氣相色譜法操作規(guī)程

目的本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了高效液相色譜法操作規(guī)程。適用范圍本操作法適用于公司檢驗(yàn)中氣相測(cè)試樣品的操作。職責(zé)檢驗(yàn)員：嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)展檢驗(yàn)。標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)擦作規(guī)程》2023年版94～104頁(yè)內(nèi)容簡(jiǎn)述柱分別系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)組成。儀器與性能要求儀器應(yīng)按現(xiàn)行國(guó)家技術(shù)監(jiān)視局“氣相色譜儀檢定規(guī)程”的要求作定期檢定。氣路系統(tǒng)氣源載氣有氮?dú)狻⒑?、氫氣等。常用氦氣和氮?dú)庾鬏d氣。氮?dú)饧兌茸詈檬褂?9.99%99.9%純氮。實(shí)際工作中〔5A13X分子篩〕的過濾器以吸附有機(jī)雜使用?；罨椒ㄊ菍⒎肿雍Y從過濾裝置中取出，置于坩堝中，置于茂福爐內(nèi)加熱到400～6004～6h。硅膠變紅時(shí)也要進(jìn)展活化，方法是在烘箱中1402h即可。該在氣源和儀器之間附加一個(gè)凈扮裝置。好，但是更換不便利。氣體發(fā)生器使用便利，但是氣體純度不高。另外，空氣壓縮機(jī)是以試驗(yàn)些，要留意常常更換凈扮裝置。氣路連接、氣體指示和調(diào)整假設(shè)承受高壓鋼瓶，在安裝氣瓶減壓閥時(shí)，應(yīng)先將瓶口聯(lián)結(jié)處的灰塵擦干凈，將瓶口向外，旋閥門開關(guān)放放氣數(shù)次，吹除灰塵，將減壓閥用扳手?jǐn)Q緊，再用聯(lián)接收將減壓閥出口聯(lián)至氣相色譜儀。用檢漏液〔外表活性劑溶液〕檢查連接處氣密性。果。進(jìn)樣系統(tǒng)包括樣品引入裝置〔和汽化室〔進(jìn)樣口。進(jìn)樣口和進(jìn)樣口技術(shù)分流/不分流進(jìn)樣口是最常用的毛細(xì)管柱進(jìn)樣口。它既可用作分流進(jìn)樣，也2μl0.5μl10:1～200:1，樣品濃度大或進(jìn)〔是指在成不同于原來的樣品組成，從而影響定量分析的準(zhǔn)確度。不均勻汽化是分流卑視的主要原說，分流比較大，越有可能造成分流卑視。具體分析中要消退分流卑視，還應(yīng)留意色譜柱的〔主要是靈敏度要求，才考慮使用不分流進(jìn)樣。程序升溫汽化進(jìn)樣程序升溫汽化〔PYV〕進(jìn)樣就是將液體或氣體樣品注射PTV進(jìn)樣有以下優(yōu)點(diǎn)：①消退了注射器針頭的進(jìn)樣卑視，這與冷柱上進(jìn)樣類似；②可實(shí)現(xiàn)大體積進(jìn)樣〔LV；③抑制了進(jìn)樣口卑視〔即分流卑視物質(zhì)可滯留在襯管中，保護(hù)了色譜柱。PTV進(jìn)樣適合于大局部樣品的分析，特別是開發(fā)方法時(shí)或篩選樣品時(shí)應(yīng)首先考慮這種進(jìn)樣方式。汽化室襯管溶劑是影響分析質(zhì)量的重要參數(shù)，根本要求是襯管容積至少要等于樣品中溶劑汽化后的體積。在實(shí)際工作中要留意襯管容積與樣品的匹配性。進(jìn)樣密封硅膠墊應(yīng)先加熱老化，除去揮發(fā)性物質(zhì)再用，并留意常常更換，另外也要留意常常更換襯管上端的密封硅橡膠圈。柱箱柱箱溫度的波動(dòng)會(huì)影響色譜分析結(jié)果的重現(xiàn)性±1℃，柱箱溫度波動(dòng)小于0.1℃/h，溫度梯度應(yīng)小于使用溫度的2%。溫度掌握分恒溫順程序升溫兩種。檢測(cè)器〔FI〔TC電子俘獲檢測(cè)器〔EC、火焰光度檢測(cè)器〔FP、氮磷檢測(cè)器〔NPDPI、原子放射光譜檢測(cè)器AE、紅外光譜檢測(cè)器IR〕子化檢測(cè)器〔FID〕是最常用的檢測(cè)器。FID檢測(cè)器操作條件及留意事項(xiàng)氣流流速FID3種不同的氣體：載氣、氫氣和空氣，由于毛細(xì)管柱的柱內(nèi)載氣流量太低〔常規(guī)柱為5ml/mi，不能滿足檢測(cè)器的最正確操作條件，所以使用毛細(xì)管柱時(shí)要承受關(guān)心氣〔尾吹氣，即在色譜柱后增加一路載氣直接進(jìn)入檢測(cè)器，就可檢測(cè)器在高靈敏度狀態(tài)下工作，尾吹氣的另一個(gè)重要作用是消退檢測(cè)器死體積的駐外效應(yīng)。一般狀況下，氮?dú)狻参泊禋?載氣、空氣和氫氣三者的比例接近或等于1:1:10〔如：氮?dú)?0～40ml/min300～400ml/min300～400ml/min〕時(shí)，F(xiàn)ID的靈敏度最高。檢測(cè)器溫度溫度對(duì)FID150℃。ECDECDECD63Ni，也有承受氚為放射源的，ECD250℃～300250℃。ECD可以承受氮?dú)庾鳛檩d氣，也可以承受含5%甲烷的氬氣作為載氣。ECD對(duì)電負(fù)性成分靈敏度高，故要求載氣純度高，至少要在99.99%以上，檢測(cè)器的溫度對(duì)響應(yīng)值有較大影響，要求檢測(cè)器的溫度波動(dòng)必需周密掌握在±〔0.1～0.3〕℃之間，以保證響應(yīng)1%之內(nèi)。ECD要避開與氧氣或濕氣接觸，否則噪聲會(huì)明顯增大。因此，載氣和尾吹氣都要求很好地凈化。由于ECD都有放射源，故檢測(cè)器出口肯定要用管道接到室外，最好接到通ECD6個(gè)月要進(jìn)展一次放射性泄露檢查。色譜柱色譜分析的好壞主要打算于色譜柱。氣象色譜柱依據(jù)色譜柱內(nèi)徑的大小和長(zhǎng)度，可分為填充柱和毛細(xì)管柱，前者的內(nèi)徑在2～4mm1～10m左右；后者內(nèi)0.2～0.5mm25～100m。毛細(xì)管柱毛細(xì)管柱由于分別效能高，分析速度快，樣品用量少等特點(diǎn)，自從19581979了彈性石英毛細(xì)管柱色譜柱〔FSOT〕以來，由于是承受石英在高溫下特別拉制而成，化學(xué)惰性好、強(qiáng)度大，所以有肯定的彈性但不易折斷，安裝、使用便利。目前，國(guó)內(nèi)外已經(jīng)有各種各樣的商品柱，能夠滿足不同的試驗(yàn)要求，毛細(xì)管柱的使用日益廣泛。色譜數(shù)據(jù)采集處理及儀器掌握系統(tǒng)由于微電子技術(shù)的不斷進(jìn)展，特別是計(jì)算機(jī)的消滅，當(dāng)今的氣相色譜儀一般都承受計(jì)算機(jī)〔工作站軟件〕制，使氣相色譜分析自動(dòng)化。因商品規(guī)格型號(hào)不同，具體操作也不盡一樣器說明書進(jìn)展操作，這里不作介紹。開機(jī)操作檢查儀器上的電源開關(guān)，均應(yīng)處于“關(guān)”的位置。選好適宜的色譜柱，柱的兩端應(yīng)堵有盲堵。取下盲堵，分清入口端及出口端，套好石墨密封圈及固定螺母，留神裝于儀器上，擰緊固定螺母，但也勿過緊，以也不漏氣為適宜。假設(shè)要換下色譜柱，應(yīng)堵上盲堵保存。開啟載氣鋼瓶上總閥調(diào)整減壓閥至規(guī)定壓力。留意：假設(shè)承受氮?dú)獍l(fā)生器作為2～3h翻開氮?dú)獍l(fā)生器進(jìn)展平衡〔由于氮?dú)獍l(fā)生器產(chǎn)生的氮?dú)庵醒醯暮枯^高，另外由于ECD對(duì)載氣中的氧特別敏感，所以承受ECD用檢漏液〔外表活性劑溶液〕檢查柱連接處是否漏氣，如有漏氣應(yīng)檢查柱兩端的石墨密封圈或再略緊固螺母。翻開個(gè)局部電路開關(guān)，翻開色譜工作站，設(shè)定進(jìn)樣口〔汽化室、柱溫箱、檢測(cè)器溫度和載氣流量等色譜參數(shù)。開頭加熱?！不蛘叻_氫氣/空氣發(fā)生器開關(guān)，同載氣操作。按下點(diǎn)火按鈕〔對(duì)于FID檢測(cè)器來說，有些儀器在監(jiān)測(cè)器溫度到達(dá)肯定溫度后有自動(dòng)點(diǎn)火功能，應(yīng)有“撲”的點(diǎn)火聲，用玻璃片置FID檢測(cè)器氣體出口處，檢視玻璃片上應(yīng)有水霧，表示已點(diǎn)著火，同時(shí)工作站上應(yīng)有信號(hào)相應(yīng)。留意進(jìn)展監(jiān)視，以確保點(diǎn)火成功。調(diào)整儀器的放大器靈敏度等，走基線，待基線穩(wěn)定度到達(dá)可以承受的范圍內(nèi)，即可進(jìn)樣分析。氣相色譜常用的進(jìn)樣方法有手動(dòng)進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣、頂空進(jìn)樣〔多為自動(dòng)〕等，在用微量主要技術(shù)要求如下〔針對(duì)常規(guī)液體樣品。選用適宜的注射器氣象色譜分析最常用的是10μl1μl。假設(shè)進(jìn)樣量要掌握在1μl5μl1μl時(shí)要留意：5μl或1μl的注射器往往是將樣品抽在針尖內(nèi)，因此觀看不到針管內(nèi)的液面，故很可能抽入氣泡。取樣時(shí)應(yīng)反復(fù)推拉針芯，以確保針尖內(nèi)沒有氣泡。注射速度要快注射速度慢時(shí)會(huì)使樣品的汽化過程變長(zhǎng)，導(dǎo)致樣品進(jìn)入色譜柱的初始譜帶變寬。正確的注射方法應(yīng)當(dāng)是：取樣后，一手持注射器，并用食指放在針芯的末端〔防止汽化室的高氣壓將針芯吹出〕另一只手保護(hù)針尖〔防止插入隔墊時(shí)彎曲，先留神〔留意不要使針芯彎曲在汽化室中停留的時(shí)間越短越好，且每次注射的過程越重現(xiàn)越好。3〔抽滿針管的2/，再排出，再用要分析的樣品溶液洗針至少3次，然后取樣〔屢次上下抽動(dòng)上可以消退樣品之間的相互干擾〔記憶效應(yīng)。削減注射卑視所謂注射卑視是指注射針插入氣相色譜儀進(jìn)樣口時(shí)，針尖內(nèi)的劑量太大會(huì)造成色譜柱超載。40℃〔或更低40℃用盲堵上，放在盒內(nèi)，妥當(dāng)保存。寫好使用記錄。樣品的測(cè)定儀器系統(tǒng)適用性試驗(yàn)應(yīng)符合藥典或部頒標(biāo)準(zhǔn)各品種項(xiàng)下的要求。2定。預(yù)試驗(yàn)初次測(cè)定該品種時(shí)可適當(dāng)調(diào)整柱溫、載氣流速、進(jìn)樣量、進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等，使色譜峰頂?shù)谋４鏁r(shí)間、分別度、峰面積或峰高的測(cè)量能符合要求。正式測(cè)定正式測(cè)定時(shí)，每份校正因子測(cè)定溶液〔或比照溶液22份共42.0%。多份供試品測(cè)定時(shí)，522。原始記錄譜柱型號(hào)、規(guī)格及批號(hào)；進(jìn)樣口、柱溫箱及檢測(cè)器溫度，載氣流速和壓力，進(jìn)樣體積，進(jìn)樣方式，并附色譜柱圖及打印結(jié)果。填充色譜柱的填充及其他維護(hù)毛細(xì)管柱安裝從柱架上將色譜柱兩端各拉出大約0.5m，以用于進(jìn)樣口和檢測(cè)離端口大約5cm。在距柱兩端大約4-5cm用柱切割器〔一般為帶有刃口的陶器片〕與柱垂直螺帽1/4-1/2供給的正確插入距離。毛細(xì)管柱的老化在比最高溫分析溫度高20℃或最高溫〔溫度更低者〕2h，假設(shè)在高溫10minVespdl老化完成后再重檢查密封程度。檢測(cè)器清洗FI