注入人體，使機(jī)體被動(dòng)地獲得特異性免疫力而受到保護(hù)。特點(diǎn)：并非由被接種者產(chǎn)生，缺乏主動(dòng)補(bǔ)給的來源，因而接種后免疫效果維持時(shí)間短暫，一般約2~3周。應(yīng)用：疫情發(fā)生時(shí)的緊急預(yù)防或治療。第九十五頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、人工被動(dòng)免疫

-----（1）免疫血清（immuneserum）定義：是指細(xì)菌外毒素或類毒素免疫動(dòng)物而制備的免疫血清。特點(diǎn)：

體內(nèi)停留和作用時(shí)間短。注意：

免疫血清為動(dòng)物血清，含有大量異體蛋白，易產(chǎn)生過敏反應(yīng)，使用時(shí)必須作過敏試驗(yàn)，陰性者方可應(yīng)用。第九十六頁，共一百零七頁，2022年，8月28日2、人工被動(dòng)免疫

----（2）、人免疫球蛋白制劑定義：是從大量混合血漿或胎盤血中分離制成的免疫球蛋白濃縮劑。特異性免疫球蛋白：由對某種病原微生物具有高效價(jià)抗體的血漿制備，用于特定