抗酸染色-標(biāo)準(zhǔn)操作

抗酸染色一、原理本試劑盒采用WHO推薦的Ziehl-Neelsen法分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過加熱和延長染色時(shí)間來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色。齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。二、試劑石碳酸復(fù)紅染液、酸性酒精溶液、亞甲藍(lán)溶液三、方法涂片：參見各標(biāo)本操作程序涂片，涂片后在室溫下自然干燥，也可在酒精燈上略加溫，使之迅速干燥，但勿靠近火焰2.固定：常用高溫進(jìn)行固定。即手持載玻片一端，標(biāo)本面朝上，在燈的火焰外側(cè)快速來回移動(dòng)3~4次，共約3~4秒。要求玻片溫度不超過60C，以玻片背面觸及手背皮膚不覺過燙為宜，放置待冷后染色3.染色3.1滴加石碳酸復(fù)紅染液蓋滿玻片，染色10分鐘或更久，無需加溫3.2流水自玻片一端輕緩沖洗，沖去染色液，瀝去標(biāo)本上剩余的水3.3滴加酸性酒精溶液蓋滿玻片，脫色1-2分鐘，如有必要，需流水沖去溶液后，再次脫色至痰膜無可視紅色為止3.4流水自玻片一端輕緩沖洗，沖去染色液，瀝去標(biāo)本上剩余的水3.5滴加亞甲藍(lán)溶液，染色30秒鐘流水自玻片一端輕緩沖洗，沖去染色液，瀝去標(biāo)本上剩余的水，待玻片干燥后鏡檢一張染色合格的玻片，痰膜肉眼觀察為亮藍(lán)色，無紅色斑塊四、結(jié)果判定1.干燥后油鏡觀察300個(gè)視野（觀察時(shí)間不少于4min）,抗酸性細(xì)菌呈紅色，其它細(xì)菌或細(xì)胞呈藍(lán)色2.報(bào)告方式2.1未找到抗酸桿菌2.2找到抗酸桿菌±：可疑，發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌1-2條/300視野2.3找到抗酸桿菌1+：發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌3-9條/100視野2.4找到抗酸桿菌2+：發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌1-9條/10視野2.5找到抗酸桿菌3+:發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌1-9條/1視野2.6找到抗酸桿菌4+：發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌PIO條/1視野五、注意事項(xiàng)1.每一玻片只能涂一份標(biāo)本，以防脫落混淆脫色時(shí)間需根據(jù)涂片厚薄而定，厚片可適當(dāng)延長，以無紅色脫出為止冬季室溫過低時(shí)，染色時(shí)間要適當(dāng)延長有時(shí)同一個(gè)抗菌體上紅色深淺也有不同，觀察時(shí)應(yīng)注意每次試劑用完后，請(qǐng)迅速蓋好，以免揮發(fā)，儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)避免高低溫及陽光照射在涂抹痰標(biāo)本時(shí)，嚴(yán)禁對(duì)玻片加熱染色時(shí)勿使玻片上的染液干燥