分子醫(yī)學(xué)冬-實(shí)驗(yàn)報(bào)告

研缽，eppendorf26支，移液槍，刻度移液管（5mL），恒溫水浴槽，可見光分光光度綠豆芽去頭尾留中間莖部分→取約5g豆芽→pH5.6醋酸緩沖液1ml→研磨成漿→靜置30分鐘1.5ml→6000rpm20min→留上清(原酶液)→HAc20倍→試管10支0至9編號(hào)→各管磷酸苯二鈉溶液0.5mL，35℃水浴預(yù)熱2min，酶液預(yù)熱1～90.5mL→3、5、7、10、12、15、20、25、30分鐘各管到時(shí)間先后加入碳酸鈉溶液2mL0號(hào)管碳酸鈉溶液2mL05mL0～11號(hào)Folin酚應(yīng)用液0.5mL，保溫10分鐘冷卻0號(hào)管作空白，測(cè)各管A680nm以反應(yīng)時(shí)間為橫坐標(biāo)以反應(yīng)時(shí)間為橫坐標(biāo)A680nm90～8→→1～80.1～0.8mL酚標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液→90～8→1mol/LNa2CO32mL,Folin-0.5mL→35℃10分鐘→0號(hào)管空白測(cè)各管A680nm（四）KmVmax試管7支0～6編號(hào)0～6號(hào)加入磷酸苯二鈉溶液0.5、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.5mL→35℃2min→15s(方便計(jì)時(shí))0.5搖勻，每管精確計(jì)時(shí)→保溫15min→到達(dá)反應(yīng)時(shí)間，立即加入1mol/LNa2CO3溶液2mL,搖勻Folin-0.5ml,00.5ml→35℃10分鐘→0Km值和Vmax吸光012吸光012345678903570酶反應(yīng)時(shí)間與產(chǎn)物生成量的關(guān)系曲1005反應(yīng)時(shí)間酶反應(yīng)時(shí)間與產(chǎn)物生成量的關(guān)系曲1005反應(yīng)時(shí)間

012345678酚含量00酚標(biāo)酚標(biāo)準(zhǔn)曲y=100酚含量吸光測(cè)定酶的KmVmax

V012345611/[S](L21酚含量V0酶的1/V0-1/[S]酶的1/V0-1/[S]y=92.987x+--0-50-123KmVmax由回歸方程得：橫軸截距-1/Km0.4724Km2.1168；1/Vmax=43.928，所以Vmax10

時(shí)間005反應(yīng)時(shí)間酶反應(yīng)時(shí)間與產(chǎn)物005反應(yīng)時(shí)間酶反應(yīng)時(shí)間與產(chǎn)物生成量的關(guān)系曲1005反應(yīng)時(shí)間理論趨勢(shì)吸光吸光吸光碳酸鈉的時(shí)間沒(méi)把握好。1、24、5號(hào)則反Vmax15min。0.2~0.8于0.05時(shí)，結(jié)合比耳定律，造成對(duì)應(yīng)濃度相對(duì)誤差遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)5%。所以25min與30min的實(shí)驗(yàn)0.2~0.8的范圍，可123“酚標(biāo)準(zhǔn)曲線”R2=0.9916。因?yàn)椴簧婕熬_的時(shí)間控制，也不涉123在測(cè)定“KmVmax值”R2=0.8679.60.7~0.8之間。但是由于KmVmax的實(shí)驗(yàn)在最后進(jìn)行，所以不能預(yù)料到最0.（0.8490.2~0.85%以上（機(jī)器本身因素6號(hào)數(shù)據(jù)存在誤差，但是不會(huì)太大（5%12341234假若6

[S]V0210---012-y=70.763x+76.342R2=0.9586R21，由方程計(jì)算得到的：Km=0.9269，Vmax=0.01310.6號(hào)數(shù)據(jù)的計(jì)算得到（Km=2.1168，Vmax=0.02276）相差很大。據(jù)小很多，與Vmax定義，即如此處理數(shù)據(jù)無(wú)意義。因此原假設(shè)中舍棄6號(hào)數(shù)據(jù)不可行。氧化；醋酸