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文檔簡介

EcoRI酶切鑒定組分體系質(zhì)粒DNA3gl水4plbuffer1.5glBSA0.5ulEcoRI1ul10m體系，于水浴中切割3小時，然后電泳，點樣5pl。通常質(zhì)粒DNA出現(xiàn)三個條帶，由前到后的順序為閉環(huán)質(zhì)粒、線性質(zhì)粒和開環(huán)質(zhì)粒。BamHI和HindIII雙酶切體系鑒定使用pMD-18T載體連接的目的片段，酶切鑒定時選用BamHI和HindIII雙酶切體系鑒定：（見下表）依DNA量定體系5gl10gl10"10gl重組DNA26.534BSA0.30.50.2—BamHI0.410.50.5HindIII0.410.50.5Buffer(10X)0.5111H2O1.4—4.84「反應(yīng)條件37°C水浴，3hr，電泳檢測若質(zhì)粒DNA不能被限制酶所切割，這幾乎總是由于從細菌沉淀或從核酸沉淀中去除所有上清時注意得不夠，可用酚:氯仿對solution進行抽提，以去除少量制備中的雜質(zhì)，若問題依然存在，可用離心，柱層析純化DNA。XbalI和SalI雙酶切體系鑒定依DNA量定體系20pl10gl10gl火菌去離子水8.54.3—10Xbuffer211BSA(10ug/ul)0.20.10.1DNA(1ug/ul)8.347.9XbaI(10U/ul)0.50.30.5SalI(10U/ul)0.50.30.5反應(yīng)條件37C，1~3hr，電泳檢測HindII單酶切依DNA量定體系30gl火菌去離子水410Xbuffer3DNA(1ug/ul)20HindIII3反應(yīng)條件37C，1?3hr，電泳檢測NotI和SalI雙酶切體系鑒定依DNA量定體系20pl10gl10gl10gl30gl40pl火菌去離子水8.54.3—262.410XbufferD211134BSA(10皿l)0.20.10.10.20.60.6DNA(1ug/ul)8.347.961830NotI(10U/ul)0.50.30.50.41.21.5SalI(10U/ul)0.50.30.50.41.21.5

依DNA量定體系20pl10gl火菌去離子水--10Xbuffer21DNA(1ug/ul)178.5NheI10.5反應(yīng)條件37C,1~3hr，電泳檢測反應(yīng)條件

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