35臨床級(jí)人體組織來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量控制管理規(guī)范02

ICS07.080C04江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DB32/TXXXX—2019臨床級(jí)人體組織來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

質(zhì)量控制管理規(guī)范2019-XX-XX實(shí)施2019-XX-XX實(shí)施2019-XX-XX發(fā)布江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局 發(fā)布目次TOC\o"1-5"\h\z前言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語(yǔ)和定義 1基本要求 3操作規(guī)范 4質(zhì)量控制 9附錄A（資料性附錄） 樣本捐獻(xiàn)供者知情同意書(shū) 12附錄B（資料性附錄）干細(xì)胞供者健康信息采集表 13附錄C（資料性附錄）臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量控制檢測(cè)表 14本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院、中國(guó)科學(xué)院上海營(yíng)養(yǎng)與健康研究院、常州市第一人民醫(yī)院、南京市鼓樓醫(yī)院、無(wú)錫市第三人民醫(yī)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：時(shí)玉舫、侯健全、王瑩、陳曉棟、陳永井、蔣敬庭、孫凌云、呂國(guó)忠。臨床級(jí)人體組織來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量控制管理規(guī)范范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了臨床級(jí)人體組織來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞制備的基本要求、操作規(guī)范和質(zhì)量控制。本標(biāo)準(zhǔn)適用于臨床級(jí)人體組織來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的樣本采集、制備、凍存、復(fù)蘇與質(zhì)量控制。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB19489-2008實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求GB50073-2001潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范GB50346實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范GB50591潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范WHO實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)（第三版）藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（衛(wèi)生部令第79號(hào)）中華人民共和國(guó)藥典（2015年版）干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則（試行）（國(guó)衛(wèi)辦科教發(fā)（2015〕46號(hào)）T11/CSSCR001-2017干細(xì)胞通用要求（中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)-干細(xì)胞生物學(xué)分會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)）術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞clinicalgradehumanmesenchymalstemcells符合質(zhì)量要求，可用于臨床研究和應(yīng)用的人多種組織來(lái)源（臍帶血、臍帶、胎盤(pán)、子宮內(nèi)膜、脂肪、牙齒、骨髓等組織）間充質(zhì)干細(xì)胞。倫理審查委員會(huì)ethicalreviewcommittee負(fù)責(zé)對(duì)科學(xué)研究中涉及的倫理道德問(wèn)題進(jìn)行評(píng)估和審查的專(zhuān)門(mén)組織。科學(xué)審查委員會(huì)scientificreviewcommittee負(fù)責(zé)對(duì)生物樣本采集和使用的方案進(jìn)行科學(xué)性審查的專(zhuān)門(mén)組織。3.4生物安全委員會(huì)institutionalbiosafetycommittee負(fù)責(zé)制定生物安全政策和安全操作規(guī)范的專(zhuān)門(mén)組織。知情同意informedconsent具有完全民事行為能力的自然人在重復(fù)獲取信息并準(zhǔn)確理解其內(nèi)容后，作出接受或不接受樣本采集的決定，此決定不受恐嚇、利誘或其他不當(dāng)行為的影響。樣本specimen在特定時(shí)間從受試者或捐獻(xiàn)者中采集的器官、組織、細(xì)胞等標(biāo)本。樣本采集harvest從供體獲得組織、細(xì)胞等生物樣本的過(guò)程。人間充質(zhì)干細(xì)胞分離isolationofhumanmesenchymalstemcells從供者器官或組織中分離出間充質(zhì)干細(xì)胞的過(guò)程。3.9人間充質(zhì)干細(xì)胞制備preparationofhumanmesenchymalstemcells人間充質(zhì)干細(xì)胞從新鮮組織樣品分離，經(jīng)過(guò)一系列規(guī)范處理達(dá)到入庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)的過(guò)程。3.10人間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增amplificaitonofhumanmesenchymalstemcells人間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)后，數(shù)量得到增加的過(guò)程。3.11人間充質(zhì)干細(xì)胞分化differentiationofhumanmesenchymalstemcells同一來(lái)源的人間充質(zhì)干細(xì)胞逐漸產(chǎn)生出形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征各不相同的細(xì)胞類(lèi)型的過(guò)程。3.12人間充質(zhì)干細(xì)胞凍存cryopreservationofhumanmesenchymalstemcells使人間充質(zhì)干細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而保存其干細(xì)胞特性的低溫冷凍過(guò)程。人間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇thawinghumanmesenchymalstemcells使人間充質(zhì)干細(xì)胞從脫離生長(zhǎng)狀態(tài)重新獲得生長(zhǎng)活力的過(guò)程。3.14人間充質(zhì)干細(xì)胞傳代培養(yǎng)subcultureofhumanmesenchymalstemcells當(dāng)原代培養(yǎng)成功后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)和細(xì)胞不斷分裂，為避免發(fā)生接觸性抑制，將培養(yǎng)中的人間充質(zhì)干細(xì)胞分割成小的部分，重新接種到新的培養(yǎng)皿（瓶）的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的過(guò)程。3.15干細(xì)胞制劑stemcell-basedmedicinalproducts用于治療疾病或改善健康狀況的、以某種類(lèi)型干細(xì)胞為主要成分、符合相應(yīng)質(zhì)量及安全標(biāo)準(zhǔn)，且具有明確生物學(xué)效應(yīng)的干細(xì)胞制品。3.16干細(xì)胞質(zhì)量控制stemcellqualitycontrol為達(dá)到臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞入庫(kù)質(zhì)量要求所采取的操作技術(shù)和管理程序?；疽髨?chǎng)地與設(shè)施臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)選址應(yīng)符合GMP要求，空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合GB3095標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室或廠房應(yīng)由具有潔凈實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建設(shè)資質(zhì)的工程公司設(shè)計(jì)與建造，并應(yīng)符合GB19489、GB50073、GB50346、GB50591規(guī)定。建設(shè)完成后，各功能區(qū)域的潔凈級(jí)別應(yīng)由專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)并出具合格證明。干細(xì)胞制備功能區(qū)應(yīng)按臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備工藝進(jìn)行各區(qū)域設(shè)計(jì),符合GMP和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求。干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)應(yīng)配備獨(dú)立質(zhì)量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，并符合GB19489GB和GB50346規(guī)定。設(shè)備和耗材臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)應(yīng)優(yōu)先選用符合GMP、《干細(xì)胞通用要求》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，獲得國(guó)家資質(zhì)認(rèn)證的設(shè)備、儀器、耗材和試劑。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)設(shè)備、儀器、耗材和試劑供應(yīng)商進(jìn)行資質(zhì)審核認(rèn)證，要求供應(yīng)商提供產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告和批次檢驗(yàn)報(bào)告，并對(duì)耗材及試劑進(jìn)行質(zhì)量抽檢，避免采購(gòu)質(zhì)量不合格的產(chǎn)品。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)設(shè)備和儀器正式使用前應(yīng)做安裝確認(rèn)（IQ）、運(yùn)行確認(rèn)（OQ）和性能確認(rèn)（PQ），并定期進(jìn)行第三方校準(zhǔn)，不得使用有安全隱患的儀器操作樣本及細(xì)胞制品。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)設(shè)備與儀器應(yīng)進(jìn)行編號(hào)建檔，并建立標(biāo)準(zhǔn)操作流程（SOP），確保使用、運(yùn)行、保養(yǎng)、維修記錄完整可追溯，對(duì)于關(guān)鍵工藝相關(guān)設(shè)備參數(shù)應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，及時(shí)對(duì)狀態(tài)異常的設(shè)備進(jìn)行校對(duì)和維修。人員管理臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)應(yīng)分別設(shè)立干細(xì)胞制備負(fù)責(zé)人、質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人和質(zhì)量授權(quán)人崗位。由法人授權(quán)任命，任職資質(zhì)應(yīng)符合GMP和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，定期接受崗位專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，制備技術(shù)負(fù)責(zé)人與質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人、質(zhì)量授權(quán)人不得相互兼任。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員應(yīng)具備的健康要求：HBsAg和針對(duì)HAV、HCV、HIV及梅毒的抗體檢測(cè)應(yīng)為陰性，并且（矯正）視力正常，無(wú)色盲、色弱。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員須半年接受體檢一次，有呼吸道感染或發(fā)熱等疾病狀態(tài)下不得進(jìn)入潔凈操作區(qū)，需完全康復(fù)后方可恢復(fù)崗位操作。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員上崗前應(yīng)經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，內(nèi)容包括但不限于干細(xì)胞理論與實(shí)踐、生命倫理、干細(xì)胞法律法規(guī)、GMP管理、GCP資質(zhì)、制劑基本知識(shí)、細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)、生物安全、儀器設(shè)備使用與維護(hù)方法、物料管理與清潔衛(wèi)生、崗位職責(zé)、操作規(guī)范等內(nèi)容。生命倫理臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)應(yīng)成立倫理審查委員會(huì)，倫理審查委員會(huì)由醫(yī)藥學(xué)、倫理學(xué)、法學(xué)等專(zhuān)家以及無(wú)利害關(guān)系的社區(qū)代表等人員組成，負(fù)責(zé)相關(guān)倫理問(wèn)題的審查和評(píng)價(jià)。同時(shí)應(yīng)按照國(guó)家法律法規(guī)和行業(yè)要求，建立干細(xì)胞倫理準(zhǔn)則和相應(yīng)的倫理操作規(guī)范，以保護(hù)樣本提供者的權(quán)益和安全。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)應(yīng)設(shè)有科學(xué)審查委員會(huì)?？茖W(xué)審查委員會(huì)應(yīng)由生物和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的專(zhuān)家組成，負(fù)責(zé)對(duì)生物樣本采集和使用的方案進(jìn)行科學(xué)性審查。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)應(yīng)設(shè)有生物安全評(píng)審委員會(huì)。生物安全評(píng)審委員會(huì)應(yīng)由生物學(xué)家、醫(yī)務(wù)人員、技術(shù)人員和實(shí)驗(yàn)室管理人員等各方面的專(zhuān)家或工作人員組成，制定符合WHO生物安全手冊(cè)》和GB19489規(guī)定的生物危害評(píng)估方案、生物安全事故應(yīng)急預(yù)案等安全管理措施。負(fù)責(zé)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備的生物安全政策和安全操作規(guī)范的審查，避免不必要的操作，保護(hù)供者及樣本安全。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)的工作人員應(yīng)當(dāng)對(duì)風(fēng)險(xiǎn)及收益進(jìn)行有效評(píng)估，確保樣本提供者或其近親屬對(duì)項(xiàng)目信息在當(dāng)時(shí)科學(xué)技術(shù)條件下充分知情、形成全面和準(zhǔn)確的認(rèn)識(shí)，自愿做出是否同意采集樣本的決定，并簽署知情同意書(shū)。樣本捐獻(xiàn)供者知情同意書(shū)參見(jiàn)附錄A。采集人員、醫(yī)務(wù)人員、制備質(zhì)控操作人員和管理人員應(yīng)當(dāng)對(duì)樣本提供者的個(gè)人信息采取保密措施，防止有意或意外泄露，若確需提供信息，需要經(jīng)有關(guān)申請(qǐng)程序并提交倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意方可實(shí)施。違反法律規(guī)定的，應(yīng)依法追究民事責(zé)任、行政責(zé)任和刑事責(zé)任。操作規(guī)范樣本采集供者健康臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞采集制備方應(yīng)對(duì)干細(xì)胞供者的基本信息與健康信息進(jìn)行詳細(xì)采集與記錄，同時(shí)做好對(duì)供者的隱私保護(hù)，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。干細(xì)胞供者應(yīng)無(wú)血液系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤史、性傳播疾病及高危人群史、吸毒史、一般傳染性疾病或其他遺傳疾病；HIV、HBV、HCV、TP、HTLV、EBV與CMV抗體與核酸檢測(cè)應(yīng)為陰性。供者健康調(diào)查和采集登記表參見(jiàn)附錄B。采集場(chǎng)所人體組織樣本的采集場(chǎng)所或環(huán)境一般為潔凈手術(shù)室，無(wú)菌采集。人牙齒樣本的采集場(chǎng)所無(wú)潔凈級(jí)別要求，但需保證個(gè)人基本衛(wèi)生。新生兒臍帶血、臍帶、胎盤(pán)、人骨髓樣本的采集場(chǎng)所應(yīng)達(dá)到n級(jí)標(biāo)準(zhǔn)潔凈手術(shù)室要求。人脂肪組織和子宮內(nèi)膜組織樣本的采集場(chǎng)所須達(dá)到m級(jí)一般潔凈手術(shù)室要求。采集方法新生兒臍帶血新生兒臍帶血采集應(yīng)由經(jīng)嚴(yán)格專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的護(hù)士或助產(chǎn)士職稱(chēng)以上醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行操作。待新生兒娩出后，斷臍結(jié)扎。用蘸有75%醫(yī)用酒精的消毒紗布快速擦拭胎盤(pán)遠(yuǎn)端臍帶。采血針穿刺消毒部位臍靜脈，引流臍帶血至臍帶血采集袋，待采集的臍血管塌陷、發(fā)白后或臍帶血停止流動(dòng)時(shí)即可結(jié)束采集。旋緊采血袋軟管旋塞，或做熱合密封處理，并貼上條形碼作為唯一標(biāo)識(shí)。新生兒臍帶組織新生兒臍帶組織采集應(yīng)由經(jīng)嚴(yán)格專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的護(hù)士或助產(chǎn)士職稱(chēng)以上醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行操作。胎兒娩出后，在距胎兒臍部5cm至8cm處，用止血鉗分別夾住臍帶上下兩端，用蘸有75%醫(yī)用酒精的消毒紗布擦拭臍帶，消毒剪刀于兩鉗中間斷臍。胎盤(pán)端方向取至少15cm無(wú)針孔的臍帶，手術(shù)線結(jié)扎臍帶樣本兩端，截取臍帶樣本置于無(wú)菌采集瓶中，同時(shí)加入樣本保存液以浸沒(méi)臍帶組織。采集瓶密閉包裝，并貼條形碼作為唯一標(biāo)識(shí)。新生兒胎盤(pán)組織新生兒胎盤(pán)組織采集應(yīng)由經(jīng)嚴(yán)格專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的護(hù)士或助產(chǎn)士職稱(chēng)以上醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行操作。胎兒娩出后，待胎盤(pán)與母體完全分離，用生理鹽水充分清洗胎盤(pán)，再用75%醫(yī)用酒精快速?zèng)_洗表面。迅速將胎盤(pán)放入胎盤(pán)采集盒或采集袋，再加入保存液予以全部浸沒(méi)。采集盒或采集袋密閉包裝，并貼上條形碼作為唯一標(biāo)識(shí)。脂肪組織脂肪組織采集前應(yīng)由整形醫(yī)師制定抽脂方案和術(shù)前術(shù)后的防感染措施。由整形醫(yī)師行脂肪抽吸術(shù)，抽取脂肪組織，置于無(wú)菌采集袋或瓶中保存。采集袋或瓶密封包裝，并貼上條形碼作為唯一標(biāo)識(shí)。骨髓組織骨髓采集前應(yīng)由血液科等有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師或住院醫(yī)師規(guī)范化培訓(xùn)合格者進(jìn)行制定骨髓穿刺方案和術(shù)前術(shù)后的防感染措施。由血液科等有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師或經(jīng)住院醫(yī)師規(guī)范化培訓(xùn)合格的醫(yī)師行骨髓穿刺術(shù)，采取避免骨髓稀釋的措施，采集骨髓至含抗凝劑的針管內(nèi)，即時(shí)轉(zhuǎn)移至無(wú)菌采集瓶中保存。采集瓶密封包裝，并貼上條形碼作為唯一標(biāo)識(shí)。子宮內(nèi)膜組織子宮內(nèi)膜組織采集前應(yīng)由婦產(chǎn)科醫(yī)師制定子宮內(nèi)膜診刮方案和術(shù)前術(shù)后的防感染措施。手術(shù)診刮獲取成年正常女性子宮內(nèi)膜組織，置于無(wú)菌采集瓶中，加入樣本保存液予以全部浸沒(méi)保存。采集瓶密封包裝，并貼上條形碼作為唯一標(biāo)識(shí)。牙齒組織收集沒(méi)有牙體和牙髓病變、自然脫落的乳牙，置于無(wú)菌采集瓶中，加入樣本保存液予以全部浸沒(méi)保存。采集瓶密封包裝，并貼上條形碼作為唯一標(biāo)識(shí)。樣本運(yùn)輸樣本運(yùn)輸人員應(yīng)是經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)合格的人員，對(duì)樣本運(yùn)輸應(yīng)制定規(guī)范及應(yīng)急預(yù)案，并對(duì)樣本運(yùn)輸全程做記錄，包括但不限于運(yùn)輸?shù)姆绞健l件、路徑、時(shí)間、人員、地址及樣本信息，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。樣本運(yùn)輸過(guò)程中須防滲漏、防輻射、抗震動(dòng)、耐壓、耐熱等，樣本包裝需貼上條形碼作為唯一標(biāo)識(shí)。樣本運(yùn)輸須采用平穩(wěn)、安全、快速的運(yùn)輸途徑。新生兒臍帶（血）或胎盤(pán)、人脂肪、骨髓、子宮內(nèi)膜和牙齒樣本的運(yùn)輸溫度為2℃~8℃,運(yùn)輸時(shí)間不超過(guò)12小時(shí)。樣本接收樣本接收人員應(yīng)是經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)合格的人員，應(yīng)遵從安全與準(zhǔn)確的原則對(duì)樣本接收制定規(guī)范及應(yīng)急預(yù)案，并對(duì)樣本接收過(guò)程進(jìn)行記錄，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。樣本接收時(shí)，接收人員應(yīng)做好自我防護(hù)工作，接觸樣本之前應(yīng)佩戴手套與口罩，并對(duì)接收?qǐng)鏊M(jìn)行消毒。接收樣本后應(yīng)先觀察樣本容器外包裝的外觀，檢查有無(wú)破損。檢查外觀后，工作人員應(yīng)檢查樣本采集信息記錄表是否齊全，同時(shí)確認(rèn)記錄表上信息是否填寫(xiě)完整，檢查信息記錄表信息是否與樣本信息一一對(duì)應(yīng)，樣本及記錄表上應(yīng)貼有一致對(duì)應(yīng)的條形碼，做到樣本與供者信息相對(duì)應(yīng)，確認(rèn)無(wú)誤后進(jìn)行接收。樣本接收后，使用75%醫(yī)用酒精消毒清理容器外表面，如不能及時(shí)對(duì)樣本進(jìn)行處理，需把樣本保存在2℃?8c條件下，最長(zhǎng)時(shí)間不超過(guò)12小時(shí)。樣本量應(yīng)能夠滿足制備和檢測(cè)的最低要求。樣本接收后應(yīng)及時(shí)將信息反饋給樣本發(fā)送方。間充質(zhì)干細(xì)胞制備方應(yīng)制定樣本拒收標(biāo)準(zhǔn)，按照樣本拒收標(biāo)準(zhǔn)處理樣本，并及時(shí)通知有關(guān)部門(mén)或負(fù)責(zé)人，同時(shí)做好相應(yīng)記錄。人間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)基本要求臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)應(yīng)在符合GMP、《干細(xì)胞通用要求》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求的車(chē)間內(nèi)進(jìn)行。所有操作需事先制定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，由經(jīng)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的技術(shù)人員嚴(yán)格遵照?qǐng)?zhí)行，并進(jìn)行記錄登記，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。分離與培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)標(biāo)識(shí)干細(xì)胞的名稱(chēng)、代次、批次、操作日期、培養(yǎng)條件、操作人員姓名等信息。所使用試劑應(yīng)盡量采用符合國(guó)家GMP、《中華人民共和國(guó)藥典》、《干細(xì)胞通用要求》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求的藥品輔料或已獲批的藥品，應(yīng)出具產(chǎn)品質(zhì)檢合格報(bào)告，并對(duì)各批次試劑進(jìn)行質(zhì)量抽檢。盡可能避免人源或動(dòng)物源性血清及蛋白，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動(dòng)物血清，應(yīng)確保其無(wú)特定動(dòng)物源性病毒污染。嚴(yán)禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來(lái)源的牛血清。分離與培養(yǎng)方法新生兒臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞新生兒臍帶組織剝?nèi)∪A通氏膠，以組織塊貼壁法或膠原酶消化法分離新生兒臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。采用貼壁法進(jìn)行新生兒臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。新生兒臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞新生兒臍帶血樣本，用無(wú)菌磷酸鹽緩沖液稀釋后，以密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞。采用貼壁法進(jìn)行新生兒臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。新生兒胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞去除胎盤(pán)羊膜、絨毛膜及絨毛組織，剪取臍帶近端的胎盤(pán)組織，以酶消化法分離胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞。采用貼壁法進(jìn)行新生兒胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成人脂肪組織剪碎至糜狀，以膠原酶消化法分離脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。采用貼壁法進(jìn)行人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞人骨髓液樣本，用無(wú)菌磷酸鹽緩沖液稀釋后，以密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞。采用貼壁法進(jìn)行人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞子宮內(nèi)膜組織樣本剪碎至糜狀，以膠原酶消化法分離宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞。采用貼壁法進(jìn)行人子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。牙髓間充質(zhì)干細(xì)胞牙齒樣本，完整剝離牙髓，以酶消化法分離牙髓間充質(zhì)干細(xì)胞。采用貼壁法進(jìn)行人牙髓間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。人間充質(zhì)干細(xì)胞換液臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞換液操作需嚴(yán)格遵照GMP、《干細(xì)胞通用要求》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無(wú)外源微生物污染，相關(guān)操作均進(jìn)行記錄并入檔保存至少30年。換液時(shí)間及頻次需根據(jù)人間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)情況及培養(yǎng)基狀態(tài)進(jìn)行判斷，以保障人間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)水平，并消除代謝物毒害作用。換液操作時(shí)吸棄培養(yǎng)瓶中原有的部分或全部培養(yǎng)液，再加入新鮮培養(yǎng)液。首次換液需要在鏡下觀察到原代細(xì)胞完全貼壁和延展后方可進(jìn)行。培養(yǎng)基成分應(yīng)符合臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)基本要求，盡量采用已獲國(guó)家批準(zhǔn)的臨床級(jí)產(chǎn)品或藥品輔料。人間充質(zhì)干細(xì)胞傳代臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞傳代操作應(yīng)嚴(yán)格遵照GMP、《干細(xì)胞通用要求》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無(wú)外源微生物污染，相關(guān)操作均進(jìn)行記錄并入檔保存至少30年。人間充質(zhì)干細(xì)胞一般情況在達(dá)到80%?90%融合度可進(jìn)行傳代操作，傳代操作應(yīng)密度適宜、及時(shí)，迅速。傳代所使用消化酶應(yīng)符合臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)的基本要求，盡量采用國(guó)家已批準(zhǔn)的臨床級(jí)產(chǎn)品。如必須使用動(dòng)物源性消化酶，應(yīng)確保其無(wú)特定動(dòng)物源性病毒污染。人間充質(zhì)干細(xì)胞凍存臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞凍存操作應(yīng)嚴(yán)格遵照GMP、《干細(xì)胞通用要求》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無(wú)外源微生物污染，相關(guān)操作均進(jìn)行記錄并入檔保存至少30年。經(jīng)制備數(shù)量達(dá)到凍存要求的人間充質(zhì)干細(xì)胞系可進(jìn)行凍存操作，凍存細(xì)胞需加入適當(dāng)?shù)膬龃姹Ｗo(hù)液，遵循程序降溫原則，并在液氮中進(jìn)行保存。凍存液成分應(yīng)符合臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)的基本要求，盡量采用國(guó)家已批準(zhǔn)的臨床級(jí)產(chǎn)品或藥品輔料，二甲基亞砜含量不得超過(guò)10%，如必須使用動(dòng)物源性血清，應(yīng)確保其無(wú)特定動(dòng)物源性病毒污染，嚴(yán)禁使用海綿狀腦病流行區(qū)來(lái)源的牛血清。凍存細(xì)胞應(yīng)標(biāo)明干細(xì)胞名稱(chēng)、培養(yǎng)條件、代次、批次、操作人員、凍存日期等信息，并具有唯一標(biāo)識(shí)。液氮凍存應(yīng)使用符合要求的液氮容器，氣相凍存，由專(zhuān)人負(fù)責(zé)，保證液氮充足，溫度恒定。人間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇操作應(yīng)嚴(yán)格遵照GMP、《干細(xì)胞通用要求》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無(wú)外源微生物污染，相關(guān)操作均進(jìn)行記錄并入檔保存至少30年。自液氮容器中取出裝有間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存管，迅速核對(duì)信息并檢查蓋子是否旋緊。將凍存管立即投入37℃水浴鍋中，輕搖凍存管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，消毒劑擦拭凍存管外部，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)?？焖俎D(zhuǎn)移干細(xì)胞懸液至含有培養(yǎng)基的無(wú)菌離心管內(nèi)，離心洗滌至少2次，加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，混合均勻，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶，置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)標(biāo)明細(xì)胞名稱(chēng)、代次、批次、培養(yǎng)條件、操作人員，復(fù)蘇時(shí)間等信息。人間充質(zhì)干細(xì)胞制劑制備臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制劑制備應(yīng)嚴(yán)格遵照GMP、《干細(xì)胞通用要求》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無(wú)外源微生物污染，相關(guān)操作均進(jìn)行記錄并入檔保存至少30年。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制劑主要成分應(yīng)為質(zhì)量合格的臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞，其余成分應(yīng)符合《中華人民共和國(guó)藥典》對(duì)藥品輔料的要求，并避免對(duì)人間充質(zhì)干細(xì)胞的滲透壓、狀態(tài)、功能等特性產(chǎn)生影響。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制劑制備完成到臨床使用前應(yīng)在2-8℃潔凈條件下暫存，保存時(shí)間不應(yīng)超過(guò)12小時(shí)。使用前干細(xì)胞制劑應(yīng)為均質(zhì)狀態(tài)，無(wú)明顯絮狀沉淀，細(xì)胞存活率￥90%。人間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸根據(jù)干細(xì)胞的使用要求，選擇合適的承載細(xì)胞的容器、運(yùn)輸方式、運(yùn)輸條件、運(yùn)輸設(shè)備和運(yùn)輸路線，由專(zhuān)人負(fù)責(zé)，制定保障措施，保證臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性、安全性、穩(wěn)定性和有效性。運(yùn)輸條件的控制應(yīng)包括但不限于溫度范圍、振蕩、無(wú)污染、設(shè)備性能和包裝等。干細(xì)胞的運(yùn)輸應(yīng)全程記錄，包括但不限于干細(xì)胞運(yùn)輸?shù)姆绞?、條件、路徑、時(shí)間、人員、地址及干細(xì)胞信息等，記錄入檔保存至少30年。質(zhì)量控制質(zhì)控內(nèi)容臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)顯微鏡下觀察，人間充質(zhì)干細(xì)胞漩渦狀貼壁生長(zhǎng)，呈長(zhǎng)梭形纖維細(xì)胞樣，形態(tài)均一。表面標(biāo)志物檢測(cè)采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行測(cè)定，人間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD73、CD90、CD105陽(yáng)性率不低于95%；CD14、CD31、CD34、CD45、HLA-DR陽(yáng)性率不高于5%。分化能力檢測(cè)采用體外條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)下，人間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)能夠分化為成脂肪、骨、軟骨細(xì)胞。成脂分化經(jīng)油紅。染色法鑒定，成骨分化經(jīng)茜素紅染色法鑒定，成軟骨分化經(jīng)阿爾辛藍(lán)染色法鑒定。染色體核型檢測(cè)采用G帶分析法進(jìn)行測(cè)定，人間充質(zhì)干細(xì)胞染色體數(shù)量為46（含XX/XY）,無(wú)染色體缺失、異位和重排現(xiàn)象。免疫調(diào)節(jié)功能檢測(cè)采用ELISA技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定經(jīng)炎癥因子（IFN-Y與TNF-a）誘導(dǎo)后人間充質(zhì)干細(xì)胞中吲哚胺2,3-雙加氧酶（IDO）的表達(dá)和功能，以及對(duì)于活化的人總淋巴細(xì)胞的增殖和對(duì)不同淋巴細(xì)胞亞群增殖能力的影響。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)應(yīng)表達(dá)IDO,并可抑制人淋巴細(xì)胞增殖。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞安全性參照《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部通則1101無(wú)菌檢測(cè)法執(zhí)行，對(duì)臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞樣本采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液等）檢測(cè)。細(xì)菌和真菌檢測(cè)結(jié)果都應(yīng)為陰性。支原體檢測(cè)參照《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部通則3301支原體檢測(cè)法執(zhí)行，對(duì)臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞樣本采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液等）檢測(cè)。支原體檢測(cè)結(jié)果都應(yīng)為陰性。細(xì)胞內(nèi)外源致病因子檢測(cè)采用血清ELISA檢測(cè)法或核酸檢測(cè)法，對(duì)臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞樣本采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液、細(xì)胞等）檢測(cè)。HIV抗體、HBsAg、HCV抗體、TP抗體、CMV-IgM、HTLV抗體、HPV抗體、HHV抗體、EBV抗體檢測(cè)應(yīng)為陰性；HCV、HBV、HIV病毒核酸檢測(cè)應(yīng)為陰性。內(nèi)毒素檢測(cè)參照中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程2010年版細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法執(zhí)行，對(duì)臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞樣本采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液等）檢測(cè)。各類(lèi)樣本中的內(nèi)毒素檢測(cè)值應(yīng)W0.5EU/mL。異常免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)采用流式細(xì)胞術(shù)以及ELISA技術(shù)測(cè)定異體來(lái)源人間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)于活化的人總淋巴細(xì)胞的增殖和對(duì)不同淋巴細(xì)胞亞群增殖能力的影響，以及對(duì)淋巴細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子分泌的影響。淋巴細(xì)胞亞群應(yīng)無(wú)異常增殖，細(xì)胞因子表達(dá)水平應(yīng)無(wú)異常增加。致瘤性檢測(cè)采用免疫缺陷動(dòng)物（裸鼠或SCID鼠），通過(guò)局部或靜脈方式接種人間充質(zhì)干細(xì)胞，評(píng)價(jià)人間充質(zhì)干細(xì)胞致瘤性。體內(nèi)致瘤試驗(yàn)嚴(yán)格遵照動(dòng)物倫理要求執(zhí)行，單只小鼠接種人間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量三106細(xì)胞/kg,觀察期三12周。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)無(wú)致瘤性。培養(yǎng)基及其他添加成分殘余量檢測(cè)參照《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版三部生物制品中抗生素及牛血清白蛋白（BSA）殘留量檢查法執(zhí)行。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制劑內(nèi)應(yīng)無(wú)抗生素殘留，BSA殘留量應(yīng)＜50ng/mL。臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞穩(wěn)定性存活率檢測(cè)采用臺(tái)盼藍(lán)拒染法進(jìn)行細(xì)胞存活率測(cè)定，各代數(shù)及批次臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞活細(xì)胞比例290%。生長(zhǎng)活性檢測(cè)通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞倍增時(shí)間、細(xì)胞周期、克隆形成率以及端粒酶活性對(duì)人間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)活性進(jìn)行測(cè)定，各代數(shù)及批次臨床級(jí)間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)處于指數(shù)生長(zhǎng)期，G0期細(xì)胞數(shù)W10%,具有端粒酶活性。采用人間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物流式檢測(cè)以及人基因組DNA短片段重復(fù)序列（STR）測(cè)序進(jìn)行檢定。各代數(shù)及批次臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)應(yīng)符合流式檢測(cè)比例要求，單一細(xì)胞系的臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞各代次及批次細(xì)胞STR檢測(cè)結(jié)果應(yīng)保持一致。質(zhì)控分類(lèi)批次質(zhì)量檢驗(yàn)臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)由同一供體、同一組織來(lái)源、同一時(shí)間、使用同一工藝采集和分離獲得的干細(xì)胞制劑進(jìn)行例行批次質(zhì)量檢驗(yàn)。當(dāng)制備工藝、耗材、試劑、場(chǎng)地或規(guī)模等條件發(fā)生時(shí)，制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)多批次干細(xì)胞制劑進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，確保工藝和質(zhì)量穩(wěn)定合格，記錄入檔保存至少30年。質(zhì)量控制檢測(cè)表參見(jiàn)附錄C。放行質(zhì)量檢驗(yàn)每一批次臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制劑在臨床使用前應(yīng)在完成例行質(zhì)量檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上，由干細(xì)胞臨床研究機(jī)構(gòu)質(zhì)檢平臺(tái)進(jìn)行快速和簡(jiǎn)化的質(zhì)量檢測(cè)，應(yīng)包括但不限于活率、細(xì)胞表型、細(xì)菌、病毒、支原體和內(nèi)毒素含量等，確認(rèn)制劑合格后方可申請(qǐng)臨床放行使用。相關(guān)記錄報(bào)告應(yīng)入檔保存至少30年。復(fù)核質(zhì)量檢驗(yàn)臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)每一批次干細(xì)胞制劑單獨(dú)留樣保存，詳細(xì)記錄批號(hào)、代次、生產(chǎn)日期、來(lái)源等信息。定期由國(guó)家或地方相關(guān)部門(mén)授權(quán)的專(zhuān)業(yè)細(xì)胞檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)或?qū)嶒?yàn)室進(jìn)行臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制劑的質(zhì)量復(fù)核檢驗(yàn),并出具檢驗(yàn)報(bào)告，入檔保存至少30年。復(fù)核質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告出具時(shí)間應(yīng)在該批次臨床級(jí)人間充質(zhì)干細(xì)胞制劑提出臨床放行申請(qǐng)之前，并作為放行檢驗(yàn)參考。附錄A（資料性附錄）

樣本捐獻(xiàn)供者知情同意書(shū)如有問(wèn)題或疑問(wèn)可與下列人員聯(lián)系如您對(duì)樣本采集有任何問(wèn)題，請(qǐng)聯(lián)系：項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：XXX,電話：XXXXXXXXXXX如果您對(duì)您的權(quán)利有任何疑問(wèn)，請(qǐng)聯(lián)系：倫理審查委員會(huì)負(fù)責(zé)人：XXX電話：XXXXXXXXXX同意：是/否姓名：出生： 年 月請(qǐng)仔細(xì)閱