乙型肝炎病毒微生物學及檢驗

第二節(jié)乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(HBV)

以肝臟炎性病變?yōu)橹鞯膫魅拘约膊?/p>

是乙型肝炎的病原體乙型肝炎全球分布乙肝現(xiàn)狀乙肝病毒攜帶者占人口10%.全世界20億曾感染過、有3.5億乙肝攜帶者、我國乙肝攜帶者總數(shù)高達1.3億.10%轉化為各種慢性肝病，包括有慢性肝炎、肝硬化和肝癌我國慢性肝病人數(shù)3000萬，肝病死亡人數(shù)每年30萬全球HBV感染流行情況20億人曾感染HBV,占全球人口1/3慢性HBV感染者約3.5~4億，其中亞洲占2/3,中國占1/3全球60億人口15%~25%最終將死于與HBV有關肝病每年全球死亡75~100萬例，占死因第7位LavanchyD.JViralHepatitis.2004;11:97-107

一生物學特性形態(tài)與基因結構

嗜肝DNA病毒科正肝DNA病毒屬電鏡：3種形態(tài)

大球形顆粒小球形顆粒管型顆粒完整的HBV顆粒為大球形顆粒，又稱Dane顆粒，直徑42nm，分為包膜與核心兩部分，包膜HBsAg，核心部分含有環(huán)狀雙股DNA、DNA聚合酶、HBcAg和HBeAg等，是病毒復制的主體1大球形顆粒（Dane）：直徑42nmDane顆粒雙層外殼核心DNADNA聚合酶外衣殼：相當于一般病毒包膜內(nèi)衣殼：相當于一般病毒核衣殼病毒衣殼成分：蛋白質(zhì)由殼粒組成。殼粒是衣殼的形態(tài)學亞單位，多肽分子是衣殼的化學亞單位功能保護病毒核酸參與感染過程具有抗原性2小球形顆粒

是HBV感染肝細胞時過剩的病毒衣殼組成

直徑22nm成分HBsAg少量PreS2+HBsAg不含DNA及DNA聚合酶

無法復制3管形顆粒

成分與小球形顆粒相同，是由多個小球形顆粒串聯(lián)而成直徑22nm長100—500nm無法復制

三種形態(tài)之間的關系基因組基因組長約3.2kb，為部分雙鏈環(huán)狀DNApre-S1pre-S1蛋白pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-CHBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAg

DNARNADNA轉錄逆轉錄

HBV的復制方式很特殊,在復制過程中有逆轉錄過程,與逆轉錄病毒相似,逆轉錄后的DNA可整合至靶細胞的染色體

HBV的復制3、HBV的抗原組成表面抗原HBsAg外衣殼抗原前S1抗原前S2抗原內(nèi)衣殼抗原核心抗原HBcAge抗原HBeAg大球形顆粒形態(tài)（完整的病毒，具有傳染性）HBsAgHBcAgHBVDNADNAP<聚合酶》（外膜蛋白）（核衣殼蛋白）機體感染HBV后產(chǎn)生相應的免疫反應，形成多種不同的抗原抗體系統(tǒng)表面抗原抗體系統(tǒng)(HBsAg，抗HBs)核心抗原抗體系統(tǒng)(HBcAg，抗HBc)e抗原抗體系統(tǒng)(HBeAg，抗HBe)

（1）表面抗原曾用名“澳抗”出現(xiàn)時間：HBV感染后2—6個月由S基因碼產(chǎn)生的蛋白4個亞型adradwaywayr抗-HBs●出現(xiàn)時間：急性感染后期或HBsAg消失后（空白期或窗口期）●抗-HBs為保護性抗體（中和抗體）其出現(xiàn)標志著HBV感染進入恢復期●抗-HBs對相同HBsAg亞型的HBV再感染有免疫力，但對不同亞型的HBV保護力不完全。（2）核心抗原是Dane顆粒中核心組成部分被HBsAg覆蓋，血中不易檢出抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活動的標志抗HBc-IgG：凡“有過”HBV感染者均可陽性HBcAg的免疫原性最強抗HBc-IgG可終身陽性（3）e抗原為可溶性蛋白血清HBeAg陽性者中，HBVDNA陽性率為92%左右，是HBV復制和傳染的感染性標志其抗體有利于抑制病毒復制，抗-HBe的出現(xiàn)標志著病毒復制減少、傳染性降低乙肝（3）HBeAgHBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物HBVC基因前C區(qū)C區(qū)前C/C蛋白HBeAgHBcAg表達切割、加工分泌到細胞外HBeAg只存在于血清中

4培養(yǎng)特性黑猩猩最敏感疫苗效價安全評價不能在細胞培養(yǎng)中分離培養(yǎng)

5抵抗力抵抗力強70%乙醇無法滅活HBV傳染性與抗原性不一致

二微生物學檢驗標本處理：

1.常規(guī)檢測：24小時分離5天內(nèi)2—8℃5天后—20℃/—70℃2.核酸檢測：血清（常用）血漿肝素抗凝X

6小時處理24小時按成保存—70℃乙型肝炎的快速診斷光鏡-----包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學技術雜交SouthernblotPCRNorthernblot直接病毒診斷HBVDNA：是HBV感染最直接，最靈敏和最特異的檢測指標，且血清中HBVDNA的水平可作為治療方案與療效觀察的指標。HBVDNA定量檢測

酶聯(lián)免疫法

ELLSA

E固相抗體標本（含抗原）酶標抗體EE底物雙抗體夾心法檢測抗原（+）1、已知抗體包3、加酶標抗體4、加酶作用的2、加待檢抗原4、加酶作用的洗滌洗滌洗滌洗滌1、已知抗體包2、加待檢物3、加酶標抗體（-）YYYYYYEYEYEYYYYYYYYYYEYEYEYYYYYYYEYEYEYYYY洗滌洗滌雙抗體夾心法測抗原

EEE底物固相抗體標本（含抗原）酶標抗體雙位點一步法檢測抗原固相抗體標本（含抗體）抗原酶標抗體底物EEE競爭法檢測HBeAb乙型肝炎病毒血清標志物的綜合評價

(1)(2)(3)(4)(5)常見模式及其意義

＋－＋－＋急性或慢性乙型肝炎，高傳染性＋－－－＋急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg攜帶者＋－－＋＋急性乙肝趨向恢復或慢性乙肝，弱傳染性－＋－－＋急性HBV感染康復期或有既往感染史，有免疫力－－－＋＋乙肝恢復期，弱傳染性－－－－＋急性HBV感染“窗口期”，或既往曾感染過乙肝－＋－－－接種HBV疫苗或HBV感染后康復－＋－＋＋急性乙肝康復期，開始產(chǎn)生免疫力－－－－－無HBV感染＋－－－－無癥狀攜帶者乙型肝炎病毒血清標志物的綜合評價

(1)(2)(3)(4)(5)少見模式及其意義＋＋＋－＋不HBsAg亞型病毒的雙重感染

＋＋－－＋HBsAg亞型病毒的雙重感染

＋－＋＋＋乙肝趨向恢復

1表面抗原HBsAg2表面抗體抗-HBs3e抗原HBeAg4e抗體抗-HBe5核心抗體抗-HBc

三臨床意義HBsAg無癥狀攜帶者主要傳染源潛伏期30—160天傳播方式1、輸血傳播2、性接觸傳播(同性戀)3、垂直傳播4、口-口傳播（唾液檢測HBV-DNA）5、靜脈藥癮，血液透析醫(yī)源性傳播輸血或注射器、血透機、內(nèi)窺鏡等消毒不嚴格乙肝垂直傳播主要途徑：圍產(chǎn)期（新生兒皮膚、粘膜有破損而接觸母血）和產(chǎn)后密切接觸經(jīng)胎盤及生殖細胞傳播：有可能垂直傳播是我國HBV感染的主要模式HBV感染的自然史急性HBV感染慢性HBV感染

成年期感染3~5%

嬰兒期感染>95%

肝硬化肝功能衰竭肝細胞癌

慢性乙型肝炎5年發(fā)生率12~25%5年發(fā)生率6~15%5年發(fā)生率20~23%肝移植AdaptedfromEASLCo